Biología Molecular y Genética

Unidad II: TCP 1

25.09.20

GENÉTICA MOLECULAR

La genética molecular es el campo de la genética que estudia las bases moleculares

de la herencia, es decir, estructura y funcionamiento de genes a nivel molecular.
Además, la genética molecular estudia:

• Organización del material genético

• Expresión génica
• Mutación y reparación del DNA
• Bases moleculares de enfermedades genéticas
Científicos influyentes en la genética molecular:

• J.Watson & F. Crick descubrieron la famosa estructura de doble hélice o

escalera en espiral, modelo del ADN.
• R. Flankiln con su trabajo pudo clarificarse la estructura de doble hélice del
ADN, vital para la comprensión de la vida
• E. Chargaff analizó las bases nitrogenadas del ADN en diferentes formas de
vida, concluyendo que, la cantidad de purinas siempre se encontraban en
proporciones iguales a las de las pirimidinas. (Proporción de A-T y G-C)
• B.McClintock desubrió los “genes saltarines”.
• K.Mullis inventó el PCR.

Estructura de los cromosomas

Esquema que representa el cambio del
cromosoma en mitosis:
G1: Pasa de ser una hebra doble de ADN
no duplicada a una hebra doble duplicada
(S).
G2: Esta se condensa hasta formar el
cromosoma doble (M).

Observación: En la unidad de genética

molecular no se estudiarán animales, sino
que sólo humanos.

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Primera observación de los cromosomas ocurrió en 1955

En 1955 Sr. Y Sra. Boué observaron por primera vez los 46 cromosomas.
Todos los cromosomas de las especies tienen:

- Un telómero en cada extremo.

- Uno o varios orígenes de replicación (dependiendo de dónde comience la
replicación).
- Un centrómero.
o Lugar donde se anclan microtúbulos en mitosis. (huso
mitótico).
o Regiones/secuencias repetidas de DNA (150-171
pares de bases).
o Componen el 1-3% de la secuencia de un genoma.
o Su posición varía en los distintos cromosomas.

Observación de cromosomas:
Cariotipo: Montaje de cromosomas que se
pueden visualizar en el microscopio. Se
pueden reconocer los números de los
cromosomas.
Cariograma: Es el cariotipo ordenado con
sus parejas homólogas correspondientes (por
tamaño). Comienzan con el cromosoma de
mayor tamaño (cromosoma 1) con su pareja
hasta llegar a los cromosomas sexuales. Es

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un esquema artificial que se realiza en computador.

- La diferencia entre ellas es la nomenclatura solamente.

- La diferencia de color es debido a las distintas sondas.

Tipos de cromosomas
Los cromosomas se clasifican en distintos tipos dependiendo la posición del
centrómero. No tiene relación con el tamaño del cromosoma.

• Metacéntrico: Los brazos son de longitud similar, es decir, el centrómero

esta justo en el centro.
• Submetacéntrico: El centrómero esta desplazado hacia uno de sus brazos,
no está exactamente en el centro.
• Acrocéntrico: El centrómero está notablemente desplazado hacia uno de
sus brazos
• Telocéntrico: No se observan brazos después del centrómero.

- En la imagen se observa
un cromosoma duplicado
de cada tipo (materno o
paterno), es decir, se
observan las dos
cromátida hermanas
unidas por el centrómero.
- Solo se visualizan de esta
manera en metafase.
- El centrómero da la pista
que son cromosomas que
ya pasaron por la
duplicación.

En humanos existen los cromosomas metacéntricos, submetacéntricos,

acrocéntricos, pero NO los telocéntricos (en otras especies sí). Si es que se
observa un cromosoma telocéntrico en un humano, corresponde una falla, siendo
más grave que una mutación, la cual puede o no generar una enfermedad,

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Idiograma
Es un esquema de un cariotipo en donde se ordenan los cromosomas por tamaño,
además incluye la información del estado de la tinción de cada uno.
El orden de un idiograma depende del tamaño de los cromosomas (de mayor a
menor):
1. Cromosomas grandes: Van al comienzo (1, 2, 3, 4, 5),
2. Cromosomas medianos (6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18).
3. Cromosomas pequeños (19, 20, 21, 22)
4. Cromosomas X e Y siempre van al final
Observación: El cromosoma Y también se considera pequeño.

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Bandeo G (Giemsa):
Para estudiar a los cromosomas se utilizan
tinciones, las cuales existen de distintos tipos,
pero la más usada es la tinción de Giemsa que
produce el bandeo G.
Para realizar un bandeo G, se fijan los
cromosomas, se le echa esta molécula para
teñirlos y se forman bandas claras y bandas
oscuras, como se observa en la imágen.

Se observa un cariograma de una mujer, ya

que tiene los 22 cromosomas autosómicos y los
2 sexuales correspondientes a XX. Estos
cromosomas se encuentran simplificados.

Características de las bandas oscuras:

• Son zonas ricas en Adenina y timina (A-T).

• Se replican (duplican) durante la segunda mitad de la fase S del ciclo celular.
Comienza tarde a replicarse.
• Comparado con las zonas claras tienen relativamente pocos genes.
Características de las bandas claras:

• Zonas ricas en Guanina y Citocina (G-C)

• Se replican tempranamente
• Tienen muchos genes

Genes y alelos en Bandeo G:

- Esto es así siempre, la especie humana posee el mismo patrón. No cambia
entre un individuo y otro. Excepto que existan deleciones o se añada un
segmento de cromosoma en otro donde no corresponde.

- En general el brazo largo del cromosoma se denomina “brazo q” y el más corto

“brazo p” (viene de petite).

- Un gen pequeño va a estar probablemente dentro de un fragmento completo

oscuro o de un fragmento completo claro. La secuencia de un gen es tan

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pequeña en comparación con el cromosoma completo, que este cabe

completamente dentro de una zona oscura o clara.

- Por ejemplo, una zona marcada de manera oscura puede que tenga millones de
pares de bases y a lo mejor un gen es mil pares de bases. En el cromosoma
homologo ese gen se va a encontrar exactamente en la misma zona con el
mismo patrón.

- Cromosoma 1 paterno con el 1 materno se tiñen exactamente igual, por lo

tanto, todos los alelos están a la misma altura.

- En cada banda (clara u

oscura) hay muchos locus
distintos.
- Los telómeros están en los
extremos.
- El Centrómero se ubica en el
medio.

• Brazo p Corto
• Brazo q Largo

Observación: Cuando el
cromosoma es metacéntrico, el
brazo p será igual al brazo q.

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• Para identificar las bandas ya sean oscuras o claras, dentro de cada

cromosoma hay zonas determinadas con números, que van del centrómeros
hacia arriba y del centrómero hacia abajo. Ejemplo: Zona 31 (en la imagen
anterior)
• El cromosoma Y es mucho mas pequeño (contiene menos genes que el X),
junto con el 19, 20,21 y 22.

La morfología de los cromosomas va cambiando según el grado de

compactación de su cromatina

• A medida que avanza el ciclo celular las bandas se van juntando por lo que va
disminuyendo el número de bandas, siendo éstas más gruesas.
• Por lo tanto, se observan los cromosomas:

- Metafase (cromosoma de la derecha):

Mayor grado de condensación
(cromosomas más pequeño) y menor
número de bandas pero más gruesas.
- Prometafase: (cromosoma del medio)
:
Un poco menor grdo de condensación
(cromosoma un poco más largo)
- Profase (cromosoma de la izquierda):
Menor grado de condensación
(cromosoma más largo) y mayor
número de bandas más delgadas.

En resumen:

• El ciclo celular avanza de derecha a izquierda, como se observa en la imágen

superior (Profase-Prometafase-Metafase).
• En el ciclo celular, loos cromosomas avanzan de menor a mayor condensación
• La afinidad de las moléculas (A-T) hacia la tinción Giemsa depende de la
configuración química que posea
• Todos los seres humanos tenemos el mismo patrón en los cromosomas.
- Ej: El cromosoma 1 se tiñe igual en todas las personas en la misma etapa de
condensación.

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Bandeo Q (Tinción con Quinacrina)

• Es una Tinción fluorescente

• Las bandas más brillantes “blanquitas”
(fluorescentes) son idénticas a las oscuras
del bandeo G.
• Se observan al revés que Giemsa. Es decir,
las bandas claras presentes en la tinción
Giemsa, se ven oscuras y las teñidas
oscuras con Giemsa se ven claras.

• Las bandas oscuras coinciden con las de quinacrina, ambas tiñen A-T

Ejemplo tipo prueba:

- Las bandas brillantes de quinacrina son ricas en GC FALSO
- Las bandas brillantes de quinacrina se replican de forma temprana en el ciclo
celular FALSO

Bandas R (Tinción R)
Las bandas R se tiñen al revés que Giemsa, es decir si una banda se tiñe oscuro
en R, es una banda clara en Giemsa.

Depende del laboratorio el tipo de

tinción.

Importante: Hay que fijarse en el

tipo de tinción y color de banda

“Donde haya una banda oscura en R,

es una banda clara en Giemsa”.

La diferencia simplemente recae en

que tipo de tinción esté disponible,
por lo tanto, se debe ser capaz de
reconocer las muestras con las
distintas tinciones.

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Resumen:

Bandas R: Se tiñen al reverso de una tinción Giemsa

Bandas G: Se tiñen al reverso de una tinción R

Bandas T: Como bandas R, pero de tinción más intensa.

Bandas C (tinción C)
Se tiñe específicamente la región centromérica y otras regiones que contienen
heterocromatina.

Se observan cromosomas duplicados (en metafase).

En rojo Posiblemente cromosomas 1 y 2 (de mayor tamaño), materno y
paterno.

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FISH (fluorescent in situ hybridization).

La Hibridación fluorescente in situ (FISH) es una técnica de laboratorio para detectar
y localizar una secuencia específica de ADN en un cromosoma.
La técnica se basa en exponer los cromosomas a una pequeña secuencia de ADN
llamado sonda que tiene una molécula fluorescente pegada a ella.
A nivel molecular una sonda para DNA es un marcador genético
complementario.
Ejemplo: Si se tiene una secuencia como ACGGTA, y si se quiere buscar en el
genoma esta secuencia específicamente (asumiendo que no está repetida, solo
existe una vez), se tiene que usar una sonda para que reconozca esta secuencia.
Se crea una marcada para que hibride justo con esa secuencia: TGCCAT. Se
introduce en una célula
fijada, donde la sonda buscará la secuencia que hibridará, y cuando la encuentre,
va a fluorescer.

¿Qué se necesita para poder hacer una

sonda especifica?

La secuencia original, los pares de bases.

Se necesita una base de datos para saber
que región se usará.

Se requiere ir a una base de datos y pedir

una región específica del cromosoma, en
donde nos darán una secuencia
nucleotídica. Estas se sintetizan en un
laboratorio.

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Realizar este protocolo cuando la sonda es fluorescente se denomina hibridación

in situ fluorescente (FISH).

− Hibridación: la sonda
hibrida con el DNA
− In situ: porque ocurre en el
lugar. Se tienen los
cromosomas en las células
y la hibridación es en el
lugar.
− Fluorescente: porque la
sonda está fluorescente
Se deben diseñar las sondas
para que vayan a la región del
cromosoma de la que uno está
interesado en estudiar.

Célula en interfase.
Una sonda marca 2 puntos, por lo que se observan:
Puntos rojos (x2), rosados (x2), amarillos (x2), celestes (x3)
y verdes (x3). Cada color corresponde a una sonda
marcada.
1. ¿Por qué se ven dos puntos rojos, rosados y amarillos?

Se ven dos puntos porque son células diploides

(cromosoma materno y paterno), ya que una misma sonda
marca 2 puntos diferentes, es decir, se evidencia que existe
una misma secuencia en distintos cromosomas.

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La razón de esto es que puede que sean son 2 cromosomas distintos o que la
secuencia esta 2 veces en el genoma. Al haber un cromosoma paterno y materno,
las secuencias son las mismas y la sonda los reconoce como iguales.

2. ¿Por qué se ven 3 puntos celestes y verdes?

En este caso, 3 cromosomas tienen la misma secuencia, siendo una trisomía lo más
probable, sin embargo no es viable tener mas de 1 trisoma.

Otra posible opción es que haya alguna traslocación de un trozo de cromosoma

hacia otro.

La respuesta correcta es que las 2 sondas reconocen distintas secuencias del

mismo cromosoma.

Es importante mencionar que con esta técnica no se pueden detectar mutaciones.

Si una sonda tiene 1000 pares de bases y hay 999 iguales, estas 999 van a hibridar de
todas formas, por lo tanto si 1 base falla, el resto no fallará.
Puede existir una traslocación de un pedazo de genes a otro cromosoma y esto no se
observará en esta técnica de laboratorio.

Célula en Metafase

¿Por qué se distinguen dos “puntitos” en cada

cromosoma en metafase?
Si se utiliza una sonda en metafase se verán
dos puntitos ya que se esta tiñendo una
cromátida y su hermana duplicada y puede
que en otro lado se vea el mismo cromosoma
(paterno y materno) con otros dos puntitos,
por lo que a veces se pueden observar 4
puntitos. En el caso de que dos secuencias se
encuentren muy juntas y una esta marcada
con amarillo y otra con rojo en el microscopio se podría ver naranjo el punto.

La sonda detecta la secuencia en el

cromosoma aunque este silenciado.

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Alteraciones cromosómicas

• Numéricas → 1 de cada 318 nacimientos

- Ocurre cuando sobra un cromosoma o falta.

- No tener 46 cromosomas, por ejemplo, las trisomías 13 (patau), 18 (edwards),
21 (down) o en los cromosomas sexuales, como Klinefelter (XXY)
- Monosomía: Pérdida de un cromosoma
- La única monosomia viable en el ser humano es la XO (ocurre por silenciamiento
de un X)

Aneuploidia: alteración en el numero

de cromosomas

• Estructurales→1 de cada 425 nacimientos

- Ocurren cuando una porción de un cromosoma se ubica en la estructura de

su cromosoma complementario, o también cuando una porción del
cromosoma se encuentra ausente .
- Ejemplo: El síndrome de Cri du chat es un síndrome poco frecuente causado
por una deleción autosómica parcial del brazo corto del cromosoma 5.

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Ejemplos de alteraciones cromosómicas

Las alteraciones estructurales tienen mayor probabilidad de sobrevivencia.

Diferencia entre triploidía y trisomía

Triploidía Tener el set completo de cromosomas 3 veces, se puede repetir el set
paterno o el materno (en vez de 46 en total son 69). Ninguna es viable.
Trisomía Se repite solo uno de los cromosomas en un par (hay “un par de 3”).

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