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    PDF Metodos de Diagnostico Viral

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    Karen Chiquez Lujan
    Este documento describe diferentes métodos para el diagnóstico directo e indirecto de infecciones virales. Entre los métodos directos se encuentran la detección del virus como partícula o como agente infeccioso a través de técnicas como el aislamiento viral, la microscopía electrónica o la detección de antígenos virales. Los métodos indirectos incluyen la detección de anticuerpos como la inmunofluorescencia indirecta y el ELISA para determinar la presencia de IgM e IgG. El documento también explica consideraciones sobre la to

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    Este documento describe diferentes métodos para el diagnóstico directo e indirecto de infecciones virales. Entre los métodos directos se encuentran la detección del virus como partícula o como agente infeccioso a través de técnicas como el aislamiento viral, la microscopía electrónica o la detección de antígenos virales. Los métodos indirectos incluyen la detección de anticuerpos como la inmunofluorescencia indirecta y el ELISA para determinar la presencia de IgM e IgG. El documento también explica consideraciones sobre la to

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    Este documento describe diferentes métodos para el diagnóstico directo e indirecto de infecciones virales. Entre los métodos directos se encuentran la detección del virus como partícula o como agente infeccioso a través de técnicas como el aislamiento viral, la microscopía electrónica o la detección de antígenos virales. Los métodos indirectos incluyen la detección de anticuerpos como la inmunofluorescencia indirecta y el ELISA para determinar la presencia de IgM e IgG. El documento también explica consideraciones sobre la to

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    Este documento describe diferentes métodos para el diagnóstico directo e indirecto de infecciones virales. Entre los métodos directos se encuentran la detección del virus como partícula o como agente infeccioso a través de técnicas como el aislamiento viral, la microscopía electrónica o la detección de antígenos virales. Los métodos indirectos incluyen la detección de anticuerpos como la inmunofluorescencia indirecta y el ELISA para determinar la presencia de IgM e IgG. El documento también explica consideraciones sobre la to

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    de 42

    WL OVG]TOKCK Y]OVCKC CL[GLN] N]]GBN

    @OD]NMONHNBÍC
    Pueden clasificarse en KO]GD[NT e OLKO]GD[NT:

    KG[GD[CL C KG[GD[CL
    HC YC] CL[ ODWG] YN
    [ ODWHC T FN]@CKNT
    VO] CH, Cb
    YN]
    VBOG] LCNH@ CDDONL
    VO] CH
    NC KGH

    VO] WT
    Métodos directos

    MÉTODOS
    DIRECTOS

    Concentración
    viral

    Ingreso del
    virus
    TOMA DE MUESTRA
    Consideraciones generales para la toma de
    muestra para diagnǫsti co directo de la infecciǫn
    viral

    ❓
    ❑ APrdeeccouzada (raspados, Iavados, …) ↝

    ¡Células!
    ❑ Localización primaria de la infección y otras
    posibles
    ❑ Transporte y conservación
    ❑ Decontaminación
    ❑ lnfección ³ enfermedad (viremia)
    Tipo de Muestras
    ❓ Vifus fespifAtofios: AspifAdo nAsofAfíngeo
    ❓ Lesiones CutÁneAs: fAspAdo e hisopAdo
    ❓ SAngfe: AislAmiento vifAl

    ❓ Suefo: búsquedA de Anticuefpos (sefologíA)

    ❓MAtefiA FecAl: entefovifus

    ❓OfinA: AislAmiento de CMV

    ❓ LC R : entefovifus y pAfotiditis

    ❓MuestfAs oculAfes: hisopAdo


    ❓Tejidos: AislAmiento vifAl o inmunohistoquímicA
    METODOS DIRECTOS

    EI virus como EI virus como Detección de ÁcDideotescncuió


    partícuIa viraI: agente infeccioso: Antígenos viraIes: cnIediceos
    Microscopía AisIamiento ViraI - Técnicas viraIes:
    EIectrónica CuItivos CeIuIares InmunoIógicas (IF, Técnicas
    EIA, etc.) de BioIogía
    @ nhgduhc
    r (YD] …)
    9

    SvieranlecsepsoitrammLá. s de 10
    Es muy específica pero poco sensible.
    partículas
    Sirve para muestras con mayor
    contenido de virus, por ejemplo:
    Líquidos vesiculares (herpes, varicela,
    viruela, etc.); verrugas (papiloma,

    etc.)
    El aislamiento del virus es la técnica “gold
    standard” a pesar de las técnicas
    moleculares, este tiene una sensibilidad y
    una especificidad muy alta.

    Sin embargo, existen algunas desventajas en


    el aislamiento del virus: El proceso suele ser
    lento, ya que demanda días a semanas para
    la identificación, y en consecuencia puede no
    estar disponible a tiempo para influir en la
    atención del paciente.
    El aislamiento viral se basa en la capacidad infectiva del agente infeccioso presente en la muestra, se puede
    realizar en:

    ❑ Huevos embrionados: Lesiones de membrana, estudio de líquidos y tejidos.


    ❑ Animales de laboratorio: Enfermedad o muerte.
    ❑ CULTIVOS CELULARES (primarios, línea continua): Efecto citopático, producción de hemaglutininas,
    Interferencia.

    El aislamiento viral no es un mȩtodo de diagnǫsti co rápido en la ruti na de laboratorio, ya que necesita de cierta

    infraestructura y condiciones (ti empos de culti vo, pasajes en ciego, condiciones de la muestra) para su realizaciǫn.
    Inoculación intracraneal

    Inoculación intraperitoneal

    Irneocicéunlancaiócni
    Parálisis flácida de las
    extremidades posteriores como Parálisis espástica secundaria a
    ddoeprartaón se ve con la infección por el virus infección por Coxsackie virus B
    Coxsackie A
    aislamiento viral
    Herpes simplex virus
    Poxvirus
    Rous sarcoma virus

    Influenza virus
    Mumps virus

    Aislamiento viral en
    huevos embrionados

    Influenza virus
    Mumps virus
    Newcastle
    disease virus
    Avian
    adenovirus
    Un cultivo celular es obtenido de explantes de órganos o de embriones de animales,
    además existen comercialmente las llamadas líneas celulares, por
    técnicas
    adecuadas se obtiene MONOCAPAS CELULARES donde se “sie m bra” al virus.
    Luego de incubación correspondiente se detecta al virus por sus
    efectos
    CITOPÁTICOS o por técnicas como la hemadsorción u otras.
    Detección de Antígenos Detección de Ácidos
    viraIes: nucIeicos viraIes1
    Técnicas InmunoIógicas TécniMcaosIdeecuBIa
    iorIogía
    IL MWL OFHWORESCEL CI
    A DIRECTA (ID)
    SOLDAS DE ACIDOS
    RIA DIRECTO L WCHEICOS

    EIA (EHISA DIRECTO)

    DETERMILACIOL DE
    TEST DE ABHWTIL ACIOL ACIDOS L WCHEICOS
    VIRAHES YOR SOLDA
    IL MWL OCROMATOBRAFIA SILTETICA

    AMYHIFICACIOL DE ACIDOS
    L WCHEICOS VIRAHES
    MEDIALTE WL A REACCIOL
    E L CADELA DE HA
    YOHIMERASA (YCR)
    FASE SÔHIDA
    (AL TICWERYO AL TICWERYO
    ESYECÍFICO) MARCADO COL
    ISOTOYO
    RADIOACTIVO

    MWESTRA
    (Ag viraI)

    RIA DIRECTO
    Se detecta por emisión de
    radiación cuando es
    positivo
    EIA (Enzimoinmunoanálisis Directo)
    ELZIMA HqHug brngcsdgdcinbl rcg bdc

    nls ugsl tzrci`tnc k c l k n


    EIA DIRECTO AL TICWERYO
    dnhnr
    MARCADO
    (COL JWBADO)

    MWESTRA
    ALTÍBELO VIRAH

    AL TICWERYO ESYECÍFICO
    EL FASE SÔHIDA
    Tȩ c n ic a s d e a g lu ti n a c iǫ n .-
    Sobre una tarjeta de reacción se mezclan la muestra clínica que alberga al antígeno con el
    reactivo que contiene a los anticuerpos específicos. Al entrar en contacto los anticuerpos mediante los dos puntos de
    unión con el antígeno establecen entramados de muchas moléculas de antígeno y de anticuerpos. Esta aglutinación de
    partículas antigénicas forma grumos (Figuras 2a y 2b). Para que estos grumos sean fácilmente visibles
    macroscópicamente, los anticuerpos están unidos por el fragmento Fc a partículas inertes de mayor tamaño, tales como

    partículas de látex.
    Aspecto del
    fondo del tubo

    Resultado Resultado

    positi vo negati vo
    PCR: Reacción en cadena de Ia poIimerasa
    La PCR es una amplificación de secuencias específicas del DNA. Se basa en la utilización de secuencias
    cortas de nucleótidos sintéticos llamados primers o cebadores, que se hibridan de forma especifica con
    cada una de las cadenas de DNA (muestra donde existirían ácidos nucIeicos viraIes), previamente
    desnaturalizadas, llamadas moldes o templados. Para que la reacción tenga lugar se usa una enzima,
    Taq pol (ADN Polimerasa termoestable obtenida de la bacteria Thermus aquaticus ) y deoxinucleótidos
    trifosfatos (dNTPs). La función natural de la DNA polimerasa consiste en reparar y replicar el DNA. Los
    deoxinucleótidos trifosfatos se necesitan como ladrillos para la construcción. El nucleótido al cual se

    utenma plladpo.liSme esirnatseatizsaeraásícuonma pclaedmeneantsaimrioplededelaDNbaAs,ecoemn

    plalempoesnictaiórina ycoalrirnesapdoanadiceandtae"dperimlaerca"d. ena


    • Se realiza una serie repetida de ciclos cada uno compuesto por 3 pasos básicos:
    •
    a. Desnaturalización del ADN doble cadena por la elevada temperatura (95ºC).
    •
    b. Acoplamiento de los primers, desciende la temperatura (entre 55ºC-72ºC).
    • c. Elongación del primers, aquí se eleva la temperatura a 72ºC permitiendo la incorporación de los
    deoxinucleótidos.
    •
    Mientras tanto se van deplecionando los primers y los deoxinucleótidos, y se van sintetizando nuevas
    cadenas de DNA. Al final se consiguen miles de copias de DNA del fragmento de DNA limitado por los
    "primers ". Los fragmentos de DNA así obtenidos se pueden identificar por varias técnicas:
    visualización en geles de agarosa o poliacrilamida mediante tinción con bromuro de etidio y examen
    con luz ultravioleta, o hibridación con una sonda marcada. La combinación de la PCR y las sondas de
    ácidos nucleicos marcadas promete ser el método más sensible para la detección e identificación de
    los virus.
    @G[ NDNT
    ONDO] GD[ NT

    ON@WNNFHWN] GTDG GNZO@NON@WNNANAH


    NDOA ONDO] GD[ A OTOT ONDO] GD[ N R GT[ G] N
    (OFO) (GOA) MHN[
    Wétodos Indirectos

    • Detección de IgM
    •
    Infección aguda
    •
    Infección congénita
    •

    • FR: f+ f-
    ↓ ObB:
    •
    IgM Captura

    • Detección de IgG
    • Seroconversión
    • Recién Nacidos
    • Avidez
    ON@WNNFHWN] GTDGNDOA
    ONDO] GD[ A (OFO)
    La IFI, es un método rápido y confiable
    para la determinación de anticuerpos
    antivirales en el suero del paciente.
    Posibilidad de determinar las clases de
    anticuerpos mediante el empleo de
    conjugados.
    Se basa en la unión de anticuerpos
    antivirales presentes en el suero del
    paciente a los antígenos
    virales expresados en la
    superficie
    citoplasma yde células infectadas, que
    han sido fijadas a un portaobjeto de
    vidrio.
    ENZIMOINMUNOANALISIS INDIRECTO (EIA)

    Hugbn s g cbrgbc sustrctn


    GNZO@
    Método versátiI, reIativamente económico,Asensib Ie qkyculdkgnergIeccdtduinral c dnl
    objetiva (instrumentaI).
    g l zi` c dnhnr

    AN[ O OgB marcado

    AN[ ODWG] YN GN HA @WGT[ ] A


    (OgB )

    AN[ OBGNN VO] AH GN


    FATG TÔHODA
    MUESTRA

    Conjubado
    La técnica de WB se basa en
    la separación electroforética
    proteínas virales que son
    de
    posteriormente

    inmovilizadas enl
    presencia de anticuerpos
    específicos contra cada una
    deoaesas
    p proteínas.
    bpjeetlodedneitrdoectelrum

    loinsaarcolna
    RESTERN MLOT (RM)
    •
    Muy especifica
    • Método confirmatorio
    3

    2
    4

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