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    ELECTROFORESIS

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    EvaKamarillo
    La electroforesis es una técnica de separación de moléculas basada en su migración bajo la influencia de un campo eléctrico, dependiendo de su carga, tamaño y estructura. Puede utilizarse gel de poliacrilamida o agarosa como medio de soporte, y la velocidad de migración depende de factores como la carga, tamaño y forma de las moléculas, así como parámetros del campo eléctrico y el medio.

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    ELECTROFORESIS

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    La electroforesis es una técnica de separación de moléculas basada en su migración bajo la influencia de un campo eléctrico, dependiendo de su carga, tamaño y estructura. Puede utilizarse gel de poliacrilamida o agarosa como medio de soporte, y la velocidad de migración depende de factores como la carga, tamaño y forma de las moléculas, así como parámetros del campo eléctrico y el medio.

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    La electroforesis es una técnica de separación de moléculas basada en su migración bajo la influencia de un campo eléctrico, dependiendo de su carga, tamaño y estructura. Puede utilizarse gel de poliacrilamida o agarosa como medio de soporte, y la velocidad de migración depende de factores como la carga, tamaño y forma de las moléculas, así como parámetros del campo eléctrico y el medio.

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    ELECTROFORESIS

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    La electroforesis es una técnica de separación de moléculas basada en su migración bajo la influencia de un campo eléctrico, dependiendo de su carga, tamaño y estructura. Puede utilizarse gel de poliacrilamida o agarosa como medio de soporte, y la velocidad de migración depende de factores como la carga, tamaño y forma de las moléculas, así como parámetros del campo eléctrico y el medio.

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    ANALISIS

    INSTRUMENTAL
    INTRODUCCION
    La electroforesis es una tcnica
    de separacin que puede ser
    utilizada con fines analticos y
    que fue introducida por el
    qumico sueco Arne Tiselius.
    El inters principal de este
    investigador fue la qumica de
    las protenas sricas. Por su
    trabajo pionero en este campo,
    Tiselius recibi el Premio
    Nobel en 1948.
    Es una tcnica de separacin que consiste en el
    transporte de iones a travs de una disolucin por
    accin de un campo elctrico.
    La velocidad de migracin en un sistema
    electrofortico es:
    Inversamente proporcional a la viscosidad del medio.
    Proporcional a la fuerza aplicada al campo.
    Proporcional a la carga neta de la molcula
    Inversamente proporcional al tamao de la molcula.
    Inversamente proporcional al coeficiente de friccin.
    Electroforesis
    Es una tcnica para la separacin de molculas que se basa en la
    migracin de solutos inicos bajo la influencia de un campo elctrico;
    estas partculas migran hacia el ctodo o nodo, en dependencia de
    una combinacin de su carga, peso molecular y estructura
    tridimensional.
    Afecta la estructura de las protenas
    por lo tanto, tambin afecta a la
    funcin de la misma.
    Separacin, visualizacin y
    cuantificacin del numero de
    protenas de una solucin.
    Ventajas
    Desventajas
    Movimiento inico en un
    campo elctrico
    Durante el proceso de migracin de una partcula cargada en un
    campo elctrico, dependiendo de la carga neta ocurrir lo siguiente:
    a. Si la partcula posee carga + se mover hacia el ctodo.
    b. Si la partcula posee carga se mover hacia el nodo.
    c. Si la partcula no posee carga no se mover





    PARMETROS QUE INFLUYEN EN LA
    MOVILIDAD ELECTROFORTICA
    Tenemos:
    1) Parmetros externos
    Campo elctrico
    Temperatura
    2) Parmetros relacionados con el solvente y con el
    sistema electrofortico
    Viscosidad
    Fuerza inica
    La naturaleza de los iones componentes
    El pH
    3) Parmetros relacionados con el soluto
    La carga
    La forma y tamao de los iones

    EQUIPO ELECTROFORTICO
    - +
    muestra
    muestra
    +
    fuente de
    alimentacin
    fuente de
    alimentacin
    cable
    cable
    -
    tampn
    tampn
    cubeta
    cubeta
    gel
    gel
    electrodo
    electrodo
    ctodo
    nodo
    electrodo
    ctodo
    nodo
    * Fuente de alimentacin
    * Cubeta
    * Tampn de electroforesis
    * Soporte electrofortico
    (gel)
    * Dos electrodos
    nodo (+)
    ctodo (-)
    Componentes:
    (E. horizontal)
    (E. vertical)
    Proceso Electrofortico
    Electroforesis libre:
    Electrodos
    Protenas
    disueltas en el
    buffer
    Buffer
    Una disolucin tamponada de
    la mezcla de protenas se coloca
    en una clula de observacin en
    forma de U.
    http://pt7mdv.ceingebi.unam.mx/computo/pdfs/met/Electroforesis/Electroforesis/Introduccion/BoundaryElectr.jpg
    Electroforesis de zona :
    La disolucin a tratar se aplica
    como una mancha , o como una
    banda, y las partculas migran a
    travs del disolvente, utilizando
    adems un medio de soporte
    inerte y homogneo, tal como
    el papel o ciertos tipos de geles.
    Bioqumica
    Christopher K. Mathews
    Cmaras Electroforticas
    Cmaras horizontales
    En la electroforesis de tipo
    horizontal generalmente,
    se trabaja con ADN o
    ARN.
    Cmaras verticales
    En la electroforesis de tipo
    vertical, se analizan tanto
    molculas de ADN como
    protenas.
    Medios de Soporte
    Papel
    Mtodo sencillo y rpido



    Separacin de:
    Protenas
    Oligonucletidos
    Carbohidratos
    Lpidos
    Desventajas
    Se desgarra fcilmente
    Distorsiona las bandas
    Se produce interaccin entre
    las protenas y los grupos
    hidroxilo de la celulosa, por lo
    tanto la migracin se frena

    Acetato de
    Celulosa
    Se usa en el anlisis de fluidos biolgicos

    Tiempo de anlisis corto

    Sencillez de la tcnica

    Desventaja: Su dbil resolucin
    Gran parte de los grupos hidroxilo de la celulosa se han
    esterificado por acetilacin, por lo que no hay interaccin
    con las protenas.
    Gel
    Almidn Tcnica barata, fcil y rpida




    Poliacrilamida






    Agarosa
    Soporte mas usado
    en electroforesis
    De alta resolucin
    Sus componentes
    son txicos
    Buena resolucin
    Separacin de
    molculas grandes
    con radio mayor a 5-
    10nm (virus, cidos
    nucleicos)
    Factores que afectan la
    Electroforesis
    Carga neta
    Tamao
    Intensidad del campo elctrica
    Temperatura
    Medio de soporte
    Buffer
    Electroforesis en gel de poliacrilamida
    Qu es la poliacrilamida?


    Polmero generado a partir de acrilamida y
    bisacrilamida. Forma un gel con poros y se usa para
    realizar electroforesis de macromolculas, en
    especial protenas y fragmentos de cidos
    nucleicos.










    Como se realiza la electroforesis
    en gel de poliacrilamida?

    Primeramente se necesita el gel de poliacrilamida,
    quien funciona como filtro gracias a su estructura
    porosa.

    Como se realiza la electroforesis
    en gel de poliacrilamida?
    Colocar las muestras en los
    pocillos.

    Se aplican cargas elctricas
    Como se realiza la electroforesis
    en gel de poliacrilamida?
    Aplicar un colorante tal como el azul de
    Coomassie.
    http://www.quimicaviva.qb.fcen.uba.ar/contratapa/aprendiendo/capitulo14.htm
    Electroforesis en gel de
    poliacrilamida en SDS
    Es otra tcnica electrofortica tambin aplicada en
    protenas en la que las mismas sufren desnaturalizacin.


    SDS?
    De que habla?


    El SDS (Dodecilsulfato sdico) es un compuesto
    desnaturalizante con una carga fuertemente negativo.

    Como se realiza la electroforesis
    en gel de poliacrilamida SDS?
    Primero deben
    desnaturalizarse las protenas.


    En presencia de SDS la
    protena:

    http://ahorrarnoshacebien.com/articulos/agua-mito-
    realidad.html
    http://mariajosevegamiranda.blogspot.com/2012/1
    1/proteinas.html
    http://cvclavoz.com/blog/paralel
    o/page/6/
    http://bioquimica6ce.wikispaces.co
    m/Proteinas
    Como se realiza la electroforesis
    en gel de poliacrilamida SDS?
    Se colocan las
    muestras en los pocillos
    y se aplican las cargas
    elctricas.



    Se visualizan
    aadiendo un
    colorante como el azul
    de Coomassie

    http://farmacologiabasica.blogspot.com/2008/08/electro
    foresis-en-gel.html
    http://coleccion.educ.ar/coleccion/CD17/contenidos/mt/biologia/t
    ecnologiaadn/estudiar_expresion_gen.html
    Electroforesis en gel de
    agarosa
    o Es una tcnica utilizada para fragmentos grandes
    de ADN.

    Agarosa?
    La agarosa es un polmero de galactosa


    http://www.ecogen.com/producto.asp?id=196
    Cmo se lleva a cabo la
    electroforesis en gel de agarosa?
    Primero se debe mezclar el polvo de agarosa con
    un buffer.

    http://www.ugr.es/~mgarrido/Protocolos.html
    Cmo se lleva a cabo la
    electroforesis en gel de agarosa?
    http://html.rincondelvago.com/electroforesis-de-acidos-
    nucleicos.html
    Cmo se lleva a cabo la
    electroforesis en gel de agarosa?
    http://oldearth.wordpress.com/2008/10/16/experimentos-de-biologia-
    molecular-1-electroforesis/

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