INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

Centro de Estudios Científicos y Tecnológicos No. 15

“Diódoro Antúnez Echegaray”
Academia de Biología

Unidad de Aprendizaje. Biología Celular Semestre: 3ro

Unidad 1 Métodos de estudio de la célula
Práctica No. 2 Microscopìa. Tinción simple Fecha:
Nombre: Grupo: Equipo:

Calificación:

Competencia a alcanzar.
Emplea métodos y técnicas citológicas para caracterizar las células de los seres vivos, como
fundamento para resolver problemas del medio.

Introducción
Para estudiar una célula o una asociación celular es necesario el uso de los microscopios
ya sean fotónicos o electrónicos, además se debe tomar en cuenta que hay dificultades en
la manipulación de los especímenes y el inicio de los procesos de desarreglo molecular
(autólisis) y celular que suelen presentarse después que las células y los tejidos abandonan
su hábitat natural. Por lo que utilizar una serie de procedimientos que nos permitan
comprender, describir y analizar la estructura microscópica de las células, tejidos y órganos,
es imprescindible.

La teoría química de la coloración explica que el proceso se debe a la union de las moléculas
del colorante con los elementos constituyentes del tejido, es decir a la estructura cellular.
“El principio base de la teoría consiste en que ciertas regions celulares tienen pH alcalino y
se tiñen con los colorants básicos, por ejemplo el núcleo; debido a esto los colorantes se
clasifican en ácidos, básicos, anfóteros y neutros.” (Gonzalo Gaviño De la Torre, 1977),
revisa en la tabla algunos ejemplos de colorantes básicos y ácidos.

Colorantes básicos Colorantes ácidos

 Azul de metileno  Eosina alcóholica
 Hematoxilina  Fucsina ácida
 Safranina  Ïndico –carmín
 Violeta de genciana  Rojo congo
 Verde metilo  Sudán III

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 Técnicas de coloración o tinción.

La coloración vital permite poner de relieve detalles estructurales sin matar al organismo al
acumularse en determinadas zonas de la célula.
La observación de las estructuras celulares es difícil porque las células son muy pequeñas
y son transparentes a la luz visible, de ahí que se utilicen colorantes para visualizarlas y
destacar sus componentes.
Las técnicas de coloración pueden ser: vitales y supravitales.

Vitales
• El colorante no provoca la muerte celular, se utiliza para teñir
material vivo: azul de metileno, rojo congo, rojo neutro, verde
B de Janus.
Supravitales
• Se aplican los colorantes una vez que el material está fijado:
Giemsa, hematoxilina férrica, lugol, Sudan III, verde metilo.

Cuando el colorante se aplica directamente al tejido o material que se desea colorear refiere
a una tinción simple, esto es, cuando se agrega un solo colorante a la muestra biológica,
que por lo general es básico, por ejemplo, el azul de metileno, el rojo neutro o el verde
jano, estos se utilizan para incrementar el contraste; todas las células absorben el colorante
y se tiñen del mismo color. Se añade el colorante, se deja el tiempo necesario para que se
absorba, se retira el exceso de colorante y la preparación ya está lista para ser observada.

La tinción simple se aplica en la elaboración de preparaciones microscópicas temporales,

que sólo se observan en periodo de tiempo corto y por lo general son de material fresco,
como epidermis de cebolla, muestra de pulque, muestra de agua de estanque, epidermis
de lirio, epidermis de jitomate, muestra de moho, muestra de papa, entre otros; con esta
tinción, el material se observa con sus características vitales.

La coloración en vivo se puede hacer de dos maneras:

• Por difusión: en el espacio entre portaobjetos y cubreobjetos de una preparación en fresco,

se pone una gota de colorante que penetra en la muestra por capilaridad.

• Mezclando una gota de colorante en el material que ha de ser examinado en el portaobjetos

y se coloca en el cubreobjetos.

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 En la imagen se muestra la aplicación del colorante de violeta de genciana a la
muestra de estudio.

Ahora iniciarás el trabajo práctico al elaborar la técnica de tinción simple al elaborar varias
preparaciones de muestras biológicas, así como la técnica micróscopica al hacer la
observación microscópica de éstas al observer a través del microscopio, siguiendo el
manejo adecuado de éste.

Es importante que leas con atención cada uno de los pasos en: la técnica de preparación
del material biológico, la técnica de tinción y la observación microscópica, para que al
realizarlos obtengas mejores resultados en los aprendizajes esperados.

Competencia a alcanzar.
Emplea métodos y técnicas citológicas para caracterizar las células de los seres vivos, como
fundamento para resolver problemas del medio.

Equipo:

1 Microscopios compuestos

Materiales
Reactivos
Alumnos Laboratorio
- Hojas de tulipán, de gladiolo, 6 portaobjetos
en general hojas de plantas 6 cubreobjetos Azul de metileno
monocotiledóneas 1 gotero Rojo neutro
(lirio). 1 puente de tinción Verde de metilo
- Mucosa bucal hombre (se 2 agujas de disección acético
toma la muestra en el 1 caja de Petri Glicerina
laboratorio) 1 pinzas de disección Agua
- Cebolla 1 bisturí o navaja
- 2 abatelenguas

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 Descripción de actividades

I. Epidermis de la hoja de lirio

 Técnica de preparación
Coloca agua en la caja de Petri a tres cuartas partes, has una incisión transversal con la
punta del bisturí o navaja de 0.5 cm de longitud, en el tercio superior de la hoja. Con las
pinzas de disección tira de uno de los bordes del corte en sentido longitudinal de la hoja. Se
desprenderá fácilmente una membrana, es la epidermis, se lleva a la caja con agua y
posteriormente se monta la preparación en el portaobjetos, colocando enseguida el
cubreobjetos.

Has otra preparaciones de lirio agregando esta vez azul de metileno y/o rojo neutro.

Observación microscópica

Utiliza primero el objetivo seco débil con el fin de centrar la preparación y determinar la zona
objeto de studio, después cambia a seco fuerte.
Las células de la epidermis de la hoja son alargadas e incoloras, tienen núcleos visibles.
Las estomas están formadas por células simétricas arriñonadas, éstas son únicas de la
epidermis que contienen granos de clorofila. Entre las dos células se percibe un orificio de
forma oval, denominado ostiolo.

La forma de las células epidérmicas y la forma de las estomas está sujeta a variaciones
dependiendo del tipo de hoja, y más directamente de la especie.

Registro de resultados y observaciones

Elabora esquemas anotando los nombres de las estructuras celulares que identificaste.

Observación de: Epidermis de lirio

Objetivo: 10X Aumento total: _____
Descripción de la muestra:

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 Observación de: Epidermis de lirio
Objetivo: 40X Aumento total: _____
Descripción de la muestra:

II. Células epiteliales de la mucosa bucal.

 Técnica de preparación

Raspa suavemente con un extremo del abatelenguas la cara interna del carrillo (mejilla).
Coloca el raspado obtenido sobre una gota de agua en un portaobjetos. Realiza
suavemente una extensión frotando con la aguja de disección sobre el portaobjetos.

 Técnica de tinción

Agrega una gota de azul de metileno sobre frotis. Deja actuar el colorante durante dos
minutos. Cubre con el cubreobjetos y quita el exceso de líquido con tiritas de papel filtro.
 Observación al microscopio

Utiliza primero el objetivo seco débil con el fin de centrar la preparación y determinar la
zona objeto de estudio, debe evitarse enfocar zonas poco o muy teñidas y las
aglomeraciones celulares, posteriormente enfocar las células aisladas con aumento seco
fuerte.

La preparación nos muestra una visión parecida a un mosaico formado por células planas,
poligonales, abundan las células aisladas, en cuyas caras se perciben los trazos de
inserción de unas células con otras. El material observado procede de la capa superficial,
de descamación del epitelio pluriestratificado de la mucosa bucal. En su mayoría son
células muertas o células que están en periodo de degeneración.

El azul de metileno tiñe intensamente el núcleo, y con menos color el citoplasma, que
presenta un cierto aspecto de alteración y suele ser algo granuloso.

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Registro de resultados y observaciones

Elabora esquemas anotando los nombres de las estructuras celulares que identificaste.

Observación de: Epitelio bucal

Objetivo: 10X Aumento total: _____
Descripción de la muestra:

Observación de: Epitelio bucal

Objetivo: 40X Aumento total: _____
Descripción de la muestra:

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III. Células de la epidermis de cebolla.

 Técnica de preparación

Retira las hojas exteriores secas. Corta la cebolla en cuatro gajos, separar una capa y
desprender la tenue membrana que está adherida por la cara interna cóncava, llevar la
epidermis interna de las hojas del bulbo de la cebolla a la caja de Petri con agua; si el trozo
desprendido fuese muy grande, mayor de 3 o 4 cm 2, debe cortarse con las tijeras finas,
dentro del agua en porciones muy pequeñas y se monta como se indica en la figura.

 Técnica de tinción

1. Una vez montada la epidermis en el portaobjetos, verter una gota de verde de metilo acético
y dejar actuar el colorante-fijador durante cinco minutos. No debe secarse la epidermis por
falta de colorante o por evaporación del mismo.
2. Con el gotero bañar la epidermis con agua abundante hasta que no suelte colorante.
3. Llevar el portaobjetos sobre la caja de Petri y agregar una gota de glicerina.
4. Se coloca el cubreobjetos.

 Observación al microscopio

Se utilizará primero el objetivo seco débil (10X) con el fin de centrar la preparación y
determinar la zona objeto de estudio. Después cambiar a seco fuerte.

Las células de la epidermis de las hojas internas del bulbo de cebolla, son alargadas y
grandes. La pared celular se destaca muy claramente teñida. Los núcleos son grandes, en
el interior de los mismos se pueden percibir granulaciones, son los nucléolos. El citoplasma
tiene aspecto claro, en él se distinguen algunas vacuolas grandes débilmente coloreadas.

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Registro de resultados y observaciones

Elabora esquemas anotando los nombres de las estructuras celulares que identificaste.

Observación de: Epidermis de

cebolla
Objetivo: 10X Aumento total: _____
Descripción de la muestra:

Observación de: Epidermis de

cebolla
Objetivo: 40X Aumento total: _____
Descripción de la muestra:

Análisis de resultados

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 Cuestionario

1) ¿Qué es una técnica de tinción?

2) ¿Cuándo se utiliza una coloración vital?

3) Un colorante ácido, ¿tiñe los núcleos de las células? _______, argumenta tu respuesta.

4) ¿Qué tipo de colorantes tiñen al citoplasma de una célula?

5) ¿Qué estructuras identificaste de las preparaciones que observaste?

Conclusiones

Referencias documentales y referencias electrónicas

• Manual de Prácticas de Microscopia, Biología I. ENOSA. Madrid. 1973.

• Gaviño, Juárez y Figueroa, 2010, Técnicas Biológicas, Ed. Limusa.
• https://www.ecured.cu/Anexo:Colorantes_artificiales_b%C3%A1sicos
• https://www.ecured.cu/Anexo:Colorantes_artificiales_%C3%A1cidos

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