PROCEDIMIENTO:

El equipo Cell-Dyn Emerald se basa en las siguientes metodologías para analizar muestras
sanguíneas:
Recuento por impedancia
El recuento por impedancia eléctrica se utiliza para hacer el recuento y medir el tamaño de WBC,
RBC y plaquetas. Este método está basado en el cambio de la medición en la resistencia eléctrica,
producido por partículas (células) suspendidas en un líquido conductor a medida que pasan por una
abertura de dimensiones conocidas. A uno de los lados de la abertura se sumerge un electrodo en el
líquido para crear una conducción eléctrica.
A medida que cada célula pasa por la abertura, se produce un cambio transitorio en la resistencia entre
los electrodos, produciendo un impulso eléctrico medible. El número de impulsos generado indica el
número de células que pasa a través de la abertura. La amplitud de cada impulso es proporcional al
volumen de la célula que lo produce.
Cada impulso se amplifica y se compara a los canales de voltaje de referencia internos. Estos canales
están delineados por tipificadores de tamaño calibrados para aceptar impulsos únicamente de cierta
amplitud. Asimismo, los impulsos se tipifican en canales de varios tamaños según la amplitud.
Análisis de leucocitos
El instrumento aspira 9,8 μl de la muestra de sangre. La sangre se mezcla con 2 ml de diluyente y
0,38 ml de hemolizante en la cámara de recuento de leucocitos. El reactivo hemolizante destruye los
eritrocitos y el estroma y rompe la membrana citoplásmica de los leucocitos, permitiendo la salida
del citoplasma.
Análisis de eritrocitos
El instrumento aspira 20 μl de la dilución de la cámara de recuento de leucocitos, y añade 1,5 ml de
diluyente a la cámara de recuento de eritrocitos para la dilución RBC/PLT.
Espectrofotometría de absorción y medición de la hemoglobina
La hemoglobina se mide con un cromógeno de metahemoglobina formado al utilizar el reactivo
hemolizante sin cianuro. La metahemoglobina se mide mediante espectrofotometría de absorción
usando un LED de 555 nm como fuente de luz.
Una vez completado el recuento de leucocitos, el LED emite un haz de luz a través de la cámara de
recuento de leucocitos. La concentración de hemoglobina es directamente proporcional a la
absorbancia de la muestra. Durante el lavado, se realiza una lectura de blanco. Las lecturas de blanco
y de la muestra se comparan entre sí para establecer la concentración de hemoglobina en la muestra.
La citometría hemática comprende el análisis detallado de cada uno de los datos que la conforman,
los cuales se dividen en tres partes: datos de la serie roja, datos de la serie blanca, y de la serie
trombocítica.
El Cell-Dyn Emerald es un sistema de hematología completamente automatizado, de alta calidad para
la utilización en el diagnóstico in vitro en laboratorios clínicos.
Se utilizan dos tipos de mediciones y diversas técnicas innovadoras para hacer un recuento, calcular
el tamaño y clasificar las células sanguíneas, y medir la hemoglobina. Los dos tipos de mediciones
comprenden:
• Tecnología de recuento por impedancia eléctrica – utilizada para mediciones de WBC, RBC y PLT
• Espectrometría de absorción – utilizada para mediciones de HGB
Las mediciones de hemoglobina se realizan en la cámara de recuento de leucocitos mediante la
espectrometría de absorción. El reactivo utilizado para dichas mediciones no contiene cianuro. Cada
medición se describe detalladamente en relación con cada parámetro.
En este apartado también se describen las alarmas del sistema y las alertas de datos.
➢ Basófilia difusa: Es el tinte basófilo de los eritrocitos en su última etapa de maduración que,
cuando se tiñen con colorantes supravitales corresponde a reticulocitos. También se le
denomina policromatofilia.
RETICULOCITOS.

Los reticulocitos se evidencian al ponerlos en contacto con una tinción especial. Los resultados se
informan en porcentaje de reticulocitos (con relación al total de eritrocitos) y en cifras absolutas por
mm3 de sangre.

2.3.1 PROPOSITO DEL EXAMEN:

El RNA ribosomal, que ocasiona la basófilia difusa del eritrocito policromático, es precipitado y
teñido con una tinción vital como el azul de metileno o el azul de cresil brillante que le da una imagen
filamentosa reticular fácilmente visible al microscopio, para ello, se preparan extensiones delgadas y
se cuenta el número de eritrocitos que contiene dicha preparación teñida, los que se consideran como
reticulocitos.

Con el propósito de identificar la importancia y utilidad clínica del recuento de reticulocitos,

realizando correctamente el recuento porcentual para obtener las cifras absolutas de reticulocitos por
mm3 de sangre.

2.4 TIPO DE MUESTRA: Sangre total con anticoagulante EDTA 4 ml.

2.12 INSTRUCCIONES DE TRABAJO:

1. Colocar tres gotas de sangre anticoagulada con EDTA, perfectamente mezclada en tubo
de ensayo de 12 x 75 mm.
2. Agregar tres gotas del colorante (azul de cresil brillante o nuevo azul de metileno).
3. Mezclar suavemente e incubar a 37ºC durante 20 minutos.
4. Resuspender los eritrocitos mediante mezclado suave y hacer extensiones delgadas.
 5. Cuando el frotis este seco, leer al microscopio. Contar 1000 eritrocitos, anotando el
número de reticulocitos encontrados durante esa cuenta.
Interpretación: Esta determinación permite diferenciar entre las anemias hipoproliferativas e
hiperproliferativa y permite evaluar reacción de la médula ósea a la anemia, y los resultados del
tratamiento contra este último problema. El recuento de reticulocitos es un excelente método
indirecto para evaluar la eritropoyesis, ya que cuando hay respuesta a la eritropoyetina se incrementa;
sin embargo, cuando la médula ósea no responde, los reticulocitos se encontraran normales o
disminuidos. Es de mayor utilidad, reportarlos en valores absolutos para evaluar la magnitud de la
eritropoyesis.

3.0 DETERMINACION DE ERITROSEDIMENTACION O VELOCIDAD DE

SEDIMENTACION GLOBULAR.

3.3 PROCEDIMIENTO: La velocidad de sedimentación de los glóbulos rojos se refiere al tiempo

que tardan en separarse del plasma, se mide en milímetros por hora.

3.3.1 PROPOSITO DEL EXAMEN: La determinación de la Eritrosedimentación por el método

de WINTROBE es un indicador sensible de procesos infecciosos e inflamatorios.

3.4 TIPO DE MUESTRA: Sangre Total anticoagulada con EDTA

3.12 INSTRUCCIONES DE TRABAJO:

1. Mezclar la sangre por inversión por lo menos durante 5 min.

2. Llenar un tubo de Wintrobe hasta la marca de 0 a 10 usando una pipeta Pasteur. Es importante
vigilar que no se formen burbujas en la columna de sangre o en el fondo del tubo al llenarlo.
Esto se logra haciendo resbalar la sangre por las paredes del tubo, iniciando en el fondo y
sacando la punta de la pipeta a medida que se va llenando.

3. Colocar el tubo en la gradilla de sedimentación, verificando que ésta se encuentre bien nivelada.

4. Dejar en reposo en una mesa sin vibraciones, durante 60 min.

5. Hacer la lectura de la interfase plasma\ eritrocitos y anotar la cifra. Corregir la lectura de la

Eritrosedimentación con el hematocrito usando la tabla de Wintrobe Landsberg. Anexo 1

En los pacientes pediátricos se realiza de la siguiente manera:

1.- Se mezcla la sangre total

2.- Se procede al llenado de un tubo capilar en cuyo extremo se sellara con plastilina, pegándolo en
la pared en una posición libre de vibraciones.

3.- Dejar reposar 1 hora

4.- Al cumplir el tiempo proceder a la lectura, que será en mm de plasma/paquete globular.

5.- Se reporta en mm/hora

3.13 CALCULOS:

La lectura, que será en mm/hora de plasma/paquete globular. En caso que se requiera corregir la
Eritrosedimentación con la tabla de Wintrobe es de la siguiente manera:

Extrapolando la lectura de la Eritrosedimentación del paciente con su Hematocrito y llevándolo al

hematocrito ideal según sea hombre o mujer, que finalmente nos dará la Eritrosedimentación real. Se
hace la corrección, solo en el caso de que el hematócrito del paciente sea menor de 42 en mujeres y
menor de 46 en hombres.

Se reporta: Velocidad de Sedimentación Globular _____________ en mm/hora

Interpretación: Aunque la prueba no es específica para alguna patología, se utiliza como un índice
de presencia de proceso inflamatorio agudo o proceso infeccioso. Se producen elevaciones
fisiológicas en el embarazo y durante la menstruación. La velocidad de Eritrosedimentación
disminuye en la anemia falciforme y en las hepatopatías severas.

3.17 INTERVALOS BIOLOGICOS DE REFERENCIA:

• Hombres de 0 -15 mm/hora

• Mujeres de 0- 13 mm/hora

4.0 PROCEDIMIENTO PARA LA DETERMINACION DE TIEMPO DE PROTROMBINA

4.2 DEFINICIONES:

➢ Tiempo de protrombina es una prueba que mide el tiempo que tarda en coagular el plasma
descalcificado con la adición de factor tisular artificial.
➢ El INR (índice normalizado internacional) es un estándar para monitorear pacientes que se
encuentran en tratamiento con anticoagulantes orales
➢ El ISI (Indicé de sensibilidad Internacional del reactivo)
4.3 PROCEDIMIENTO: Es la mejor prueba de sondeo para anormalidades de la vía extrínseca.
Mide la activación del factor X por el factor tisular y el complejo del factor VIIa, así como también,
las reacciones restantes de la vía común. Es decir mide los factores I, II, V, VII Y X.

4.3.1 PROPOSITO DEL EXAMEN: Determinar in vitro el tiempo de protrombina en plasma

citratado en el laboratorio de la CUSRS utilizando el equipo automatizado Destiny Plus. Identificar
la utilidad diagnostica del tiempo de protrombina y evaluar la terapia con los anticoagulantes orales.

PRINCIPIO DEL EXAMEN: El reactivo que se utiliza es una tromboplastina tisular (cerebro de
conejo) que contiene iones de calcio y estabilizadores en un buffer o tampón. La adición del reactivo
al plasma descalcificado evidenciara la coagulación la cual es valorada en tiempo (segundos).

4.4 TIPO DE MUESTRA:

• Sangre total con anticoagulante citrato de sodio al 3.2%

• En caso de pacientes pediátricos se prepara el tubo para una dilución 1:9

5.0 PROCEDIMIENTO PARA LA DETERMINACION DE TIEMPO DE

TROMBOPLASTINA PARCIAL ACTIVADO (TTPa)

5.2 DEFINICIONES:

➢ Tiempo de tromboplastina parcial activado es una prueba que mide el tiempo que tarda en
coagular el plasma descalcificado con la adición de un activador de la coagulación y calcio.

5.3 PROCEDIMIENTO: El tiempo de tromboplastina parcial activada es un parámetro que evalúa

la presencia y función de todos los factores de coagulación de la vía intrínseca, excepto VII Y XIII,
al medir el lapso necesario para que se forme el coagulo o la fibrina después de añadir el calcio y una
emulsión de fosfolípidos a la muestra de plasma.

5.3.1 PROPOSITO DEL EXAMEN: Identificar las deficiencias de los factores de coagulación en
las vías intrínsecas (excepto factores VII Y XIII), y vigilar los efectos de la administración de
heparina. Determinar in vitro el tiempo de tromboplastina parcial activado en plasma citratado en el
laboratorio de la CUSRS utilizando un equipo automatizado.

5.3.2 METODO: El Destiny Plus puede emplearse como método de análisis de coagulación para
detectar la formación de fibrina a través de métodos mecánicos (método de bola) o foto-ópticos.
PRINCIPIO DEL EXAMEN: El reactivo que se utiliza para la determinación del TTP contiene
fosfolípidos purificados (porcino y pollo); contiene sílice micronizado (activador) amortiguador,
estabilizador y azida sódica como conservador. Al mezclar el reactivo y el plasma se obtiene un nivel
adecuado de factor 3 plaquetario y una activación uniforme de la muestra después del tiempo de
incubación adecuado a 37°C, la reacción se inicia añadiendo cloruro de calcio 0.2 M, midiendo el
tiempo en segundos hasta la formación del coágulo.

5.4 TIPO DE MUESTRA: Sangre total con Citrato de Sodio (Tapa celeste), en una proporción 1:9
de anticoagulante con sangre total.

7.- DETERMINACIÓN DE EOSINÓFILOS EN MOCO NASAL.

7.2 DEFINICIONES: Los eosinófilos son células que se encuentran en sangre periférica, médula
ósea, esputo (en el asma bronquial) y en secreciones nasales y conjuntivales (fiebre del heno). Son
los encargados de modular la respuesta alérgica.

7.3 PROCEDIMIENTO: Realizar una tinción del Moco nasal en busca de Eosinófilos.

7.3.1 PROPOSITO DEL EXAMEN: Identificar la presencia de Eosinófilos en una extensión de

moco nasal, con la finalidad de descartar o confirmar la presencia de una alergia y las alteraciones
atópicas, como el asma bronquial y la rinitis estacional (fiebre de heno), que se caracterizan por la
presencia de eosinofilía; estas reacciones inmunológicas están controladas por la IgE que provoca la
degranulación del mastocito y del basófilo, liberando un factor quimiotáctico para los eosinófilos.

7.4.1 OBTENCION Y TRANSPORTE DE MUESTRA: La muestra se obtiene con un hisopo, la

cual se coloca en un portaobjetos y se lleva al área de hematología, para su tinción y observación.

7.12 INSTRUCCIONES DE TRABAJO:

1.- Se acomoda al paciente sentado en el caso de los adultos, con la cabeza en un ángulo de 45º hacia
atrás, y los pacientes pediátricos se les recuesta en la camilla de exploración.

PRIMERA TOMA:

2.- Se introduce en forma rotatoria y hasta el fondo un hisopo en cada fosa nasal

Anexo 1.

3.- Se realiza un extendido de la secreción obtenida en un portaobjeto limpio y seco, girando

suavemente para evitar que se rompan los eosinófilos.

4.- Dejándolo secar a temperatura ambiente.

5.- Proceder a teñirlo con colorante de Wright

6.- Se observa al microscopio en busca de eosinófilos.

Realizando un recuento diferencial y reportando el porcentaje de células observadas:

Polimorfonucleares, mononucleares y eosinófilos.

SEGUNDA TOMA:

El mismo procedimiento, dos horas después de que el paciente haya ingerido alimentos.

TERCERA TOMA:

El mismo procedimiento, nuevamente por la mañana.

7.13 CALCULOS:

Se cuentan 100 leucocitos y se reporta el porcentaje.

Ejemplo:

Polimorfonucleares _________ %

Mononucleares ____________ %

Eosinófilos ________________%

8.- INVESTIGACIÓN DE PLASMODIUM.

8.2 DEFINICIONES: A pesar de que el paludismo es poco frecuente en la actualidad, constituye

una enfermedad muy importante en gran parte del mundo y es responsable directa o indirectamente
de muchas muertes y estados de debilidad. Se conocen diferentes especies de protozoos plasmodium,
con el nombre genérico del agente etiológico; Vivax, ovale, falciparum y malarie. La transmisión de
hombre a hombre se hace a través de la picadura de ciertas especies del mosquito hembra anopheles
infectada; sin embargo hay otros medios, como la transmisión congénita, el uso de agujas
contaminadas por los adictos a drogas y las transfusiones de sangre. El paludismo no inducido por
mosquitos se desarrolla a través de la introducción de los esquizontes maduros en el torrente
sanguíneo del receptor iniciando el ciclo asexual. La enfermedad, aunque se comunica generalmente
como paludismo, puede designarse específicamente por el nombre de agente etiológico. Las
infecciones múltiples son posibles, aunque no suelen ocurrir.
8.3 PROCEDIMIENTO: Se toma la muestra de sangre periférica y con ella se hacen los siguientes
exámenes.

• Frotis
• Gota gruesa

8.3.1 PROPOSITO DEL EXAMEN:

Búsqueda de Plasmodium: El diagnóstico microscópico del parásito con una muestra de sangre,
mediante gota gruesa o extendido fino, está basado en la identificación de los parásitos coloreados
libres (gota gruesa) o intracelulares en el eritrocito (extendido fino).

8.3.2 METODO:

PRINCIPIO DEL EQUIPO Y DEL EXAMEN:

• Microscopia de luz
• Tinción de Giemsa

8.4 TIPO DE MUESTRA: Sangre completa.

8.4.1 OBTENCION Y TRANSPORTE DE MUESTRA:

La muestra de sangre se toma con jeringa.Para Plasmodium Vivax y Plasmodium malarie la toma de
la muestra se debe efectuar cuando el paciente presenta escalofríos para la búsqueda de esquizontes
maduros. Para Plasmodium falciparum se debe tomar la muestra después del acceso febril para
observar los eritrocitos con varios trofozoitos antes de que estos desaparezcan en capilares de órganos
internos. Una vez obtenida la muestra se lleva al área de hematología para su tinción y observación.

8.12 INSTRUCCIONES DE TRABAJO:

1. Se obtiene una muestra sanguínea del paciente de preferencia con jeringa, inmediatamente
después se hace un frotis delgado y fino.
2. En el mismo portaobjeto colocar una gota de sangre y extenderla formando un cuadrado
ayudándonos con la esquina de otro portaobjeto.
3. Dejar secar el extendido de sangre y proceder a teñir.
TINCION:

1. Se fija el frotis con alcohol metílico, sin fijar la gota gruesa, durante 30 segundos.
2. Dejar secar.
 3. Se tiñe toda la preparación con Giemsa diluida al 5% por 45 minutos (0.5 ml de colorante
Giemsa + 9.5 ml de agua).
4. Lavar y dejar secar.
5. Observar al microscopio con objetivo 100x en busca del parásito.
Los parásitos se identifican por su forma y por la coloración diferencial de sus componentes, es decir,
citoplasma, cromatina y pigmento.

Interpretación: La presencia del parásito en la muestra sanguínea confirma que el paciente

se encuentra infectado, y el médico se encargara de dar el tratamiento adecuado.

IDENTIFICACIÓN DE LOS PARÁSITOS: El desarrollo de los plasmodios en los glóbulos

rojos de la sangre atraviesa por diferentes fases que es necesario distinguir para su identificación.

Dicho desarrollo se presenta a continuación en forma esquemática, como base teórica

orientadora del examen microscópico, en la inteligencia de que la certeza del diagnóstico
parasitológico se logra más con la experiencia que da la observación diaria que con la descripción
más minuciosa que se pueda hacer. Los lapsos de horas que se indican son aproximados.

1. El merozoito penetra al glóbulo rojo y se convierte en trofozoito, tomando, a las seis horas,
la forma de anillo de sello con una vacuola en su interior, su núcleo es sencillo y de color rojo y su
citoplasma de color azul; el parásito en este estadio ocupa una cuarta o quinta parte del volumen del
eritrocito.

2. Cuando han transcurrido 18 horas, el trofozoito ha crecido algo más y su forma se hace
amiboide; el pigmento se empieza a observar en el citoplasma y el núcleo inicia su división; en el
eritrocito se aprecia un ligero aumento de tamaño y la aparición de los gránulos de Schüffner en color
rojo; el parásito ocupa entre un tercio y una cuarta parte del glóbulo.

3. A las 26 horas el trofozoito entra en la fase de esquizonte y ocupa un poco más de la mitad
del glóbulo, el cual también se ha agrandado en forma regular; en este momento el pigmento puede
ser visto más claramente y el núcleo se ha dividido en 6 u 8 células hijas.

4. Después de 36 horas, el esquizonte casi llena al eritrocito, y su núcleo se ha dividido en 12

o 14 células hijas; los gránulos de pigmento empiezan a acumularse en el centro del parásito y los
gránulos de Shüffner todavía son visibles en las márgenes del eritrocito.
 5. Al final de las 48 horas el esquizonte se encuentra completamente desarrollado y en
segmentación; produciendo de 16 a 18 merozoitos que a la ruptura del glóbulo rojo, pasan al torrente
circulatorio para invadir de inmediato nuevos eritrocitos y repetir el ciclo esquizogónico.

El desarrollo de los parásitos que evolucionaron hacia las formas sexuadas es el siguiente:

a) El macrogameto joven presenta un cuerpo compacto que llena aproximadamente la mitad

del eritrocito, y un núcleo sencillo y sin ninguna señal de segmentación.

b) El macrogametocito maduro (a nivel de eritrocito) casi llena el glóbulo rojo, mismo que
ya se encuentra aumentado de tamaño; su citoplasma en forma de mancha es de color azul profundo;
su núcleo forma una masa compacta y los gránulos de Schüffner también pueden ser vistos. Para
llegar a esta fase madura se requirió de un periodo de 10 días aproximadamente desde el momento en
que el merozoito penetró en el glóbulo.

c) El microgametocito joven posee un citoplasma que forma una mancha de color azul más
claro; el pigmento es de gránulos más finos y el núcleo ocupa una mayor superficie.

d) El microgrametocito maduro (en el nivel eritrocito) casi llena al glóbulo ya agrandado, su

núcleo es difuso, y su citoplasma, en forma de mancha, toma un color ligeramente azul,
frecuentemente con un tinte rosado.