Resultados Practica 8

Resultados
Imagen de los reactivos del Kit de extracción de ADN
Imagen de la sangre con la solución de lisis celular
Imagen de la sangre con la solución de lisis celular centrifugado a 13,000 g
Imagen de los glóbulos blancos obtenidos luego de retirar el sobrenadante
Imagen de los glóbulos blancos obtenidos con la solución de lisis de núcleos
Imagen de los glóbulos blancos obtenidos con la solución de lisis de núcleos luego de ser
pipeteado 6 veces
Imagen de los glóbulos blancos después de ser pipeteado 6 veces y luego de añadirle el
reactivo de precipitación de proteínas
Imagen de los glóbulos blancos con el reactivo de precipitación de proteínas luego ser
centrifugado a 13,000 g
Imagen de recolección de sobrenadante de los glóbulos blancos con el reactivo de

precipitación de proteínas luego ser centrifugado a 13,000 g
Imagen del líquido de recolección de sobrenadante con isopropanol aquí se aprecia el ADN
de manera pequeña como una fibra blanca
Imagen del líquido de recolección de sobrenadante con etanol aquí se aprecia el ADN de
manera pequeña como una fibra blanca
Imagen con el ADN y el reactivo de rehidratación del ADN
Imagen de la solución total de la pulpa de fresa con los 100 ML de agua destilada, 5ml de
detergente y 2g de sal en bolsa ziploc.
Imagen de la solución total de la pulpa de fresa con los 100 ML de agua destilada, 5ml de
detergente y 2g de sal posterior a su filtración,
Imagen con la pulpa de fresa filtrada y la solución de detergente con sal con la adición de
alcohol frio.
Imagen con la pulpa de fresa filtrada y la solución de detergente con sal con la adición de
alcohol frio donde se encuentra el ADN de la fresa.
Observaciones
• Durante la preparación de la muestra de sangre en el paso de añadirle la solución de

lisis de núcleos se generaron grumos por lo que la muestra tuvo que incubarse
aproximadamente 20 minutos a 37°C y posteriormente con el agitador Vortex
desaparecieron los grumos.
• Se omitió el paso de añadir el reactivo de RNasa, debido a que generalmente en este
proceso no se utiliza.
• Se realizo la centrifugación de las muestras a 13,000 RPM (revoluciones por minuto)
en vez de utilizar fuerza G o RFC (fuerza centrífuga relativa).
• Luego de la centrifugación a 13,000g (RPM) de la muestra con la solución de
precipitación de proteínas el granulo no se quedo en el fondo, se quedo pegado a la
pared del tubo Eppendorf en la zona baja y el color fue más rojizo que marrón.
• El ADN obtenido en la muestra de sangre fue de un tamaño muy pequeño para la vista
del ojo humano pareciendo una pequeña fibra o incluso una mota blanca.
• Durante el proceso de extracción de ADN de la fresa se realizó una doble filtración de
la muestra.
• El alcohol utilizado para la extracción de ADN de la fresa primero se encontraba a
temperatura ambiente aunque luego se guardo en un refrigerador aproximadamente x
horas y no se conoce a que temperatura se encontraba el alcohol durante su uso.
Discusión
• La sal o el detergente no fueron pesados de manera correcta o no tenían la pureza

necesaria, según lo mencionado por el CESUR “El detergente y el NaCl se utilizan
para romper las paredes celulares, las membranas plasmáticas y las membranas
nucleares, de tal manera que se podrá dejar libre las moléculas de ADN”. puede que
en consecuencia a esto la aparición del ADN no se haya podido concretar.
• El alcohol no se encontraba completamente frio, según lo mencionado por Green y
Sambrook, en su libro “Clonación molecular”, es importante que el alcohol se
encuentre muy frío para que el ADN pueda precipitarse correctamente entre la
solución de fresa y el alcohol. Si el alcohol no estaba suficientemente frío, este factor
pudo haber estropeado la formación de la capa de ADN visible en la interfase de
estas.
• Al momento de que se agregó la solución de precipitado de proteínas, se llegó a
visualizar con una generación de grumos en la parte inferior del tubo Eppendorf de 1.5
mL. Esta generación de grumos se puede llegar a explicar mediante el manual de
"Wizard® Genomic DNA Purification Kit", esta generación de grumos es debido a que
la lisis de núcleos tiene un contenido de sales el cual promueve la desnaturalización
de las proteínas, lo cual tiene como efecto que estas proteínas se lleguen a precipitar,
por lo cual como consecuencia hay una formación de grumos en la muestra.
Conclusión

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Imagen de los glóbulos blancos obtenidos con la solución de lisis de núcleos

Imagen de recolección de sobrenadante de los glóbulos blancos con el reactivo de

Imagen con el ADN y el reactivo de rehidratación del ADN

• Durante la preparación de la muestra de sangre en el paso de añadirle la solución de

• La sal o el detergente no fueron pesados de manera correcta o no tenían la pureza

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