Polaridad de Fases y Ejercicios Cromatografía

Índice de Polaridad, P’
 Es una medida numérica de la polaridad

relativa de los disolventes, utilizado en
cromatografía de reparto. • Para una mezcla de A y B el índice de
 Este índice varía de 10,2 para solventes Polaridad está dado por:
muy polares como el agua y -2 para los
fluoroalcanos muy poco polares. 𝑃 ′ 𝐴𝐵 =𝜙 𝐴 𝑃 ′ 𝐴 + 𝜙 𝐵 𝑃 ′ 𝐵
• Donde:
• P’A y P’B : índice de polaridad de A y B
• ΦA y ΦB : Fracción en volumen de A y B
Índice de Polaridad vs Resolución
 La forma más sencilla de mejorar la  Una aproximación del efecto de P sobre k, es
resolución cromatográfica de dos considerar que 2 unidades de P’ origina una variación
especies es modificar el factor de de diez veces en k.
retención (k), el cuál se puede modificar  Para una Fase Normal (Fase móvil de baja polaridad)
cambiando el índice de Polaridad.
 Esto se consigue utilizando fases móviles ′ ′
( 𝑃 1 − 𝑃 2)
formadas por mezclas adecuadas de dos 𝑘2 2
= 10
disolventes.  𝑘1 Inversa (Fase móvil de elevada
Para una Fase
polaridad)
′ ′
( 𝑃 2 − 𝑃 1)
𝑘2 2
= 10
𝑘1
Datos
Columna Fase inversa
tRA = 31,3 min
to = 0,48 min
Solventes: A: 30% MeOH
B: 70% H2O
′ ′
( 𝑃 2 − 𝑃 1)
a) kA = (31,3 – 0,48)/0,48 = 64,21 kA 𝑘2 2
= 10
𝑘1
b) Proporción de Agua/MeOH para k = 5
𝑃 ′ 𝐴𝐵 = 𝜙 𝐴 𝑃 ′ 𝐴 + 𝜙 𝐵 𝑃 ′ 𝐵 5
′
( 𝑃 2 − 8 ,67 )
2
=10
6 4 , 21
= 8,67
(1 – X ) *10,2 𝐿𝑜𝑔 ( 5
)
64 , 21
=
𝑃 2 − 8 , 67
2
0,74 => MeOH 74%
H2O 26% 𝑃 2=8 , 67+2 𝐿𝑜𝑔 ( 5
)
64 , 21
=6 , 45
Ejercicios Cromatografía
Análisis Instrumental II
Composición de solventes
 Se analizó una muestra mediante HPLC fase inversa para determinar el
contenido teobromina y cafeína en una muestra, utilizando una mezcla 50 %
metanol y 50 % agua, los datos se muestran en la siguiente Tabla:
Teobromina Cafeína
Tiempo de retención 5,27 min 10,79 min
Ancho de peak - muestra 1,12 min 1,45 min
Soluto no retenido 1,05 min
 Se propone cambiar la proporción de solventes a 70% metanol/30% agua.

Evalúe los efectos del cambio utilizando la resolución para cada condición.
 (P H2O = 10,2, Pmetanol = 5,1)
Rs1 = 4,29
Rs 2 = 1,33
Calcular ppm de Acetona en 3,46 gramos de una muestra, si al extraerla con 50 mL de un solvente apropiado y
posterior inyección de 50 uL en un cromatógrafo de gases la señal obtenida presenta un área de 3,52.
Paralelamente se preparó un standard de Acetona con una concentración de 3 mg en 100 ml del mismo
solvente. Se inyectan 50 microlitros de esta solución en el cromatógrafo, obteniéndose una señal de 4,76.
R: 320,81 ppm
La determinación de cafeína en un comprimido analgésico se realiza mediante HPLC, usando una de

calibración obtenida con diferentes soluciones patrones de cafeína de las cuáles una vez preparadas se
inyectan 10 uL de cada una en el cromatógrafo, obteniéndose los siguientes resultados :
Concentración del patrón [ ppm ] ...... 50 100 150 200 250
Señal [unidades arbitrarias ] ................ 8354 16925 25218 33584 42002
La muestra se prepara disolviendo un comprimido en 10 mL de metanol y la solución obtenida es diluida a
25 mL con metanol. Esta solución es luego filtrada y 1 mL de ella es enrasada con metanol a 10 mL, y de
esta dilución se inyectan 10 uL en el cromatógrafo dando una señal de 21469 para la cafeína presente.
Calcule los mg de cafeína en el comprimido.
R: 32 mg de cafeína
Curva de Calibración
La determinación de cafeína en diferentes productos se realiza mediante HPLC,
usando una curva de calibración obtenida con diferentes soluciones patrones de
cafeína de las cuáles una vez preparadas se inyectan 10 uL de cada una en el
cromatógrafo, obteniéndose los siguientes resultados:
Concentración del patrón [ ppm ] 50 100 150 200 250
Señal [unidades arbitrarias ] 8354 16925 25218 33584

42002
Se analizan tres muestras:
• Un volumen de Coca Cola es calentado a ebullición suave por unos 10 minutos y
después de enfriar y filtrar se inyectan 20 uL en el cromatógrafo obteniéndose una
señal de 14755 unidades arbitrarias.
• En otra determinación se pesan 2 gr de té en bolsa y se trata con agua caliente
bidestilada . La solución obtenida después de enfriar es enrasada con agua para
HPLC a 500 mL . De esta solución se filtra un pequeño volumen y de la solución
filtrada se inyectan 20 uL al cromatógrafo obteniéndose una señal de 19842
unidades arbitrarias.
• Otra muestra de café se prepara disolviendo 2,0 gr en agua y posterior dilución
hasta 1 Lt. De esta solución se toma una alícuota de 40 mL, que luego de ser
filtrada se diluye con agua hasta completar 200 mL. De esta dilución se inyectan 30
uL en el cromatógrafo dando una señal de 21469 para la cafeína presente.
Determine la cantidad de cafeína en los tres productos, expresándola en las unidades
Coca – Cola Té Café
Señal = 167,91* [ ] + 30,1 Señal = 167,91* [ ] + 30,1 Señal = 167,91* [ ] + 30,1
20 uL  14755 20 uL  19842 30 uL  21469

10 uL  7377,5 10 uL  9921 10 uL  7156
Señal = 7377,5 => [ ] = 44 ppm Señal = 9921 => [ ] = 59 ppm Señal = 7156 => [ ] = 42 ppm
2,0 g café  1000 mL

40 mL  200 mL
210 ppm 42 ppm
C = 42 * 200mL/40 mL = 210 ppm

La determinación de un producto tóxico en un alimento se realizó pesando 4,66 gr del alimento y
posterior tratamiento de extracción del tóxico con un solvente adecuado. La solución obtenida se
enrasó a 100 mL, y de esta solución se inyectan 50 uL en un HPLC obteniéndose una señal de
área 32670. Por otra parte, siguiendo la misma metodología se preparó un standard disolviendo
2,6 mg del tóxico en mismo solvente y posterior dilución a 200 mL. La inyección de 25 uL de la
solución del standard presentó una señal de área 30500.
Calcule ppm de tóxico en el alimento.
R: 149,36 ppm

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Índice de Polaridad, P’

 Es una medida numérica de la polaridad

 Se propone cambiar la proporción de solventes a 70% metanol/30% agua.

La determinación de cafeína en un comprimido analgésico se realiza mediante HPLC, usando una de

Señal [unidades arbitrarias ] 8354 16925 25218 33584

Señal = 167,91* [ ] + 30,1 Señal = 167,91* [ ] + 30,1 Señal = 167,91* [ ] + 30,1

20 uL  14755 20 uL  19842 30 uL  21469

2,0 g café  1000 mL

C = 42 * 200mL/40 mL = 210 ppm

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