BIOLOGÍA MOLECULAR

D. en C. Carolina N. Reséndiz Nava

 Tres dominios de la vida

✓ 3 dominios de la vida
Carl Woese, 1990

✓ Basados en secuencia de
genes ribosomales
ARN ribosomal

✓ Ancestro común

Schematic universal tree updated from (Woese et al., 1990)

Forterre, Front Microbiol. 2015
Tres dominios de la vida
Bacteria vs. Eucaria

FUNCIONES DE LOS ORGANELOS

EN LA CÉLULA EUCARIOTA
 ¿Qué es la Biología Molecular?

✓ Disciplina científica que tiene como objetivo el estudio de los procesos que se
desarrollan en los seres vivos desde un punto de vista molecular.

✓ Dentro del Proyecto Genoma Humano puede encontrarse la siguiente definición sobre
la Biología Molecular: El estudio de la estructura, función y composición de las
moléculas biológicamente importantes.

✓ Interacciones de los diferentes sistemas de la célula, lo que incluye relaciones de ADN

con el ARN, la síntesis de proteínas, el metabolismo, y el cómo todas esas
interacciones son reguladas para conseguir un correcto funcionamiento de la célula.
 Dogma Central de la Biología Molecular

• En 1958, Crick propuso la existencia de la replicación del ADN

• Síntesis de proteínas debe existir una molécula mediadora entre las
proteínas y el ADN
• Propuso el dogma central de la biología molecular:

“El ADN dirige su propia replicación y su trascripción para

formar ARN complementario a su secuencia; el ARN es
traducido en aminoácidos para formar una proteína”.

www.genome.gov/genetics-glossary/Central-Dogma
Dogma Central de la Biología Molecular

www.genome.gov/genetics-glossary/Central-Dogma
 Dogma Central de la Biología Molecular

*
Priones
*
El dogma central de la biología molecular es una teoría que postula que la
información genética fluye en una sola dirección, del ADN al ARN y de este a la
proteína, o del ARN directamente a la proteína
De los genes a las funciones

Molecular Biology, Alberts, 5th edition.

¿En dónde se llevan a cabo estos procesos?

Exón = Codifica

Intrón = No codifica
¿En dónde se llevan a cabo estos procesos?

Producción de proteínas (1 – 3)

Replicación DNA (4)

Intrón = No codifica

Exón = Codifica
La replicación se lleva a
cabo en el Núcleo celular
 El núcleo es parte fundamental en la célula

El núcleo alberga el material genético de la

célula, el ADN, y es también el lugar donde se
producen los ribosomas, las máquinas celulares
que sintetizan proteínas.

• Almacén de información genética

• Centro de control celular

Funciones
Mantener la integridad de genoma: en 23 pares
de cromosomas
Replicación ADN
Producir ARN mensajero

Molecular Biology, Alberts, 5th edition;

https://es.khanacademy.org/science/biology/structure-of-a-cell/
El núcleo es la estructura que contiene los ácidos nucleicos

El ADN eucariota nunca deja el

núcleo, sino que se transcribe (copia)
en moléculas de ARN que pueden
salir de él.

Nucleolo:
Estructura esférica que se encuentra
en el núcleo de la célula cuya función
principal es producir y ensamblar los
ribosomas
Los ribosomas de bacterias se
ensamblan en el citosol.
Intrón = No codifica
Exón = Codifica
Molecular Biology, Alberts, 5th edition.
Estructura de ácidos nucleicos

Una función
importante de los
ácidos nucleicos
implica el
almacenamiento y
la expresión de
información
genómica.
 Estructura de ácidos nucleicos

A excepción de
algunos virus, ARN
es monocatenario

Tipos de ARN
ARNm
ARNt
ARNr

Proporción
A–T
C–G
A partir de una célula, se forma un organismo completo

¿Cómo se logra?

✓ Replicación del ADN

✓ División celular
 Estructura ADN

A) Estructura nucleótido
B) Los nucleótidos dentro de cada cadena
están unidos por un enlace fuerte
(covalente)
C) Polimerización. Molécula de ADN
consiste en dos hebras complementarias.
D) Los enlaces con la hebra
complementaria son débiles (puentes de
hidrógeno)
E) Las dos hebras se giran para formar
doble hélices

Molecular Biology, Alberts, 5th edition.

1. Replicación: se lleva a cabo en el núcleo

Proceso mediante el cual se copia

(duplica) el ADN: division celular
✓ Semi-conservativa
✓Antiparalela y complementaria
✓ Semi-continua
Tres aspectos fundamentales en la replicación del ADN

✓ Semi-conservativa:
cadena original
+
cadena nueva
Tres aspectos fundamentales en la replicación del ADN

✓ Antiparalela y
complementaria:
Dos secuencias de ADN
son complementarias cuando
sus bases pueden
emparejarse y unirse entre sí
de forma antiparalela,
formando una hélice
 Tres aspectos fundamentales en la replicación del ADN

✓ Semi-continua:
Enzima polimerasa:
dirección 5´ - 3´
• Cadena continua
• Cadena discontinua

Las ADN polimerasas pueden agregar nucleótidos libres solo al extremo 3 ' de la cadena de ADN en formación.
Esto provoca que el alargamiento de la cadena en formación se realice en la dirección 5'-3 '.
La replicación del ADN se lleva a cabo en el núcleo

1. Helicasa: rompe los

puentes de hidrógeno
2. Topoisomerasas:
reducir la tensión
Single Stranded
Binding Protein (super-coiling)
3. SSBP: evita la unión
Helicasa

Topoisomerasa
 La replicación del ADN se lleva a cabo en el núcleo

5’
3’
3’ 5’

5’ 3’
5’

3’

4. Primasa: síntesis de cadenas iniciadores

5. ADN polimerasa: agrega nucleótidos a la cadena libre solo al extremo
3 ' de la cadena de ADN en formación. Esto provoca que el alargamiento
de la cadena en formación se realice en la dirección 5´- 3´
VIDEO
La replicación del ADN se lleva a cabo en el núcleo
Técnica de PCR es una replicación in vitro
Técnica de PCR es una replicación in vitro
 Técnica de PCR es una replicación in vitro

PCR:
- Rápido
- Específico
- Altamente sensible
- Caracterización genética
Técnica de PCR es una replicación in vitro

uL Samples Master Mix

10X Buffer 1.7 10 17
10mM dNTP 0.34 3.4
Primer F 0.68 6.8
Primer R 0.68 6.8
Taq Dream 0.085 0.85
DNA (5 ng/ul) 2
H2O 11.515 115.15
Total 17 150
Técnica de PCR es una replicación in vitro
 Técnica PCR

Extracción
DNA PCR
 Variantes de la técnica PCR

1. PCR convencional 2. PCR múltiple (multiplex PCR)

Electroforesis (+ / -)
3 genes

iroN (553 pb)

hlyF (450 pb)
iutA (300 pb)

+
2 genes

ompT (496 pb)

iss (323 pb)

✓ Ventajas
 Variantes de la técnica PCR

3. PCR anidada
 Variantes de la técnica PCR
4. PCR cuantitativa (qPCR)
PCR en tiempo real

3.1 Curva de amplificación en tiempo real

 Variantes de la técnica PCR
4. PCR cuantitativa (qPCR)
PCR en tiempo real

3.2 Curva estándar de cuantificación

(cuantificación absoluta)

Límite de detección:
2.45X10-6 - 1.79X10-3 ng DNA/μL
 Variantes de la técnica PCR
4. PCR cuantitativa (qPCR)
PCR en tiempo real

3.3 Curva de disociación (melting)

ACTIVIDAD # 1

ARTÍCULO PCR
 Expresión génica

Gen: unidad de DNA que contiene la información para sintetizar

cadena polipéptidos o RNA funcional ( )

• La expresión génica es el proceso por el cual la información

codificada por un gen se usa para producir moléculas de ARN
que codifican para proteínas o para producir moléculas de ARN
no codificantes que cumplen otras funciones.

✓ Cambia en tejidos y condiciones

✓ Productos de ARN y proteínas de muchos genes sirven para
regular la expresión de otros genes.
Transcripción: se lleva a cabo en el núcleo

Es el primer paso de
la expresión génica.
Proceso en el que la
secuencia de ADN
de un gen se
transcribe (copia)
para formar una
molécula de ARN

ARN polimerasa es
la principal enzima
de la transcripción
Transcripción: ARN polimerasa

ARN polimerasa acción: 5´→ 3´

Nucleósido = unión covalente entre una

base nitrogenada con una pentosa

Ribonucleosido trifosfatado (rNTP)

Liberación de un pirofosfato
 Transcripción: se lleva a cabo en el núcleo

1. Iniciación: ARN polimerasa + promotor + factores de

transcripción
2. Elongación: ARN polimerasa (A, C, G, U)
3. Terminación: depende de secuencias en el ARN que
señalan el fin de la transcripción.
Transcripción: principales componentes
 2. Transcripción

1. Iniciación: RNA polimerasa (RNA POL) reconoce

y se une a una secuencia de DNA cadena doble
conocida como PROMOTOR.
- Se unen factores de transcripción
TF II – A, C, D, E, F, H
- RNA POL abre la cadena de DNA = burbuja de
transcripción.
- RNA POL cataliza la unión de los rNTPs
- Termina cuando los dos primeros ribonucleótidos
de RNA se unen por enlaces fosfodiéster

2. Elongación: RNA POL avanza 3´→ 5´ en la

cadena molde

3. Terminación: RNA POL libera al transcrito

primario y se disocia de la cadena molde de DNA
 2. Transcripción:
procesamiento de transcritos primarios

Metilguanilato = Capuchón (5’)

Poly A = Poly A polimerasa (3´)

RNA Splicing

RNA procesado sale al citoplasma → Traducción

Transcripción: Splicing alternativo