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Fijación biológica de nitrógeno

Article · January 2004

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Juliana Mayz
Universidad de Oriente Nucleo de Monagas
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 Fijación biológica de nitrógeno

Biological Nitrogen Fixation

Juliana Mayz-Figueroa

Universidad de Oriente, Núcleo de Monagas, Laboratorio de Rizobiología, Campus Juanico, Maturín, Estado
Monagas. Email: [email protected].

RESUMEN

Esta revisión es acerca de los organismos fijadores de nitrógeno, viviendo libres o en asociación con plantas terrestres. Se
discute su hábitat, morfología y los aspectos fisiológicos; se incluyen, la ubicación de las estructuras involucradas en la
Fijación Biológica de Nitrógeno, los mecanismos de protección de la nitrogenasa, las vías metabólicas de incorporación del
nitrógeno fijado y los compuestos nitrogenados transportados vía xilema o floema. Además, se citan géneros y especies de
organismos o sistemas fijadores que se localizan en el territorio de Venezuela, indicando el colector y el herbario de
referencia.

Palabras Clave: Fijación Biológica de Nitrógeno, Microorganismos de vida libre, Asociaciones, Nitrogenasa.

ABSTRACT

This review is about nitrogen-fixing organisms, free-living or living in association with terrestrial plants. Their habitat,
morphology and physiological aspects are discussed; location of the involved structures in the Biological Nitrogen Fixation,
mechanisms of nitrogenase protection, metabolic routes of fixed nitrogen incorporation and nitrogen compounds transported
via xylem or phloem are included. In addition, genus and species of organisms or fixing-systems located in the states of
Venezuela countryside are mentioned, jointly with the collector and the reference herbarium.

Key Words: Biological Nitrogen Fixation, Free-living microorganisms, Associations, Nitrogenase.

INTRODUCCIÓN reducir la degradación del suelo (Allan y Graham,

2002; Parsons, 2004).
El Nitrógeno (N) es un elemento necesario en
la composición de proteínas, ácidos nucleicos y otros La FBN es mediada por el complejo
componentes celulares, siendo así una molécula nitrogenasa, presente en los organismos fijadores, el
esencial para el crecimiento de todos los organismos. cual cataliza la conversión del N2 a NH4+ bajo la
En la atmósfera el N ocupa aproximadamente el 80%, reacción general: N2 + 10H+ + 8e- + nMgATP →
existiendo en la forma N≡N; sin embargo, el N2, 2NH4+ + H2 + nMgADP + nPi (n ≥16). Esta requiere
debido al triple enlace entre los dos átomos de de grandes cantidades de poder reductor y energía
nitrógeno, que hace a la molécula casi inerte, no (ATP), y la reducción obligada de protones con un
puede ser aprovechado por la mayoría de las formas mínimo de 1 mol of H2 producido por mol de N2
vivientes, sino sólo por un pequeño grupo de reducido (Halbleib y Luden, 2000). La actividad del
microorganismos altamente especializados, que complejo enzimático puede ser mermada por el
incluyen algas, bacterias y actinomicetes. Para ser oxígeno, de tal manera que los organismos fijadores
utilizado en el crecimiento, este debe ser primero poseen mecanismos (e.j. alta tasa respiratoria,
reducido y luego “fijado” (combinado) en la forma de compartamentalizaciones o protección
iones amonio (NH4+) o nitrato (NO3-). El proceso a conformacional) que les permiten mantener bajas
través del cual esos microorganismos reducen el concentraciones de éste a fin de mantener la enzima
nitrógeno hasta una forma utilizable es conocido funcionando (Ureta y Nordlund, 2002; Lee et al.,
como Fijación Biológica de Nitrógeno (FBN por sus 2004).
siglas en español). El proceso puede ser llevado a
cabo por los microorganismos en vida libre o en Organismos involucrados en la FBN
simbiosis con plantas, y el mismo no sólo permite
usar el nitrógeno atmosférico sino también revertir o Entre los microorganismos involucrados en la
FBN se encuentran: bacterias, algas verde-azules

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(cianobacterias) y actinomicetes, los cuales pueden multicelulares filamentosas y con o sin la presencia
fijar el nitrógeno viviendo libremente o formando de heterocistos. Stanier y Cohen-Bazire (1977), las
asociaciones. describen como fotoautotróficas, fijadoras de CO2 a
través del Ciclo de Calvin y carentes de 2-
Microorganismos de Vida Libre oxoglutarato deshidrogenasa. En las cianobacterias,
el amonio es incorporado en esqueletos carbonados
Bacterias (2-oxoglutarato) a través del ciclo de la glutamina
sintetasa-glutamato sintasa para la biosíntesis de
Las bacterias fijadoras de nitrógeno son glutamato y compuestos nitrogenados derivados
componentes importantes del suelo y requieren una (Herrero et al., 2001).
fuente de energía química si no son fotosintéticas, las
cuales a su vez utilizan la energía de la luz solar. Los heterocistos (Figura 1) son células
especializadas, distribuidas a lo largo o al final del
Entre las bacterias de vida libre pueden filamento (cianobacterias multicelulares
encontrarse: anaeróbicas obligadas o facultativas (e.j. filamentosas), los cuales tienen conexiones
Clostridium pasteurianum, Klebsiella spp., intercelulares con las células vegetativas adyacentes,
Desulfovibrio sp.), aeróbicas obligadas (e.j. de tal manera que existe un continuo movimiento de
Azotobacter spp., Beijerinckia sp.) y fotosintéticas los productos de la fijación de nitrógeno desde los
(bacterias púrpuras sulfurosas y no sulfurosas, y heterocistos hacia las células vegetativas y de los
bacterias verdes sulfurosas) (Allan y Graham, 2002). productos fotosintéticos desde las células vegetativas
hacia los heterocistos (Todar, 2004).
Las bacterias aeróbicas dependen fuertemente
de las condiciones de humedad, oxígeno y materia
orgánica, y las anaeróbicas son predominantes en
suelos anegados donde existen las condiciones de
humedad y materia orgánica, pero el suministro de
oxígeno está restringido. La FBN en los suelos
tropicales con las condiciones requeridas de humedad,
temperatura y materia orgánica es generalmente alta.
Se reporta que el número de bacterias fijadoras de
nitrógeno es particularmente elevado en la zona
adyacente a la raíz (rizósfera), debido a la liberación
de compuestos orgánicos que le sirven como
nutrimento (Dugan 2004).

Las bacterias aeróbicas emplean dos

mecanismos de protección de la nitrogenasa: la
protección respiratoria, donde se produce una elevada
tasa respiratoria a expensas de un alto consumo de
carbono y energía, manteniendo así una concentración Figura 1.a. Imagen de contraste de fase de filamentos
intracelular de oxígeno baja; y la protección de Nostoc punctiforme, mostrando
conformacional, en la cual la nitrogenasa cambia su heterocistos (flechas).
disposición a una forma reversible inactiva (Robson y b. Imagen epifluorescente de los filamentos
Postgate, 1980; Segura y Espín, 1998). mostrados en la Figura a. (Meeks y Elhai,
2002).
Cianobacterias
Debido a la sensibilidad de la enzima
Las Cianobacterias tienen una amplia nitrogenasa al oxígeno, las cianobacterias tienen
distribución y ocupan un gran rango de habitas al como mecanismos de protección, la separación en
igual que las bacterias, que incluyen suelo y agua, espacio o en tiempo de los mecanismos fotosintéticos
tanto de regiones tropicales y templadas como de y de fijación de nitrógeno. Algunas algas filamentosas
climas extremos (Herrero et al. 2001), Presentan una como Nostoc y Anabaena, tienen la nitrogenasa
gran diversidad morfológica, desde unicelulares hasta confinada a los heterocistos, los cuales carecen del

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fotosistema II liberador de oxígeno y rodeados de una Asociaciones

pared glicolipídica gruesa que reduce la difusión de
éste hacia las células, cualquier oxígeno que difunde Asociaciones no simbióticas
hacia los heterocistos es rápidamente reducido por
hidrógeno; así, la fijación de nitrógeno está Bacterias-Filósfera
espacialmente y metabólicamente separada del
proceso fotosintético; las algas unicelulares (e.j. Varias bacterias fijadoras de nitrógeno
Gloeocapsa) y las filamentosas sin heterocistos (e.j. pueden colonizar la filósfera, término usado por
Trichodesmium), presentan los dos procesos algunos investigadores para referirse a la superficie
separados en tiempo; de tal manera que la nitrogenasa adaxial y abaxial de la hoja, y por otros a la hoja
b ocurre en el período de oscuridad. Sin embargo,
sólo completa, incluyendo el ambiente interno. Se ha
algunas cianobacterias como mantienen la fijación de observado que las bacterias más abundantes en las
nitrógeno durante el período de luz, a expensas de una hojas son las pigmentadas (e. j. Methylobacterium
elevada tasa respiratoria, mecanismo similar al mesophilicum, Pseudomonas syringae), a las cuales
presentado por las bacterias aeróbicas (Capone et al., se les ha atribuido una mejor adaptación a los rayos
1997; Herrero et al., 2001; Omoregie et al., 2004; solares (Sundin y Jacobs, 1999; Hirano y Upper,
Todar, 2004). 2000). Las especies de Beijerinckia y Azotobacter
son comúnmente encontradas en cultivos; y se ha
Actinomicetes reportado su efecto benéfico en el crecimiento de las
plantas (Ching-Hong, 2001; Lindow y Brandl, 2003).
Los actinomicetes son bacterias filamentosas Sin embargo, no está clara la forma en que las plantas
Gram positivas, comunes en el suelo, especialmente se benefician y posiblemente se ha atribuido el
en suelos de elevado pH y poca humedad. Se les beneficio a la absorción radical de compuestos
considera como organismos intermedios entre los nitrogenados, los cuales una vez excretados por las
hongos y las bacterias, formadores de micelios bacterias en las hojas, llegan a la raíz por lavado.
(Lechevalier y Lechevalier, 1979; Huss, 1990).
Bacterias-Rizósfera
Frankia es un género del grupo de los
actinomicetes, cuya especie F. alni, se ha reportado Hiltner en 1904 observó por primera vez la
como fijadora de nitrógeno tanto en vida libre como acumulación de microorganismos en la zona radical y
en asociación con algunas angiospermas (no propuso el término “rizósfera”. Los exudados
leguminosas). Las especies de Frankia son de radicales, conformados por substancias diversas crean
crecimiento lento en cultivo y requieren de medios alrededor de las raíces (rizósfera) un ambiente
especializados para su crecimiento, presentan hifas nutricional enriquecido que favorece el crecimiento
ramificadas y septadas con vesículas y esporangios. bacteriano. Smith (1976) y Martin y Kemp (1980)
Los esporangios multiloculares e irregulares en forma reportan la presencia de carbohidratos y aminoácidos,
se localizan terminal, lateralo intercalarmente en las y señalan que la composición y cantidad de exudados
hifas, cuyas esporas no resistentes al calor sirven varía con la especie presente y las condiciones
probablemente como agentes de propagación. La abióticas, tales como agua y temperatura.
actividad de la nitrogenasa ha sido asociada con las
vesículas, las cuales pueden formarse lateral o La relación que se establece entre las
terminalmente en las hifas y bajo condiciones de bacterias y las plantas puede ser favorable, perjudicial
deficiencia de nitrógeno. Cada vesícula está rodeada o neutra. Dentro de las relaciones favorables se
por una multicapa lipídica que probablemente encuentra la asociación con bacterias fijadoras de
funciona como una barrera para la difusión de nitrógeno; entre estas, especies de Azospirillum1,
oxígeno. Estudios estructurales en cultivo han Enterobacter, Klebsiella, Pseudomonas y
mostrado que el grosor de la capa lipídica aumenta en Burkholderia (Estrada et al., 2001). Las bacterias
respuesta a un incremento de la concentración de
oxígeno, a fin de evitar la inactivación de la 1
Identificado en suelos de la Gran Sabana por Andrade y
nitrogenasa (Silvester et al., 1990; Nalin et al., 2000;
Cuenca (1998).
Todar, 2004).

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fijadoras de nitrógeno pueden ser categorizadas de Nomenclatura Bacteriana (Opinión 34) aprobó
dentro del grupo de las rizobacterias promotoras del como nombre genérico Rhizobium FranK 1889
crecimiento (PGPR, por sus siglas en inglés), al (nombre conservado) en vez de Phytomyxa Schroeter
ejercen un efecto benéfico sobre el crecimiento de las 1886 (nombre prioritario). Esto se hizo en base a que
plantas. La primera especie aislada fue Azospirillum el nombre RhIzobium, tiene la ventaja de enfatizar la
lipoferum (para entonces nombrada como Spirillum importancia agronómica de las bacterias de los
lipoferum) en Holanda en 1925 (BeijerincK, 1925) y nódulos de las raíces (rhiza: raíz, bius: vida,
de la cual en la actualidad se reconocen 7 especies: A. Rhizobium: vida en las raíces) y a su vez guarda
brasilense, A. lipoferum, A. amazonense, A. tributo a la extensa literatura publicada con ese
halopraeferans, A. irakense, A. largimobile y A. nombre (Mayz, 1997). Actualmente, además de
doebereinerae (Tarrand et al.,1978; Magelhaes et al., Rhizobium, existen otros géneros de bacterias
1983; Reinhold et al., 1987; Khammas et al., 1989; fijadoras de nitrógeno: Ensifer (Casida, 1982),
Sly y Stackebrandt, 1999; Eckert et al., 2001); desde Bradyrhizobium (Jordan 1982), Azorhizobium
entonces ha sido aislada de varias especies cultivadas (Dreyfus et al., 1988) y Mesorhizobium (Jarvis et al.,
y silvestres y de varios tipos de suelo. 1997). Weir (2004) hace una revisión exhaustiva de
la taxonomía actual de los rizobia.
Por muchos años se consideró que el efecto
benéfico de las bacterias fijadoras de nitrógeno sólo El enigma de las leguminosas fue aclarado
provenía de la utilización por las plantas del amonio cuando Hellriegel y Wilfarth en 1888 probaron la
excretado; así existen numerosas publicaciones que fijación de nitrógeno en plantas noduladas, esto fue
prueban tal efecto (Mirza et al., 2001; Becker et al., seguido por el aislamiento de la primera bacteria de
2002); sin embargo, se ha encontrado que esta los nódulos por Beijerinck ese mismo año. En 1932,
bacterias también producen fitohormonas (auxinas, Fred y colaboradores publicaron una monografía que
giberelinas y citocininas) que afectan favorablemente ha recorrido el mundo, donde revisaron y analizaron
el desarrollo de las plantas, particularmente de la raíz la información existente sobre la simbiosis; sus
(Persello-Cartieaux et al., 2003). Más recientemente consideraciones tuvieron una profunda influencia en
se ha reportado que las bacterias fijadoras de la práctica y teoría subsiguientes. Para las décadas
nitrógeno incrementan la capacidad radical de posteriores y hasta la actualidad los avances
absorción de nitrato, indirectamente como una tecnológicos han permitido estudios más detallados y
consecuencia de la estimulación del desarrollo por lo tanto un mejor conocimiento y entendimiento
radical y directamente por estimulación del sistema de la simbiosis leguminosas-rizobia.
transportador del compuesto (Mantelin y Touraine,
2004). Para que se establezca la relación simbiótica
deben ocurrir las siguientes etapas: 1. multiplicación
Asociaciones simbióticas de las bacterias en la rizósfera, 2. colonización de la
Rhizobia-Leguminosas rizósfera, 3. adsorción de las bacterias a la raíz, 4.
ensortijamiento de los pelos radicales, ocurre en las
Rhizobium Frank 1889, el género tipo de la raíces cuando la infección es vía pelos radicales y en
Familia Rhizobiaceae Conn 1998, está representado algunas donde acontece vía unión raíces laterales-raíz
por bacterias de forma bacilar, Gram negativas, principal, 5. formación de los hilos o zonas
habitantes del suelo, que tienen la capacidad de intercelulares de infección, 6. crecimiento del hilo de
formar nódulos en varias leguminosas y en infección hacia las células corticales o invasión
Parasponia spp. (e. j. P. andersonii, P. rigida). Esta directa de las mismas, y 7. diferenciación tisular y
relación simbiótica es controlada genéticamente tanto desarrollo del nódulo (Figura 2). Los cambios
por la planta como por la bacteria y ocurre a través de morfológicos y fisiológicos que ocurren a nivel de los
una secuencia de estados de desarrollo que culminan puntos de desarrollo nodular van acompañados de
en el establecimiento de una simbiosis efectiva: el señales moleculares inducidas por genes propios del
nódulo fijador de nitrógeno. El primer nombre dado a proceso (genes Nod) (Mayz, 1997; Perret et al., 2000;
las bacterias de los nódulos de las raíces de las González y Marketon, 2003; Gage, 2004).
leguminosas fue Phytomyxa, el cual lo propuso
Schroeter en 1886, considerando la relación de estas El tipo y estructura nodular es dependiente de la
bacterias con los hongos mucosos. Sin embargo, en planta hospedera, así se tienen:
1970, la Comisión Judicial del Comité Internacional

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a. nódulos determinados, en los cuales la actividad integración de las vías metabólicas de la fijación
meristemática cesa temprano en su formación y su (bacteroides) y de la asimilación (planta hospedera)
aspecto final resulta del alargamiento de las células, del nitrógeno. La bacteria emplea compuestos
este tipo de desarrollo origina nódulos esféricos o carbonados oxidables suplidos por la planta para su
globosos (Figura 3A), que pueden organizarse metabolismo y desarrollo y para la síntesis de ATP y
alrededor de la raíz para formar los denominados del poder reductor usados en la reacción de fijación
nódulos en collar (Figura 3B) (Hirsch, 1992; Mayz, catalizada por la nitrogenasa, la cual genera el
1997). nitrógeno asimilable (NH4+), que es metabolizado en
b. nódulos indeterminados, los cuales presentan las células nodulares a amidas o ureidos, que luego
un meristema persistente, que puede producir nódulos son exportados vía xilema al resto de la planta, donde
ramificados o coraloides, puesto que constantemente son usados (Mayz, 1997).
se añaden nuevas células a la parte distal del nódulo;
de tal manera que todos los estados de desarrollo El primer producto de la reacción de fijación es
están así representados, debido a que ocurre un NH3 (amoníaco), pero este es rápidamente protonado,
gradiente de formación desde la parte distal, a la formándose NH4+, lo cual es favorecido por el pK
proximal en el punto de unión a la raíz. Este tipo de (9,25) de la reacción, de tal manera que amonio es la
desarrollo da lugar a nódulos elongados o cilíndricos especie predominante a los pHs fisiológicos y la que
(Figura 3C) y ramificados o coraloides (Figura 3D) toma parte en las reacciones de asimilación (Sprent y
(Hirsch, 1992; Mayz, 1997). La utilización del Sprent, 1990).
nitrógeno atmosférico en la simbiosis, requiere de la

Figura 2. Invasión de pelos radicales por Rhizobium sp. (A) rizobia (rh) coloniza la rizósfera y se adhiere al pelo
radical (r). (B) “Factores Nod” inducen el ensortijamiento del pelo radical y permiten la penetración
bacteriana al centro de infección (ci). El núcleo del pelo radical (n) precede el crecimiento del hilo de
infección (it). (C) El hilo de infección alcanza la base del pelo radical (it), aún acompañado del núcleo
(n) (D) El pelo radical (r) se ramifica (rit) cerca del primordio nodular formado por las células corticales
en división. (E) Los bacteroides (b) son liberados desde el hilo de infección (it) y forman simbiosomas
(s) donde se acumulan gránulos de poly--hidroxibutarato (phb) rodeados por la membrana
peribacteroidal (pb). Otras abreviaturas: c, corteza; d, vacuola digestiva; ep, epidermis; ed, endodermis
(Perret et al., 2000).

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Figura 3. Formas nodulares presentes en algunas especies de leguminosas. 1. Vigna unguiculata, 2. Desmodium
canum, 3. Centrosema brasilianum, 4. Cannavalia ensiformis, 5. Indigofera hirsuta, 6. Cajanus cajan,
7-8. Crotalaria retusa, 9. Gliricidia sepium (Mayz, 1997).

El amonio es un inhibidor de la síntesis de (Figura 5). El primer grupo incluye varias especies
nitrogenasa, por lo que es imperativa su rápida de regiones templadas, entre estas Lupinus
asimilación; en el citosol de las células infectadas, subcarnosus, Pisum sativum y Medicago sativa y el
éste es asimilado en ácido glutámico, en cuya segundo varias especies tropicales, tales como
reacción interviene la enzima octamérica ATP Glycine max, Phaseolus vulgaris y Vigna unguiculata
dependiente glutamina sintetasa o GS, y donde se (Scott et al., 1976; Miflin y Habash, 2002; Harrison et
forma glutamina, la cual puede ser exportada o usada al., 2003).
para restaurar el ácido glutámico, a través de una
reacción con el ácido 2-oxoglutárico (proveniente del Cianobacterias-Hongos (Líquenes), Briofitas,
ciclo de los ácidos tricarboxílicos) catalizada por la Helechos, Angiospermas, Gimnospermas
enzima monomérica NADH dependiente glutamato
sintasa, también denominada glutamina-2- Las cianobacterias se asocian
oxoglutarato aminotransferasa o GOGAT (Sprent y simbióticamente con representantes de las cuatro
Sprent, 1990; Ortega et al., 2004). principales divisiones filogenéticas de las plantas
terrestres: briofitas (musgos, hepáticas y
Las leguminosas simbióticas pueden ser antocerotas), helechos, gimnospermas y
separadas en dos grupos de acuerdo a los productos angiospermas; además, se asocian con hongos para
exportados desde los nódulos: las exportadoras de formar los líquenes y con organismos marinos (Meeks
amidas (asparagina, glutamina) (Figura 4) y las y Elhai, 2002). Esta revisión se centra en las
exportadoras de ureidos (alantoína y ácido alantoico) asociaciones de cianobacterias con plantas terrestres.

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Figuara 4. Síntesis de asparagina en nódulos de Lupinus sp. 1. glutamina sintetasa, 2. glutamato sintasa, 3. aspartato
aminotransferasa, 4. asparagina sintetasa, 5. fosfoenol piruvato carboxilasa (Scott et al., 1976).

Figura 5. Síntesis de los ureidos alantoína y ácido alantoico. 1. glutamina sintetasa, 2. glutamato sintasa,
3. aspartatp aminotransferasa, 4. aminotransferasas, 5. inosina monofosfato deshidrogenasa,
6. nucleosidasas, nucleotidasas, 7. xantina deshidrogenada, 8. urato oxidasa (uricasa), 9.
alantoinasa, 10. fosfoenol piruvato carboxilasa (Mayz, 1997).

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Líquenes

Los líquenes son asociaciones simbióticas

entre un hongo (micobionte) y una cianobacteria
(fotobionte o cianobionte). La cianobacteria más
frecuente en los líquenes es Nostoc (Meeks y Elhai,
2002; Oksanen et al., 2004). Los líquenes viven en
varias superficies: suelos, árboles, rocas y paredes, a
menudo son los primeros en establecerse en el
ambiente, constituyendo la única vegetación en
ambientes extremos. Su aspecto es variable: de hojas
(folioso, Figura 6), de costra (crustoso, Figura 7) o de
arbusto (fruticoso, Figura 8) (Purvis, 2000).

Figura 8. Teloschistes chrysophthalmus (Armstrong,

2001)4

a. El talo homómero presenta una estructura

uniforme donde están distribuidas las células del alga,
penetradas por las hifas del hongo (Figura 9).

b. El talo heterómero con una sola especie de alga

(liquen bipartito), exhibe capas delimitadas e
identificables: la corteza superior, la capa fotobióntica
que contiene las células del alga, la médula, donde se
Figura 6. Parmotremma stuppeum (Amstrong, 2004)2 alojan las hifas del hongo y la corteza inferior (Figura
10).

c. En el talo heterómero donde se presentan dos

especies de algas (liquen tripartito), la cianobacteria
está confinada a estructuras especiales o cefalopodios
que pueden sobresalir en la superficie superior o
inferior del liquen, o permanecer internamente, y el
alga verde está localizada en la corteza superior
(Figura 11).

En la asociación, la cianobacteria debe ser

capaz de llenar los requerimientos bioquímicos y de
desarrollo del hongo. La función del fotobionte en el
talo es de proporcionar compuestos nitrogenados y
Figura 7. Caloplaca saxicola (Silverside, 2002)3
carbohidratos (polioles y glucosa), donde alrededor
del 80% o más de los productos fotosintéticos son
La anatomía de los líquenes varía desde muy liberados e inmediatamente absorbidos por el
simple hasta compleja (Per, 2001; Brodo et al., 2001): micobionte, mientras que el hongo le suministra
protección, agua y minerales (Hill, 2001; Schofield et
al., 2003).
2
Parmotrema stuppeum (Taylor) Hale, colectada en el
4
estado Mérida por López 353 (VEN). Teloschistes chrysophthalmus (L.) Norm. Colectado en el
3
Caloplaca saxicola (Hoffm.) Nordin, colectada en el estado Mérida por Vareschi 233 (VEN) y López
estado Mérida por López 464 (VEN) y Marcano et al. 441(VEN).
197 (VEN).
8 Revista UDO Agrícola 4 (1): 1-20. 2004
 Mayz-Figueroa. Fijación biológica de nitrógeno

Cianobacterias-Briofitas (musgos, hepáticas y

antocerotas)

Los musgos (e.j., Sphagnum spp.)5, hepáticas

(e.j: Marchantia spp.)6 y antocerotas (e.j Anthoceros
spp., Notothylas spp. y Phaeoceros spp.) forman
asociaciones simbióticas con especies de
cianobacterias, siendo las especies de Nostoc las más
frecuentemente encontradas (e.j. N. ellipsosporum y
N. punctiforme) (Adams, 2000; Wong y Meeks,
2002).

Las colonias de la cianobacteria se alojan en

cavidades especiales (domatias) localizadas en la
parte ventral del gametofito (Figura 12), donde ocurre
Figura 9. Talo Homómero (Per, 2001) el intercambio de compuestos nitrogenados y
carbohidratos (Vance et al., 1998; Costa et al., 2001).
Los heterocistos proporcionan los productos
nitrogenados a las células vegetativas de la planta, y
en turno reciben los productos fotosintéticos. Se
asume que existen mecanismos reguladores
(probablemente genes) que controlan la
diferenciación y el patrón de distribución de los
heterocistos en las cianobacterias simbióticas, a fin de
optimizar la fijación de nitrógeno y por ende la
simbiosis (Yoon y Golden, 2001).

Cianobacterias-helechos (Azolla)

Azolla (Figura 13) es un helecho acuático que

Figura 10. Talo heterómero (Per, 2001)
forma una simbiosis permanente y hereditaria con la
cianobacteria Anabaena azollae, cuya relación
mutualística es la única conocida en la naturaleza
entre una pteridofita y una procariotica diazotrófica
Esta asociación fue descrita por primera vez por el
científico alemán Eduard Strasburger en 1873. En

5
Sphagnum meridense (Hampe) Müll. Hal. Bolívar:
Steyermark y Wurdack 383 (MO); Trujillo: Griffin et al.
1129 (MO); Sphagnum sparsum Hampe Bolívar:
Steyermark et al. 109321 (MO), Mérida: Griffin y López
PV-922 (MO); Sphagnum tenerum Sull. & Lesq. ex Sull.
Bolívar: Liesner 19159 (MO); Sphagnum recurvum P.
Beauv. Bolívar: Steyermark et al. 128356 (MO);
Sphagnum sancto-josephense H.A. Crum & Crosby
Trujillo: Dorr et al. 5055 (MO, NY); Sphagnum
magellanicum Brid. Amazonas: Steyermark 129570
(MO); Sphagnum ornatum H.A. Crum Amazonas: Buck
10628 (MO, NY), Bolívar: Boom 9333 (MO, NY);
Figura 11. Talo heterómero con cefalopodios
Sphagnum perichaetiale Hampe Amazonas: Steyermark
(Per, 2001)
107519 (MO), Bolívar: Liesner 19951 (MO).
6
Marchantia polymorfa L. Colectada en el estado Mérida:
Pittier 12894(MO), Marchantia chenopoda L. colectada
en el Distrito Federal: Agostini et al. 81 (MO).

Revista UDO Agrícola 4 (1): 1-20. 2004 9

 Mayz-Figueroa. Fijación biológica de nitrógeno

Venezuela se han identificado algunas especies: e.j. donde además se localizan tricomas que intervienen
A. filiculoides7 y A. carolliniana8. en el transporte de substancias. En esta asociación
ocurre un intercambio de compuestos desde la
cianobacteria hacia el hospedero (compuestos
nitrogenados) y en vía contraria (productos
fotosintéticos).

Cianobacterias-Angiospermas

Todas las especies de Gunnera (Figura 15) forman

asociaciones simbióticas con Nostoc (particularmente
con N. punctiforme) (Figura 16), siendo la única
angiosperma conocida por formar este tipo de
asociación. Las cianobacterias se localizan
Figura 12. Sección del talo de Anthoceros intracelularmente (Figura 17) en las glándulas
punctatus, mostrando los domatia ubicadas en la base del pecíolo (Figura 18) donde
(flechas) con colonias de Nostoc
ocurre el intercambio de compuestos: nitrogenados
punctiforme (Wong y Meeks, 2002).
desde el alga y fotosintéticos desde la planta (Benson
y Margulis, 2002). Las glándulas se abren al exterior
Azolla es usado como fertilizante verde y a través de varios canales y las células que las
como alimento para animales en China y Vietnam, y conforman se separan ligeramente en la base de los
algunas regiones de África desde hace mucho tiempo canales, formando una cavidad (Bergman et al.,
y más recientemente como un biofiltro de aguas 1992). Las especies de Gunnera (alrededor de 40) se
servidas (Carrapiço, 2002; van Hove y Lejeune, distribuyen principalmente en el Hemisferio Sur, y se
2002). consideran originarias de Suramérica (Wanntorp y
Wanntorp, 2003). G. pittierana es autóctona en el
El endosimbionte se aloja en la cavidad del Parque Nacional Henry Pittier (Venezuela).
lóbulo dorsal clorofílico de la hoja bilobada (Fig. 14),
Cianobaterias- Gymnospermas (Cícadas)

El grupo de las cícadas (e.j. Cycas, Zamia,

Bowenia) forma asociaciones simbióticas con
cianobacterias (siendo las más comunes Nostoc spp,
Spirulina sp. Oscillatoria sp., Anabaena spp.,
Rivularia sp. y Calothrix sp.) proporcionando un
ambiente estable al alga a cambio del nitrógeno
fijado; en esta alianza las cianobacterias son
endosimbiontes de algunas raíces (raíces coraloides o
parecidas a corales), las cuales se caracterizan por
tener un crecimiento apogeotrópico o hacia la
superficie del suelo (Figura 19) (Medeiros y
Stevenson, 2004; Thoumire, 2004). Cycas revoluta
es común en parques y jardines del país (Figura 20).

El proceso de colonización de las raíces

precoraloides envuelve mecanismos de acción y
Figura 13. Talo de Azolla sp. (van Hove y Lejeune, reacción de ambos organismos. El alga penetra a
2002).
través de la epidermis hacia la zona cianobacterial
(Figura 21), produciéndose cambios permanentes que
7
Mérida: Barclay 9628 (MO). conducen a la transformación de las raíces
8
Amazonas: Liesner y Carnevali 22784 (MO), Portuguesa: precoraloides en raíces coraloides simbióticas (Figura
Liesner y González 12698; Zulia: Liesner y González 19) (Lindblad y Costa, 2002).
13188 (VEN).

10 Revista UDO Agrícola 4 (1): 1-20. 2004

 Mayz-Figueroa. Fijación biológica de nitrógeno

Figura 14. Lóbulo dorsal (a) de la hoja de Azolla filiculoides (b), mostrando la cavidad (c), donde se localiza el
endosinbionte Anabaena azollae (Carrapico, 2002).

Fig. 16. Fotomicrografía en microscopio de luz del

corte transversal del tallo de G. chilense,
Figura 15. Planta de Gunnera magellanica (Rai
mostrando las colonias de Nostoc (S.U.,
et al., 2000).
2004).

Revista UDO Agrícola 4 (1): 1-20. 2004 11

 Mayz-Figueroa. Fijación biológica de nitrógeno

Figura 17. Fotomicrografía en microscopio de Figura 20. Cycas revoluta. copyright © Geoff
transmisión del corte transversal del Stein, 1997 (VCE, 2004)
tallo de G. chilense, mostrando la
infección intracelular por Nostoc (S.
U., 2004).

Figura 21. Sección transversal de una raíz

coraloide mostrando la zona
cianobacterial (CZ), traqueidas
(Xy), corteza externa (OC) e
Figura 18. Tallo de G. chilensis mostrando las interna (IC) y peridermis (Pd )
glándulas en la base de los pecíolos (S.U., (Medeiros y Stevenson, 2004).
2004).
Después de la reducción del nitrógeno hasta
amonio, éste es incorporado en glutamina por
glutamina sintetasa, luego el grupo amida es
transferido a la posición alfa del α-cetoglutarato,
produciéndose glutamato, reacción catalizada por la
glutamato sintasa; sin embargo, el análisis de la savia
xilemática ha revelado que los compuestos
nitrogenados transportados varían en algunas
especies; así en Macrozamia, Lepidozamia y
Encephalartos se ha encontrado glutamina y citrulina,
mientras que en Bowenia y Cycas, glutamina y ácido
glutámico (Lindblad y Costa, 2002).

Fisiología del Intercambio de compuestos en las

Figura 19. Raíces precoraloides (PC) y coraloides (C) asociaciones con cianobacterias
de Cycas circinalis, donde se muestra la
cianobacteria como endófito (→) Durante la simbiosis de las cianobacterias con
(Medeiros y Stevenson, 2004). otros organismos, ocurren cambios estructurales y
fisiológicos que conducen al intercambio apropiado

12 Revista UDO Agrícola 4 (1): 1-20. 2004

 Mayz-Figueroa. Fijación biológica de nitrógeno

de compuestos entre el cianobionte y el hospedero reservorio, siendo la fuente a utilizar por el

(Figura 22). cianobionte. En el caso de localizaciones
intracelulares como en briofitas (musgos, hepáticas y
En el caso de localizaciones extracelulares del antocerotas), helechos (Azolla), angiospermas
alga como en los líquenes, el contacto íntimo de las (Gunnera) y gimnospermas (cícadas), se señala la
hifas con los heterocistos permite el tráfico de posibilidad de que el cianobionte pierda su capacidad
substancias, desconociéndose el mecanismo exacto de fotosintética y que el C provenga de las partes
intercambio. Se ha encontrado que en los fotosintéticas del hospedero hacia el tejido simbiótico
cianolíquenes bipartitos (hongo-alga) ocurre el como sacarosa o procedente de la degradación de los
movimiento de productos fotosintéticos desde el polisacáridos que están normalmente presentes en el
cianobionte al micobionte, siendo principalmente mucílago de las cavidades o nódulos donde habita la
glucosa, la cual es convertida a manitol (no cianobacteria. La fijación y transferencia de nitrógeno
producido, ni consumido por el alga) en el hongo, desde el cianobionte al hospedero ocurre en todas las
posiblemente una estrategia para el secuestro de simbiosis, siendo los heterocistos, los sitios de
carbohidratos. Como causa de esta liberación de fijación y de las primeras reacciones de asimilación.
glucosa se ha considerado la reducción de la síntesis El N puede existir en las células en las formas NH4+
de polisacáridos para la formación de las paredes o NH3 que puede difundir a través de las membranas
celulares. El alga permanece independiente en cuanto o ser reciclado por las células a través de un sistema
a sus requerimientos y producción de carbohidratos. transportador de amonio, devolviéndolo desde el
En los líquenes con cefalopodios o tripartitos no se ha espacio periplásmico conjuntamente con un protón.
encontrado o existe poco movimiento de En los líquenes el amonio liberado, es asimilado vía
carbohidratos desde el cianobionte al micobionte, glutamato deshidrogenasa, pero en las otras
considerándose que la fuente de carbohidratos es el asociaciones se presenta la vía glutamato sintasa-
ficobionte (alga verde) asociado ya que la glutamato sintetasa. El transporte de nitrógeno desde
cianobacteria no fotosintetiza. La glucosa liberada los tejidos simbióticos hacia las otras partes del
origina un pool de glucano, el cual sirve como hospedero se hace en forma de aminoácidos. En los

Figura 22. Intercambio de compuestos en las asociaciones con cianobacterias. N2 asa: nitrogenasa, GDH: glutamato
deshidrogenada, GS-GOGAT: vía glutamato cintasa-glutamato deshidrogenada, H: heterocistos, V: células
vegetativas (Rai et al., 2000).

Revista UDO Agrícola 4 (1): 1-20. 2004 13

 Mayz-Figueroa. Fijación biológica de nitrógeno

líquenes tripartitos, se ha demostrado el transporte de algunas especies la infección es vía pelos radicales,
alanina desde el cefalopodio hacia el resto del talo; en e.j. Casuarina, Morella (Myrica), y en otras procede
Azolla, se transportan desde las cavidades en las hojas intercelularmente, e.j. Discaria, Dryas, Ceanothus, la
hacia el ápice del tallo los compuestos glutamato, morfología y anatomía de los nódulos y en la
glutamina, amonio y un derivado de glutamato; en diferenciación de Frankia en el desarrollo nodular
Gunnera, asparagina es el compuesto principal (Benson y Silvester, 1993; Huss, 1990, 1999). La
exportado a través del floema desde las glándulas al formación del primordio nodular (Figura 24) se inicia
resto de la planta y en las cícadas una mezcla de en el periciclo, donde se originan raíces laterales
aminoácidos es liberada en el xilema desde las raíces modificadas de forma lobular con células infectadas
coraloides, principalmente citrulina en Zamiaceae y en la corteza. Frankia penetra los pelos radicales
glutamina en las otras familias (Rai et al., 2000). curvados o intercelularmente hacia la corteza, donde
ocurren divisiones celulares limitadas que dan lugar a
Frankia-Angiospermas la formación del prenódulo; al mismo tiempo, en las
células del periciclo opuestas al protoxilema se
La ocurrencia de Frankia en el interior de los suceden divisiones mitóticas que conducen a la
nódulos de algunas plantas fue reportada por Woronin formación de las raíces laterales modificadas o
en 1866, quien describió las hifas y vesículas como nódulos; al prenódulo se le considera como un órgano
pertenecientes a un hongo parásito, más tarde simbiótico paralelo, desde donde progresan las hifas
correctamente identificadas como pertenecientes al hacia el primordio del nódulo (Laplaze et al., 2000;
actinomicete Frankia. (Becking, 1974, Lechevalier y Obertello, 2003). Los lóbulos presentan un meristema
Lechevalier 1979), pero no fue sino hasta 1978 apical y Frankia existe como un micelio vegetativo
cuando pudo ser aislado. Este actinomicete forma con presencia de vesículas donde es protegida y
nódulos (actinorizas) o raíces laterales modificadas funciona la nitrogenasa; tal resguardo es dado por la
con lóbulos hasta de 5 cm de longitud (Figura 23) y elevada concentración de ácidos grasos; sin embargo,
fija nitrógeno en ocho familias de dicotiledóneas: en Casuarina y Allocasuarina, no se forman
Betulaceae9, Casuarinaceae, Coriariaceae, vesículas, dado el cambio de composición de las
Datiscaceae, Elaeagnaceae, Myricaceae10, paredes celulares, las cuales se hacen más
Rhamnaceae11 y Rosaceae12. Como consecuencia, hidrofóbicas y menos permeables al oxígeno después
estas plantas son capaces de crecer en suelos pobres e de la infección (Verghese y Misra, 2002).
intervenidos (Verghese y Misra, 2002), siendo así
útiles en la recuperación de suelos y reforestación. Durante la simbiosis, el microsimbionte
obtiene la energía de la planta hospedera a través de
En el proceso simbiótico y de formación de compuestos carbonados; se considera que Frankia por
los nódulos se presentan variaciones determinadas por carecer de enzimas glicolíticas, obtiene el carbono de
el hospedero, que incluyen la vía de infección (en lípidos (Verghese y Misra, 2002); sin embargo,

9
Alnus acuminata subs. acuminata Kunth ha sido
colectada en el estado Mérida: Hahn y Grifo
3509(MO); Alnus acuminata var. ferruginea (Kunth)
Regel colectada en la Cordillera de los Andes por
Pittier 13239 (VEN).
10
Morella pubescens (Humb. & Bonpl. ex Willd.)
Wilbur, 2001 ha sido colectada en los estados Barinas:
Croat 74592 (MO), Lara: Liesner et al. 7939, Mérida:
Liesner 13849 (MO), Yaracuy: Trujillo y Ponce 18275
(MO), Trujillo: Trujillo et al. 18370 (MO). y Distrito
Federal: Gentry et al. 41263 (MO).
11
Rhamnus acuminata Maguire & Steyerm 1989.
Colectada en el estado Amazonas: Maguire et al.
42496 (MO); Rhamnus sipapoenis Steyerm. Maguire y
Politi 28656(MO).
12 Figura 23. Nódulos de Alnus sp. mostrando la
Prunus moritziana Koehne colectada en los estados
estructura multilobulada. Copyright ©
Mérida: Hahn y Grifo 3341 (MO) y Yaracuy: Smith
Lundquist, P.O. (Allan y Graham,
V10001.
2002).

14 Revista UDO Agrícola 4 (1): 1-20. 2004

 Mayz-Figueroa. Fijación biológica de nitrógeno

algunos investigadores han reportado el transporte de microorganismos pertenecientes a los Dominios

sacarosa vía floema hacia los nódulos (Parsons y Archaea y Bacteria, los cuales pueden formar
Sunley, 2001). Como en los otros sistemas asociaciones con organismos pertenecientes al
simbióticos el compuesto de nitrógeno metabolizado Dominio Eucaria. Estas asociaciones pueden ser de
es NH4+ a través de la vía GS/GOGAT, ATP/NADPH tipo no simbiótico, ocurriendo principalmente en la
dependientes, que produce glutamina y luego filósfera o la rizósfera de algunas plantas, o de tipo
glutamato en los nódulos; los aminoácidos aspartato y simbiótico, dándose en briofitas (musgos, hepáticas y
asparagina son subsecuentemente metabolizados por antocerotas), helechos (Azolla), gimnospermas
enzimas amido y amino transferasas (AAT) y (cícadas) y angiospermas (Gunnera, leguminosas y
sintetasas (AS) (Figura 25). El compuesto Parasponia) y en zonas de la planta que incluyen la
nitrogenado transportado vía xilema desde los raíz, el tallo y las hojas.
nódulos varía entre los hospederos; así, se ha
encontrado citrulina en Alnus sp. (Wheeler y Bond, Una característica común de los
1970) y Casuarina equisetifolia (Walsh et al., 1984), microorganismos involucrados en la FBN, es la
arginina en Casuarina cunninghamiana (Sellstedt y presencia del sistema enzimático nitrogenasa, que les
Atkins, 1991), y glutamina y asparagina en Myrica permite la reducción del nitrógeno molecular (N≡N)
(Fig. 25), Hippophae, Ceanothus y Elaeagnus (Huss, atmosférico hasta la forma asimilable NH4+. Esta
1990; Parsons, 2004). enzima puede funcionar a cabalidad en los
microorganismos viviendo en forma libre o asociados,
excepto en las asociaciones de rizobia con
CONCLUSIONES leguminosas o Parasponia, donde la síntesis de la
enzima es compartida; es decir su acción depende de
los dos organismos involucrados. La actividad es
Los microorganismos fijadores de nitrógeno susceptible a las concentraciones de oxígeno de la
de vida libre, abarcan una gama morfológica que va atmósfera circundante, de tal manera que los
desde los organismos unicelulares como las bacterias organismos, bien aislados o asociados han adoptado
y algunas cianobacterias, hasta multicelulares como mecanismos que le permiten la protección de la
las cianobacterias filamentosas y los actinomicetes, actividad de la misma, mecanismos que incluyen:
que habitan diferentes ambientes, incluyendo los protección respiratoria, conformacional y la
extremos, todos procarióticos; comprendiendo así compartamentalización.

Fig. 24. Infección y desarrollo nodular (Obertello, 2003).

Revista UDO Agrícola 4 (1): 1-20. 2004 15

 Mayz-Figueroa. Fijación biológica de nitrógeno

Figura 25. Síntesis de asparagina en Myrica sp. (Parsons, 2004).

Bien sea de vida libre o asociados los Water, and Climate. University of Minnesota.
organismos se benefician de la FBN, al poder utilizar Disponible en:
el nitrógeno del aire como fuente del elemento, e http://www.soils.agri.umn.edu/academics/classes/s
incorporarlo en compuestos esenciales para su oil3612/SymbioticNitrogenFixation/Other.htm.
crecimiento y desarrollo. En general la vía de (Última visita 15 de noviembre de 2004)
metabolización es la glutamato sintasa/glutamato
Andrade de, Z. and Cuenca, G. 1998. First report of
sintetasa (GS/GOGAT), excepto en los líquenes,
Giomalean fungi in the highlands tepuis of La
donde el amonio es asimilado vía glutamato
Gran Sabana, Guayana Shield, Venezuela. 2nd
deshidrogenada. Los compuesto transportados vía
Internacional Conference on Mycorrhiza.
xilema o floema son aminoácidos, principalmente
Uppsala, Sweden, 5-10 July.
glutamina o sus derivados aminas, amidas o ureidos
formados por reacciones de aminación y Armstrong, W. J. 2004. Parmotremma stuppeum.
desaminación. Disponible
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En Venezuela, están representados todos los armotremma. (Última visita 22 de noviembre de
organismos y asociaciones fijadoras de nitrógeno, 2004)
siendo un potencial casi inexplorado; está en nuestras Armstrong, W. J. 2001. Teloschistes chrysophthalmus.
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