Manual Del Laboratorio - Microbiologia TP - 2023B
Manual Del Laboratorio - Microbiologia TP - 2023B
Manual Del Laboratorio - Microbiologia TP - 2023B
1. Propósito de la práctica
La limpieza, desinfección y esterilización son procesos importantes para asegurar la calidad
de los resultados en microbiología; ya que la microbiota se encuentra en todas partes,
incluyendo a ambiente que nos rodea.
3. Etapas de la limpieza
a. Recoger y desechar los residuos del producto, polvo o cualquier otra suciedad presente
en el lugar a limpiar. Debe identificar el tipo de material a desechar (materia orgánica, cultivos,
reactivos químicos como colorantes, entre muchos otros) y cuál es la manera indicada para
ello.
• Humedecer o lavar con suficiente agua potable el lugar o superficie que se va a limpiar.
• Preparar la solución de detergente que se va a usar.
• Enjabonar la superficie por limpiar, esparciendo la solución de detergente con
esponja o cepillo.
• Estregar la superficie fuertemente con ayuda de un paño o cepillo, eliminando toda
la suciedad posible.
• Dejar la solución de detergente aplicada por un minuto para que este actúe.
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• Luz ultravioleta: ésta no penetra en la mayoría de las sustancias, incluidos los tejidos
y, por lo tanto, se utiliza principalmente para inactivar microorganismos ubicados en
superficies. En los laboratorios de microbiología, las lámparas ultravioletas se utilizan dentro
de CBS para descontaminar sus superficies, generalmente al final del día.
• Filtración: es otro ejemplo de un método físico de esterilización que se usa para
eliminar bacterias, hongos y sus endosporas del aire o las soluciones. Estas se pueden eliminar
del aire al pasar el aire a través de filtro de partículas de aire una alta eficiencia. (HEPA). Las
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Cuando la aplicación de calor no es práctica, los agentes químicos son útiles para destruir
microorganismos patógenos. Existe una amplia variedad de agentes químicos que tienen
capacidad de antimicrobianos, los cuales podemos separar en dos clases generales: (1) Aquellos
que son útiles para destruir microorganismos patógenos en el medio ambiente o superficies
inertes (desinfectantes) o en la piel (antisépticos), (2) los que pueden administrarse a pacientes
para el tratamiento de enfermedades infecciosas (agentes antimicrobianos, a menudo llamados
antibióticos). Muchas sustancias antimicrobianas son demasiado tóxicas para ser utilizadas en
la terapia del paciente, pero son valiosos como desinfectantes ambientales.
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Cada agente tiene un modo de acción químico limitado, y la actividad frente a los
microorganismos expuestos a ella pueden variar ampliamente en sus respuestas. Algunos
microbios o sus formas pueden sucumbir a sus efectos (como las células bacterianas
vegetativas) mientras que otros no pueden (como las endosporas bacterianas).
2. Objetivos
4. Metodología
1. Flamee el asa en el mechero, tome una asada del cultivo de Staphylococcus spp. y
siémbrelo por agotamiento en la primera mitad de la placa. Etiquete esta muestra como: sin
incineración (SI, Fig. 2).
2. Seguidamente, vuelva a flamear el asa en el mechero y tome, nuevamente, un asada del
cultivo de Staphylococcus spp. y flamee nuevamente el asa hasta ignición. Cuando el asa este
fría, siembre por agotamiento en la segunda mitad de la placa. Etiquete esta sección como: con
incineración (CI, Fig. 2).
3. Repita los procedimientos 1 y 2, pero ahora con el cultivo de Bacillus spp.
4. Incubar las placas a 35°C, durante 24 horas.
5. Por favor, anote los resultados en la tabla 1, que se encuentra en la sección
correspondiente a resultados esperados.
Figura 2. Efecto del calor seco sobre los microorganismos (Elaborada por Aura Falco).
1. Etiquete una placa como Staphylococcus spp. y la otra como Bacillus spp. Luego, etiqueta
los cuadrantes en cada placa de la siguiente manera: 5, 10, 15 y 20 minutos (Fig. 3).
Figura 3: Efecto del calor húmedo sobre los microorganismos. Rotulación de las placas.
(Elaborada por Aura Falco).
2. Llene un beaker con agua y colocarlo sobre una plancha de calentamiento encendida.
3. Una vez el agua esté hirviendo, tome el cultivo de Staphylococcus spp. y de Bacillus spp.
y colóquelos en el baño de agua hirviendo.
4. Deje los tubos en agua hirviendo durante 5 minutos. Retire los tubos con cuidado,
asegurándose de que no goteen agua.
5. Enfríe los tubos rápidamente colocándolos bajo agua corriente (fría) y siembre una
asada de cada cultivo en el cuadrante correspondiente a los 5 minutos (Fig. 4).
6. Devuelva los tubos al baño de agua hirviendo durante 5 minutos adicionales y repita el
procedimiento para 15 y 20 minutos.
7. Incubar las placas a 37°C durante 20 horas.
8. Por favor, anote los resultados en la tabla 2, que se encuentra en la sección
correspondiente a resultados esperados.
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Figura 4: Efecto del calor húmedo sobre los microorganismos (Elaborada por Aura Falco).
Para llevar a cabo la esterilización del material de vidrio debe seguir los pasos que se
describen a continuación.
• Erlenmeyer y probetas
1. Colocar un tapón de algodón envuelto con gaza en la boca del Erlenmeyer y de la
probeta (Fig. 5).
2. Cubrir el tapón con una porción de papel de aluminio. No olvide colocar la cinta para
esterilizar o testigo.
NOTA: cuando se utiliza algodón para Erlenmeyer y probetas se debe tomar la precaución de
que éste pueda ser manipulado con facilidad, para ello no debe quedar ni muy apretado, ni muy
flojo y debe alcanzar aproximadamente 3 cm dentro del material de vidrio.
• Pipetas de vidrio
1. Coloca una pequeña torunda de algodón en el extremo superior de la pipeta (Fig. 6).
2. Recorta el papel Kraft en tiras de aproximadamente 10 cm de ancho por el largo que da
el pliego del papel.
3. Envuelve la pipeta con el papel Kraft según las indicaciones del profesor.
4. Marcar externamente el volumen de la pipeta. Por ejemplo: 5 mL, 1 mL, etc. No olvide
colocar la cinta para esterilizar o testigo.
• Placas de Petri
1. Recorte papel Kraft de acuerdo con el número de placas a envolver (no se recomiendan
más de 4 en cada paquete).
2. Envuelva las placas de Petri con papel Kraft siguiendo las indicaciones del profesor (Fig.
7). No olvide colocar la cinta para esterilizar o testigo.
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• Tubos de ensayo
1. Coloque las tapas de los tubos de ensayo siguiendo las indicaciones del profesor.
2. Organice los tubos de ensayo en una gradilla destinada para tal fin. No olvide colocar la
cinta para esterilizar o testigo.
Finalmente, todo el material de vidrio que se preparó en la sesión del laboratorio será
esterilizado en una autoclave durante 15 minutos, a 121°C y 15 lb de presión. Es importante
mencionar que una vez que el material sale de la autoclave se debe colocar en una estufa a 70°C,
durante unas horas, para que el material que sale húmedo se seque por completo.
5. Resultados esperados
Para cada sesión del laboratorio el estudiante debe diligenciar las tablas dispuestas para los
resultados esperados (RE) y los resultados obtenidos (RO) en el laboratorio, para poder
discutirlos en clases.
Es importante hacer notar que esta sección “Resultados esperados” debe entregarla en
físico (impresa) al profesor cuando él se lo informe y siguiendo todas sus indicaciones.
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Tabla 1. Registro de los resultados del experimento “Efecto del calor seco sobre los
microorganismos”.
RE RO RE RO RE RO
Staphylococcus spp.
Bacillus spp.
Tabla 2. Registro de resultados de experimento “Efecto del calor húmedo sobre los
microorganismos”.
Minutos en ebullición
Cultivo 5 10 15 20
RE RO RE RO RE RO RE RO
Staphylococcus spp.
Bacillus spp.
5. Referencias bibliográficas
• https://www.who.int/topics/medical_waste/manual_bioseguridad_laboratorio.pdf.
Manual de bioseguridad en el laboratorio. – 3a ed.
• https://www.cdc.gov/labs/BMBL.html. Biosafety in Microbiological and Biomedical
Laboratories (BMBL) 5th Edition.
• Laboratory manual and workbook in microbiology: applications to patient care. Paul A.
Granato, Josephine A. Morello, Verna Morton. Twelfth edition. | New York, NY: McGraw-Hill
Education.
• http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/10_Prep
_de_material_de_vidrio.pdf
• https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/2689620;
• https://www.pda.org/docs/default-source/website-document-
library/chapters/presentations/metro/defining-a-strategy-for-the-validation-and-
qualification-of-sterile-filtration-processes-of-investigational-medicinal-
compounds.pdf?sfvrsn=8
1. Propósito de la práctica
Los medios de cultivo son sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio
que contienen los nutrientes necesarios para el aislamiento de microorganismos y es una de las
herramientas principales para su identificación. Un medio de cultivo debe estar exento de todo
microorganismo contaminante.
Para que un microorganismo pueda crecer adecuadamente en un medio de cultivo; este debe
cumplir unos requerimientos básicos:
• Medios semisólidos
Los medios semisólidos generalmente se preparan con agar a razón de 7 g/L de medio
de cultivo. Son útiles para la determinación de la motilidad bacteriana y para llevar a cabo
estudios con bacteriófagos (virus capaces de infectar bacterias). Un ejemplo de ellos es el medio
swarmming utilizado para identificar este tipo de movilidad en Pseudomonas aeruginosa (Fig.
9).
utilizan para cultivar bacterias exigentes desde el punto de vista nutricional. Agar sangre, agar
chocolate etc. son algunos de los medios enriquecidos. El agar sangre se prepara agregando 5-
10% (en volumen) de sangre a un medio base (Fig. 11).
2. Objetivos
4. Metodología
• Pese el medio de cultivo siguiendo las indicaciones del fabricante, es decir, teniendo en
cuenta cuántos gramos del medio se deben pesar para preparar el volumen requerido.
Colocarlo en un Erlenmeyer o Boeco que previamente tenga un poco de agua destilada.
• Agregue el agua destilada hasta el volumen correspondiente y mezcle con el agitador
magnético. Es muy importante que siga las recomendaciones del fabricante debido a que
algunos medios requieren ser calentados antes de ser esterilizados, mientras que otros no.
• Coloque el tapón de algodón y gaza al Erlenmeyer que contiene el medio de cultivo o
cierre el Boeco ajustando la tapa. Recuerde que no debe dejar la fuertemente cerrada.
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5. Resultados esperados
El lote de placas realizadas por cada grupo debe estar libre de contaminación.
6. Referencias bibliográficas
• Manual of Clinical Microbiology. 10th edition. Versaloviic J, Carroll KC, Funke G,
Joregesen JH, Landry ML and Warnock DW (ed). Washington DC. ASM Press 2011.
• Procedimientos en microbiología clínica. Sociedad Española de Enfermedades
infecciosas y Microbiología clínica.
• http://www.seimc.org/documentos/protocolos/microbiologia/;
https://microbeonline.com/category/mycology/
• Preparación de Medios de Cultivo: https://www.youtube.com/watch?v=cneascR3OEc.
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1. Propósito de la práctica
1. Estimación del número de células en un cultivo bacteriano: El número de células
de un cultivo puede ser determinado por diferentes métodos, por ejemplo, por densitometría,
utilizando espectrofotómetros o fotocolorímetros; o por recuento directo del número de células
bajo el microscopio de luz, utilizando cámaras de Petroff-Hauser. Con ambos métodos se
realizan contajes de la población total, sin discriminar entre las células viables y las muertas.
Estimar la población de células vivas requiere realizar una titulación o contaje viable. Si el
cultivo original se diluye en forma precisa y, a partir de estas diluciones, se siembran volúmenes
conocidos sobre placas de medio rico, solamente las bacterias viables del cultivo darán origen
a la formación de colonias. Cada bacteria viable que se encuentre en un punto sobre el medio
de cultivo sólido comenzará a multiplicarse sucesivamente, lo que dará lugar a un clon de
células genéticamente relacionadas, llamada colonia.
Si se realizan diluciones seriadas del cultivo, con factores de dilución conocidos, en cada
dilución, la población disminuirá en forma proporcional a la dilución. Así que, previamente a
sembrar el cultivo, este debe ser diluido en forma seriada. Para establecer una dilución de 1
parte en 10 partes (1/10), se añade, por ejemplo, 1 ml del cultivo original a un tubo de ensayo
que contenga 9 ml de solución salina estéril (0,85%) o de agua peptonada:
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𝑉𝑜𝑙 𝑑𝑒 𝑐𝑢𝑙𝑡𝑖𝑣𝑜 1 𝑚𝑙 1
= = = 10−1
𝑉𝑜𝑙 𝑇𝑜𝑡𝑎𝑙 (9 𝑚𝑙 + 1 𝑚𝑙) 10
En esta dilución, el número de bacterias por mililitro será 10 veces menor al del cultivo
original y puede expresarse como 1/10 o 10-1. Si de esta dilución 10-1 se toma 1 ml y lo lleva a
un nuevo tubo con 10 ml de eluyente estéril, habrá efectuado una dilución del cultivo original
de 1/100 (1/10 x 1/10), lo cual es igual a 10-2, así el número de bacterias por mililitro será 100
veces menor con respecto al número original de bacterias (Fig. 14).
Por ejemplo: al realizar dos siembras de la dilución 10-5 se obtienen los siguientes resultados:
0,1 ml
= 2 x 108
0,05 ml
Técnicas de siembra
1. El método de siembra por agotamiento o por estrías
Es el método más fácil y el más usado para obtener cultivos axénicos (puros). Para ello, con
un asa de siembra, se toma una muestra de la población mixta y a continuación se hacen estrías
sobre la superficie de un medio sólido preparado en una placa de Petri. A medida que se van
haciendo estrías en zigzags con el asa, se van depositando menos microorganismos en la
superficie del medio. A continuación, se flamea el asa, se toca en la región donde se han
realizado las últimas estrías y se continúa la siembra con la misma técnica, en la superficie de
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medio sin sembrar aún. Repitiendo este proceso varias veces se logra separar células
individuales y, que después del periodo de incubación, se observen colonias aisladas (Fig. 15).
Figura 15: Siembra por estría en placa o agotamiento (Tomado de: Clinical microbiology
procedures Handbook. Fourth edition).
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a. Siembra por profundidad: Las muestras diluidas se mezclan con agar fundido y se
vierten en la placa. Algunas colonias quedarán embebidas en el agar y otras crecerán en la
superficie. Las colonias superficiales se extenderán y serán más grandes. Generalmente, lo que
se hace es que, a partir de un cultivo en medio líquido o, de una suspensión bacteriana, se
realizan diluciones seriadas. (10-1 ,10-2 ,10-3). Luego, se toma una alícuota (generalmente es 1
ml) de la última dilución y se vierte en una placa de Petri a la que luego, se le agrega agar fundido
(~56°C). Las cajas de Petri se deben incubar a la temperatura y las condiciones requeridas.
Después de la incubación, se desarrollan colonias en el agar (más pequeñas) y en su superficie
(más grandes).
3. Medios inclinados
Este tipo de cultivo es empleado para mantener cepas a mediano plazo para realizar
pruebas adicionales posteriores o para la realización de pruebas bioquímicas para
identificación de microorganismos. Se requiere práctica y siempre debe hacerse cerca del
mechero Bunsen. El cuello del tubo o del frasco debe ser flameado antes de recubrirlo o de
volver a colocar la tapa.
mantenimiento a mediano plazo de aislados y/o cepas. Se requiere para ello un asa recta y
siempre debe hacerse cerca del mechero Bunsen. El cuello del tubo o del frasco debe ser
flameado antes de recubrirlo o de volver a colocar la tapa.
Existen muchas técnicas de mantenimiento de los cultivos puros, pero casi todas consisten
en una desecación (eliminación del agua) o en un almacenamiento a baja temperatura.
2. Objetivos
• Conocer uno de los métodos para evaluar poblaciones bacterianas: el contaje viable.
• Adquirir destrezas en diferentes técnicas de siembra, dependiendo del tipo del medio de
cultivo y de la finalidad de dicha siembra.
4. Metodología
b. A partir del medio líquido: A partir de un cultivo líquido y, usando el asa, debe
sembrar el cultivo de cada una de las especies bacterianas en agar MK, TSA y CH, AMS siguiendo
las indicaciones de la figura 14. Para ello, debe esterilizar un asa de siembra con calor seco,
enfriar el asa al lado del mechero o en un borde limpio del agar, para luego hacer estrías sobre
la superficie del AN (Fig. 15), quemando el asa en cada nueva zona de estrías para así asilar
colonias. Incubar a 37°C por 24 horas las placas de MK, TSA y CH y AMS durante 48 horas.
Figura 16. Esquema de diluciones seriadas para sembrar por profundidad (Realizado por A.
Falco)
Figura 17. Esquema de diluciones seriadas para la siembra en superficie (Realizado por A.
Falco).
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5. Resultados esperados
Para cada sesión del laboratorio el estudiante debe diligenciar las tablas dispuestas para los
resultados esperados (RE) y los resultados obtenidos (RO) en el laboratorio, para poder
discutirlos en clases.
Es importante hacer notar que esta sección “Resultados esperados” debe entregarla en
físico (impresa) al profesor cuando él se lo informe y siguiendo todas sus indicaciones.
Tabla 3. Registro de los resultados del experimento “Siembra por agotamiento” partiendo de
medio sólido y de medio líquido.
E. coli
P. aeruginosa
K. pneumoniae
S. aureus
6. Referencias bibliográficas
• Manual of Clinical Microbiology. 10th edition. Versaloviic J, Carroll KC, Funke G,
Joregesen JH, Landry ML and Warnock DW (ed). Whasington DC. ASM Press 2011.
• Laboratory Manual and Workbook in Microbiology. Twelfth edition. Granato Paul A;
Morello Josephine A; Morton Verna. New York: McGraw-Hill Education, 2019.
• Clinical Microbiology Procedures Handbook. Fourth edition. Amy L. Leber. Whasington
DC. ASM Press, 2016.
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1. Propósito de la práctica
Características macroscópicas de bacterias
Las características de las colonias en medios de cultivo pueden ser características para cada
especie. La observación de esas características como color, textura, superficie, forma y tamaño
podrían proporcionar información sobre la identidad de un organismo particular. Sin
embargo, la identificación final no puede realizarse solo por la morfología de la colonia.
A continuación, se presentan algunas de las características que se pueden observar tanto en
bacterias (Fig. 18). como en hongos.
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I. TAMAÑO
1. Grande
2. Mediana
3. Pequeña
4. Puntiforme
II. FORMA, BORDES Y ELEVACIÓN:
1. Superficie
2. Lisa
3. Rugosa
III. CONSISTENCIA:
1. Blanda
2. Dura
3. Mucoide
IV. ASPECTO
1. Brillante u opaco
2. Mate o translúcida
VI PIGMENTO (Se observan en medios como agar nutritivo o agar sangre)
1. Amarillo
2. Rojo
3. Verde
VII HEMÓLISIS (Se observa solo en agar sangre)
1. Parcial (alfa)
2. Total (beta)
3. No hemolítica
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Tinciones
Para hacer tinciones se necesitan colorantes, los cuales son compuestos orgánicos o
inorgánicos que tienen la capacidad de colorear. Químicamente, el colorante está constituido
por un componente cromóforo y un auxócromo. El cromóforo es un compuesto orgánico
responsable de la absorción selectiva de la luz y que transmite un color determinado, mientras
que los auxócromos son grupos cargados positivamente que intensifican una sustancia o
cromóforo en la síntesis de colorantes.
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Básicos o Catiónicos (+): la carga del ion cromóforo es positiva. Corresponden a colorantes
que tiñen estructuras nucleares o similares, que son acidas, es decir, cargadas negativamente.
Ejemplos: Fucsina básica, cristal violeta o violeta de Genciana y azul de Metileno.
Neutros: Son sales compuestas de un colorante ácido y un colorante básico, por ejemplo,
el eosinato azul de Metileno que, en general, posee propiedades de colorante ácido y básico.
Tinción diferencial: Se usan dos o más colorantes y uno de ellos sirve de contraste. Se
denominan diferenciales porque discriminan ciertas características y permiten agrupar a los
microorganismos. Ejemplos: Coloración de Gram y Coloración de Ziehl Neelsen.
2. Objetivos
• Definir las características de la morfología de las colonias y la diferencia entre cultivos
axénicos y mixtos.
• Preparación de frotis directos.
• Realizar coloraciones: simples y diferenciales
• Interpretar y evaluar correctamente los resultados obtenidos en las distintas
coloraciones.
• Cajas de agar nutritivo con cepas ATCC 25922 (E. coli), 27853 (P. aeruginosa), 25923 (S.
aureus), Bacillus spp., 4352 (K. pneumoniae).
• Cajas de agar MK, agar Chromocult, agar manitol salado, agar cetrimide en las que se
encuentran sembradas las especies: ATCC 25922 (E. coli), 27853 (P. aeruginosa), 25923 (S.
aureus), Bacillus spp., 4352 (K. pneumoniae).
Tinción Gram
• Caja de portaobjetos y de cubreobjetos
• 1 gotero con azul de metileno
• 1 batería de coloración de Gram: Cristal violeta, lugol, alcohol-acetona, safranina.
• 2 asas en aro
• 2 mecheros
• 1 gotero con solución SS estéril (0,85%)
• 1 gotero con aceite de inmersión
• 2 microscopios
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4. Metodología
5. Resultados esperados
Para cada sesión del laboratorio el estudiante debe diligenciar las tablas dispuestas para los
resultados esperados (RE) y los resultados obtenidos (RO) en el laboratorio, para poder
discutirlos en clases.
Es importante hacer notar que esta sección “Resultados esperados” debe entregarla en
físico (impresa) al profesor cuando él se lo informe y siguiendo todas sus indicaciones.
Nombre de la
especie Características macroscópicas Forma al microscopio
bacteriana
Gram:
Color:
Forma:
Borde:
Elevación:
6. Referencias bibliográficas
• Manual of Clinical Microbiology. 10th edition. Versaloviic J, Carroll KC, Funke G,
Joregesen JH, Landry ML and Warnock DW (ed). Whasington DC. ASM Press 2011.
• Laboratory Manual and Workbook in Microbiology. Twelfth edition. Granato Paul A;
Morello Josephine A; Morton Verna. New York: McGraw-Hill Education, 2019.
• Clinical Microbiology Procedures Handbook. Fourth edition. Amy L. Leber.
Whasington DC. ASM Press, 2016.
• Koneman’s Color Atlas and Textbook of Diagnostic Microbiology. 7th edition. Gary W.
Procop, Deirdre L. Church, Geraldine S. Hall, William M. Janda, Elmer W. Koneman, Paul C.
Schreckenberger, Gail L. Woods. Philadelphia: Wolters Kluwer Health, 2017.
• Manual of Clinical Microbiology. 10th edition. Versaloviic J, Carroll KC, Funke G,
Joregesen JH, Landry ML and Warnock DW (ed). Whasington DC. ASM Press 2011.
• Laboratory Manual and Workbook in Microbiology. Twelfth edition. Granato Paul A;
Morello Josephine A; Morton Verna. New York: McGraw-Hill Education, 2019.
• Clinical Microbiology Procedures Handbook. Fourth edition. Amy L. Leber.
Whasington DC. ASM Press, 2016.
• Koneman’s Color Atlas and Textbook of Diagnostic Microbiology. 7th edition. Gary W.
Procop, Deirdre L. Church, Geraldine S. Hall, William M. Janda, Elmer W. Koneman, Paul C.
Schreckenberger, Gail L. Woods. Philadelphia: Wolters Kluwer Health, 2017.
1. Propósito de la práctica
Las pruebas de identificación y susceptibilidad son utilizadas para
identificar/tipificar los microorganismos y su respuesta a antimicrobianos.
Tradicionalmente, la identificación de bacterias y hongos se han basado en el examen
de la morfología de la colonia y, en bacterias, se ha utilizado la realización de pruebas
bioquímicas en tubos de ensayo. Estos métodos continúan utilizándose en muchos
laboratorios de microbiología, pero requieren mucho tiempo y trabajo. Adicionalmente,
las pruebas bioquímicas en tubo dependen de interpretaciones subjetivas y, los
resultados finales, están disponibles entre 24 a 48 horas.
Para entender un poco la dinámica de las metodologías más utilizadas para realizar
las pruebas de identificación, se presentarán a continuación los métodos más utilizados
y aceptados para su estudio.
medio, mientras que los no fermentadores general alcalinización del medio. El indicador
de color utilizado para este medio es azul de bromotimol.
b. Citrato: El agar citrato se usa para identificar si el organismo tiene la
capacidad de utilizar el citrato como fuente de energía. El medio contiene citrato como
única fuente de carbono y sales de amonio inorgánico como la única fuente de nitrógeno.
El crecimiento es indicativo de la utilización de citrato, un metabolito intermedio en el
ciclo de Krebs. Cuando la bacteria metaboliza citrato, las sales de amonio se rompen y
generan amoníaco, que aumenta la alcalinidad. El cambio en el pH convierte el indicador
azul de bromotimol del medio de verde a azul reacción que realiza por encima de pH
7.6.
c. Urea: Medio de urea, ya sea un caldo o agar, contiene urea y el indicador
de pH es rojo de fenol. Muchos organismos, especialmente aquellos que infectar el tracto
urinario, tienen una enzima ureasa, que es capaz de hidrolizar la urea en presencia de
agua para liberar dos moléculas de amoníaco y dióxido de carbono. El amoniaco se
combina con el dióxido de carbono y agua para formar carbonato de amonio, que
convierte el medio alcalino, girando el indicador de su naranja original a color amarillo
a rosa brillante.
d. Lisina (Lisina hierro azúcar): El medio se usa para detectar si un
organismo tiene la capacidad de descarboxilar o hidrolizar un aminoácido, formando
una amina que produce un pH alcalino. El medio basal contiene peptonas de carne y
extracto de levadura, que suministran nutrientes nitrogenados para apoyar el
crecimiento bacteriano. Esto permite identificar las enzimas descarboxilasa y
deaminasa. La glucosa es el carbohidrato fermentable. Los indicadores de pH son
púrpuras de bromocresol y rojo cresol.
e. MIO (movilidad, indol y ornitina descarboxilasa): En este medio se
puede observar la movilidad de algunas bacterias, adicionalmente, el medio contiene
tripteína que aporta triptófano sustrato de la enzima triptofanasa, sustrato del indol que
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Métodos moleculares
1. Cámara de ionización
2. Analizador de masas
3. Detector de iones.
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La muestra vaporizada es luego dirigido y acelerado a través del analizador de masas, que
separa los iones cargados positivamente en función de su relación masa-carga. La velocidad a
la que viajan los iones depende de su relación masa-carga, aquellos con relaciones más
pequeñas viajan más rápido que aquellos con relaciones más grandes.
Al salir del analizador de masas, las partículas ionizadas son capturadas y sus tiempos de
vuelo se mide con un detector de iones. El espectro de masas generado es esencialmente una
huella digital única de "proteína" de la bacteria u hongo desconocido. Basados en el perfil
obtenido, el microorganismo desconocido se identifica por comparación computarizada en una
base de datos de espectros de referencia de más de 22,000 previamente bien caracterizados.
2. Objetivos
• Conocer las diferentes técnicas utilizadas para realizar la identificación
utilizadas para la identificación de bacterias.
• Una batería bioquímica: TSI, lisina, citrato, urea, MIO, reactivo de Kovacs
• Dos mecheros
• Dos asas en argolla y dos en punta
• Un gotero con SS estéril (0,85%)
4. Metodología
5. Resultados esperados
1. Descarboxilación:
a. Positivo: Superficie alcalina/Profundidad alcalina – superficie violeta/fondo
violeta.
b. Negativo: Superficie alcalina/Profundidad ácida – violeta/amarillo.
2. Desaminación:
a. Positivo: Superficie rojiza/Profundidad ácida.
3. Producción de SH2: Color negro en el medio
a. Movilidad:
• Positiva: Presencia de turbidez o crecimiento más allá de la línea de
siembra.
• Negativa: Crecimiento limitado a la línea de siembra.
b. Ornitina descarboxilasa:
• Positiva: Color purpura; Negativa: Color amarillo.
Para cada sesión del laboratorio el estudiante debe diligenciar las tablas dispuestas para los
resultados esperados (RE) y los resultados obtenidos (RO) en el laboratorio, para poder
discutirlos en clases.
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Es importante hacer notar que esta sección “Resultados esperados” debe entregarla en
físico (impresa) al profesor cuando él se lo informe y siguiendo todas sus indicaciones.
Tabla 6. Registro de los resultados esperados para las “Pruebas bioquímicas – Identificación
bacteriana”.
Tabla 7. Registro de los resultados obtenidos para las “Pruebas bioquímicas – Identificación
bacteriana”.
6. Referencias bibliográficas
• Manual of Clinical Microbiology. 10th edition. Versaloviic J, Carroll KC, Funke G,
Joregesen JH, Landry ML and Warnock DW (ed). Whasington DC. ASM Press 2011.
• Laboratory Manual and Workbook in Microbiology. Twelfth edition. Granato Paul A;
Morello Josephine A; Morton Verna. New York: McGraw-Hill Education, 2019.
• Clinical Microbiology Procedures Handbook. Fourth edition. Amy L. Leber. Whasington
DC. ASM Press, 2016.
• Koneman’s Color Atlas and Textbook of Diagnostic Microbiology. 7th edition. Gary
W. Procop, Deirdre L. Church, Geraldine S. Hall, William M. Janda, Elmer W.
PRACTICA # 6: Hongos
1. Propósito de la práctica
Hay una gran diversidad de hongos y, algunos de ello, son comestibles. Las setas
comestibles son hongos, al igual que el moho que forma las líneas azules o verdes de algunas
clases de queso; mientras que la levadura, otro tipo de hongo, es un ingrediente necesario para
la elaboración de distintos tipos de pan. Otros hongos pueden causar enfermedades. Un ejemplo
es Candida spp., un hongo dimórfico que puede causar infecciones conocidas como candidiasis.
Los hongos también son responsables de afecciones de la piel como el pie de atleta y la tiña.
1. Algodonosa
2. Afelpada
3. Granular
4. Polvosa
5. Pastosa
6. Algodonosa-granular
1. Lisa
2. Radiada o Rugosa
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PRACTICA # 6: Hongos
3. Verrugosa
1. Cremosa
2. Mucosa
3. Dura- Pastosa
PRACTICA # 6: Hongos
2. Objetivos
• Identificar las diferentes estructuras somáticas y reproductivas que poseen los hongos
y que son útiles para su identificación.
• Utilizar las diferentes técnicas de montaje y coloración de hongos.
4. Metodología
b) Tomar con un asa curva una porción de colonia de hongos y colocarlo encima de la gota
de azul de lactofenol.
c) Con ayuda de una aguja recta estéril disociar el micelio con el objeto de hacer más delgada
la preparación que permita una mejor visualización de las estructuras del hongo.
PRACTICA # 6: Hongos
b) Tomar un pequeño fragmento de cinta transparente entre los dedos pulgar e índice, con
el lado adhesivo hacia afuera.
d) Colocar la cinta con el lado adhesivo hacia abajo y pegarla sobre el portaobjeto con el
ALF.
5. Resultados esperados
Es importante hacer notar que esta sección “Resultados esperados” debe entregarla en
físico (impresa) al profesor cuando él se lo informe y siguiendo todas sus indicaciones.
El estudiante debe registrar las características esperadas y las observadas en cada una de
las colonias de los hongos que se le entreguen, de acuerdo con la tabla 8 y 9.
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PRACTICA # 6: Hongos
Color:
Textura:
Color:
Topografía:
Consistencia:
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PRACTICA # 6: Hongos
6. Referencias bibliográficas
PRACTICA # 6: Hongos
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PRACTICA # 7: Parasitología
1. Propósito de la práctica
PRACTICA # 7: Parasitología
• Paraténico. Alberga al parásito sin que éste se desarrolle en alguna fase (se dice que es
de transporte).
• Reservorio. Permite que el parásito conserve su naturaleza infectiva para el humano.
PROTOZOARIOS
PRACTICA # 7: Parasitología
en la que se reproduce y durante la cual ocasiona en realidad los daños al huésped. El quiste es
inmóvil y es la fase infectante y resistente (figura 25).
Diagnóstico: La amibiasis intestinal se diagnostica con exámenes de materia fecal
(coprológico), que es el estudio directo. Si las muestras son liquidas se puede observar tanto
como trofozoítos como quistes; sin embargo, si la muestra es formada, existe menos posibilidad
de encontrar trofozoítos. Como el parásito ingresa por vía oral, debe descontaminar bien los
alimentos. En el interior del quiste se efectúa la división nuclear, por la cual el quiste maduro
adquiere cuatro núcleos (Figura 26).
.
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PRACTICA # 7: Parasitología
Balantidium coli: presenta dos fases en su ciclo de vida: trofozoíto y quiste, el cual es la
forma infectante y se infecta cuando este ingiere alimentos y bebidas contaminadas (Fig. 27).
Diagnóstico: Se realiza a partir de materia fecal en la cual fácilmente se puede identificarse
por su gran tamaño.
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PRACTICA # 7: Parasitología
HELMINTOS
PRACTICA # 7: Parasitología
PRACTICA # 7: Parasitología
3. Objetivos
• Identificar las características de parásitos asociados con infecciones clínicas.
PRACTICA # 7: Parasitología
5. Metodología
Observar al microscopio empleando los aumentos 40X y 100X.
6. Resultados esperados
Es importante hacer notar que esta sección “Resultados esperados” debe entregarla en
físico (impresa) al profesor cuando él se lo informe y siguiendo todas sus indicaciones.
El estudiante debe registrar las características observadas en cada uno de los parásitos que
observe, de acuerdo con la tabla 10.
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PRACTICA # 7: Parasitología
1.
2.
3.
4.
7. Referencias bibliográficas
• Parasitología Medica. Marco Antonio Becerril: McGraw Hill, 2011.
• DPDx - Laboratory Identification of Parasites of Public Health Concern:
https://www.cdc.gov/dpdx/index.html.
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PRACTICA # 7: Parasitología