Seleccion, Mantenimiento y Mejoramiento

SELECCION, MANTENIMIENTO Y MEJORAMIENTO
DE MICROORGANISMOS DE INTERES
INDUSTRIALMANTE
SELECCIÓN
Pueden obtenerse de:
• Fermentaciones naturales: vino, pan, queso, materiales en descomposición.
• Animales y plantas enfermos: vacunas.
• Suelo:
es el mayor almacén, pero también el más difícil de manejar ya que se puede

encontrar todo tipo de microorganismo y en una concentración de 100 millones
por gramo de suelo (gran variedad y cantidad).
SELECCIÓN
• Colecciones internacionales de cultivos tipo
• Para obtener nuevos productos metabólicos se aíslan cepas de

ambientes extremos como:
 grandes altitudes
 hábitats fríos
 aguas marinas
 profundidades en los océanos
 desiertos
 géiseres
 campos de petróleo
SELECCIÓN
• Las industrias poseen su propia colección de organismos. La
mayoría ha sido mejorada a través de mutaciones o ingeniería
genética. Estos organismos tienen patentes y pueden ser
utilizados en:
› reacciones específicas de biosíntesis (crecimiento celular y
Polisacáridos)
› reacciones de degradación (alcochol, acido cítrico, maltosa, etc)

SELECCIÓN
• Temperatura:
Hongos 20-22°C; Actinomicetos 28°C
• pH:
Hongos pH ácido; Bacterias pH neutro
• Oxígeno:
Todos los productores son aerobios (necesitan O2)
• Carbono:
Los actinomicetos usan glicerol, quitina o almidón.
• Nitrógeno:
Los actinomicetos usan caseína, arginina (amino ácido) o asparagina (amino ácido).
SELECCIÓN
• A escala industrial se utilizan como microorganismos
productores de amino ácidos a las bacterias.
• Como microorganismos productores de vitaminas se utilizan

levaduras y hongos filamentosos (eucariotas).
SELECCIÓN
• Para la búsqueda de estos microorganismos se debe utilizar
en el medio el sustrato de la enzima que queremos
manifestar, por ejemplo si buscamos:
› Amilasas ----> debemos añadir almidón
› Celulasas ----> debemos añadir celulosa

SELECCIÓN
• Las siguientes son lugares donde encontramos cultivos de
microorganismos, en estos lugares podemos comprar los
microorganismos deseados.
“American Type Culture” (bacterias, levaduras, algas, actinomicetos, mohos,
protozoos, virus y líneas celulares (U.S.A)
“Collection Nationales de cultures de Microoganismes” (Francia)
“Northern Regional Research Laboratory” (U.S.A.)
“National Collection Type Culture” (Londres)

CARACTERISTICAS DESEABLES DE M.O
1.Pequeño tamaño de la célula microbiana y elevada relación de superficie/volumen, con rápido uso de
nutrientes para la producción de estructura celular. El crecimiento es así muy rápido (20 minutos por
división en E. coli).
2.Diversidad fisiológica. Cualquier sustancia química, natural o artificial, puede ser asimilada o modificada
por algún microorganismo. Medios de cultivo baratos, poco refinados, pueden soportar buenos crecimientos
de los microorganismos industriales.
3.Persistencia. En condiciones desfavorables: Muchos microorganismos producen formas de resistencia

inactivas en condiciones desfavorables pero capaces de regenerar el microorganismo original cuando las
condiciones vuelven a ser favorables. Es deseable que los microorganismos industriales puedan ser estables
genéticamente para que mantengan sus propiedades y no degeneren con el cultivo.
4.Posibilidad de alterar sus programas metabólicos mediante mutación o manipulación genética.
5.Producción de sustancias de interés. Cuando los microorganismos producen sustancias que han de ser
consumidas por el hombre, los animales o las plantas cultivadas el microorganismo productor debe obtener
la calificación GRAS (Generally Regarded As Safe).
6.Facilidad de manejo en el laboratorio y la industria. Es deseable que los microorganismos industriales

permitan desarrollar etapas de tratamiento downstream lo más sencillas posibles.
AISLAMIENTO
1. Búsqueda al azar (shotgun screening): A partir de muestras tomadas
en ambientes naturales o artificiales se intenta aislar el mayor número
de microorganismos posible, con lo que se obtiene diversidad, para
luego someter a cada uno de los microorganismos aislados a pruebas
concretas de producción de sustancias determinadas.
Es un procedimiento lento, pero que, al obtener microorganismos muy

diferentes fisiológicamente, permite establecer grandes “librerías de
cultivos” que pueden luego ser sometidos a diversos procedimientos de
escrutinio orientado.
AISLAMIENTO
2. Búsqueda objetiva (objective screening): Se establece desde el
principio un criterio de selección estricto, de manera que solo se
conservan los microorganismos que son capaces de superar esa
prueba concreta.
Los microorganismos que no pasan la prueba no son detectados o

son ignorados. Esta aproximación puede ser más rápida en cada
caso concreto, pero debe repetirse para cada nueva necesidad o
criterio que se considere.
LA TOMA DE MUESTRAS
• Para obtener nuevas cepas puede llevarse a cabo
en ambientes muy variados, ya que los
microorganismos pueden estar presentes en casi
cualquier sitio.
• De nuevo es importante evitar el reaislamiento
continuo de un mismo microorganismo, es decir,
mantener la diversidad de la colección.
CONSERVACIÓN DE CULTIVOS Y
MANTENIMIENTO DE PROPIEDADES
• Los cultivos deben mantenerse puros, viables, estables

genéticamente y accesibles de forma lo más sencilla
posible.
• Para uso inmediato o en cortos periodos de tiempo, se

suele emplear el cultivo en serie o resiembra periódica
PARA LA CONSERVACIÓN DURANTE LARGOS
PERIODOS DE TIEMPO
1. Inmersión en aceite mineral: Los cultivos de hongos
filamentosos no esporulantes pueden conservarse cubiertos
con aceite mineral estéril. Esto reduce la evaporación del
agua del organismo, y detiene el metabolismo al reducir el
intercambio de gases. Los cultivos cubiertos con aceite
mineral se mantienen a unos 10ºC durante meses, incluso
años.
PERIODOS DE TIEMPO
2. Liofilización:
Es el método más habitual para la conservación a largo plazo (años). Los

cultivos en crecimiento activo se mezclan con leche descremada estéril
(15-20%) o sacarosa estéril (12%), se introducen en ampollas de vidrio
adecuadas y se congelan rápidamente. Los viales así formados se
conectan a una fuente de vacío, lo que produce la sublimación del agua.
Posteriormente, y sin romper el vacío, las ampollas se sellan a la llama.
PERIODOS DE TIEMPO
3.Congelación:
a. Congelación lenta:
En general conviene mezclar los cultivos con glicerol a

concentraciones finales de 12-25%. El glicerol impide la formación
de cristales de hielo en el agua celular, que romperían las
estructuras internas. A –20/-30ºC suelen plantearse grandes
problemas de viabilidad al producirse una enorme heterogeneidad
de temperatura en la muestra.
PERIODOS DE TIEMPO
b. Congelación Rápida
A –70ºC, en ultracongeladores especiales, la conservación en

presencia de glicerol es muy apropiada para bacterias, levaduras y
cualquier tipo de esporas (de hongos o de bacterias).
El acceso al cultivo conservado es fácil e inmediato a –193ºC en

nitrógeno líquido, la conservación es excelente en la mayoría de los
casos, para virus, bacterias, hongos, células vegetales y animales,
etc.
PERIODOS DE TIEMPO
4. Preservación en celulosa
El empleo de un soporte de papel para el mantenimiento de células en condiciones

de ausencia de agua es un procedimiento adecuado y sencillo, para conservar
cepas.
La técnica consiste en embeber tiras de papel de filtro con una suspensión densa
de organismos en suero, glutamato de sodio u otro agente, las mismas son
posteriormente colocadas en tubos para su posterior secado bajo vacío.
De esta forma se han logrado conservar cepas de Streptomyres y Salmonella por

períodos de hasta 2 años a temperatura ambiente.
Mejoramiento de microorganismos
industriales
1. Selección natural:
Mutaciones espontaneas
2. Mutación inducida:
Físicos:
Radiación UV
Químicos:
Acido nitroso.
N-metil-N'-nitro-N-nitrosoguanidina (NTG).
3. Recombinación genética

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• Animales y plantas enfermos: vacunas.

es el mayor almacén, pero también el más difícil de manejar ya que se puede

• Para obtener nuevos productos metabólicos se aíslan cepas de

 profundidades en los océanos

› reacciones de degradación (alcochol, acido cítrico, maltosa, etc)

Hongos 20-22°C; Actinomicetos 28°C

Hongos pH ácido; Bacterias pH neutro

Todos los productores son aerobios (necesitan O2)

Los actinomicetos usan glicerol, quitina o almidón.

• Como microorganismos productores de vitaminas se utilizan

› Amilasas ----> debemos añadir almidón

› Celulasas ----> debemos añadir celulosa

“Northern Regional Research Laboratory” (U.S.A.)

“National Collection Type Culture” (Londres)

3.Persistencia. En condiciones desfavorables: Muchos microorganismos producen formas de resistencia

4.Posibilidad de alterar sus programas metabólicos mediante mutación o manipulación genética.

6.Facilidad de manejo en el laboratorio y la industria. Es deseable que los microorganismos industriales

Es un procedimiento lento, pero que, al obtener microorganismos muy

Los microorganismos que no pasan la prueba no son detectados o

• Los cultivos deben mantenerse puros, viables, estables

• Para uso inmediato o en cortos periodos de tiempo, se

Es el método más habitual para la conservación a largo plazo (años). Los

En general conviene mezclar los cultivos con glicerol a

A –70ºC, en ultracongeladores especiales, la conservación en

El acceso al cultivo conservado es fácil e inmediato a –193ºC en

El empleo de un soporte de papel para el mantenimiento de células en condiciones

De esta forma se han logrado conservar cepas de Streptomyres y Salmonella por

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