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    MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA

    BACTERIOLOGIA
    CLASE 4
    De la Toma de Muestras a la Identificación
    del Microorganismo
    COPROCULTIVO

    BACTERIAS GRAM NEGATIVAS


    Objetivo del examen

    • Pacientes con diarrea: búsqueda del agente


    • Enfermedad diarreica severa
    • Diarrea crónica
    • Diarreas de pacientes inmunosuprimidos
    • Personas sanas: búsqueda de portadores
    (Salmonella spp – vibrio cholerae)

    Otras causas: virus, parásitos, no infecciosos


    (colitis ulcerosa, enfermedad de Chron)
    Clostridium difficile.
    Flora Normal

    Intestino Delgado: Intestino Grueso:

    • Lactobacilus • Anaerobios estrictos:


    Bacteroides sp. : cocos
    • Anaerobios Gram negat.
    • Gram negativos
    • Enterococcos anerobios, Clostridium.

    • Enterobacteriáceas • Enterobacteriáceas
    (E.coli)
    • Mycobacteria
    • Enterococos
    Patógenos Intestinales Bacterianos

    • Salmonella spp • Escherichia coli:


    • Shigella spp • Enteropatógena (ECEP)
    • Aeromonas spp • Enteroagregativa (ECEg)
    • • Enteroinvasora (ECEI)
    Vibrio cholerae
    • Enterotoxigénica(ECET)
    • Campylobacter spp
    • Enterohemorrágica
    • Yersinia
    enterocolítica (ECEH)
    Toma de Muestra

    • Pacientes con diarrea


    • Neonatos y lactantes: hisopado anal luego de la
    evacuación. Medio de transporte (Stuart)
    • Niños y adultos: 1 porción de evacuación reciente
    en un frasco estéril de boca ancha.
    • Portadores sanos: 1 porción de evacuación blanda
    o líquida, luego de purgante salino. Seriado 3 días.
    • Conservación y transporte: a T ambiente, o hisopo
    con MF en Stuart, para Vibrio cholerae medio Cary
    Blair.
    Identificación del patógeno
    con Pruebas Convencionales

    • Examen macroscópico
    • Observación en fresco
    • Tinciones
    • Placas (Medios de cultivo)
    • Condiciones ambientales
    • Pruebas Bioquímicas
    Procesamiento de la muestra

    • Examen macroscópico: moco, pus,


    sangre, acuosa, pastosa, moldeada.
    • Observación en fresco: + SF, mezclar
    (hematíes, leucocitos, parásitos,
    levaduras).
    • Tinciones: azul de metileno y/o M G
    Giemsa (leucocitos, hematíes)
    • Gram (disbacteriosis)
    • Kinjoun inmunodeprimidos (Isospora,
    Microsporidium. Cryptosporidium)
    Clasificación de Bacterias en Base
    a Requerimientos de Oxigeno

    • Aerobias
    • Anaerobias
    • Anaerobias Facultativas
    • Microaerofílicas
    Identificación de Bacterias Gram Negativas

    • Aerobias (BNF, Familia


    Vibrio)

    • Anaerobias facultativas
    (Enterobacterias)

    • Microarofílicas
    (Haemophilus, Neisseria
    y Campylobacter)
    Familia Enterobacteriaceae
    •Menos de 20 especies son responsables de más
    del 95% de las infecciones.
    • Enfermedad
    gastrointestinal
    - Escherichia coli
    – Salmonella
    – Shigella
    – Yersinia
    entercólica
    – Citrobacter
    – Enterobacter
    •Enterobacteria
    Familia Enterobacteriaceae
    • Enfermedades GÉNEROS:
    oportunistas
    - neumonia • Citrobacter
    – meningitis • Enterobacter
    – septicemia • Escherichia
    – infectiones del • Hafnia
    tracto urinario • Morganella
    • Providencia
    • Serratia
    Aislamiento e identificación
    Enterobacteriaceae

    • Bacilos Gram-negativos anerobios


    facultativos
    • No poseen citocromo oxidasa (oxidasa
    negativos)
    • Son aislados a partir de materia fecal en
    agar conteniendo lactosa y un indicador
    de pH (colonias fermentadoras viran el
    indicador por producción de ácido)
    Escherichia coli
    Escherichia coli

    • E. coli y Shigella
    – Geneticamente muy similares
    – Mucha similitud en las patologías
    que causan
    Escherichia coli
    Enteropatogénica
    • Destrucción de las micro-vellosidades
    intestinales sin invasión
    • fiebre
    • diarrea
    • vómitos
    • nausea
    • MF sin sangre
    • asociados con diarrea en niños
    Escherichia coli
    Enterotoxigénica

    • Diarrea parecida al cólera pero en


    grado mucho mas leve
    • Causan también la "diarrea del viajero".
    • Producen dos tipos de toxinas
    codificadas en plásmidos (Diarrea
    acuosa, fiebre y náusea):
    -Toxinas lábiles al calor o termolábiles (HLT)
    -Toxinas termo estables (HST)
    Escherichia coli
    Enteroinvasiva
    • Disentería
    – Clínicamente indistinguible de shigellosis
    Escherichia coli
    Enterohemorragica
    • Usualmente serotipo O157:H7

    Transmission electron
    micrograph
    Escherichia coli
    Enterohemorragica
    • Por consumo de carne contaminada mal
    cocida.
    • Colitis hemorrágica (diarrea sanguinolenta con
    pocos leucocitos, en pacientes afebriles)
    • Síndrome sistémico urémico-hemolítico
    (anemia hemolítica, trombocitopenia y falla
    renal)
    • Vero toxina “shiga-like”
    • Hemolisinas
    Tratamiento
    • Sintomático
    • En la patología gastrointestinal: reposición
    de fluídos.
    • No se usan antibióticos, excepto en casos
    de enfermedad muy severa o que haya
    progresado a un estado sistémico (ej.
    síndrome de urémico-hemolítico)
    Shigella

    ••Shigella
    Shigella
    dysenteriae
    dysenteriae
    Shigella
    • 4 especies:
    • S. dysenteriae
    • S. flexneri
    • S.boydii
    • S. sonnei

    • Exclusivos del hombre


    • Muy parecidos bioquímica y antigénicamente a
    E. coli
    Shigella
    PATOGENIA
    • Transmisión persona-persona
    • vía fecal-oral

    • Invasión y multiplicación colon

    • Respuesta inflamatoria secundaria


    Shigella
    CLÍNICA
    • Gastroenteritis

    • Estado de portador asintomático

    • Disentería bacilar o shigellosis (heces


    sanguinolentas asociadas con dolor
    intestinal, pus)
    Shigella
    • invade la capa epitelial de
    recubrimiento pero no lleva a cabo
    penetración
    • Dentro de los 2-3 días
    – Disentería por daño de células
    epiteliales del intestino

    • A veces diarrea acuosa sin disentería


    toxina Shiga
    • neurotóxica
    • enterotóxica
    • citotóxica
    • inhibe la síntesis de proteínas
    (actuando sobre el ribosoma 70S y
    eliminando el rRNA 28S)
    Shigellosis
    • El hombre es el único reservorio
    • Enfermedad de niños pequeños
    • Por contacto oral-fecal
    • Los adultos pueden adquirirla de los niños
    • Pueden transmitirla manipuladores de
    alimentos adultos infectados
    • ¡LAVARSE LAS MANOS!
    Tratamiento
    • Manejo adecuado de la deshidratación

    • La disentería severa normalmente se trata


    con antibióticos (ej. ampicilina).

    • En general los pacientes responden a la


    terapia con antibióticos y la duración de la
    enfermedad se reduce.
    Salmonella
    Salmonella
    • CLASIFICACIÓN
    Familia Enterobacteriaceae
    Género Salmonella:
    Salmonella enterica
    Salmonella bongori
    Salmonella
    • ESTRUCTURA ANTIGÉNICA
    Antígeno O (LPS):
     Mayores (de grupo).
     Menores.
    Antígeno H (flagelar)
    Antígeno Vi (capsular)
    PATOGENIA
    SALMONELLAS GASTROENTÉRICAS

    Puerta de entrada: vía oral


    Invasión y multiplicación (intestino
    delgado)
    Muerte celular y extensión a células
    adyacentes/tejido linfoide.
    PATOGENIA
    SALMONELLAS TIFO-PARATÍFICAS
     Puerta de entrada: vía oral
     Colonizan mucosa intestinal.
     Invasión y multiplicación. No causan lesiones
    importantes
     Linfáticos locales (placas de Peyer). Sangre
     Fagocitadas por macrófagos. Se localizan en
    hígado, bazo, médula ósea. Vesícula biliar,
    intestino.
     Eliminación: vía fecal
    GÉNERO SALMONELLA
    FACTORES DE VIRULENCIA
     Fimbrias (?)
     Sistemas de secreción tipo III:
     SPI-1: invasión.
     SPI-2: supervivencia en interior macrófago.
     Cápsula (Ag Vi)
     Evaden fagocitosis.
     Dificulta el depósito de Complemento
     Enmascaran Ag O.
     Lípido A, toxinas (?)
     Supervivencia intracelular.
    GÉNERO SALMONELLA
    FACTORES PREDISPONENTES

    Edad.
    Gástrico:
     Hipocloridia, tránsito rápido.
    Intestinal:
     Tratamiento antimicrobiano.
     Diverticulosis, fístulas, estenosis.
    Sistema inmunológico:
     Desnutrición, diabetes, neoplasias, SIDA.
    CUADROS CLÍNICOS
    SALMONELLAS GASTROENTÉRICAS

    ENTERITIS:
    Incubación 6-48 h.
    No complicada: Curación
    espontánea (3-15d).
    Bacteriemia persistente, sepsis por
    Gram negativos.
    Estado portador: raro
    CUADROS CLÍNICOS
    SALMONELLAS TIFO-PARATÍFICAS

    FIEBRES ENTÉRICAS:
     Incubación: 10-14d (3d-3s).
     Fiebre y signos inespecíficos: cefalea,
    mialgias, anorexia. (1 semana)
     Fiebre alta, estupor, roseola,
    hepatoesplenomegalia. Signos
    gastrointestinales (3-4 semanas)
     Infecciones localizadas muy variables
     Complicaciones tardías: hemorragia,
    perforación intestinal
     Estado portador.
    GÉNERO SALMONELLA
    DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO

    Salmonellas entéricas:
    Diagnóstico Directo
     Muestra: Heces
     Cultivo: medios selectivos,
    diferenciales, de enriquecimiento
     Identificación:
     Bioquímica (género).
     Serológica (grupo).
    GÉNERO SALMONELLA
    DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO

    Salmonellas tifo-paratíficas:
    Diagnóstico Directo
     Muestra: Sangre ( médula ósea)
     Cultivo: medios no selectivos.
     Identificación:
     Bioquímica (género).
     Serológica (grupo).
    Mc Conkey
    Agar
    GÉNERO SALMONELLA
    TRATAMIENTO ENTERITIS

     Tratamiento sintomático, no
    antimicrobianos.
     Antimicrobianos:
     Indicaciones: <1 año, >50 años,
    inmunodeprimidos, portadores
    de prótesis o injertos vasculares
     Fluorquinolonas, azitromicina,
    cefalosporinas 3ª.

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