Frotis y Tinciones

El Frotis y sus tinciones
Merle Arévalo
MSc Microbiología
extensión de una muestra de fluido
corporal (humano o animal) sobre
un portaobjetos para su análisis
Spread culture in thin clínico
film over side
flood slide
with stain; rinse and dry
Dry in air
MÉTODO
100X • Realizar capa muy fina sobre un
portaobjetos.
slide oil • Fijar al aire con calor o algún líquido especial
• Teñir y generalmente se protege con un
place drop of oil on slide; cubreobjetos
examine with 100X objective • Estudio clínico mediante un microscopio
Pass slide through flame to fix

Tipos de frotis
Se clasifican en función del material biológico estudiado:
• Aspirados
• Cultivos
• Exudados
• Sangre
• Secreciones
• etc.
Morfología y agrupación de bacterias
• Uso de las tinciones: con el fin de caracterizar a las bacterias.
• Formas: Espiroquetas Cocos Bacilos
• Tinte: compuesto orgánico que le da contraste a la célula.
• cromógeno (solvente orgánico que provee las propiedades de color)
• auxócromo (grupo químico que se ioniza con el cromógeno y forma
sales que se pegan a las fibras y tejidos).
• La adhesión del tinte va a depender de la carga que posea
Tinte Carga Descripción Ejemplo
La porción del cromógeno azul de metileno
Básicos Catiónica + tiene carga positiva cristal Violeta
y poseen gran afinidad carbol fucsina
por los compuestos
celulares negativos. Son
los más utilizados debido
a que las bacterias tienen
una superficie con carga
negativa
La porción del cromógeno Safranina, Verde Rápido
Acídicos Aniónica - es negativa y tiene gran FCF, Naranja G y el Azul
afinidad por los de Anilina.
componentes celulares
positivos. Las sales de
sodio potasio calcio o
amoníaco de ácidos con
color son ionizados para
producir cromógeno con
carga negativa
Tipos de Tinciones
Simple Diferencial Específica
•• Tamaño, arreglo Separar y clasificar los Para identificar estructuras:

y forma microorganismos Ejemplos: Tinción
Un solo tinte observados de acuerdo a sus de flagelos, cápsulas y
• Directa características esporas
Tiñe bacteria
• Negativa Más de un tinte
tiñe el fondo pero no a la
Bacteria Ejemplos:
Ejemplo: azul de metileno Tinción Gram y Ácido
resistente
Tinciones en microbiología
• Una tinción o coloración Técnica auxiliar utilizada en microscopía para mejorar el
contraste en la imagen vista al microscopio.
Los colorantes y tinturas son sustancias que usualmente se utilizan en biología y medicina para
resaltar, aumentar la definición resaltar estructuras o poblaciones celulares en tejidos
biológicos para ser observados con ≠ MX.
• En bioquímica:
Agregar un colorante específico (selectiva de ADN, proteínas, lípidos, carbohidratos, etc.) a un
sustrato para cualificar o cuantificar la presencia de un determinado compuesto.
• Diferentes tipos de tinciones biológicas son utilizadas también para marcar

células en citometría de flujo y para marcar proteínas ó ácidos nucleicos en
electroforesis en gel.
Clases de tinciones
• In vivo vital 1:5.000 a 1:50.000
• In vitro supravital combinación de varios colorantes Protocolos específicos de fijación y de
preparación de muestras.
• depende del tipo de análisis planeado
• Fijación: modificación de las propiedades fisicoquímicas de las proteínas que forman una célula o
tejido y que tiene por finalidad preservar las formas de las células o tejidos tanto como sea
posible.
*Calor para matar, adherir y alterar un espécimen de modo que acepte la tinción.
*Fijador químico. Enlaces cruzados entre proteínas, o entre proteínas y otras sustancias presentes en la muestra,
> su resistencia mecánica. Formaldehído, etanol, metanol, y/o el ácido pícrico.
*Inclusión: parafina o algún polímero, proceso conocido como , para incrementar su resistencia y estabilidad,
fácil corte en rodajas extremadamente delgadas (+ definición).
• Permeabilización surfactante suave: disolver la membrana celular para permitir que las grandes
moléculas de colorante puedan acceder a las estructuras del interior de las células.
• Montaje Portaobjetos Micrótomo
Clases de tinciones
• Tinción directa
Cuando el colorante interacciona directamente con el sustrato, sin otro
tratamiento previo.
• Tinción indirecta
Cuando usan un mordiente. Ácido tánico
19/08/2020/12:19
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?
Gram + (Bacillus cereus)󠄕 Gram – (E. coli)
Tinción de Gram con Control de Calidad

Cubrir frotis con tinte cristal violeta (1 minuto).
2. Enjuague con agua destilada para remover el exceso de tinte.
3. Cubrir frotis con lugol (1 minuto).
4. Enjuague con agua destilada.
5. Enjuague la laminilla con alcohol etílico 95% (no exceder los 30 seg).
6. Enjuague la laminilla con agua destilada.
7. Cubrir frotis con tinte safranina (1 minuto).
8. Enjuague con agua destilada para remover el exceso de tinte.
9. Secar laminas para remover el exceso de agua
GRAM POSITIVAS GRAM NEGATIVAS
FIJACION
CRISTAL VIOLETA
LUGOL
DECOLORACION
CONTRASTE
Hematoxilina Eosina
H&S
Papanicolau policromática
Gram Tinción de Ziehl- Neelsen
• López-Jácome Luis Esaú y cols. Las tinciones básicas en el laboratorio de microbiología. Revista Investigación
en Discapacidad Vol. 3, Num.1 Enero-marzo 2014 pp 10-18. Disponible en
https://www.researchgate.net/publication/281102865_Las_tinciones_basicas_en_el_laboratorio_de_micro
biologia
• Larone DH. Medical important fungi. A guide to identifica-tion. 5th ed. USA: American Society for
Microbiology; 2011
• Prescott LM. Microbiology. 5th ed. USA: McGraw-Hill;2002
• Koneman E. Diagnóstico microbiológico. 6a ed. MéxicoDF: Editorial Médica Panamericana S.A.; 2006.21.
Forbes BA, Sahm D, Weissfeld A.
• Bailey & Scott.Diagnóstico microbiológico. 12a ed. Editorial Médica Panamericana S.A.; 2009.
• Thomas R. Neu, Bertram Manz, Frank Volke, James J. Dynes, Adam P. Hitchcock, John R. Lawrence, Advanced
imaging techniques for assessment of structure, composition and function in biofilm systems, FEMS
Microbiology Ecology, Volume 72, Issue 1, April 2010, Pages 1–21, https://doi.org/10.1111/j.1574-
6941.2010.00837.x

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