BIOLOGÍA MOLECULAR Y CITOGENÉTICA

Técnicas de análisis
cromosómico:
diagnóstico
citogenético
prenatal

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 / 1. Introducción y contextualización práctica 3

/ 2. Diagnóstico citogenético prenatal 4

/ 3. Indicaciones clínicas del diagnóstico prenatal 4

/ 4. Tipos de muestras para el diagnóstico prenatal 5

/ 5. Caso práctico 1: “Cultivo de vellosidades coriales” 5

/ 6. Cultivo de vellosidades coriales 5

/ 7. Cultivo de líquido amniótico 6

/ 8. Cultivo celular de sangre fetal 7

/ 9. Métodos de análisis citogenético 7

/ 10. Ventajas y desventajas de las distintas técnicas citogenéticas 8

/ 11. Caso práctico 2: “El informe en citogenética” 9

/ 12. Técnicas invasivas en diagnóstico prenatal 9

/ 13. Resumen y resolución del caso práctico de la unidad 11

/ 14. Bibliografía 11

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 Conocer qué es el diagnóstico prenatal.

Distinguir entre las diferentes muestras para el diagnóstico prenatal, así como
sus ventajas e inconvenientes.

Conocer las utilidades y relevancia clínica del diagnóstico prenatal.

/ 1. Introducción y contextualización práctica

El diagnóstico prenatal se basa precisamente en realizar pruebas diagnósticas a alguien que todavía no ha nacido.
Esto implica una serie de inconvenientes, como el hecho de que no podemos acceder al feto o al embrión sin poner
en peligro su vida. Por suerte, algunos métodos no invasivos como la ecografía nos proporcionan una gran cantidad
de información, pero según el diagnóstico o enfermedad que busquemos, puede quedarse corta. En este aspecto,
la citogenética nos brinda una gran fuente de información, ya que nos
permite conocer cuál será el cariotipo del individuo antes de nacer, no sin
asumir algunos riesgos en la toma de las diferentes muestras requeridas para
realizar el diagnóstico prenatal.

A continuación, vamos a plantear un caso práctico a través del cual podremos

aproximarnos de forma práctica a la teoría de este tema.

Escucha el siguiente audio, donde planteamos la contextualización práctica.

Encontrarás su resolución en el apartado «Resumen y resolución del caso
práctico de la unidad». Fig. 1. Feto en el útero materno

Audio intro. “Diagnóstico citogenético

prenatal”
https://bit.ly/3cI97Pu
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Biología molecular y citogenética /4

/ 2. Diagnóstico citogenético prenatal

Durante el embarazo se realizan diferentes estudios para diagnosticar posibles anomalías en el desarrollo del feto.
El más conocido y empleado es la ecografía, que valora la correcta morfología y perfusión (con ecografía Doppler)
del feto, aunque existen también otros indicadores, como algunos marcadores bioquímicos o antecedentes de
alteraciones genéticas en la familia.

Cuando algunas de estas pruebas nos ofrecen valores alterados (indicativos

de que hay un riesgo importante de alteraciones genéticas en el feto) o
ya tenemos hijos con anomalías genéticas, se realizan pruebas invasivas
con el fin de obtener material suficiente para proceder a un diagnóstico
citogenético. Como ya sabes, se quieren obtener células fetales para estudiar
sus cromosomas en metafase.

Una vez que se detectan alteraciones cromosómicas previas al nacimiento,

podemos hablar de diagnóstico prenatal. En el caso de que se hallen
después, corresponderían al diagnóstico postnatal, temática que no nos
concierne en esta unidad. Fig. 2. Ecografía del 2o trimestre

Audio 1. “Cribado prenatal”

https://bit.ly/2xcwDoW

/ 3. Indicaciones clínicas del diagnóstico prenatal

Sin lugar a dudas, debido a los riesgos que acarrea, el diagnóstico prenatal debe estar debidamente justificado.

Se realizará el diagnóstico citogenético prenatal a las mujeres que cumplan con alguno de estos requisitos:

• Hijo previo con alteraciones cromosómicas documentadas.

• Ecografía con signos de una posible malformación fetal o síndrome cromosómico.

• Test combinado del primer trimestre (ecografía + marcadores bioquímicos) con alto riesgo de
cromosomopatías.

• Edad materna mayor o igual a 40 años.

• Padres portadores de alteraciones

cromosómicas.

Los test de screening que se realizan a embarazadas

son test que indican la probabilidad de padecer una
enfermedad, pero que no la diagnostican. Cuando
en uno de estos test se manifiesta un importante
riesgo de patología genética, se procede a realizar las
pruebas diagnósticas. Fig. 3. Principales indicaciones del estudio citogenético prenatal.
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/ 4. Tipos de muestras para el diagnóstico prenatal

Antes de proceder al estudio citogenético, como es evidente, necesitamos una muestra con células fetales. El
problema reside en que esto requiere de técnicas invasivas y, cuanto más invasiva sea, mayor riesgo habrá de aborto
o de lesiones en el feto. Las diferentes muestras que se pueden tomar son:

• Vellosidades coriales: Se obtiene realizando una biopsia de vellosidades coriales. Permite un diagnóstico más
precoz que otras técnicas.

• Líquido amniótico: Mediante una punción abdominal se extrae líquido amniótico. Cuanto antes se haga,
mayor riesgo habrá de aborto, que está normalmente en torno al 1 %. Existen además otras complicaciones,
como las infecciones.

• Sangre fetal: En esta ocasión, se punciona la vena del cordón umbilical y se extrae sangre de ella. Es la que
mayor riesgo de complicaciones tiene, ya que hasta en un 50 % de los casos se produce una hemorragia
transplacentaria.

Fig. 4. Técnicas para obtener células fetales.

/ 5. Caso práctico 1: “Cultivo de vellosidades coriales”

Planteamiento: tenemos que hacer un diagnóstico prenatal, pero por la
naturaleza del caso, debe ser lo más precoz posible.

Nudo: ¿qué muestra buscaremos para el estudio citogenético prenatal?

Desenlace: para obtener un diagnóstico precoz, tomaremos muestras de las

vellosidades coriales. Estas son las primeras muestras que podemos tomar,
ya que es una estructura que ya está desarrollada a partir de la décima
semana de embarazo, cuando el cordón umbilical y el líquido amniótico aún
no presentan la cantidad o calidad debidos. Fig. 5. Vellosidades coriales.

/ 6. Cultivo de vellosidades coriales

Dentro de las vellosidades coriónicas encontramos diferentes tipos celulares, como fibroblastos, células endoteliales
y macrófagos inmersos en una abundante matriz intercelular. De estas tres células principales, las que más nos
interesan son los fibroblastos, ya que crecen rápidamente in vitro.

El primer paso es disgregar las células que nos interesan mediante el empleo de tripsina/EDTA para eliminar una
capa de células trofoblásticas (células de la placenta); a continuación, emplearemos la enzima colagenasa, que
digerirá la matriz intercelular.
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Biología molecular y citogenética /6

Posteriormente, se mantiene el cultivo adherido al recipiente en cuestión y se cultivan de 5 a 7 días. Una vez
pasado este tiempo, se trata con Colcemid, sustancia que detendrá la mitosis celular.

A continuación, se produce la hinchazón de las células con una solución hipotónica de citrato de sodio y, entonces,
se procesan para su tinción y análisis.

Fig. 6. Útero con feto y placenta a la izquierda y detalle de vellosidades coriales en placenta a la
derecha.

/ 7. Cultivo de líquido amniótico

En primer lugar, es preciso obtener el líquido amniótico, lo cual se realiza mediante el empleo de largas agujas
destinadas a atravesar el útero. Las muestras se mantienen a temperatura ambiente hasta su procesado. Después,
se resuspenden las células invirtiendo suavemente el recipiente.

A continuación, se centrifuga la muestra. Posteriormente, se aspira el sobrenadante y se añade el medio de cultivo, se

resuspenden las células golpeando suavemente el lateral del tubo y se incuban los cultivos de 24 a 48 horas. Una vez
realizado este proceso, se añade nuevamente medio de cultivo precalentado y se incuban 2 días para, transcurrido
este tiempo, cambiar los cultivos a nuevos recipientes y añadir de nuevo medio de cultivo para volver a cultivar.

Al 5o día de incubación, en un microscopio invertido, se valora el crecimiento celular de los cultivos, que ya pueden
presentar actividad mitótica (si no fuera así, se pueden mantener en incubación hasta 9 días). Una vez presentan
actividad mitótica y el crecimiento es el adecuado, se añade Colcemid y, después, una solución hipotónica para su
posterior fijación y tinción.

Mantener la muestra a Centrifugación y aspiración del

Resuspensión celular Resuspensión celular
temperatura ambiente sobrenadante

Adición de medio de cultivo

Incubación 2 días Incubación 24-48 h Resuspensión celular
precalentado

Cambio de recipiente y adición Al 5o día valoración al microscopio Adición de soluición hipotónica

Adición de Colcemid
de nuevo medio de cultivo invertido

Tinción Fijación

Fig. 7. Esquema de cultivo de líquido amniótico

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/ 8. Cultivo celular de sangre fetal

Una vez obtenida la sangre se añade heparina, una sustancia anticoagulante, para que la sangre con la que
trabajemos sea sangre heparinizada. Esta se incorpora a los medios de cultivo, se tapa el tubo y se mezcla bien. Se
incuban a 37 oC de 48 a 96 horas. Después, se añade Metotrexato un día antes de la recolección y se incuban a 37
oC de nuevo. Después, el mismo día de la recolección, se añade timidina y se sigue incubando.

Treinta minutos antes de la recolección se añade Colcemid y se deja

incubando a 37 oC. Se centrifugan los cultivos y se retira el sobrenadante.
Se añade KCl para hinchar las células y se resuspende el cultivo celular, como
hemos visto en apartados anteriores. Se añade el fijador, se mezcla bien y se
centrifuga otra vez.

Posteriormente, se retira el sobrenadante, se añade fijador de nuevo y se

centrifuga una vez más.

Finalmente, el sedimento celular que obtenemos puede llevarse al Fig. 8. Corte transversal de cordón umbilical
portaobjetos. La recolección se llevará a cabo cuando veamos al microscopio donde se aprecian las 2 arterias umbilicales
que el crecimiento del cultivo celular es el adecuado. superiores, y la vena umbilical inferior

/ 9. Métodos de análisis citogenético

Existen diferentes métodos para estudiar los cromosomas. Estos son los más utilizados:

• Tinción: En sus comienzos se teñían simplemente los cromosomas, todos de manera uniforme, lo que solo
permitía ordenarlos por parejas en función de tamaño y morfología. Actualmente, es un método en desuso.

• Bandeo: A partir de 1971 se comienzan a realizar

bandeos, los cuales ya nos permiten diferenciar
distintas bandas, claras y oscuras o fluorescentes
y no fluorescentes, dentro de cada cromosoma.
Las más empleadas en el diagnóstico citogenético
son las bandas G (estudiadas en unidades
anteriores).

• FISH (Fluorescent in situ hybridization): Esta

técnica consiste en marcar una secuencia
de ADN con un fluorocromo (colorante
fluorescente) y adherirla a la región de
ADN que queramos estudiar, que serán
complementarias. Se desnaturaliza primero
el ADN con calor y luego se hibrida con la
secuencia marcada, que se llama sonda.
Después, se observa en un microscopio de
fluorescencia. Fig. 9. SKY-FISH.

Cuando se realiza con diferentes fluorocromos se denomina SKY-FISH, multi-FISH o cariotipo multicolor o espectral,
aunque se emplea solo en investigación.

Recuerda...
La hibridación del ADN consiste en unir sus dos cadenas complementarias;
por su parte, desnaturalizarlo implica separarlas.
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Biología molecular y citogenética /8

Otros métodos también muy empleados en el estudio de los cromosomas son:

• CGH (Comparative Genomic Hybridization): Se realiza una hibridación entre el ADN de una muestra a
estudiar (marcada con un fluorocromo rojo) y el de un individuo sano (marcado con un fluorocromo verde),
uniéndose en proporción 1:1, de tal manera que cada hebra de ADN se une con una hebra complementaria
de un individuo sano; así, los cromosomas o ADN que estén sanos tendrán la misma proporción de verde
que de rojo, dando lugar a un color amarillo homogéneo. Si hay pérdida de material genético de la muestra
aparecerán regiones verdes y, si hay ganancia, rojas.

• CGH array: Es una evolución del CGH donde, en lugar de cromosomas

en metafase, se emplean «chips», que son dispositivos de vidrio,
plástico o silicona que contienen pequeños fragmentos de ADN. El
fundamento sigue siendo el mismo, comparar ADN a estudiar con
ADN control para detectar pérdidas o ganancias de material genético
empleando tinciones fluorescentes.

• SNP array: SNP son las siglas de Single Nucleotide Polymorphism y

supone una variación en una única base nitrogenada. Son chips, como
en el caso anterior, pero en este se busca es detectar estos mínimos
cambios en el genoma. Fig. 10. Chips de ADN

/ 10. Ventajas y desventajas de las distintas técnicas

citogenéticas
Entre las diferentes técnicas de análisis citogenético hay que valorar coste, equipo necesario y precisión.

Habitualmente, las técnicas más económicas y con menor equipo imprescindible son las tinciones. El problema es
que su precisión es muy limitada; de hecho, han sido sustituidas por el bandeo cromosómico. Esta técnica de bandeo
requiere un proceso más complejo que precisa de un mayor entrenamiento del personal, pero ofrece nuevos límites
diagnósticos que superan notablemente los de la tinción convencional.

En el caso de las tinciones fluorescentes, tenemos que emplear material fluorescente y debemos realizar los estudios
en una sala de microscopía de fluorescencia. Esto
incrementa el coste de las técnicas, ya que requiere,
además, de instalaciones específicas, pero genera
nuevas posibilidades diagnósticas, como ocurre con la
CGH.

Finalmente, los dispositivos de microarray para CGH y

SNP son las técnicas más precisas que hemos visto, pero
también son las que más incrementan el precio, aunque
nos permiten identificar alteraciones genéticas mínimas
(el array SNP detectan cambios en un solo nucleótido),
cosa que el cariotipo habitual no consigue, ya que
detecta alteraciones genéticas de millones de pares
de bases. Por supuesto, no hay que olvidar otros datos
como la sensibilidad, especificidad, reproducibilidad de
la técnica, etc. Fig. 11. Hibridación genómica comparativa (CGH)
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/ 11. Caso práctico 2: “El informe en citogenética”

Planteamiento: de cara a transmitir la información obtenida en las diferentes pruebas de laboratorio, necesitamos
elaborar un informe genético para que, tanto el clínico solicitante, como el paciente, puedan recibir de un modo
ordenado y sistemático la información sobre los hallazgos obtenidos en el laboratorio.

Nudo: se ha de elaborar un informe citogenético donde se incluya la información esencial que necesitan tanto el
médico solicitante como el paciente. ¿Cómo se elabora este informe?

Desenlace: antes que nada, deben figurar los datos personales del paciente, así como los datos profesionales
referentes tanto al servicio, cita y petición, como los del médico o médicos implicados en el procedimiento. Al
tratarse de un estudio citogenético, deben indicarse claramente las pruebas y procedimientos realizados junto a su
justificación, así como el tipo de muestra que se ha estudiado y, por supuesto, los resultados obtenidos con todos los
detalles posibles, en sus correspondientes unidades de medida y con las representaciones gráficas necesarias para
facilitar su comprensión. Finalmente, debe figurar la interpretación de los datos obtenidos y un diagnóstico claro, si
lo hubiera, además de la justificación de las técnicas peligrosas realizadas, si fuera el caso.

Informe en citogenética
Datos personales del paciente
Datos referentes al servicio y al médico responsable
Pruebas y procedimientos realizados
Justificación de la prueba realizada

Tipo de muestra estudiada

Resultados obtenidos
Interpretación de los datos y diagnóstico
Imágenes y gráficos

Tabla. 1. Datos del informe en citogenética.

/ 12. Técnicas invasivas en diagnóstico prenatal

Hay diferentes técnicas para obtener material de estudio para el diagnóstico citogenético prenatal. Cada una
presenta unas ventajas y unos inconvenientes; por ello, se emplean en función de cada caso y siempre bajo el criterio
del médico responsable. Las principales técnicas invasivas son:

• Biopsia corial: Se toma una muestra del trofoblasto de dos maneras: por vía transcervical, a través
del cuello del úter; o por vía transabdominal, atravesando el abdomen. Este tipo de técnica permite
realizar estudios citogenéticos, moleculares y bioquímicos.Es la técnica principal para estudiar el
cariotipo fetal antes de la semana 15 de gestación. Nos ofrece un resultado válido en el 99% de las ocasiones,
con un alto grado de precisión. El 1% restante (el que no es fiable) suele deberse a contaminación, fracaso del
cultivo o resultados citogenéticos confusos.

El mayor inconveniente de esta técnica es la posibilidad de pérdida de la gestación, aunque esto ocurre en 1 de
cada 100-150 casos, de manera similar a como sucede en la amniocentesis, pero por ello no es menos segura,
siempre que la lleven a cabo personal experimentado. Otra posible complicación es la infección aguda, pero
esta presenta una probabilidad menor al 0,5%.
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Biología molecular y citogenética / 10

• Amniocentesis: Supone una punción abdominal para llegar a la cavidad uterina y extraer líquido amniótico.
Hay que distinguir entre dos tipos de amniocentesis: la precoz, que se realiza entre las semanas 11 y 14,
también conocida como la del primer trimestre; y la clásica, que se practica a partir de la semana 15 o del
segundo trimestre.

Su precisión a la hora del diagnóstico prenatal está por encima del 99%, siendo además raros los fracasos del
cultivo celular. En cuanto a los riesgos, la pérdida fetal se ha estimado habitualmente en un 1%, pero estos
datos se obtienen antes de contar con la ecografía de alta resolución. Actualmente, se considera que tiene
un riesgo similar al de la biopsia corial.

Evidentemente, es posible producir lesiones en el feto con la aguja, pero solo se conocen algunos casos
descritos donde esto haya tenido lugar (aunque sí se ha comprobado su relación con un pequeño aumento en
las complicaciones del tercer trimestre de embarazo).

Fig. 12. Amniocentesis.

Otra técnica invasiva en el diagnóstico prenatal es la cordocentesis. Consiste en obtener sangre fetal a partir del
cordón umbilical. Es la técnica invasiva más difícil. De hecho, en algunos casos es imposible; por ejemplo, cuando el
feto tapa la zona de inserción de la placenta. En caso de no poder realizar esta técnica, se puede puncionar la vena
umbilical en su tramo por el interior del hígado o puncionar directamente el ventrículo derecho, pero presentan
mayor riesgo de pérdida fetal.

Muchas de las enfermedades que se diagnostican con cordocentesis ya pueden hacerse también por amniocentesis
o biopsia corial, gracias a los avances en las técnicas de biología molecular. Además, un inconveniente importante es
que no podemos obtener sangre fetal antes de la semana 18. Sin embargo,
es una técnica imprescindible para completar el estudio del feto cuando se
trata de enfermedades hematológicas. La cordocentesis es importante para
el estudio del cariotipo fetal cuando la sospecha de cromosomopatía aparece
tarde, por ser una técnica que ahorra tiempo frente a las demás, o resuelve
dudas en diagnósticos generados mediante las otras técnicas.

Si el operador es experto, la pérdida fetal se encuentra entre el 1 y el 3%,

valores similares al resto de técnicas. Sí es muy común que se produzca una
hemorragia, aunque es rara la muerte por esta causa. Una complicación
frecuente es la bradicardia (frecuencia cardíaca por debajo de los valores
normales) y otra rara, pero grave, es la trombosis del vaso que ha puncionado. Fig. 13. Cordocentesis.

Sabías que...
El estudio citogenético prenatal debemos tomar muestras de vellosidades
coriales, del líquido amniótico o de la vena del cordón umbilical.
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/ 13. Resumen y resolución del caso práctico de la unidad

El diagnóstico prenatal consiste en detectar anomalías fetales antes del nacimiento, empleando ecografía,
marcadores bioquímicos y citogenéticos. Generalmente, estas técnicas se desarrollan cuando hay antecedentes
de enfermedades genéticas en la familia, cribados prenatales con alto riesgo de cromosomopatías o indicios de
malformaciones en el feto.

Las muestras que se van a manejar son la vellosidad corial (obtenida por biopsia corial), el líquido amniótico
(obtenido por amniocentesis) y la sangre fetal (obtenida por cordocentesis). Cada una de estas muestras tiene un
protocolo de procesamiento y cultivo diferente. Una vez se cultivan los tejidos, contamos con diferentes técnicas
para su análisis: tinción, bandeo, FISH, CGH y arrays de CGH y SNP.

Fig. 14. Esquema resumen del tema.

Resolución del caso práctico de la unidad

Se solicita el diagnóstico citogenético prenatal ante la sospecha de que el feto pueda tener una alteración cromosómica
importante, teniendo en cuenta que, además, la familia tiene antecedentes de enfermedad cromosómica grave, por
ello, se solicita la prueba para descartar que el feto haya heredado dicha anomalía.

Ante una gestante en la semana 14 de embarazo, la técnica de elección es la biopsia corial. Si por el motivo que fuere
decidimos sustituir esta técnica por otra, podemos realizar una amniocentesis precoz o una cordocentesis, aunque,
por regla general, la cordocentesis será la última elección, por acarrear mayor dificultad y riesgo.

/ 14. Bibliografía
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