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    Universidad de Guayaquil

    Facultad de Ciencias Químicas


    Carrera: Bioquímica y Farmacia

    Asignatura INMUNOLOGÍA I PR

    Práctica # 2 INVESTIGACIÓN DE SÍFILIS POR TÉCNICA DE AGLUTINACIÓN.


    Docente: Q. F Suarez Camacho Lourdes Amalia M. Sc
    Fecha: 27/10/2024
    Semestre: Sexto
    Integrantes: • Piloco Sánchez Lissette • Quiñonez Quiñonez Rosa
    Grupo: 3-B
    Objetivos de la práctica de laboratorio
    • Detectar por acción de las reaginas con antígeno de cardiolipina, lecitina y colesterol adsorbido sobre
    partículas de carbón la presencia de aglutinación.
    • Analizar los principios y fundamentos de la técnica de aglutinación utilizada en la detección de sífilis.
    Instrucciones o consideraciones previas
    Conocer los reactivos a utilizar.
    Analizar e interpretar el inserto del reactivo a utilizar.
    Marco Teórico
    La sífilis está causada por la espiroqueta Treponema pallidum subsp. Pallidum, que se transmite por vía sexual o
    vertical durante la gestación. Su incidencia se ha incrementado en los últimos años, especialmente entre los
    hombres que tienen sexo con hombres. Sin tratamiento, la infección progresa en distintas fases que terminan en
    complicaciones irreversibles neurológicas y cardiovasculares. Para su clasificación diferenciamos entre sífilis
    precoz (primaria, secundaria y latente de menos de un año), que es infecciosa, de la sífilis tardía (latente de más
    de un año y terciaria), en la que el paciente no es contagioso. El diagnóstico y el tratamiento no es sencillo debido
    a la gran variedad de manifestaciones clínicas y a la dificultad en la interpretación de las pruebas serológicas. El
    tratamiento de la sífilis se basa en la administración de penicilina o de doxiciclina en casos de alergia. Con
    azitromicina se han descrito fracasos terapéuticos y se han encontrado resistencias. Los pacientes que hayan sido
    diagnosticados y tratados deben de ser seguidos para evaluar la respuesta al tratamiento y diagnosticar posibles
    reinfecciones (Lasagabaster & Guerra, 2019).

    Ilustración 1. Espiroqueta Treponema pallidum.


    Principio de la técnica de aglutinación
    La técnica de aglutinación se basa en la reacción antígeno-anticuerpo. Cuando un antígeno (en este caso, proteínas
    del Treponema pallidum) se mezcla con su anticuerpo específico en una muestra de suero, se produce una
    aglutinación visible (Vazquez-Pertejo, 2022)
    Prueba de sífilis
    La prueba de sífilis generalmente involucra dos pasos. En la mayoría de los casos, es detectar anticuerpos que
    están relacionados con la infección de sífilis. Sin embargo, otros factores tal vez puedan hacer que el sistema
    inmunitario produzca estos anticuerpos, como enfermedades autoinmunitarias, otras infecciones y vacunas
    (Pruebas de Sífilis, s. f.). En general, las pruebas de detección de sífilis incluyen:
    • Pruebas no treponémicas: Como el VDRL (Venereal Disease Research Laboratory) y RPR (Rapid
    Plasma Reagin). Estas pruebas detectan anticuerpos que no son específicos para Treponema pallidum,
    pero que se producen como respuesta a la infección. Estas pruebas suelen ser cualitativas, aunque pueden
    realizarse cuantitativamente (Lemos & Lemos, 2024).
    • Pruebas treponémicas: Detectan anticuerpos específicos contra Treponema pallidum. Ejemplos
    incluyen la prueba de absorción de anticuerpos fluorescentes (FTA-ABS) y la prueba de
    microaglutinación de partículas de Treponema pallidum (MHA-TP).
    Procedimiento general
    Sigue los siguientes pasos:
    • Se extrae una muestra de sangre del paciente.
    • El suero se separa de la sangre mediante centrifugación.
    • Se añaden antígenos de Treponema pallidum a la muestra de suero. Estos antígenos están marcados para
    facilitar la detección.
    • Si hay anticuerpos presentes en la muestra, se produce una aglutinación, lo que indica una reacción
    positiva. La aglutinación puede verse como pequeñas partículas o grumos.

    Ilustración 2. Pasos para realizar la prueba VDRL


    Las "reaginas", presentes en individuos infectados por T. pallidum se detectan en suero por la reacción con un
    antígeno cardiolipínico purificado y estabilizado. Si la muestra contiene reagina, ésta se unirá al antígeno
    produciendo una floculación visible en microscopio (Prueba Rápida de Reaginas Plasmáticas, s. f.). Las
    reacciones inespecíficas se evitan con el empleo de antígeno altamente purificado y el agregado de cloruro de
    colina característica de la técnica USR (Unheated Serum Reagin) en la que no es necesario inactivar la muestra.

    Reactivos de laboratorio
    A. Reactivo A:
    Suspensión de antígeno de cardiolipina 0,003%, lecitina 0,02% y colesterol 0,09%, adsorbido sobre partículas de
    carbón 0,02% especialmente tratado en buffer fosfatos 0,01 mol/l con cloruro de colina 0,72 mol/l, EDTA 12,5
    mmol/l y conservantes apropiados.
    Control Positivo: dilución de suero reactivo.
    Control Negativo: dilución de suero no reactivo.
    Materiales de laboratorio
    • Tarjetas de reacción
    • Gotero metálico para dispensar el Reactivo
    • Goteros plásticos descartables para dispensar y distribuir las muestras
    • Agitador rotativo de 100 rpm
    • Pipeta automática.
    Equipos de laboratorio
    • Centrifuga
    • Microscopio
    Actividades por desarrollar/ técnica operatoria
    Prueba cualitativa
    Llevar a temperatura ambiente los reactivos y la muestra antes de realizar el ensayo.
    En cada uno de los círculos de la tarjeta de reacción colocar con un gotero plástico
    provisto:870860022 / 00 p. 2/9
    Muestra o Controles 1 gota (50 ul)
    Con el extremo cerrado del gotero distribuir la muestra uniformemente en todo el círculo.Con el gotero
    metálico provisto, en posición vertical, agregar en el centro del círculo:
    Reactivo A 1 gota (17 ul)
    SIN MEZCLAR, hacer rotar horizontalmente la tarjeta de reacción en forma manual o con agitador rotativo a
    100 rpm durante 8 minutos. Observar la presencia o ausencia de aglutinación al cabo de este tiempo. Tiempos
    de lectura mayores pueden dar lugar a falsos resultados.
    Prueba semicuantitativa
    Efectuar diluciones seriadas 1:2, 1:4, 1:8, hasta 1:64 empleando solución fisiológica y proceder de la misma
    manera que en la técnica cualitativa. El título estará dado por la inversa de la última dilución que se observe
    reactiva.

    Resultados obtenidos
    Una vez obtenida la Con una pipeta automática
    muestra de sangre se la se agrego 50 μL de la
    llevó a la centrifuga para muestra y agitamos con un
    obtener el suero palillo
    Agregamos 50 μL del La muestra no mostro
    reactivo y observamos en aglutinación lo que indica
    el microscopio un resultado negativo para
    sífilis.
    Reactivo: presencia de aglutinación visible en forma de grumos negros sobre el fondo claro que indica
    presencia de "reaginas" en la muestra.
    No reactivo: aspecto gris homogéneo que indica ausencia de "reaginas" en la muestra.
    Conclusiones
    • La prueba VDRL no mostró aglutinación en la muestra, lo que indica un resultado negativo para sífilis.
    Esto sugiere que no se detectaron anticuerpos no treponémicos (reaginas) en el suero del paciente, los
    cuales normalmente están presentes en una infección activa por Treponema pallidum. El resultado
    negativo sugiere la ausencia de infección.
    • El análisis de la técnica de aglutinación utilizada en la prueba VDRL demuestra que este método es
    eficaz para detectar anticuerpos no específicos asociados con la infección por sífilis. La prueba VDRL
    es útil como método de detección preliminar, pero un resultado negativo subraya la importancia de
    considerar factores adicionales, como la fase de la infección o la posibilidad de realizar una prueba
    treponémica complementaria para confirmar el diagnóstico.
    Recomendaciones
    • Uso de equipo de protección personal, guantes y bata deben ser utilizados en todo momento al manejar
    muestras de sangre y reactivos.
    • Las muestras de sangre, reactivos usados y cualquier material contaminado deben desecharse de acuerdo
    con las normas de bioseguridad para evitar infecciones o contaminaciones.
    • Manipular con cuidado para evitar hemólisis (descomposición de glóbulos rojos), lo que podría afectar
    la precisión de la prueba.
    Bibliografía
    Lasagabaster, M. A., & Guerra, L. O. (2019). Sífilis. Enfermedades Infecciosas y Microbiología Clínica, 37(6),

    398-404. https://doi.org/10.1016/j.eimc.2018.12.009

    Lemos, M., & Lemos, M. (2024, 10 julio). Examen VDRL (reactivo y no reactivo): qué significa y qué

    enfermedad detecta. Tua Saúde. https://www.tuasaude.com/es/examen-vdrl/

    Prueba rápida de reaginas plasmáticas. (s. f.).

    https://healthlibrary.brighamandwomens.org/spanish/Encyclopedia/167,rapid_plasma_reagin_syphilis_

    Pruebas de sífilis. (s. f.). https://medlineplus.gov/spanish/pruebas-de-laboratorio/pruebas-de-sifilis/

    Vazquez-Pertejo, M. T. (2022, 6 octubre). Pruebas inmunológicas para las enfermedades infecciosas. Manual

    MSD Versión Para Profesionales. https://www.msdmanuals.com/es-ec/professional/enfermedades-

    infecciosas/diagn%C3%B3stico-de-laboratorio-de-las-enfermedades-infecciosas/pruebas-

    inmunol%C3%B3gicas-para-las-enfermedades-infecciosas

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