Medios de Cultivo - Microbiología

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Medios de Cultivo
Los microorganismos deben
debe contar en su medio ambiente con todas las
sustancias químicas necesarias
arias para generar energía y material celular, y
las condiciones físicas óptimas para crecer: pH adecuado, temperatura
óptima y presencia o ausencia de O2.
Fuera de su hábitat, los microorganismos pueden crecer en medios
artificiales.

MEDIO DE CULTIVO: e ess toda preparación artificial, sólida,

semisólida o líquida que suministra al microorganismo las
sustancias fundamentales, una fuente de energía y condiciones
ambientales adecuadas para la síntesis y mantenimiento de su
protoplasma

CULTIVO: Son las poblaciones de microorganismos que se

obtienen en los medios de cultivo.

PUROS O AXÉNICOS:
AXÉNICOS Cuando
uando la población está constituida
c
Los por una única clase de microorganismos.
cultivos
pueden MIXTOS: Cuando
uando la población está constituida por más de
ser
una clase de microorganismos.

Clasificación de los microorganismos según la fuente de energía que utilizan

Energía luminosa que se convierte
convierte en energía química.
LUZ Los microorganismos que utilizan esta fuente de
energía se denominan fotótrofos.
A partir de compuestos químicos inorgánicos u
Reacciones de
oxido-reducción orgánicos. Los microorganismos que utilizan esta
fuente de energía se denominan
denom quimiótrofos.
quimiótrofos
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Diferentes
iferentes rutas por las cuales los microorganismos generan energía
Fotosíntesis
Respiración Cadena de transporte de e-e con aceptor final de
aerobia electrones: O2
Respiración
Aceptores finales de electrones: NO3-, SO4=, CO2, fumarato
anaerobia
Conjunto de reacciones donde compuestos orgánicos
Fermentación sirven como donadores y aceptoraceptores
es de electrones. Se
produce ATP por fosforilación a nivel de sustrato

Clasificación de los microorganismos según la fuente de carbono que utilizan

Los microorganismos que utilizan esta fuente de carbono se
CO2
denominan autótrofos.
Compuestos Azúcares, aminoácidos, ácidos grasos, etc). Los
orgánicos microorganismos que utilizan estas fuentes de carbono se
carbonados denominan heterótrofos.

De la combinación de estas categorías surge la siguiente clasificación:

Fuente de
Fuente de energía Categoría Ejemplos
carbono
Algas
Bacterias rojas
Luz CO2 Fotoautótrofos
y verdes
Cianobacterias
Bacterias rojas
Luz acetato Fotoheterótrofos
y verdes
Reacciones de
Bacterias
óxido-reducción CO2 Quimioautotrofos
Archae
entre comp. inorgánicos
Reacciones de Hongos
óxido-reducción Azúcares Quimioheterotrofos Protozoos
entre comp. orgánicos Bacterias

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REQUERIMIENTOS DE LOS MICROORGANISMOS

- CO2 para autótrofos,
- Azúcares para heterótrofos.
Los azúcares se consideran fuente de carbono y energía por
excelencia en los quimioorganotrofos. Los más comunes son:
Hexosas: Glucosa, fructosa y galactosa;
Fuente Pentosas: arabinosa, xilosa, ramnosa;
de Disacáridos: lactosa, sacarosa, maltosa;
carbono Polisacáridos: almidón, glucógeno;
Alcoholes: glicerol, sorbitol, manitol;
Glucósidos: salicina, esculina.
Otros compuestos carbonados orgánicos para heter heterótrofos
pueden ser, en ausencia de un azúcar: aminoácidos, ácidos grasos,
ácidos orgánicos, compuestos aromáticos
Muchos organismos son autótrofos respecto de la fuente de
nitrógeno y pueden crecer utilizando moléculas sencillas como
Fuente NO3-, NH3 ó N2. El nitrógeno es metabolizado para proveer
de N proteínas, ácidos nucleicos y polímeros de pared. Otros
microorganismos pueden incorporar nitrógeno en forma de
aminoácidos, bases púricas o pirimídicas.
Se suelen agregar fosfatos de sodio o potasio que también
Macro- confieren poder buffer al medio de cultivo (pH cercano a 7). Esto es
elementos importante para mantener el desarrollo del microorganismo, ya
(g/l) Fuente que si el medio se acidifica en las primeras horas de cultivo, el
ELEMENTOS de crecimiento se detiene.
fósforo: En algunos
algunos medios de cultivo el aporte de P es realizado por los
ENERGÉTICOS Y glicerofosfolípidos de la yema de huevo. El fósforo se incorpora a
CONSTITUTIVOS ácidos nucleicos, fosfolípidos, polímeros de membrana, ATP, y
sustancias de reserva (gránulos de volutina) dentro de la célula.
Fuente Se adiciona como SO42-, tiosulfato o sulfuro. En la célula se
de incorpora a aminoácidos (cisteína y metionina) y diferentes
azufre: coenzimas.
Estos
stos cationes se adicionan como sales inorgánicas. Estabilizan
macromoléculas aniónicas y actúan como cofactores de enzimas.
Fuente
Mg2+ es estabilizador de ribosomas, membranas celulares y ácidos
de Ca,
nucleicos y puede integrarse a clorofila en organismos
Mg y K:
fotosintéticos. Ca2+ estabiliza la pared bacteriana y abunda en las
dipicol
esporas como dipicolinato de calcio.
sodio contribuiría a equilibrar la presión osmótica del medio
Fuente
extracelular. Es un catión requerido por bacterias halofílicas. Se
de Na
suele suministrar como NaCl.
Fuente Se aporta como FeSO4 o FeCl3. Forma parte de ci citocromos,
de Fe: catalasa, proteínas Fe/S y flavoproteínas implicadas en la función
respiratoria.
Son metales que se requieren en muy pequeñas cantidades. Participan en la
estructura de las enzimas, vitaminas, transportadores de electroelectrones como
citocromos. Son contaminantes de los macroelementos y se incorporan
Micro-
junto a ellos en los medios de cultivo. Pueden ser:
elementos o
- Frecuentemente esenciales: Cr, Co, Cu, Mn, Mo, Ni, Se, W, V, Zn
trazas
- Inhibidores del crecimiento:
crecimiento: Au, Ag, Cd, Cr, Pb, y cualquier
croelemento a concentración mayor que 10-4 M puede resultar tóxico
microelemento
para el desarrollo de los microorganismos
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Son compuestos orgánicos requeridos en muy bajas concentraciones y que

no pueden ser sintetizados por la célula. Por est esta razón, deben ser
agregados al medio de cultivo.
Ejemplos de factores de crecimiento :
Factores de
 vitaminas, como las del complejo B
crecimiento  algunos aminoácidos
 purinas y pirimidinas
Otros factores de crecimiento que requiere la bacteria Haemophilus
influenzae, patógena humana, son el factor V (NAD) y el factor X (hemina)
contenidos en los glóbulos rojos de la sangre.
Representa el 80-90%
90% del peso total de una célula y es fundamental para la realización de
todos los procesos metabólicos, funciones enzimáticas, solvataciónsolvatación de materiales
orgánicos e inorgánicos, y donación de electrones para organismos fotosintéticos.
AGUA
Los medios de cultivo se preparan en el laboratorio con agua destilada lo que estandariza
su composición y asegura la ausencia de iones como Ca2+ y Mg2+ Mg2+ que pueden precipitar
con fosfatos o generar reacciones indeseables
Es un polisacárido ácido derivado de algas marinas, formado
principalmente por galactosa con un grupo sulfato cada 10 a 50 restos. Se
usa sin problemas en medios de cultivo porque las bacterias NO lo digieren.
Se agrega al: - 1.5-2%2% en medios de consistencia sólida normal,
- 0.2-0.3% en medios semisólidos o blandos,
andos,
- 5% en medios de consistencia muy firme para detener el
crecimiento de gérmenes muy móviles
- 0% cuando se preparan medios líquidos (caldos).
aracterísticas:
Características:
- Funde a 80-100°C
80 y permanece líquido hasta 50-55°C.
55°C.
Agar - A 45-55°C55°C se pueden agregar suspensiones de células sin afectar la
(El más viabilidad (supervivencia) de las mismas.
usado) - Permanece sólido a 37°C, temperatura de incubación de la mayoría de
las bacterias patógenas del hombre.
- No es tóxico para las bacterias, ni es degradado por éstas.
AGENTES - Utilizado al 1.5-2%,
1.5 permite el aislamiento de colonias (poblaciones de
SOLIDIFICAN-
TES microorganismos derivadas de una única célula), lo que resulta
Su agregado imposible en medios líquidos
al medio de - Es transparente, lo que facilita la visualización
visualización de las colonias.
cultivo es - Al solidificar, forma una trama suficientemente abierta para permitir la
opcional. difusión de los nutrientes del medio de cultivo en todas direcciones, y
suficientemente cerrada –segúnsegún la concentración empleada-
empleada para
lo microorganismos.
impedir la movilidad de los
Es agar muy transparente libre de sulfatos. Se usa intensamente para fines
Agarosa
específicos en Inmunología y Biología Molecular.
Silicagel: Es silicato diluido en HCl. Se prefiere para el cultivo de autotrofos, donde
debe excluirse
excluir materia orgánica del medio de cultivo.
Ess una proteína obtenida por hidrólisis del colágeno. Fue el primer
solidificante usado en Microbiología, pero es degradado por la mayoría de
Gelatina: las bacterias (lo comen, por lo que el medio inicialmente s sólido termina
convertido en medio líquido) y la temperatura de incubación no puede ser
mayor a 22°C (es el punto de fusión) con lo que cultivos sólidos a
temperaturas más altas resultan inviables.
Albúmina A 80°C estas proteínas coagulan y solidifican el medio de cultivo. Se han
Lowestein Jensen para el cultivo de Mycobacterium
de huevo, usado en el medio de Lowestein-Jensen
suero tuberculosis.
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Condiciones físicas de un medio de cultivo

Aún cuando las condiciones químicas del medio de cultivo estén cubiertas, el
crecimiento
ento y desarrollo de los microorganismos dependerá también de las siguientes
condiciones físicas:
Cada especie tiene su temperatura óptima de crecimiento.
* mesófilos: 35-37°C
TEMPERATURA
* psicrófilos: 15-20°C
* termófilos: 50-60°C
PRESIÓN La mayoría
ayoría de las bacterias crece en 0.1 a 1% NaCl.. Las halófilas
OSMÓTICA requieren concentraciones superiores.
egún sus requerimientos de O2 las bacterias se clasifican en
Según
a) aerobios estrictos:: requieren oxígeno para
iración aerobia.
crecer. Realizan respiración
b) anaerobios obligados:: el O2 les resulta
tóxico. Crecen en medios muy reducidos (sin
O2). Metabolismo fermentativo o respiración
anaerobia.
c) anaerobios facultativos:: pueden crecer tanto
PRESENCIA en condiciones aerobias (metabolismo
DE OXÍGENO atorio) como en condiciones anaerobias
respiratorio)
(metabolismo fermentativo y respiración
anaerobia).
d) microaerófilos:: necesitan bajas tensiones de
O2 y una atm enriquecida en CO2. Pueden
realizar respiración aerobia.
e) anaerobios aerotolerantes:
aerotolerantes crecen en
ausencia de O2 (metabolismo fermentativo) y si
son expuestos al O2 no mueren.
Todas
odas las bacterias necesitan un ambiente mucho más húmedo para
su desarrollo que los hongos. En condiciones ambientales adversas,
HUMEDAD algunas especies producen estructuras de resistencia a la
desecación llamadas esporas que permanecen viables durante un
tiempo prolongado hasta que el ambiente sea propicio para la
germinación. Producen esporas los géneros Clostridium y Bacillus.
LUZ Importante para los microorganismos fot fotosintéticos.
osintéticos.
La mayoría de las bacterias crece en medios neutros o levemente
7.6). Existen excepciones: son los lactobacilos (pH 5,
alcalinos (7–7.6).
PH
acidófilos), Vibrio cholerae (pH 8.6). Los hongos crecen a pH menor
que 7.

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Clasificación de los medios de cultivo

A) QUÍMICAMENTE DEFINIDOS O SINTÉTICOS
Su composición química es rigurosamente constante y se conoce con exactitud
exactitud, cada
componente es de alta pureza analítica y realiza un aporte específico.
Ej.: Medio de cultivo D para fotótrofo
fotótrofos:
CO2 …………………fuente de C KH2PO4 …………fuente de P y K
NaNO3 …………fuente de N Trazas ……………varias
Na2SO4 ………fuente
fuente de S y Na H2O …………………indispensable
indispensable para toda función celular

B) NATURALES O COMPLEJOS:
Su fórmula química exacta no es completamente conocida.
co Se preparan a partir de
sustancias naturales de origen animal o vegetal de composición química no
constante:: leche, suero, macerado de maíz, peptonas, extractos de
rigurosamente constante
carne, levadura. Cada una de ellas realiza varios aportes simultáneame
simultáneamente. Son aptos
para ell cultivo de quimioorganotrofos. Ej:
Agar nutritivo Agar Sabouraud glucosa
Para bacterias quimioorganotrofas Para hongos y levaduras
Peptona de carne . 0.5 g Peptona de carne ………… 5 g
Extracto de carne .. 0.3 g Peptona de caseína ……… 5 g
Nacl ……………… 0.5 g Glucosa ……………………. 20 g
Agar ………………… 1.5 – 2 Agar ……………………… 17 g
Agua destilada ……. 100 ml Ph 5.6

Algunos conglomerados nutritivos utilizados son los siguientes:

Por su
origen: 1) Las peptonas: Son on productos de la hidrólisis ácidácidaa o enzimática de proteínas d
de
origen animal o vegetal (Peptona
(Peptona de carne, peptona de soja, peptona de caseína).
Estos pueden ser de longitud variable, desde aminoácidos, hasta dipéptidos,
tripéptidos, y polipéptidos.
-La hidrólisis ácida puede ser realizada
realiza con HCl ó H2SO4 y presenta desventajas como:
- El triptofano se destruye
- Se pierde el 10% de vitaminas presentes
- Desaparecen casi completamente los polipéptidos
Se prefiere la hidrólisis enzimática de, que e emplea diferentes proteasas, E
Ej. Papaína a
ph 6.5, tripsina a ph 8.5, pepsina a ph 2, y no destruye vitaminas y aminoácidos.
Las peptonas de origen vegetal pueden aportar carbohidratos fermentables.

2) Los extractos
-extracto de carne: Ess complemento vitamínico de las peptonas. También aporta:
 Sustancias nitrogenadas: aminoácidos, bases púricas y pirimídicas, ácidos
orgánicos, creatina, xantina, hipoxantina, ácido úrico, urea,
 Sustancias
ustancias no nitrogenadas: glucógeno, fosfatos de hexosas, ácido láctico,
sales inorgánicas.
-extracto de levadura: se obtiene
ene por autólisis o plasmólisis de las célula
células de levadura.
Es suplemento vitamínico de las peptonas, y aporta mezclas de aminoácidos y
péptidos, y carbohidratos.
-extracto de malta: es un sustituto
sustituto del extracto de levadura ya que posee adecuado
contenido de vitaminas, carbohidratos y aminoácidos. Es el extracto soluble en agua de
la malta de cebada

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Líquidos (no contienen solidificante y no permiten el aislamiento de colonias)

Ej. : caldo nutritivo, cuya fórmula incluye:
Peptona de carne rne (fuente de N, C y energía, ya que no hay hidratos de carbono
Por su que puedan cumplir esa función).
función) Extracto
xtracto de carne (complemento vitamínico)
vitamínico).
consistencia osmótica) Agua destilada
NaCl (equilibra presión osmótica).
Semisólidos o blandos:
blandos incluye agar al 0.3%
Sólidos (incluyen
yen agar en concentraciones de 1.5 a 2%)

Comunes:: incluyen una fórmula nutritiva básica que permite el crecimiento de

microorganismos poco exigentes.
Ej.: Agar
gar nutritivo (ver fórmula anterior)
Por su Enriquecidos:: mejoran su calidad nutritiva
nutritiva por el agregado de componentes muy ricos
composición como leche, sangre, huevo, líquido ascítico, extracto proteico de cianobacterias. Se
utilizan en el cultivo de bacterias exigentes.
Ej.: Agar sangre Agar nutritivo (ver fórmula anterior)
an + sangre de carnero al 5%

enriquecimiento son medios líquidos que sembrados con poblaciones

Medios de enriquecimiento:
mixtas de microorganismos, favorecen la multiplicación de ciertos grupos e inhiben el
desarrollo de las especies restantes. Incluyenncluyen compuestos químicos específicos
(antibióticos, colorantes) o requieren
requiere ciertas condiciones físicas (temperatura, pH) pH
Medios selectivos:: son medios sólidos que de manera parecida a los anteriores,
permiten el desarrollo dede ciertos microorganismos e impiden el desarrollo de otros. La
selectividad se logra alterando las condiciones físicas del medio de cultivo o agregando
compuestos químicos inhibidores.
Cómo se puede lograr la selectividad en un medio de cultivo?
cultivo
- Cambiando el pH:: para favorecer el desarrollo de Lactobacillus, un género implicado
en la producción de yogur, se puede agregar ácido acético a los medios de cultivo para
obtener un pH final de 5.4, que es inadecuado para muchas bacterias acompañantes.
- Altas concentraciones
oncentraciones osmóticas: en agar manitol salado con una con concentración de
NaCl 7.5%, solo las ba acterias que presenten una elevada tolerancia a NaCl pueden
crecer, como Staphylococcus aureus.
- Agregando
gregando antisépticos
antisépticos: Verde brillante, cristal violeta y eosina se utilizan para inhibir
Por su gérmenes Gram positivos mientras los Gram negativos desarrollan sin dificultad. Las
función sales biliares se usan con el mismo propósito. Esto ocurre en el caldo Mac Conkey que
sólo permite el desarrollo de coliformes.
col
- Agregando
gregando antibióticos:
antibióticos En Clínica, se usan antibióticos de espectro de acción
reducido que inhiben o destruyen microorganismos cuyo estudio no interesa, a la vez
que no afectan a los que se están investigando. Ej.: agar OGY (agar oxitetraciclina
oxitetraciclina-
extracto de levadura) donde sólo crecen hongos ya que las bacterias son
glucosa-extracto
sensibles a oxitetraciclina y no desarrollan.
Medios diferenciales: Para discriminar entre diferentes tipos de bac bacterias basándose
en características metabólicas particulares de cada uno.
Existen medios diferenciales donde se pueden detectar varias características
cas distintas. La clave es incluir en la fórmula del medio de cultivo:
metabólicas
- el sustrato adecuado para la característica metabólica que se desea estudiar, y
- un sistema indicador que refleje por variación de color u otro fenómeno perceptible,
los cambios que hayan tenido lugar.
Medios de transporte:
transporte se usan cuando transcurre cierto tiempo entre la toma de
muestra y su procesamiento. Incluye compuestos
compuestos que aseguran la supervivencia de las
células hasta que sean sembradas en un medio de cultivo adecuado.Ej. medio de Stuart
.

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BIBLIOGRAFÍA
 1) Madigan, Martincko. 2009. Brock, Biología
de los microorganismos. 12°. Edición.
Pearson-Prentice Hall.
 2) Teoría
ría del TP de Laboratorio “Medios de
Cultivo”, cátedra de microbiología general,
Universidad Nacional de San Luis

Más Resúmenes en:

https://www.udocz.com/profile/gen.n

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