GUIAS DE LABORATORIO

BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR I

PRIMERA PARTE.

Msc. LUCILA RIASCOS FORERO

Bióloga

FACULTAD DE MEDICINA

San Juan de Pasto, 2018

 Practica 1. MICROSCOPIA Y MEDCIONES MICROSCOPICAS

EL microscopio es un instrumento óptico que aumenta la imagen de los objetos. En los últimos tres siglos ha
permitido ampliar el campo de las investigaciones biológicas y se ha convertido en el instrumento básico
para abrir nuevas fronteras en la biología molecular. La lupa puede considerarse como el microscopio más
simple y fue usada inicialmente por algunos investigadores para adquirir los primeros conocimientos del
mundo microscópico. Posteriormente se perfeccionó y en la actualidad existen varios tipos de microscopios,
algunos de ellos altamente especializados para una gran variedad de usos. Entre los diferentes tipos
podemos citar: microscopio simple, compuesto y electrónico.
El microscopio, al aumentar la imagen de los objetos, nos permite analizar la estructura, forma y tamaño de
diferente tipo de muestras. En esta práctica se utilizará el microscopio compuesto en el cual se combinan
dos lentes, el ocular y el objetivo, para aumentar la imagen.

NOCIONES BÁSICAS DE ÓPTICA.

La óptica es la rama de la física que estudia la naturaleza de la luz, sus características y sus manifestaciones.
Comprende el estudio del comportamiento de la luz, la interacción de la luz con la materia y la formación de
las imágenes.

Para que los objetos puedan ser visualizados es necesario contar con dos elementos fundamentales; uno de
ellos es la luz, que permite destacar las características propias del objeto, su forma, color y movimiento. El
otro elemento indispensable es el ojo o instrumento óptico que posee fotorreceptores capaces de captar las
características de los objetos mencionadas anteriormente. La visión es uno de los sentidos más importantes
para relacionarnos con el medio ambiente.

El ser humano está dotado de dos globos oculares con sus respectivos anexos y su uso permite la visión
binocular, que consiste en la capacidad de integrar en una sola imagen las imágenes procedentes de cada
ojo y de esta manera, se reconocen y se localizan en el espacio los objetos del mundo exterior; del mismo
modo que se desarrolla la propiocepción visual, que permite obtener información acerca de la posición del
cuerpo y sus movimientos con respecto a dichos objetos.

Partes del microscopio compuesto y sus funciones

 Base: Parte inferior del microscopio que hace contacto con la mesa.
 Columna o Brazo: Estructura rígida situada en la parte posterior del microscopio, sostiene el tubo
binocular y la platina, y sirve para transportarlo.
 Tubo: Pieza vertical que sostiene el revólver y el lente ocular.
 Revólver: Sistema giratorio localizado en la parte inferior del tubo, al cual se incorporan los lentes
objetivos.
 Tornillo macrométrico: Sirve para alejar o acercar el tubo y la platina, permite enfocar la imagen.
 Tornillo micrométrico: Sirve para dar claridad a la imagen.
 Platina: Lámina con un orificio central en donde se coloca la muestra que se desea observar.
 Carro: Sistema de pinzas colocado encima de la platina. Sirve para desplazar la muestra hacía
adelante y hacía atrás, y de derecha a izquierda.
 Oculares: Lentes convergentes situados en la parte superior del tubo. Aumentan la imagen que
proviene del objetivo. Su aumento es de 10X.
 Objetivos: Lentes convergentes incorporados en la parte inferior del revólver. Aumenta la imagen del
objeto observado.
 Condensador: Sistema de lentes convergentes encargados de concentrar los rayos de luz en el centro
del orificio de la platina. Sirve para enfocar la luz hacia el objeto que se va a examinar.
 Diafragma o Iris: Esta situado debajo de la platina, inmediatamente debajo del condensador. Sirve
para regular la entrada de luz al condensador y se acciona mediante una palanca.
 Fuente de luz: Bombilla o espejo incorporado al microscopio.
OBJETIVOS
 Conocer las diferentes partes del microscopio compuesto y sus respectivas funciones.
 Reconocer la importancia del microscopio en el desarrollo de las ciencias biológicas
 Estimar el diámetro de campo visual y de algunas estructuras analizadas.

MATERIALES Y EQUIPO

- Microscopio compuesto de luz

- Porta y cubre objetos
- Pinzas, agujas, bisturí, tijerita y gotero *
- Papel o tela para limpieza de lentes*
- Tela a cuadros**
- Revistas o periódico. (Letra a)**
- Hilos de diferentes colores**
- sal (media cucharadita) **
- Papel milimetrado **
- cebolla cabezona (Allium cepa) **
- Lugol
* Material debe ser traído por cada estudiante
** Material por grupos

Cuidados del microscopio

Es importante tener en cuenta los siguientes cuidados y precauciones al usar el microscopio:

 Cuando se transporte el microscopio tómelo siempre con las dos manos. Nunca tenga objetos
adicionales en sus manos.

 Al colocar el microscopio sobre la mesa, sitúelo a unos 10 o 15 cm del borde.

  Si se requiere limpiar los lentes utilice sólo el papel y solución destinada para tal fin. No utilice
ningún otro tipo de papel.
 Cuando termine de trabajar deje el microscopio en el lente objetivo de 4X, la platina abajo y todos
los lentes limpios.

REALIZACIÓN DE MONTAJE HÚMEDO

Procedimiento:

1.1. Tome con un gotero una gota de agua y colóquela en el centro de la placa porta objeto.
1.2. Tome la muestra (letra a, hilos de colores, tela acuadros etc….) y colóquela sobre la gota de agua.
1.3. Tome una laminilla cubreobjetos, en posición oblicua, (+/- 45 grados) y apoyando una arista sobre la
lámina al lado de la gota, déjela caer suavemente.
1.4. Con l parte de atrás de un lápiz (borrador) golpee suavemente sobre la laminilla con el fin de que las
burbujas que se formaron desaparezcan.

2.1. Encienda el microscopio.

2.2. Coloque el objetivo de menor aumento 4X.
2.3. Baje la platina completamente girando el tornillo macrométrico.
2.4. Tome la lámina con la preparación fíjese que esté completamente seca en la parte inferior
2.5. Coloque la lámina con la preparación sobre la platina sujetándola con las pinzas. Procure que la
preparación quede centrada, girando los tornillos para desplazamiento del carro móvil.
2.6. Gire el tornillo macro métrico en sentido contrario a las agujas del reloj para subir la platina lentamente
y observando a través de los oculares.
2.7. Cuando se observe la muestra algo nítido, gire el tornillo micrométrico hasta obtener un enfoque fino.
2.8. Cierre o abra el diafragma hasta una posición intermedia, accionando su perilla en sentido contrario a
las agujas del reloj para que la luz no sea ni muy brillante ni demasiado tenue.
2.9. Gire el revólver y coloque el objetivo de 10X
2.10. Centre la imagen y defina nuevamente, Visualice con el objetivo de 10X y detalle las estructuras .
2.11. Gire el revólver y visualice con el objetivo de 40X enfoque con el tornillo micrométrico y detalle las
estructuras.

CALCULO DEL DIAMETRO DEL CAMPO VISUAL

El ojo humano solo puede discriminar (resolver) dos puntos separados por más de 0,1mm (= 100µm). La
mayoría de las células miden menos de ese tamaño y las estructuras celulares son más pequeñas aún; por
eso, para el estudio de las células, es necesario usar instrumentos que permitan observarlas de mayor
tamaño. Este instrumento es el microscopio.
Los avances logrados en el campo de la microscopía han permitido examinar detalladamente la estructura
íntima de las células.
Los microscopios más potentes que se han construido hasta el momento son los microscopios electrónicos;
con éstos se puede obtener una información directa de estructuras que oscilan entre 0,4 y 200 nm. Sin
embargo, este tipo de microscopio es muy costoso y no se puede tener uno para cada estudiante.
El tipo de microscopio que es usado rutinariamente en el laboratorio de biología es el microscopio óptico.

El campo de visión de un microscopio es la zona circular que se observa al mirar la preparación bajo un
determinado aumento. Para medir el campo de visión de un microscopio, se debe usar una unidad llamada
micra. Una micra equivale a 0,0001 mm; en otras palabras, hay 1000 micras en un milímetro. El diámetro de
este campo es su medida.

Para calcular el diámetro del campo de visión para un determinado aumento hay que seguir los siguientes
pasos:
 Recorte un cuadrado de 1 cm de lado de papel milimetrado
 Colóquelo sobre la abertura central del portaobjeto
 Observando por el ocular y con el objetivo de 4X, mover la muestra hasta lograr que la línea 0
mm quede en el borde izquierdo del campo visual
 Enfocar con el objetivo de menor aumento 4X hasta que se vea con claridad. Enfocar la
preparación quiere decir situarla a la distancia del objetivo que permite su observación nítida. Esta distancia
se conoce como distancia de trabajo y es tanto menor cuanto mayor es el poder de aumento del objetivo
 Medir el campo visual haciendo coincidir una de las líneas del papel milimetrado con el borde del
campo de visión
 Contar el número de milímetros que se ven (recuerde que la distancia entre dos líneas es un
milímetro) y estimar aproximadamente la fracción sobrante, si la hay. El resultado será el diámetro del
campo visual para ese aumento (objetivo x ocular).
 Si queremos calcular el diámetro del campo de visión para aumentos mayores, hay que tener en
cuenta que cuanto mayor sea el aumento, el campo será menor, es decir, se verá menos de la muestra que
estemos observando. De forma que, si el aumento es el doble, el campo será la mitad, si el aumento es el
triple, el diámetro será la tercera parte, etc. (inversamente proporcionales). Por tanto, bastará con realizar
un sencillo cálculo matemático para saber el nuevo diámetro.

PROCEDIMIENTO

Aumento Total: Es calculado multiplicando el aumento del lente ocular por el aumento del lente objetivo
por q (factor de tubo), en algunos microscopios se encuentra en un círculo ubicado entre los oculares, si tu
microscopio no lo presenta, su valor es de 1. Procede a hacer los siguientes cálculos de acuerdo a la tabla

Tabla 1. Cálculo del aumento total en los siguientes casos:

Objetivo Lente ocular Lente objetivo q Aumento total

Objetivo de exploración

Objetivo de bajo poder

Objetivo de alto poder

Objetivo de inmersión
2. Cálculo del diámetro y el área del campo

Estimación del diámetro del campo visual (DCV) con el objetivo 10x bajo poder. Coloque una fracción de
papel milimetrado en el campo de observación enfoque lentamente con el macrométrico hasta que las
líneas se hagan visible, a lo largo del diámetro del campo con el objetivo 10x.

Estime el número de milímetros que usted ve a lo largo del campo y escríbalo aquí:
DCV 10X__________,

Estimación del Diámetro del campo visual en aumento 40x de alto poder.

El aumento de los objetivos es inversamente proporcional a los diámetros de sus campos. Coloque los datos
de su microscopio dentro de los siguientes espacios:

D1= Diámetro del campo visual en 10 x ______________ (μm)

A1= Objetivo de aumento de bajo poder (10x) ______________
A2= Objetivo de aumento de alto poder (40x) ______________

D2 = Diámetro del campo visual en el objetivo de alto poder de aumento (40X).

Para calcular el diámetro del campo con el objetivo de Alto poder de aumento (40x) (D2) inserte los datos
encontrados en la ecuación

D2 = D1 x A1
A2

Área del Campo: Se puede calcular utilizando la fórmula del área del círculo, tenga en cuenta el diámetro
encontrado en el aumento 10 X.

Con base a los datos anteriores asuma que las células de cebolla poseen una forma rectangular, calcule el
área de cada célula y determine cuántas caben en el área del campo visual

CUESTIONARIO
1. Describa los cambios que ocurren en la imagen cuando se reduce la luz o cuando se
incrementa al máximo.
2. Explique en que es el sistema de iluminación de Köhler.
3. Al cambiar al objetivo de mayor aumento (40X) describa las diferencias en el campo visual
en cuanto a iluminación, definición y resolución.
 4. ¿Que puede decir acerca del movimiento de los objetos cuando se ven a través del
microscopio?
5. La luminosidad del campo visual es mayor o menor con el objetivo de 40X?
6. Que detalles se observan con el objetivo de 40X que no eran visibles con el de 10X?
7. Teniendo en cuenta el tamaño de las siguientes células calcule cuantas caben en el campo
de su microscopio: ameba 300 µm, célula de epidermis humana 60µm, glóbulo rojo
7,5µm, estafilococo 1µm, micoplasma 0.15µm
8. Explique cuáles son los poderes del microscopio

BIBLIOGRAFIA

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