Galeria API 20E

Sistemas de identificación multipruebas (API
20 E)
Galeria API 20E

(Sistemas de identificación multipruebas)
La batería de pruebas API20E es un sistema de identificación rápida para bacterias

de la familia Enterobacteriaceae y otras bacterias Gram -. Básicamente consta de 21
tests bioquímicos estandarizados y miniaturizados, y una base de datos. Este
sistema presenta las ventajas de ser rápido, eficaz y de permitir realizar numerosas
pruebas a la vez. Cada tira de API 20E contiene 20 microtubos o pocillos con
distintos sustratos deshidratados. Cada tubo es una prueba bioquímica distinta. La
prueba número 21, la oxidasa, se hace de forma independiente a la tira.

Las pruebas de que consta la galeria son las siguientes:
Reacción / Enzimas
Prueba
ONPG Beta-galactosidasa
ADH Arginina deshidrolasa
LDC Lisina descarboxilasa
ODC Ornitina descarboxilasa
CIT Utilización del citrato
H2S Producción de H 2 S
URE Ureasa
TDA Triptófano desaminasa
IND Producción de indol
Producción de acetoína (Voges-
VP
Proskauer)
GEL Gelatinasa
GLU Fermentación/oxidación de glucosa
MAN Fermentación/oxidación de manitol
INO Fermentación/oxidación de inositol
SOR Fermentación/oxidación de sorbitol
RHA Fermentación/oxidación de ramnosa
SAC Fermentación/oxidación de sacarosa
MEL Fermentación/oxidación de melobiosa
AMY Fermentación/oxidación de amigdalina
ARA Fermentación/oxidación de arabinosa
OX Citocromo oxidasa

A patir de una colonia bien aislada del microorganismo, hacer una suspensión en 5
mL de solución salina (1% de NaCl) o 5 mL de agua estéril.
Llenar con la suspensión de bacterias los tubos, no la cúpula (cada pocillo tiene un
tubo y una cúpula, parte aerobia), de todos los pocillos.
Llenar la cúpula de los pocillos CIT , VP, GEL con la suspensión de bacterias.

Cubrir con parafina las cúpulas de los pocillos ADH, LDC, ODC, URE, H 2S para
obtener anaerobiosis.
Poner la tira en su propia cámara húmeda de incubación. Previamente poner agua en

los alvéolos de la cámara para proporcionar una atmósfera húmeda durante la
incubación.

Incubar a 37 °C durante 18-24 h.
Tras la incubación se anotan los resultados inmediatos, es decir, los que no

requieren ser revelados.
Determinadas pruebas requieren ser reveladas, para el revelado se tienen que tener
en cuenta dos criterios:
 Si la glucosa da negativo y los tests positivos son dos o menos de dos, no hay que añadir
reactivos. Cuando ésto ocurre se hacen otros tipos de API como el API 20NE, API OF, el
API M o el API 10S para ver determinados metabolismos especiales.
 Si la glucosa es positiva y/o tres o más tests son positivos se revelan los test que requieren
reactivos:
TDA
Añadir una gota de FeCl3 10 %.
VP
Añadir una gota del reactivo 1 (KOH al 40%) y una gota del reactivo 2 (C2

IND
Añadir una gota de reactivo de Kovacs o de Dimetilamino-cinamaldehido.
Oxidasa
Añadir una gota del reactivo (tetrafenilendiamina) recién preparado.
Interpretación
La lectura de los resultados se lleva a cabo por comparación de los colores de cada
pocillo con los de las tablas de lectura, y anotando el resultado como positivo o
negativo (más adelante se explicará con detalle).
Reacción / Enzimas Negativo Positivo

Prueba
ONPG Beta-galactosidasa sin color amarillo
ADH Arginina deshidrolasa amarillo rojo o naranja
LDC Lisina descarboxilasa amarillo rojo o naranja
ODC Ornitina descarboxilasa amarillo rojo o naranja
azul oscuro o
CIT Utilización del citrato verde
turquesa
sin precipitado
H2S Producción de H 2 S precipitado negro
negro
URE Ureasa amarillo rojo o naranja
TDA Triptófano desaminasa amarillo marrón-rojo
color rosa o anillo
IND Producción de indol amarillo
rosa-rojo
Producción de acetoína (Voges-
VP sin color rosa-rojo
Proskauer)
difusión de
GEL Gelatinasa sin difusión
pigmento
Fermentación/oxidación de
GLU azul o verde amarillo
glucosa
MAN azul o verde amarillo
manitol
INO azul o verde amarillo
inositol
SOR azul o verde amarillo
sorbitol
RHA azul o verde amarillo
ramnosa
SAC azul o verde amarillo
sacarosa
MEL azul o verde amarillo
melobiosa
AMY azul o verde amarillo
amigdalina
ARA azul o verde amarillo
arabinosa
OX Citocromo oxidasa

Del conjunto de reacciones y resultados se obtiene un perfil numérico de 7 cifras.

Los pocillos están separados en grupos de tres: en total tenemos 7 grupos de tres
tubos o tripletes (el test número 21 corresponde al test de la oxidasa).
Para obtener el perfil númerico de 7 cifras, a cada pocillo se le dará el valor 0, 1, 2 ó

4, de acuerdo a los siguientes criterios:
 Si la reacción es negativa se pone 0.
 Si la reacción es positiva se pone: 1 si es el primer pocillo de un triplete, 2 si es el segundo,

4 si es el tercero.
 Se suman los valores de cada triplete, con las sumas de los siete tripletes se obtiene un
código de 7 cifras.
Con este código se busca en la tabla de identificación la especie de que se trata,

para realizar esta operación hay programas informáticos.
Perfiles numéricos.

0104140 Shigella flexneri

0104452 Salmonella paratyphi A
0104504 Pasteurella multocida
0104521 Yersinia enterocolitica
0140004 Pasteurella multocida
0144042 Shigella boydii
0206042 Acinetobacter calcoaceticus
0210004 Achromobacter sp.
0210004 Alcaligenes faecalis
0210004 Alcaligenes sp.
0314000 Proteus mirabilis
0504512 Salmonella paratyphi A
0676001 Proteus vulgaris
0776000 Proteus mirabilis
1000004 Pasteurella sp.
1014743 Klebsiella ozaenae
1104112 Shigella sonnei
1214012 Yersinia pseudotuberculosis
1214773 Klebsiella pneumoniae
2206004 Pseudomonas aeruginosa
2504752 Salmonella spp.
3005573 Enterobacter cloacae
3246527 Aeromonas hydrophilia
4004550 Salmonella cholerasuis
4004550 Salmonella typhi
4104100 Salmonella gallinarun
4357106 Vibrio parahemolyticus
4404112 Salmonella gallinarum
4404540 Salmonella tiphy
4504010 Salmonella pullorum
5004024 Pseudomonas cepacea
5044124 Vibrio cholerae
5046753 Serratia odorifera
5100100 Yersinia ruckeri
5104111 Hafnia alvei
5104542 Salmonella arizonae
5144572 Escherichia coli
5207323 Serratia rubidae
5255573 Klebsiella oxytoca
5346761 Serratia marcescens
5314173 Enterobacter gergoviae
5317761 Serratia marcescens
6004540 Salmonella typhi
6144204 Plesiomonas shigelloides
6704532 Salmonella spp
6704752 Salmonella gallinarum
7244126 Aeromonas hydrophila
7305773 Enterobacter cloacae

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La batería de pruebas API20E es un sistema de identificación rápida para bacterias

Las pruebas de que consta la galeria son las siguientes:

Poner la tira en su propia cámara húmeda de incubación. Previamente poner agua en

Incubar a 37 °C durante 18-24 h.

Tras la incubación se anotan los resultados inmediatos, es decir, los que no

Añadir una gota de FeCl3 10 %.

Añadir una gota de reactivo de Kovacs o de Dimetilamino-cinamaldehido.

Añadir una gota del reactivo (tetrafenilendiamina) recién preparado.

Reacción / Enzimas Negativo Positivo

Del conjunto de reacciones y resultados se obtiene un perfil numérico de 7 cifras.

Para obtener el perfil númerico de 7 cifras, a cada pocillo se le dará el valor 0, 1, 2 ó

 Si la reacción es negativa se pone 0.

 Si la reacción es positiva se pone: 1 si es el primer pocillo de un triplete, 2 si es el segundo,

Con este código se busca en la tabla de identificación la especie de que se trata,

0104140 Shigella flexneri

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