CULTIVOS CELULARES

Es el conjunto de procedimiento que hacen posibles el mantenimiento de células de organismo

pluricelulares in vitro,preservando al máximo sus características fisiológicas,bioquímicas y
genéticas

CULTIVO DE ORGANOS
Consiste en mantener un órgano entero o parte de él en la interfase entre un medio de cultivo
artificial y una atmósfera controlada

1. Se suelen mantener vivos,durante un tiempo limitado

2. Los distintos tipos celulares diferenciados presentes en el órgano
3. La estructura histológica y la arquitectura del órgano

● Estos cultivos no pueden propagarse,ya que la mayor parte de los tipos celulares no
proliferan,únicamente se producen crecimiento de algunas células indiferenciadas o
embrionarias en el tejido.

CULTIVO DE EXPLANTES

Tejidos vivos o explantes son también susceptibles de cultivo

Consiste en adherir un fragmento de tejido a una superficie ( placa o frasco de cultivo )

Y nutrirlo con un medio de cultivo .
● En estas condiciones, las células periféricas del explante se multiplican y proliferan,
migran por la superficie del soporte

CULTIVO DE CELULAS
Se realiza a partir de suspensiones celulares,que se introducen en el recipiente adecuado junto
con un medio de cultivo y se incuban en las condiciones óptimas para que las células proliferen
● Este es más habitual y se realiza a partir de muestras de cualquier tipo de tejido:
Restos ovulares,líquido amniótico ,sangre periférica,médula ósea ,célula
hematopoyética,células madre; ETC
● Hay dos tipos primario y secundario
Cultivo celular primario CULTIVO CELULAR SECUNDARIO
La suspensión celular de partida se La suspensión celular se obtiene a partir
obtiene disgregando las células de un de un cultivo primario y otro secundario
tejido por métodos mecánicos o ,mediante un (pase) también puede
enzimáticos se puede realizar a partir de obtenerse a partir de una línea celular
esta muestra o seleccionando un tipo mediante congelación.
celular concreto .
 APLICACIÓN DE LOS CULTIVOS CELULARES
Tiene múltiples aplicaciones ,tanto de investigación básica e investigación aplicada

INVESTIGACIÓN BÁSICA INVESTIGACIÓN APLICADA

● Cualquier aspecto relacionado con el ● Inmunología, para producción de
metabolismo celular: Ciclo producción de anticuerpos
celular,rutas metabólicas ,flujos monoclonales
intracelulares ,diferenciación ● Farmacología, para producir de
,transformación,etc fármacos
● Interacciones celulares: entre células ● Toxicología, para estudios de
,con la matriz intracelular ,con el citotoxicidad ,carcinogenesis y
medio ambiente. mutagenesis.

BIOLOGÍA DE LAS CÉLULAS EN CULTIVO

Una vez que las células en suspensión se les añade el medio de cultivo ,se introduce en un
recipiente adecuado (frasco de cultivo) y se incuba en condiciones óptimas de temperatura y
humedad,las células empiezan a crecer.

LA CURVA DE CRECIMIENTO DEL CULTIVO

Es la representación gráfica de la dinámica de crecimiento de un cultivo, es decir , la
concentración de células por los días de evolución del cultivo.
 Fase de latencia Fase de crecimiento Fase estacionaria
● Es un tramo recto sin exponencial ● Es un tramo recto de
pendiente o con cierta ● Es la curva en el pendiente
concavidad.correspon tramo recto con nula,sucede a partir
de a las primeras 24 pendiente de los 6-7 días de
horas de evolución de elevada,dura evolución del cultivo y
cultivos en las que no aproximadamente 6-7 es la fase en la que el
se produce días y corresponde a número de células
crecimiento y el la fase en la que el permanece constante.
número de células número de células
puede disminuir aumenta de manera
exponencial hasta
alcanzar un máximo.

FORMAS DE CRECIMIENTO
CRECIMIENTO EN MONOCAPA
Consiste en que las células crecen adheridas sobre una superficie sólida( plástico o vidrio)
(Este tipo de células son dependiente al anclaje , es decir necesitan adherirse a una
superficie sólida para poder crecer)
TIENE DIFERENTES ETAPAS DE DESARROLLO

ADHESIÓN A UNA PROLIFERACIÓN Y INHIBICIÓN POR

SUPERFICIE FORMACIÓN DE COLONIAS CONTACTO
● Corresponde al ● Una vez las células se ● Con el paso del
periodo durante el han adherido al tiempo, las células
cual las células se soporte empiezan a ocupan toda la
van adhiriendo al proliferar superficie disponible y
soporte ,exponiéndose por entran en confluencia
toda la superficie y ,produciéndose un
formando colonias fenómeno demonio
celulares inhibición por contacto

CRECIMIENTO EN SUSPENSIÓN
Las células no necesitan pegarse a una superficie para crecer ,por lo que se mantiene
dispersas en el seno del medio de cultivo y proliferando,también tiene diferentes etapas

ADAPTACIÓN AL MEDIO PROLIFERACIÓN EN INHIBICIÓN POR

DE CULTIVO SUSPENSIÓN DENSIDAD
Es un periodo relativamente Una vez adaptadas las En el cultivo en el que se
corto ,en el que las células se células dispersas en el medio alcanza un numero de cultivo
adaptan al medio de de cultivo empiezan a crítico de las células en la
cultivo,antes de iniciar la proliferar aumentando relación con el volumen de
proliferación ,se corresponde exponencialmente su número medio de cultivo y los
a la fase de lactancia de la ( fase exponencial de nutrientes que quedan en
 curva de crecimiento crecimiento) el.en este las células dejan
de crecer.

COMPORTAMIENTO VITAL TRAS SUCESIVOS PASES

LINEA CELULAR PRIMARIA
Se obtiene a partir de un tejido u órgano mediante un cultivo primario que se mantiene durante
un tiempo limitado.
● La población celular aumenta en cada pase, y suele estabilizarse a partir del tercero.
Las células se hacen uniformes y homogéneas.
● Cuando el cultivo primario se realiza a partir de una mezcla celular compleja, el tipo
células con mayor tasa de crecimiento desplaza a los demás, impidiendo su
proliferación.
LA FASE SENESCENCIA
Es la etapa vital en que las células van perdiendo su capacidad de dividirse y el cultivo acaba
muriendo.
● Debido a que con las sucesivas divisiones los telómeros de los cromosomas se acortan
y las células van acumulando anomalías genéticas y pidiendo ayuda.
● Conservan una línea celular primaria congelando células antes de alcanzar la secuencia
LINEA CELULAR CONTINUA
Son aquellas que se obtiene a partir de un cultivo primario y que se mantiene en cultivo por
tiempo ilimitado de un cultivo primario y que se mantiene en cultivo por tiempo ilimitado
mediante pases seriados.
● Crecen indefinidamente en cultivo ( son inmortales)
● Pierden la dependencia del anclaje para crecer,por lo que pueden crecer en suspensión.
● Pierden la inhibición por contacto
● Puede invadir tejidos y producir tumores
● Acumulan anomalias geneticas, normalmente son ,aneuploidies, con multiplices
aberraciones cromosomicas.
LA APARICIÓN DE LÍNEAS CELULARES CONTINUAS SE PUEDEN TAMBIÉN INDUCIR
POR LO MÉTODOS SIGUIENTES

● MÉTODOS FISICOS: Irradiacion del cultivo

● MÉTODOS QUÍMICOS : Tratamiento con productos químicos carcinogénicos.
● MÉTODOS BIOLÓGICOS : (Infección vírica, transformación de ADN )

FACTORES QUE INTERVIENE EN EL CULTIVO

El cultivo de células implica extraerla de su entorno, introducirlas en un recipiente
adecuado y luego colocarlo en un incubador con las condiciones adecuadas. Para que
este proceso se desarrolle de forma correcta hay que controlar los siguientes factores: -
El soporte físico en el que van a crecer las células.
● La composición y las propiedades fisicoquímicas del medio de cultivo.
● La atmósfera gaseosa.
● Las condiciones de incubación.
EL SOPORTE FÍSICO
Las células en cultivo suelen crecer en monocapa adheridas a la superficie del recipiente en el
que se realiza el cultivo, por ello debemos tener en cuenta 3 aspectos en cuanto a los
recipientes: material del que están fabricados, su diseño o forma y los posibles tratamientos de
la superficie.
LOS MATERIALES DE CULTIVO
Los materiales deben permitir la adhesión de células, ser fáciles de esterilizar y tener un
mínimo de calidad óptica para ver el cultivo con un microscopio invertido. Los más utilizados
son el vidrio y los plásticos, pero hay otros más:
● Vidrio: reutilizable, fácil de limpiar y esterilizar con calor en autoclave, buena calidad
óptica.
● Plástico desechable: bajo coste. fácil esterilización por irradiación, buena calidad
óptica, no se reutiliza por lo que hay menos probabilidad de contaminación.
● Matrices tridimensionales: se hacen con geles de colágeno o esponjas de celulosa,
recubiertas o no por colágeno, que hace que forman estructuras tridimensionales
porosas. Se utilizan para cultivar algunos tipos celulares que se introducen dentro de la
red tridimensional y crecen organizándose de forma parecida a como lo hacen en su
tejido de procedencia.
● Microesferas de sephadex o poliacrilamida: las células crecen adheridas a estas
microesferas, de forma que se cultivan células dependientes de anclaje como si fuese
un cultivo en suspensión, aumentando la superficie de crecimiento disponible.
● Metales: se utiliza para aplicaciones concretas, como el cultivo de células de la glía. Se
usan metales como el paladio o el acero.

CARACTERÍSTICAS Y TIPOS DE RECIPIENTES DE CULTIVO

Hay muchos recipientes para cultivo, pero la característica más importante de estos es la
superficie útil de cultivo, ya que sabiendo eso, calculamos la cantidad de células que se
siembran y se calcula el nº aproximado final de células cuando se alcanza la confluencia.
 PLACAS PLACAS PETRI FRACOS O BOTELLAS PARA
MULTIPOCILLOS BOTELLAS DE INCUBADOR TIPO
ROUX ROLLER

placas con un nº Placas de cultivo

variable de pocillos circulares con tapa,
(6-96) con un fondo : botellas cilíndricas
su tamaño está entre En estos frascos se
plano, recubiertas por de distintos
los 2 '5 y 10 cm de pueden realizar
una tapa no tamaños, con gran
diámetro, y la cultivos cerrados o
hermética. El superficie de
superficie de cultivo abiertos, los abiertos
diámetro está entre crecimiento y que se
entre 10 y 78 cm2. permiten el
los 8 y 35 cm, y la incuban sobre
Tiene el mismo uso intercambio gaseoso
superficie de cultivo rodillos que las
que las placas con la atmósfera del
entre 0’5 y 10 cm2 hacen girar
multipocillo incubador a la vez
por pocillo. Se lentamente,
utilizan para que se previene la haciendo crecer
experimentos contaminación. Un células en toda la
puntuales tipo especial de frasco superficie interior de
simultáneos con de cultivos es el que la botella.
distintas líneas la superficie de
celulares o distintas crecimiento es un
condiciones de portaobjetos del
cultivo. No se mismo material que el
aconseja usar estas resto del frasco. Una
placas para mantener vez finalizado el
líneas celulares cultivo se retira el
debido a su mala medio de cultivo y el
estanqueidad y por el resto del frascos se
riesgo de despega de la
contaminación. superficie de
crecimiento, de forma
que se puede manejar
como un portaobjetos
convencional, fijando
y tiñendo a monocapa
que ha crecido sobre
él mediante tinciones,
técnicas de
hibridación in situ…
TRATAMIENTO DE LA SUPERFICIES
para mejorar la adhesión de las células dependientes de anclaje en las superficies de cultivo,
se pueden tratar con proteínas de matriz extracelular (colágeno, laminina, fibronectina…) o
proteínas naturales o sintéticas (gelatina y polilisina).
COMPOSICIÓN Y PROPIEDADES DEL MEDIO DE CULTIVO
Son medios nutritivos que sustituyen el medio natural en el que se encuentra la célula
fisiológicamente.
● Aportar a la célula todo tipo de sustancias necesarias para el completo desarrollo
metabólico que permita a la célula proliferar.
● Reunir una serie de características fisicoquímicas que:
1. Generen condiciones microambientales adecuadas para el desarrollo celular.
2. Permitan acumular temporalmente productos de desecho del metabolismo celular.
COMPOSICIÓN DEL MEDIO DE CULTIVO
● Sales minerales. La base de un medio de cultivo es una solución salina equilibrada en
la que se disuelven el resto de los componentes. La concentración de bicarbonato
sódico es especialmente importante por su papel en la regulación del pH en conjunción
con la concentración de COz ambiental.
● Tampón. El medio de cultivo tiene que estar tamponado, puesto que las células son
muy sensibles a los cambios de pH. El tampón más utilizado ha sido el bicarbonato, sin
embargo, en la actualidad se aconseja el uso del tampón HEPES
● Glucosa. La glucosa se incluye en los medios de cultivo como fuente de energía, como
componente único o junto con otros hidratos de carbono.
● Aminoácidos. El medio de cultivo debe contener, como mínimo, todos los aminoácidos
esenciales. Se puede suplementar además con otros aminoácidos, dependiendo de las
necesidades de las células que se quiere cultivar.
● Vitaminas.Varía mucho de un medio a otro y va a depender de la concentración de
suero que se utilice, son necesarias porque influyen en la tasa de crecimiento y en la
supervivencia de las células.
● Suplementos orgánicos de bajo peso molecular. Se incluyen ácidos grasos
esenciales y otros lípidos, nucleótidos….
● Indicador de pH. Registra cambios mínimos en el rango de pH óptimo para el
crecimiento.El más utilizado es el rojo fenol.
● Hormonas y factores de crecimiento. La mayor parte de los medios de cultivo
básicos, conocidos como medios no definidos, con suero animal en proporción variable.
● Antibióticos y antifúngicos. Es esencial para prevenir la contaminación por bacterias,
levaduras y hongos. Se pueden utilizar solos o en combinación, pero hay que controlar
muy bien la concentración final para evitar dañar las células. Los antibióticos más
utilizados son:
❖ Gentamicina a una concentración de 50 pg/ml.
❖ Combinación de penicilina/estreptomicina a concentraciones de 100 U/ml y 100 ug/ml,
respectivamente. El antifúngico más utilizado es la anfotericina B a una concentración
de 2-5 ug/ml.
CARACTERÍSTICAS FISICOQUÍMICAS DEL MEDIO DEL CULTIVO
● PH. Las células crecer en un pH relativamente estrecho. El pH óptimoes de 7,4 (rango
7,2-7,6), aunque algunos tipos concretos pueden crecer mejor a otros pH.
● Osmolaridad. Los medios de cultivo deben ser isotónicos o ligeramente hipotónicos
respecto de las células que se cultivan. En general, las células en cultivo toleran valores
de osmolaridad en el rango de 260-320 mOsm/kg.
● Viscosidad. No suele ser un parámetro limitante para el crecimiento de las células.
Depende principalmente de la concentración de suero que se use. Una viscosidad
ligeramente elevada tiene efecto protector durante la tripsinización y agitación del
cultivo. Cuando se usan medios libres de suero, se pueden añadir sustancias inertes
que aumentan ligeramente la viscosidad, como la carboximetil-celulosa o la polivinil
pirrolidona.
● Tensión superficial. Debe mantenerse baja y no suele ser problema en los cultivos
tradicionales. Únicamente en ciertos cultivos especiales en suspensión en los que se
burbujea COz puede producirse espuma en el cultivo. Para evitarlo se añaden agentes
antiespumantes.

LA ATMÓSFERA GASEOSA
Es la mezcla de gases en que se mantiene los cultivos;sus dos componentes mas importantes
son el O2 y el CO2
● OXÍGENO: Su concentración en la atmósfera es suficiente para cubrir las necesidades
de cualquier cultivo celular. Solo algunos cultivos de órganos requieren una mayor
concentración de oxígeno (hasta un 95%)por la mala difusión de este elemento al
interior del órgano.
● CO2: Tiene un papel muy importante en los cultivos celulares puesto que la fracción
disuelta en el medio está en equilibrio con el ion bicarbonato. Este equilibrio se rige por
las siguientes ecuaciones químicas:
CO2 + H20 5 H-CO; 5 HCO;- + H* HCO; + Na* = NaHCO;
En consecuencia, los niveles de COz pueden influir en el pH del medio cuando este
está tamponado con un tampón bicarbonato y, en cualquier caso, en la concentración de
bicarbonato cuando se utiliza otro sistema tampón. Por esta razón cada medio de cultivo
tiene una concentración recomendada de COz en la fase gaseosa, en función de la
cantidad de bicarbonato sódico que contiene. La concentración más habitual es del 5%,
con un rango entre 2% y 8%..
CONDICIONES DE INCUBACIÓN
El incubador es también el responsable de mantener las condiciones ambientales óptimas para
el crecimiento de las células, controlando dos parámetros:
● Temperatura. Influye en la tasa de crecimiento de las células. La temperatura óptima de
crecimiento suele ser la misma a la que están sometidas fisiológicamente en los organismos de
procedencia.
● Humedad.Importante para el buen crecimiento de las células. Debe ser suficientemente
elevada para evitar la evaporación del medio de cultivo, lo que produciría aumento de la
concentración de los componentes y de la osmolaridad, y variaciones de pH. Los incubadores
actuales tienen dispositivos que inyectan agua estéril para conseguir humedades relativas
alrededor del 95%

PROCEDIMIENTO DE CULTIVO CELULAR

DIGITALIZACION CELULAR
En obtener el tipo celular que nos interesa en suspensiones ,por lo cual hay que separar las
células entre sí y de la matriz extracelular en la que se encuentran inmersas.
MÉTODOS DE DISGREGACION CELULAR
Se realiza para cultivar células procedentes de un órgano o tejido
METODOS MECANICOS
Se basan en cortar,picar e incluso triturar suavemente fragmentos de órgano o tejido colocados
en una placa petri con tampón o medio de cultivo en el que se recogen las células disgregadas
tras filtrar para retirar los restos del tejido.
1° Se colocan los fragmentos de tejido o órgano sobre una criba de nylon o metálica, con un
diámetro de poro grande que permita el paso de las células.
2° Se aplasta la masa del tejido y se coloca la criba sobre una placa petri o se acopla a un tubo
falcon.
3° Se lava con un medio cultivo; en la criba quedaron los restos de tejido aplastado y las
células que se han separado del tejido pasan a la placa o al tubo suspendidas en el medio de
cultivo.

METODOS ENZIMÁTICOS
Se basan en el tratamiento del tejido con enzimas proteolíticas que digieren las proteínas de la
matriz extracelular, liberando las células englobadas en ella.

RECUENTO Y VIABILIDAD CELULAR

La densidad celular es el número de células por ML
● Colorante Vital » permite distinguir Células Vivas y muertas. El más usado es el azul
tripán que atraviesa a células con membrana rota. Visualización en microscopio :
Células azules que tienen rota su membrana citoplasmática y no son viables. Las
células blancas son las que el colorante no ha podido atravesar porque su membrana
citoplasmática está intacta; son células vivas y viables para un cultivo.
● Contaje » recuento de células viables y no viables. Se lleva a cabo en la marca de
contaje. La más Usada es la cámara Neubauer. Procedimiento: se diluye una alícuota
de la suspensión celular con disolución de azul tripán en PBS. Se monta la cámara de
Neubauer colocando un cubre cámaras encima; se añade 10 microlitros de la
suspensión teñida en cada cámara. Se deja reposar para que las Células sedimenten y
se visualiza la cámara con un microscopio óptico convencional; se cuentan Células
viables y no viables.
DESCONGELACIÓN DE LAS CÉLULAS
Es procedimiento habitual del laboratorio de cultivos celulares para iniciar cultivos
secundarios ,a partir de líneas celulares mantenidas en congelación, en nitrógeno
líquido a -80ºc
1. Incubar el vial que contiene las células congeladas en un baño a 37 grados (para
descongelarlas)
2. Limpiar la superficie externa del vial con etanol al 70 % para prevenir
contaminaciones
3. Transferir el contenido del vial a un tubo falcon de 5 ml y añadir 10 ml de medio de
cultivo antes calentado a 37 grados.
4. Centrifugar 4-5 min at 700-800 rpm.
5. Eliminar el sobrenadante, con lo que se elimina el DMSO
6. Añadir 4-5 ml del medio de cultivo completo. La suspensión esta lista para iniciar el
cultivo.
INICIO DEL CULTIVO DE SIEMBRA
Partiendo de una suspensión celular obtenida por disgregación, selección o
descongelación, el cultivo se inicia sembrando un número determinado de células. Este
procedimiento implica:
1. Elegir el tipo de recipiente que se va a utilizar para el cultivo.
2. En virtud del recipiente, establecer el número de células que se van a sembrar
inicialmente.
3. Hacer recuento de células viables en la suspensión.
4. Transferir un volumen de suspensión que contenga el número de células deseado a
un tubo falcon y lavarlas con medio de cultivo completo precalentado a 37 °C.
5. Diluir las células con el volumen adecuado de medio de cultivo completo e
introducirlas en el recipiente de cultivo.
6. Colocar el recipiente de cultivo en un incubador a la temperatura adecuada
(normalmente 37 °C), con la proporción de CO2 requerida (del 5%, habitualmente) y
95% de humedad.
MANTENIMIENTO DE CULTIVO
Los cultivos consiste en diferentes operaciones para el control de su viabilidad y
crecimiento,las operaciones más habituales son:
● El control periódico microscópico : Los cultivos se controlan
microscópicamente con la periodicidad que se estime oportuna (normalmente
entre 1 y 3 días), para lo cual se retiran del incubador (si son cultivos ventilados
hay que cerrarlos) y se examinan con un microscopio invertido para observar la
apariencia y el crecimiento de las células.
● El cambio del medio : Es la más frecuente es el cambio de medio de cultivo,
para renovar los nutrientes consumidos por las células y retirar los productos de
desecho generados por el metabolismo celular. El cambio de medio se suele
realizar cada 2-3 días y, en cualquier caso, siempre que se observe un cambio
de color del medio (viraje del indicador de pH). El cambio de medio nunca es
total, sino que se cambian sólo 2/3 de su volumen. De esta manera las
sustancias beneficiosas para el cultivo producidas y secretadas por las células
se mantienen.
● Los subcultivos o pases : Tras un cierto tiempo de cultivo (6-7 días), los
cultivos en monocapa se encuentran en situación de confluencia y los cultivos en
suspensión alcanzan una densidad crítica. En ambos casos el crecimiento se
detiene y hay que realizar un subcultivo o pase. Cultivos en monocapa Es
necesario despegar las células de la superficie del recipiente para poder hacer el
pase. Esto se puede hacer por métodos mecánicos, con un rascador, pero el
procedimiento más habitual es la tripsinización. La tripsinización es el
procedimiento de despegue de una monocapa de células de la superficie del
recipiente mediante una solución de tripsina/EDTA.
CONVERSACIÓN DE CÉLULAS
Para ahorrar tiempo y recursos, la manera más óptima de conservar las líneas
celulares es la congelación, la cual se encuentra muy por encima de los pases
seriados.
▹PROCEDIMIENTO:
● La suspensión de células obtenidas se lavaron con medio de cultivo para
después hacer un recuento de viables.
● Se centrifuga para retirar el medio de cultivo y este se sustituye por un
volumen adecuado de suero animal más 10% de DMSO (CH₃)2 SO. Deberíamos
obtener una densidad final de células en el medio de congelación de 10^6
células por mililitro aproximadamente.
● Esta suspensión se alícuota en criotubos ( aproximadamente 1 ml por tubo) y
se procede a la congelación progresiva (-20ºC durante 24 h, -80ºC durante 48 h,
nitrógeno líquido por tiempo indefinido).
CONTAMINACIONES
Las contaminaciones en los cultivos celulares se refiere principalmente a la
alteraciones del cultivo por la presencia de microorganismos no deseados y que
son omnipresentes en el ambiente.
▹BACTERIAS, LEVADURAS Y HONGOS: Las bacterias y las levaduras son
más habituales en cultivos de corto plazo y los hongos en los de largo plazo,
todas ellas provenientes de una fuente ambiental o por malas prácticas del
laboratorio. Su presencia desemboca en la muerte del cultivo en poco tiempo
debido a que las bacterias, levaduras y los hongos se multiplican más rápido que
las células de los cultivos. A su vez, el uso de antibióticos y antifúngicos no es
suficiente para prevenir esta contaminación.
Los cosméticos y antifúngicos no son suficientes para prevenir esta
contaminación
▹PREVENCIONES:
● Trabajo en condiciones de asepsia y cabinas de seguridad biológica clase II.
● Tener especial cuidado en los procedimientos que supongan la manipulación
de los recipientes de cultivo fuera de ambiente estéril y limpiar la superficie
externa de todos los viales y recipientes que se introduzcan en la cabina de
bioseguridad con etanol al 70%.
● En los incubadores sin control de humedad que tienen bandejas con agua en
el suelo hay que cambiar regularmente el agua y desinfectar periódicamente,
además, las bandejas.
▹MICOPLASMAS: Precaristas procedentes de las propias líneas celulares
continuas que se suministran ya contaminadas o de los sueros animales. No
tienen pared celular y pueden infectar cultivos y producir sin muerte o una
alteración en el crecimiento de sus células.
▹PREVENCIÓN:
● Aislar, eliminar y esterilizar cualquier cultivo positivo en cuanto se detecte.
● Si el cultivo es importante, se aísla y se puede intentar conservarlo tratándolo
con antibióticos (kanamicina, quinolonas) o suero inmune anti micoplasmas.
▹DETECCIÓN:
● Gránulos oscuros en el citoplasma de las células es signo de sospecha.
● Se confirma la contaminación mediante la tinción de las células con orceína o
DAPI; o se realiza una PCR con cebadores específicos.
▹VIRUS: Procedente de los sueros animales, son infrecuentes y muy graves. La
detección se basa en la observación del efecto citopático, los cambios
bioquímicos y moleculares, morfológicos y de viabilidad celular, visibles a
microscopía óptica, causados durante el ciclo de replicación viral, los cuales son
característicos de cada virus.
▹PREVENCIÓN:
● Se elimina el cultivo y se esteriliza mediante la irradiación.