Lab Agua

Universidad de Camagüey “Ignacio Agramonte
Loynaz”
Facultad de Ciencias Aplicadas
Departamento de Ciencia y Tecnología de los
Alimentos
Carrera de Licenciatura en Ciencias Alimentaria
Tema: Análisis microbiológico

de agua.
Curso: 2019-2020
Objetivo:
- Aplicar la técnica del número más probable
para cuantificar MOs. coliformes en agua.
- Expresión de los resultados.
Análisis microbiológico del agua.
Se puede definir el análisis microbiológico como el conjunto de
operaciones encaminadas a determinar los microorganismos
presentes en una muestra problema de agua.
Análisis microbiológico del agua
El interés se centra en los ENFERMEDAD AGENTE
microorganismos patógenos, ORIGEN BACATERIANO
entre los que se incluyen Fiebres tifoideas y Salmonella typhi,
diferentes tipos de bacterias, paratifoideas Salmonella paratyphi A y
B
virus, protozoos.
Disentería bacilar Shigella
Cólera Vibrio cholerae

Gastroenteritis agudas y Escherichia coli
diarreas Campylobacter
Yersinia enterocolitica
Salmonella sp
Shigella
En los países en vías de desarrollo las enfermedades producidas por estos
patógenos son uno de los motivos más importantes de muerte prematura, sobre
todo de niños. Normalmente estos microorganismos llegan al agua mediante las
heces y otros restos orgánicos que producen las personas infectadas.
Métodos de análisis:
• Bacterias coliformes termotolerantes y
Escherichia coli
• Enterococos
• Clostridium perfringens
• Enumeración de microorganismos
cultivables
• Recuento de colonias aerobias
Otras pruebas complementarias:

•Salmonellas
•Estafilococos patógenos
•Enterovirus
•Protozoos
TOMA DE MUESTRAS PARA ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO
Las muestras que se tomarán para el análisis deben ser

representativas para poder determinar así su calidad
microbiológica.
Su análisis debe comenzar antes de que hayan transcurrido 6
horas desde el momento de la toma de muestra.
En circunstancias excepcionales, las muestras pueden
conservarse a una temperatura de 4ºC durante un periodo
máximo de 24 h antes de su análisis.
Para su recogida debe utilizarse frascos estériles y recolectarse

cantidades comprendidas entre 500 y 1000 ml.
Toma de muestras para análisis microbiológico
Si el agua procede de un abasto público o privado,

antes de recoger la muestra, se debe flamear la
llave u orificio de salida, se abrirá y se hará circular
unos minutos a fin de no tomar la que ha estado en
contacto con las tuberías mucho tiempo. Cuando el
agua se extrae por bomba, ésta se hará funcionar
durante cinco minutos antes de tomar la muestra.
ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO:
Bacterias coliformes termotolerantes y
Escherichia coli
Bacilos Gram negativos, aerobios o anaerobios
facultativos, no esporulados, oxidasa negativos,
capaces de crecer en presencia de sales biliares o
agentes tensoactivos que fermentan la lactosa con
producción de ácido y gas a 35,0 ºC de 24 horas a 48
horas y que pueden presentar actividad de la enzima
β-galactosidasa. La mayoría de las bacterias del grupo
coliforme son de los géneros Escherichia, Citrobacter,
Klebsiella y Enterobacter pertenecientes a la familia
Enterobacteriaceae.
Análisis microbiológico:
Escherichia coli.
Bacteria del grupo coliformes que fermentan
la lactosa y manitol con producción de ácido, produce indol a
partir del triptófano, oxidasa negativa, no hidroliza la urea,
considerada como el indicador más específico de una
reciente contaminación fecal y la presencia eventual de
microorganismos patógenos
El método se basa en la propiedad que
tienen los MOs coliformes de fermentar la
lactosa con producción y formación de gas
a una temperatura entre 35 a 37°C. durante
24 a 48 h. Consiste en un ensayo
presuntivo en caldo lauril triptosa o caldo
lactosado, seguido de una prueba
confirmativa de los tubos que han
producido gases en la prueba presuntiva.
En la prueba confirmativa se utiliza el medio
selectivo Caldo bilis Verde Brillante y se incuba
cada tubo durante 24 h a 37 y a 44.5°C,
respectivamente para comprobar la presencia
coliformes totales y/o termotolerantes
respectivamente. Para determinar la presencia
de E. coli, cada uno de los tubos con formación
de gas a 45°C, se les realiza el ensayo de Indol.
ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO: Bacterias coliformes
Prueba presuntiva
1- Sembrar 10 ml de una muestra de agua en
cada uno de los tubos (serie de 5) que contiene
10 ml de caldo lactosado o caldo lauril triptosa
(los tubos contienen en su interior una campana
de Durhan).
2- Incubar 24 a 48 horas a 37°C
3- Anote los tubos en los que se ha formado
gas al cabo de 24 y 48 horas.
Prueba confirmativa
1- De cada uno de los tubos de la prueba
presuntiva que han producido gas, tomar
una muestra con asa de platino
(previamente flameada en el mechero).
2- Inocular en tubos con Caldo Bilis
Verde Brillante.
Prueba confirmativa
3- Incubar a 37 y 44.5 ºC, respectivamente
durante 24 horas.
4- Anote los tubos que presentan gas en la
campana de Durham y turbidez. Estos
confirman la presencia de coliformes.
5- Con esos datos vaya a la tabla de NMP
que se anexa y determine el número más
probable.
Sus resultados se expresan en Número Más

Probable (NMP) cuando se determina por la
técnica de tubos múltiples de fermentación, en
Unidades Formadoras de Colonias (UFC)
cuando se realiza por la técnica de filtración por
membrana o en presencia o ausencia según la
técnica de siembra directa de agua por
presencia o ausencia.
Coliformes termotolerantes
Subgrupo de las bacterias del grupo coliforme
que fermentan la lactosa a (44,0 ± 0,2) ºC en 24
horas siendo Escherichia coli el principal
representante. Sus resultados se expresan de
igual forma que los coliformes totales.
Expresión de los resultados
El número de tubos positivos en las pruebas confirmativas se llevan a la tabla
de NMP y se expresa como:
Índice de número más probable (NMP) de bacterias coliformes y E.coli en 100
mL de agua.
Tabla: Índice de NMP NC 827:2010 Agua potable. Requisitos sanitarios

No.de tubos Índice de NMP
positivos
0 < 2,2
1 2,2
2 5,1
3 9,2
4 16
5 > 16
Otras determinaciones:
Método de filtración por
membrana: se determina el número
de coliformes mediante filtración por
membrana de volúmenes
determinados del agua e incubación
sobre medios compuestos por
lactosa (agar lactosa TTC con
heptadecilsulfato de sodio) y una
temperatura de 44,5ºC.
Método de filtración por membrana:
 Se coloca un filtro de membrana estéril
sobre el soporte de filtración y se conecta el
matraz a una bomba eléctrica de vacío.
 Si se trata de agua potable se filtran 100 mL
de muestra, y 0,1 y 1 mL si se trata de aguas
no potables, previamente homogeneizadas.
 Mediante pinzas esterilizadas, se transfiere
la membrana filtrante sobre el medio de
cultivo contenido en una placa Petri, de
modo que la superficie de filtración quede
hacia arriba. Cerrar e invertir la placa e
incubar a 44,5ºC durante 24 h.
Conteo de bacterias aerobias: son todas las
bacterias heterótrofas, aerobias o anaerobias
facultativas, mesófilas y psicotróficas capaces
de crecer en un medio de agar nutritivo.
Este método se basa en contar el nº de

colonias desarrolladas en una placa de medio
de cultivo sólido (APC), en el que se ha
sembrado un volumen conocido de agua,
transcurrido un tiempo (48-72 h) y una
temperatura de incubación de 37°C.
Conteo de bacterias aerobias:
UTILIDAD
 Evaluar el estado de los recursos de agua
en su origen.
 Eficacia del proceso de tratamiento de las
aguas destinadas al consumo humano.
 Indica la limpieza y el estado de los sistemas
de distribución.
 Permite detectar cambios anómalos en el
número de microorganismos en la red de
distribución.
Otras
Enumeración de
determinaciones: enterococos:
determinación del número de
enterococos intestinales mediante la
filtración por membrana de un volumen
determinado de agua e incubación en el
medio de Slanetz y Bartley a una
temperatura de 37ºCdurante 48 h.
Tras la incubación, se consideran como
colonias típicas de enterococos todas
las que muestren un color rojo, marrón o
rosado, en el centro o en toda la
colonia, consecuencia de la reducción
del cloruro de trifeniltetrazolio (incoloro)
a trifenilformazán(rojo).
Otras
Determinación
determinaciones:de Clostridium
perfringens: determinación del número de
C. perfringens mediante filtración por
membrana de un volumen determinado de
agua e incubación en AGAR m-cp a una
temperatura de 44ºC durante 24 h en
condiciones de anaerobiosis.
Tras la incubación, se consideran como
colonias típicas de C. perfringens todas las
que muestren un color amarillo opaco,
consecuencia de la acidificación del medio
tras la fermentación de la sacarosa, y que
cambien a color rosa o rojo al cabo de 20 a
30 segundos de exposición a vapores de
hidróxido de amonio.
Bibliografía
 Standard methods for the examination of water
and wastewater. multiple-tube fermentation
technique for members of the coliform group.
section 9221
 NC 827:2010 Agua potable — requisitos
sanitarios “Aspectos sanitarios del agua.
Enfermedades transmitidas a través de las
aguas”

Lab Agua

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

Lab Agua

Cargado por

Información del documento

Título original

Derechos de autor

Formatos disponibles

Compartir este documento

Compartir o incrustar documentos

Opciones para compartir

¿Le pareció útil este documento?

¿Este contenido es inapropiado?

Copyright:

Formatos disponibles

Lab Agua

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

Universidad de Camagüey “Ignacio Agramonte

Tema: Análisis microbiológico

Cólera Vibrio cholerae

Otras pruebas complementarias:

Las muestras que se tomarán para el análisis deben ser

Para su recogida debe utilizarse frascos estériles y recolectarse

Si el agua procede de un abasto público o privado,

Sus resultados se expresan en Número Más

Tabla: Índice de NMP NC 827:2010 Agua potable. Requisitos sanitarios

Este método se basa en contar el nº de

También podría gustarte