SESIÓN 11

UNIVERSIDAD PERUANA LOS ANDES

FACULTAD DE MEDICINA HUMANA

BIOQUÍMICA Y
NUTRICIÓN

FOSFORILACIÓN OXIDATIVA
REGULACIÓN DE LA CADENA
RESPIRATORIA

Mg. JENNY MUÑOZ SAENZ

 Objetivos

• Describir la estructura de doble membrana de las mitocondrias, e indicar la ubicación de

diversas enzimas.
• Describir los cuatro complejos proteínicos involucrados en la transferencia de electrones
por la cadena respiratoria, y explicar los papeles de las flavoproteínas, las proteínas
hierro-azufre y la coenzima Q
• Identificar las cinco condiciones que controlan la tasa de respiración en mitocondrias, y
entender que la oxidación de equivalentes reductores por medio de la cadena
respiratoria y la fosforilación oxidativa se encuentran estrechamente acoplados en casi
todas las circunstancias, de modo que una no puede proceder a menos que la otra esté
funcionando.
 REGULACIÓN DEL CICLO DE KREBS
• La producción de acetil CoA para el ciclo del ácido
cítrico por el complejo del piruvato
deshidrogenasa es inhibida alostericamente por
los metabolitos que indican una suficiencia de
energía metabólica: ATP, acetil CoA, NADH y ácidos
grasos y es estimulada por los metabolitos que
indican un suministro reducido de energía (AMP,
NAD+ y CoA
NADH
• La velocidad global del ciclo del ácido citrico está
regulada por la velocidad de conversión del
piruvato a acaeti-CoA y por el flujo en el ciclo a
través del citrato sintasa, isocitrato
deshidrogenasa y α-cetoglutarato
deshidrogenasa. Estos flujos vienen determinado
por las concentraciones de los sustratos y
productos finales ATP y NADH, y son inhibidores,
mientras que los sustratos NAD+ y ADP son
estimuladores.
 REGULACIÓN DEL CICLO DE KREBS

▪ El flujo de carbonos desde el piruvato hacia el ciclo del ácido cítrico y a través de él esta sujeto a
regulaciones a dos niveles: La conversión de piruvato a acetil CoA (reacción del complejo del
piruvato deshidrogenasa y la entrada del acetil CoA en el ciclo del ácido cítrico (reacción de citrato
sintasa)
▪ La velocidad de flujo del ciclo de Krebs esta en función a tres factores: la disponibilidad de sustrato,
la inhibición por los productos acumulados y la retroinbición alostérica de las enzimas que catalizan
las tres primeras etapas
▪ La acumulación de productos en el ciclo inhibe los tres pasos limitantes del ciclo: el citrato inhibe el
citrato sintasa, el succinil CoA inhibe el α-cetoglutarato deshidrogenasa y también el citrato
sintasa y el ATP inhibe citrato sintasa y isocitrato deshidrogenasa.
▪ En el músculo el Ca2+, la señal para la contracción y producción de ATP activa la isocitrato
deshidrogenasa y α-cetoglutarato deshidrogenasa
▪ Las concentraciones de sustratos e intermediarios en el ciclo hacen posible que el flujo se
mantenga a una velocidad para producir concentraciones suficiente ATP y NADH
 INTERMEDIARIOS BIOSINTETICOS DE LOS COMPONENTES DEL CICLO DE KREBS

Tabla 1 Reacciones Anapleróticas

Reacciones anapleróticas Tejido

Piruvato + HCO3- + ATP Piruvato carboxilasa Hígado, riñones

Oxalacetato + ADP+ Pi
Fosfoenolpiruvato + CO2 +GDP PEP carboxiquinasa Corazón, musculo
Oxalacetato + GTP esqueletico
 INTERMEDIARIOS BIOSINTETICOS DE LOS COMPONENTES DEL CICLO DE KREBS
• El ciclo del ácido cítrico es una vía anfibólica, es decir es una vía para el los procesos anabólicos y
catabólicos. Además de su papel en el catabolismo oxidativo de glúcidos, ácidos grasos y
aminoácidos.
• El α-cetoglutarato y el oxalacetato son precursores de los aminoácidos aspartato y glutamato por
transaminación. A través del aspartato y glutamato son utilizados para sintetizar otros
aminoácidos así como nucleótidos de purina y pirimidina.
• El oxalacetato se convierte en glucosa mediante la gluconeogénesis .
• El succinil CoA es un intermediario central en la síntesis del anillo de la porfirina de los grupos
hemo.
• A medida que los intermediarios del ciclo son utilizados como precursores biosintéticos son
repuestos mediante reacciones anapleróticas, lo cual permite un equilibrio dinámico.
• Todas las reacciones anapleróticas convierten piruvato o fosfoenolpiruvato en oxalacetato o
malato en diversos tejidos y organismos. La reacción más importante en el hígado y riñones es la
carboxilación reversible del piruvato por el CO2 para formar oxalaceto, catalizada por el piruvato
carboxilasa
 FOSFORILACIÓN OXIDATIVA
La fosforilación oxidativa es la culminación
del metabolismo productor de energía en
los organismos aerobios. Todas las etapas
oxidativas en la degradación de glúcidos,
grasas y aminoácidos convergen en esta
etapa final de la respiración celular en la
que la energía de la oxidación impulsa la
síntesis de ATP.
La fosforilación oxidativa tiene lugar en las
mitocondrias en el que se produce la
reducción del O2 a H2O gracias a los
electrones cedidos por el NADH y el FADH2
FOSFORILACIÓN OXIDATIVA
 MECANISMO DE FOSFORILACIÓN OXIDATIVA
1) Los electrones fluyen desde
dadores electrónicos a través de
una cadena de transportadores
ligados a la membrana hasta un
aceptor electrónico final
2) La energía libre puesta a
disposición por el flujo de
electrones exergónico cuesta
abajo acoplado al transporte de
protones cuesta arriba a través de
la membrana impermeable,
conservando el potencial
electroquímico
3) El flujo de protones a favor de la
gradientes de concentración
transmembrana mediante canales
proteicos específicos
 TRANSPORTADORES UNIVERSALES DE ELECTRONES
La fosforilación oxidativa empieza con la entrada de electrones en la cadena respiratoria. La mayor parte de
dichos electrones provienen de la acción de las deshidrogenasas que captan electrones de vía catabólicas y los
canalizan hacia aceptores universales de electrones nucleótidos de nicotinamida (NAD+ o NADP) o nucletoidos
de flavina (FMN o FAD)

Las deshidrogenasas ligas a NAD eliminan

dos átomos de hidrógeno de sus sustratos.
Uno es transferido en forma de ion hidruro
(:H-) al NAD+ mientras que el otro aparece
como H+ en el medio
 TRANSPORTADORES UNIVERSALES DE ELECTRONES
Flavoproteínas
Las flavoproteínas contienen un
nucleótido de flavina FMN o FAD. El
nucleótido de flavina oxidado puede
aceptar un electrón (dando la forma de Riboflavina
semiquinona) o dos produciendo
FADH2 o FMNH2. La transferencia
electrónica se da gracias a que la
flavoproteína tiene un potencial de
reducción que el del compuesto
oxidado. El potencial de reducción de
un nucleótido de flavina depende de la
proteína a la que esta asociado
 TRANSPORTADORES DE ELECTRONES UNIDOS A LA MEMBRANA
La cadena respiratoria mitocondrial consta de una serie de transportadores electrónicos que
actúan secuencialmente, la mayoría son proteínas con grupos prostéticos capaces de aceptar y
donar uno o dos electrones. Existen tres tipos de transferencia electrónica en la fosforilación
oxidativa:
1) Transferencia de electrones, como sucede en la reducción de Fe 3+ a Fe 2+
2) Transferencia de un átomos de hidrógeno (H+ + e-)
3) Transferencia de un ion hidruro (:H-) portador de dos electrones

Además del NAD y FAD, hay otros tres tipos de moléculas transportadoras de electrones que
funcionan en la cadena respiratoria:

a) Ubiquinona ( también llamado coenzima Q)

b) Citocromos
c) Proteínas ferro sulfuradas
 UBIQUINONA
La Ubiquinona también llamada coenzima Q es
una benzoquinona liposoluble que contiene
una larga cadena de isoprenoide. Su función es
transportar electrones y protones en cadenas
de transferencia electrónica asociada a la
membrana. La ubiquinona puede aceptar un
electrón formándose en el radical semiquinona
(*QH) o dos electrones formando ubiquinol
(QH2). Debido a que la ubiquinona es pequeña
e hidrofóbica puede difundirse libremente
dentro de la bicapa lipídica en la membrana
interna mitocondrial puede hacer de lanzadera
de electrones entre otros transportadores
electrónico de la membrana menos moviles
 CITOCROMOS
Los citocromos son proteínas con una intensa absorción de luz
visible debida a la presencia del grupo prostético hemo que
contiene hierro. Las mitocondrias contienen tres clases de
citocromos que se diferencian por su espectro de adsorción de la
luz y se designan como a, b y c.
Los citocromos a y b son proteínas integrales de la membrana
interna mitocondrial y el citocromo c que es una proteína soluble
que se asocia mediante interacciones electrostáticas con la parte Ferroprotoporfirina IX
externa de la membrana mitocondrial Citocromos de tipo b

El hemo a tiene una cola El hemo c esta unido a la

isoprenoide unido a uno de proteína por enlaces
los anillos penta- atómicos Hemo a
Citocromos de tipo a Hemo c tioester con dos residuos
Citocromos de tipo c de Cisteina
 PROTEÍNAS FERROSULFURADAS

Las proteínas ferrosulfuradas no se encuentran en forma de hemo sino en asociación con átomos de
azufre inorgánico o con átomos de azufre de residuos de cisteína de la proteína o con los dos al mismo
tiempo. Estos centros ferrosulfurados (Fe-S) van desde estructuras sencillas con un solo átomo de Fe
coordinado con 4 residuos de Cys hasta centros Fe –S más complejos con 2 o 4 átomos de Fe. Todas las
proteínas ferro-sulfuradas participan en la transferencia de un electrón en las que se oxida o reduce
uno de los átomos de Fe de la agrupación ferro-sulfurada. En la transferencia de electrones
mitocondriales actúan como mínimo ocho proteínas ferrosulfuradas
 TRANSPORTE DE ELECTRONES POR COMPLEJOS ENZIMATICOS
Los electrones fluyen por la cadena
respiratoria a través de cuatro complejos
enzimáticos incrustados en la membrana. El
complejo I NADH-Q oxidorreductasa y el
complejo II succinato a ubiquinona
catalizan la transferencia de electrones a la
ubiquinona a partir de los dadores de NADH
produciéndose el ubquinol (QH2). El
ubiquinol. El complejo III ubiquinona a
citocromo c, transporta electrones desde la
ubiquinona reducida (ubiquinol) hacia el
citocromo c, y el complejo IV citocromo c
al O2, completa la secuencia transfiriendo La transferencia neta de 2 electrones desde el NADH al oxígeno
los electrones desde el citocromo al O2 y molecular a través de la cadena respiratoria
hace que se reduzca a H2O
 COMPLEJO I: NADH UBIQUINONA OXIDORREDUCTASA
El complejo I es una enzima enorme que contiene 43 cadenas
polipeptídicas diferentes, incluyendo una flavoproteína que
contiene FMN y como mínimo seis centros ferro sulfurados. El
complejo cataliza dos procesos simultáneos forzosamente
acoplados: 1) la transferencia exergónica hacia la ubiquinona de
un ion hidruro y un protón de la matriz

2) La transferencia endergónica de cuatro protones de la matriz

hacia el espacio intermembrana. Por lo tanto el complejo I actúa
como una bomba de protones impulsada por la energía de
transferencia. Cataliza una reacción vectorial, mueve los protones
desde la matriz que se carga negativamente a la salida de los
protones hacia la membrana que se carga positivamente
 COMPLEJO II: SUCCINATO A UBIQUINONA
✓ El complejo II, también denominado succinato deshidrogenasa es la
única enzima del ciclo de Krebs ligado a la membrana. Contiene 5 grupos
prostéticos de dos tipos y cuatro subunidades proteicas diferentes. Las
subunidades C y D son proteínas integrales de la membrana, contiene un
grupo hemo b y un sitio de unión para la ubiquinona que es el aceptor
final de electrones. Las subunidades A y B se extienden en la matriz,
contienen tres centros ferro sulfuradas, FAD unido y un sitio de unión
para el sustraoto succinato. La transferencia de electrones ocurres desde
el sitio de unión del succinato y a través de los centros Fe-s hasta el sitio
de unión de Q
✓ El primero paso de la β oxidación de los acil graso CoA, catalizados por la
flavoproteína acil CoA deshidrogenasa implica la transferencia de
electrones desde el sustrato al FAD deshidrogenasa y a continuación a la
flavoproteína transferidora de electrones (ETF) que a su vez pasa sus
electrones a la ubiquinona.
✓ El glicerol 3 fosfato formado a partir de la hidrolisis de los triacilglicerol
como de la reducción de la dihidroxiacetona fosfato en la glucolisis es
oxidado por el glicerol 3 fosfato deshidrogenasa. Esta enzima en una
flavoproteína localizada en la cara externa de la membrana mitocondrial
canaliza electrones hacia la cadena respiratoria reduciendo la
ubiquinona
 COMPLEJO III: UBIQUINONA A CITOCROMO c
El complejo III también llamado complejo citocromo bc1 o
ubiquinona: citocromo c oxidorreductasa acopla la
transferencia de electrones desde el ubiquinol (QH2) al
citocromo c con el transporte vectorial de protones de la
matriz al espacio intermembrana

Es un dímero de dos monómeros idénticos de 11

cadenas polipeptídicas cada uno. Contiene 1 centro
Fe2S2 como ferrosulfoproteína de Rieske (centro
Fe2S2 en el que 2 Cys se sustituyen por dos His), 1
citocromo c1 (que interacciona con el citocromo c) y
dos citocromos b: bK y bT, ambos unidos a la
misma cadena polipeptídica.
 COMPLEJO IV: CITOCROMO c a O2
El complejo IV también llamado citocromos oxidasa, es el último paso
de la cadena respiratoria, transporta electrones desde el citocromo c al
oxígeno molecular, reduciéndose a H2O. El complejo IV es una enzima
muy grande (13 subunidades) de la membrana mitocondrial interna. La
subunidad II mitocondrial contiene dos iones de CuA que forman
complejo con los grupos –SH de dos residuos de Cys en un centro
binuclear. La subunidad I contiene dos grupos hemo, designados α y α3
y otro ion Cuβ. El hemo α3 y el Cuβ forman un segundo centro
binuclear que acepta electrones del hemo α y los transfiere al O2 unido
al hemo α3
La transferencia de electrones a través del complejo IV va del
citocromo c al centro CuA, al hemo α, al centro hemo α3 -Cuβ y
finalmente al O2. Por cuatro electrones que pasan a través del
complejo, la enzima consume cuatro H+ sustrato de la matriz (lado N)
convirtiendo el O2 en H2O. También utiliza la energía de esta reacción
redox para bombear un protón hacia el espacio intermembrana (lado
p) por cada electrón que pasa añadiéndose al potencial electroquímico
producido por el transporte del protón
 SINTESIS DEL ATP
Según el modelo quimiosmótico, la energía
electroquímica inherentes a las
concentraciones de protones y a la
separación de cargas a través de la
membrana mitocondrial interna, la fuerza
motriz impulsa la síntesis del ATP. La
membrana interna mitocondrial es
impermeable a los protones por lo que estos
pueden volver a penetrar a la matriz a través
de canales específicos de protones (Fo ) la
fuerza- protón motriz que impulsa el retorno
de los protones a la matriz, proporciona la
energía para la síntesis de del ATP catalizada
por el complejo F1 asociada con Fo del ATP
sintasa
 SINTESIS DEL ATP
La teoría quimiosmótica describe las
reacciones enzimáticas en las que
interviene simultáneamente, una reacción
química y un proceso de transporte que
tiene lugar en tres procesos:
1) Se oxida el sustrato succinato a
fumarato
2) Se consume O2
3) Se sintetiza ATP. El consumo de oxígeno
y la síntesis de ATP dependen de la
presencia de un sustrato oxidable
(succinato), así como de ADP y Pi
 ATP SINTASA
La ATP sintasa es un complejo enzimático de la
membrana mitocondrial interna, cataliza la
formación del ATP a partir del ADP y Pi
acompañada por el flujo de protones desde la
membrana interna mitocondrial a la matriz. La
ATP sintasa también denominado complejo V
tiene dos componentes distintos F1, una
proteína periférica de la membrana y Fo que es
una proteína integral de la membrana.
En F1 varias subunidades de la proteína forman
una estructura parecida a bola alrededor de un
eje, que se proyecta hacia la matriz y contiene
el mecanismo de fosforilación. F1 está fijo al
complejo de proteína de membrana F0, que
también consta de varias subunidades
proteínicas.
F0 abarca la membrana y forma un canal de
protones. El flujo de estos últimos a través de F0
hace que rote, lo que impulsa la producción de
ATP en el complejo F1
 ATP GENERADA EN LA CADENA RESPIRATORIA

Tabla 2 Rendimiento de ATP en la oxidación completa de la glucosa

Hay una captación directa neta de dos grupos fosfato de alta energía en las reacciones glucolíticas. En el ciclo del
ácido cítrico se captan dos fosfatos de alta energía más por mol de glucosa durante la conversión de succinil CoA en
succinato. Todas estas fosforilaciones sobrevienen en el ámbito de sustrato. Por cada mol de sustrato oxidado
mediante los complejos I, III y IV en la cadena respiratoria (es decir, por medio de NADH), se forman 2.5 mol de ATP
por cada 0.5 mol de O2 consumido; esto es, la proporción P:O = 2.5 . Por otra parte, cuando un mol de sustrato (p.
ej., succinato o 3fosfoglicerato) se oxida por medio de los complejos II, III y IV, sólo se forma 1.5 mol de ATP; es decir,
P:O = 1.5. Estas reacciones se conocen como fosforilación oxidativa en el ámbito de la cadena respiratoria. Al tomar
en cuenta estos valores, se estima que cerca de 90% de los fosfatos de alta energía producidos a partir de la
oxidación completa de 1 mol de glucosa se obtiene mediante fosforilación oxidativa acoplada a la cadena respiratoria
 REGULACIÓN DE FORMACIÓN DE ATP
Las principales rutas catabólicas tienen
mecanismos reguladores engranados y
concertados para la producción de ATP y
precursores biosintéticos. Las
concentraciones relativas de ATP y ADP
controlan no solo la velocidad de
transferencia electrónica y fosforilación
oxidativa sino también las velocidades del
ciclo del ácido cítrico, oxidación del piruvato
y glucolisis.
Cuando se produce un incremento en el
consumo de ATP aumenta la velocidad de
trasferencia electrónica y de fosforilación
oxidativa. Simultáneamente aumenta la
velocidad de oxidación del piruvato a través
del ciclo acido citrico con lo que aumenta el
flujo de electrones hacia la cadena
respiratoria