TP Champignons

Plan de la sance
Champignons infrieurs: Thalle unicellulaire : Levure : Saccharomyces cerevisiae Thalle Pluricellulaire
Siphomyctes :
Absidia Glauca Rhizopus sp. Moisissure du pain

Septomyctes :
Alternaria alternata

Champignons suprieurs ( carpophore):

Champigon de Paris (Agaricus biosporus)

Macromyctes et micromyctes
Le thalle des champignons
= Myclium

Les champignons microscopiques se divisent en deux groupes :

Les champignons unicellulaires ou levures Les champignons filamenteux ou moisissures

La levure de bire, Saccharomyces cerevisiae

Observation, coloration, mise en culture

On peut s'en procurer chez tous les boulangers sous forme de petits blocs o les cellules sont agglomres et en vie ralentie. Il est possible d'observer les cellules de levure au microscope. Il suffit pour cela de dlayer une miette du paquet dans un verre d'eau et de mlanger soigneusement en mettant assez d'eau pour que le milieu prsente peine un lger trouble. Prlever alors une goutte. Pour observer au microscope.

Mise en culture
Mlanger 1 g de levure de boulanger avec 100 mL d'eau tide et 1 g de sucre. Bien agiter et prlever sur le champ 1 goutte de cette suspension de levures (dans laquelle il y a tout de mme la bagatelle de quelques millions de cellules). Mettre la goutte dans 1 litre d'eau. Bien agiter. Avec un compte goutte, prlever un chantillon. Ouvrir la bote contenant le milieu et toucher la surface du milieu avec l'extrmit du compte-gouttes en une dizaine d'endroits diffrents. Refermer le couvercle. Abandonner la bote temprature ambiante.

ENSEMENCEMENT

Mise en culture des cellules de la Levure

Champignons contaminants

Les quelques levures dposes sur un milieu vont se multiplier et engendrer des colonies qui deviennent visibles l'il nu en quelques jours. Chaque colonie est issue d'un petit nombre de cellules et prsente une forme arrondie, une taille et une couleur caractristiques de l'espce Saccharomyces cerevisiae.

Observation des cellules de levure au Microscope

On place quelques gouttes d'eau et une miette de levure. On mlange pour obtenir une solution lgrement laiteuse. Une goutte de cette solution est ensuite place entre lame et lamelle pour tre observe au fort grossissement

On distingue des cellules immobiles, plus ou moins sphriques, de 6 8 microns, pourvues d'un noyau. Le cytoplasme est entour d'une membrane paisse, caractristique des cellules vgtales. Il n'y a pas de chlorophylle, ce sont donc des champignons (Ascomyctes). Ils sont forms d'une seule cellule : il s'agit de levures.

Des cellules de levure au Microscope

Observation de cellules en bourgeonnement

Les levures grandissent et se multiplient par bourgeonnement : lorsqu'une cellule a atteint sa taille maximale, elle forme un ou plusieurs bourgeons qui grandissent leur tour puis se dtachent de la cellule mre. Il s'agit d'une forme de reproduction asexue.

Les moisissures

Rhizopus nigricans
La moisissure ou mucorale du pain
Lorsqu'on abandonne une tranche de pain humide, nous observons, aprs quelques jours, l'apparition de moisissures.

Tranche de pain humide abandonne

tranche de pain aprs quelques jours

La moisissure ou mucorale du pain

Progressivement, le pain se recouvre d'un feutrage de filaments : c'est du myclium (filaments constituant les champignons). Ils n'ont pas d'organisation particulire et ne sont pas cloisonns : ce sont des moisissures. Il s'agit de la mucorale du pain ou Rhizopus nigricans. Cette moisissure utilise facilement les sucres et l'amidon, ce qui explique son dveloppement rapide sur le pain. C'est un saprophyte.

Problme : Comment expliquer la colonisation de la tranche de pain par la moisissure ?

Observons de plus prs cette moisissure :

Une premire observation la loupe montre la prsence de petites boules noires, ce sont des "sporocystes". Le reste de notre mystrieux colonisateur est constitu de filaments : "le myclium".

Observation au Microscope de la moisissure

L'observation au microscope montre que le sporocyste contient un nombre considrable de petites boules : ce sont des "spores".

PRPARATION DE LA LAME ET OBSERVATION (sans coloration)

Une petite touffe de ce myclium est place entre lame et lamelle, sec. On observe aisment les sporanges (constitus de la "tige" ou sporangiophore et d'une "boule" ou sporocyste). Dans ce sporocyste se trouvent les spores. (Une spore n'est pas une graine).
Si on rajoute une goutte d'eau glycrine ou sale, on peut voir ces sporanges gonfler lgrement, se dchirer et librer les spores (c'est la dissmination), ce qui prouve l'importance du facteur humidit. Remarque : plus tard, ces spores germent et redonnent des filaments de myclium. Certains se rencontrent, fusionnent et forment des zygospores qui produisent du myclium et d'autres sporanges. C'est ce qui explique l'envahissement rapide du rcipient par cette mucorale

Observation au Microscope optique

Une petite touffe de ce myclium est place entre lame et lamelle. On observe aisment les sporanges (constitus de la "tige" ou sporangiophore et d'une "boule" ou sporocyste). Dans ce sporocyste se trouvent les spores.

Conclusions
Spores endognes = Endospores Cest un saprophyte Myclium sans cloisons : Cest un Siphomycte

Alternaria alternata

A. alternata est une espce toxique et pathogne. Les conidies sont allergnes et peuvent causer de graves maladies respiratoires allergiques (asthme, sinusites chroniques, rhinites). Elle provoque galement des mycoses cutanes aussi bien de la peau que du cuir chevelu.

Boite de Petri contenant deux colonies de B. dothidea et trois colonies dAlternaria alternata isol partir de lsions sur des feuilles de pistache

Culture dAlternaria alternata sur milieu Malt-Agar

Espce croissance relativement rapide. Les colonies veloutes avec une priphrie blanche sont brun-gris noires. La croissance arienne de ce champignon est presque entirement constitue de chanes de spores. Les conidiophores sont 1 3 septs, lisses, droits ou flexueux, noirs et ont une croissance sympodiale; Ils mesurent en moyenne 50 x 5 m. Les conidies bourgeonnent travers un ou plusieurs pores de la paroi du conidiophore, en chanes simples ou ramifies ; ces conidies pluricellulaires sont brunes jaune-brun, en forme de massue avec un rostre apical.

Alternaria alternata
Sur le myclium vgtatif se forment des conidiophores isols ou groups, simples ou ramifis, rectilignes, plus ou moins sinueux, paroi lisse et brune, pouvant atteindre 50 m. Les conidies dictyospores (porospores) sont produites. Les conidies, de forme murale (dictyospores), isoles ou groupes prennent naissance partir du conidiophore, leur cicatrice estompe. Les conidiophores bruns sont forms de plusieurs cellules.

-Conidiophore : c'est un filament plus ou moins spcialis, simple ou ramifi, l'extrmit duquel se forment les conidies.

-Conidies : (du grec Konos = cne) appareil de dissmination des spores, plac en position distale.

Absidia glauca
(Zygomycota, Zygomycetes, Mucorales, Mucoraceae). Formation Asexuelle de spores : Sporange contient
nombreuses spores uninucles (gauche) et une large columelle (droite)

Absidia glauca
Prsence de sporocystophores isols ou ramifis, fixs au milieu des stolons. Sporocystophores groups par 2, 3 ou 4, fixs un myclium arien pouvant atteindre 1 mm de long. Sporocystes piriformes, gristres avec une apophyse marque ( taille 30 - 60 m ). La columelle est hmisphrique. Une cloison subterminale est note dans le sporocystophore. Les sporocystospores sont globuleuses, lisses, de 2,5 - 5 m de diamtre. L'apophyse, bien dveloppe, a une forme d'entonnoir. Les rhizodes sont difficiles mettre en vidence. Les zygotes sont sphriques, brun jaune noir. Leur paroi est strie. Apophyse cest la Partie dilat du sporocystophore situ sous le sporocyste chez les Zygomyctes

Basides, spores et myclium

Le champignon de Paris (agaricaces) Agaricus bisporus

Chapeau : de 5 10 cm, globuleux devenant hmisphrique, ensuite convexe puis s'aplatissant, de couleur de fond blanchtre brun clair, recouvert d'cailles ou de fibrilles rousstres Lames : fines et serres, de couleur rose puis devenant brunes en vieillissant Anneau : bien marqu, de couleur blanche, relev chez les sujets juvniles Pied : trapu et ferme, plutt court, s'paississant vers la base, de couleur blanche

Spore

On se procure un champignon de Paris et on place l'extrmit de son pied dans l'eau, bonne temprature, pour qu'il arrive maturit. Aprs 1 2 jours, quand les lamelles sont brunes, on rcupre des spores.

Avec des ciseaux fins ou une aiguille lancole, on coupe un petit morceau du bord d'une lamelle du champignon et on le place entre lame et lamelle (si ncessaire, on peut craser doucement la prparation).

On distingue, sur le pourtour de la lamelle, des prolongements "ventrus" : les basides, portant des expansions : les strigmates, o sont fixes de petites boules : les spores. Le centre de la lamelle, ainsi que tout le champignon, sont constitus de fins filaments troitement assembls : le myclium.