INFORME DE PRÁCTICA DE LABORATORIO

CIENCIAS DE LA VIDA Y DE LA
DEPARTAMENTO: CARRERA: ☐ Ing. Agropecuaria ⊠ Ing. Biotecnología
AGRICULTURA
ASIGNATURA: Genética NIVEL: Cuarto (4) FECHA: 21/12/2022

DOCENTE: Dra. Thelvia Ramos PRÁCTICA N°: 1 CALIFICACIÓN:

Estudio de los cromosomas humanos en células en interfase: Cromatina Sexual

Sigcho Lala Mateo Nicolás & Tapia Carpio Lorena Alejandra

RESUMEN

La práctica realizada con el objetivo de estudiar los cromosomas humanos en células en interfase mediante
observación en microscopio óptico y previa preparación de muestra bucal femenina por extensión y tinción en
portaobjetos identificó 61 células epiteliales, donde por visualización con el objetivo de 100X se encontró
pequeños corpúsculos condensados (cromosoma X inactivado) ubicados en la superficie interna de la membrana
nuclear, los cuales se contabilizaron y relacionaron con la fórmula para obtención del número de cromosomas X.

Palabras Claves: Corpúsculos o Cuerpos de Barr, inactivación, cromosoma X

1. INTRODUCCIÓN:
A partir de experimentación en animales, los investigadores Barr y Bertran observaron diferencias en los núcleos de
las células de tejido nervioso en la década de los 40´s (1949); determinaron que las gatas normales poseían en su
membrana interna del núcleo de una célula en interfase un corpúsculo condensado diferente al nucleolo, mismo que
no se encontraba en los gatos; a esta presencia de un cromosoma X en el sexo femenino se le describió como una
masa de cromatina condensada y se la denominó corpúsculo de Barr. Gracias a microscopios de alta resolución se
reveló, en recientes investigaciones, que los extremos del corpúsculo de Barr están en estrecha proximidad
formando un anillo. El estudio de estas estructuras se emplea para determinar el número de cromosomas X que
tiene una célula y/o tejido, para lo cual se realiza un raspado de la mucosa bucal obteniendo las células epiteliales
que, mediante coloración, pueden observarse bajo el microscopio óptico. La fórmula para contabilizar el número de
cuerpos de Barr se determina mediante: No° Cuerpos de Barr=n-1, donde n representa el número de cromosomas X
presentes en una célula, para realizar este estudio se necesita una muestra obtenida por rapado de la mucosa bucal
que, posteriormente se tiñe con colorantes básicos para luego observar mediante microscopio óptico; En una mujer
se observa un cuerpo de Barr, mientras que, los hombres no deben tener presentes estas estructuras al presentar
solo un cromosoma X; para el diagnóstico de sexo se contabiliza 100 células y, si aproximadamente el 40% de las
células presenta los corpúsculos se diagnostica sexo femenino.
En 1966 Mary Lyon sugirió que el corpúsculo de Barr representaba un cromosoma X inactivado, esta hipótesis
presentó una prueba directa cuando los citólogos identificaron las estructuras como un cromosoma X inactivado en
mujeres normales, otras pruebas genéticas apoyaron la hipótesis al notar que las hembras heterocigóticas para un
determinado locus del X muestran un patrón peculiar de expresión fenotípica. La hipótesis de Lyon se ha
demostrado con muchos loci ligados al X, indicando que en cada célula solo se encuentra activo uno de los dos
cromosomas X. Los corpúsculos de Barr se observan en el núcleo de las células como una masa de
heterocromatina sexual teñidos más intensamente y ubicada en la superficie interna de la membrana nuclear en
forma convexa.

Código de documento: DCVA-INF-V2-2022-007 Rev. UPDI: 2022-may-17

Código de proceso: FRM.16.3
 INFORME DE PRÁCTICA DE LABORATORIO

Figura 1. Observación del cuerpo de Barr en una célula somática de mujer.

Obtenido de: https://n9.cl/4l8w3
En décadas pasadas su utilidad de identificación se centró en los casos donde el sexo de un individuo estaba en
duda, debido a la presencia de genitales ambiguos en el nacimiento. Actualmente existen otros estudios de mayor
confiabilidad para este tipo de casos como el cariotipo. Para el recuento de estos cuerpos a microscopio no solo se
debe considerar el número presente, también se debe poner interés en la morfología y el tamaño del corpúsculo; las
formas que debe presentar pueden ser redondeados, triangulares, trapezoidales, barra, etc pero siempre fijados a
la membrana nuclear; su atención en cuanto al tamaño, si son demasiado pequeños o demasiado grandes, se debe
a casos asociados con una deleción o isocromosoma del X (confirmado por un estudio del cariotipo).

2. OBJETIVO(S):
● Describir los alcances o metas de la práctica o experimento.
● Identificar los Corpúsculo o cuerpo Barr: Cromosomas X, de acuerdo a los pasos de la guía de laboratorio.
● Comprender los cuerpos de Barr y cómo influyen en la determinación del sexo y del cariotipo.
● Observar como es la forma de un Corpusculo de Barr dentro de un núcleo de célula epitelial.

3. DESCRIPCIÓN DEL PROCEDIMIENTO:

4.1 MUESTRA:
● Raspado de la mucosa bucal humana
4.2 PROCEDIMIENTO:
1) Preparación de la muestra
Para comenzar la preparación de la muestra se comprobó que los instrumentos estén perfectamente
limpios y esterilizados, en el caso del cubreobjetos y portaobjetos se lavó con una mezcla de alcohol etílico
y ácido acético al 45%, luego se extrajo la muestra de células epiteliales del interior de la mucosa oral
mediante raspado suavemente-moderado realizado por el estudiante no propietario de la muestra hacia el
propietario en la parte interna de la mejilla mediante un depresor de metal (espátula), una vez recolectada
la muestra se depositó en el portaobjetos realizando un frotis o extensión, este proceso de obtención y
frotis se realizó 3 veces para asegurarnos que la fijación de las células fué verídica; posteriormente se
etiquetó el portaobjetos con el sexo del propietario de la muestra y sus iniciales (XX, LT) y se dejó secar por
unos minutos al aire.Luego se procedió a agregar una gota de ácido clorhídrico (HCl) la cual se esparció
por toda la superficie de la extensión de muestra en el portaobjetos, se dejó reposar por 20 min y se
absorbió el resto del ácido mediante una toalla de papel

Código de documento: DCVA-INF-V2-2022-007 Rev. UPDI: 2022-may-17

Código de proceso: FRM.16.3
 INFORME DE PRÁCTICA DE LABORATORIO

Figura 2. A. Reactivo empleado en la preparación de la muestra de mucosa bucal humana. B. Proceso de

preparación de la muestra al añadir una gota del ácido clorhídrico en la superficie. S. Mateo (2022)

Figura 3. Proceso de secado del exceso de HCl mediante papel de filtro de la muestra. T. Lorena (2022).

Una vez seca la preparación se agregó dos gotas de acertoceina y, de igual forma, se esparció por toda la
muestra. Por último se inclinó el portaobjetos y se dejó caer dos a tres gotas de ácido acético en toda la
preparación, se enjuago con agua destilada toda la superficie y, de manera inmediata, se colocó los
cubreobjetos para evitar la formación de amalgamas, se esperó aproximadamente 15 minutos para que se
seque la muestra y el exceso se apoyó con papel filtro (para culminar de secar).

Figura 4. Culminación de la preparación de la muestra; portaobjetos listo para visualización a microscopio.

T. Lorena (2022).

2) Identificación de células epiteliales y cuerpos de Barr.

Una vez obtenida la muestra se llevó el portaobjetos al microscopio óptico y se observó a 10X para enfocar
la muestra, prontamente se llevó al objetivo de 40X donde se buscó y localizó una colonia de células
epiteliales.

Código de documento: DCVA-INF-V2-2022-007 Rev. UPDI: 2022-may-17

Código de proceso: FRM.16.3
 INFORME DE PRÁCTICA DE LABORATORIO

Figura 5. Visualización de células epiteliales de la muestra bucal preparada mediante el objetivo de 40X. S.
Mateo (2022).

En consecuencia se aumentó el objetivo a 100X, en primer lugar no se empleó aceite de inmersión hasta
ubicar posibles cuerpos de Barr, estas estructuras se identificaron considerando que solamente se
encuentran situadas periféricamente y pegado a la cara interna de membrana nuclear. Por último se contó
sólo los núcleos con membrana nuclear completa y cuya cromatina distribuida cuente o no con los cuerpos
de Barr, para luego sacar su porcentaje observados en la muestra, para ello se consideró la fórmula:
# 𝑑𝑒 𝑐𝑢𝑒𝑟𝑝𝑜𝑠 𝑑𝑒 𝑏𝑎𝑟𝑟 = # 𝑑𝑒 𝑐𝑟𝑜𝑚𝑜𝑠𝑜𝑚𝑎𝑠 𝑋 − 1 y se relaciono mediante cálculos con regla de
tres los porcentajes de células y Cuerpos de Barr recolectados.

Figura 6. Observación y localización de Cuerpos de Barr en la muestra preparada mediante objetivo de

100X y aceite de inmersión.

4. ANÁLISIS DE RESULTADOS:
Cuando se lleva a cabo toda la tinción respectiva es importante dejar secar un poco la muestra, pues asi estará lista
para ser observada bajo el microscopio.

Código de documento: DCVA-INF-V2-2022-007 Rev. UPDI: 2022-may-17

Código de proceso: FRM.16.3
 INFORME DE PRÁCTICA DE LABORATORIO

Figura 2. muestra de células epiteliales de mujer, pasada por proceso de tinción. S Mateo (2022).

En el proceso de observación se realizaron 6 tomas de fotografía ,en las cuales se encontraron cuerpos de Barr y
otras solo para contabilizar células y seguir explorando.

Figura 3.
Conteo celular de células epiteliales. T Lorena (2022)

Código de documento: DCVA-INF-V2-2022-007 Rev. UPDI: 2022-may-17

Código de proceso: FRM.16.3
 INFORME DE PRÁCTICA DE LABORATORIO

Figura 4. Conteo celular y hallazgo de cuerpo de Bar en célula 17. S Mateo (2022)

Figura 5. Conteo en un cúmulo de Células a 40x. T Lorena (2022)

se sigue contando las células para posteriormente reconocer y recalcar los cuerpos de Barr con las fotografías ya
mencionadas.

Figura 6 y 7. Reconocimiento y conteo de células a 100x. T Lorena (2022)

Se han encontrado 61 células visibles o ligeramente visibles, y se descartaron las imágenes desenfocadas o con
células en un cúmulo donde son difíciles de diferenciar, para luego identificar y contar los cuerpos de Barr.

Código de documento: DCVA-INF-V2-2022-007 Rev. UPDI: 2022-may-17

Código de proceso: FRM.16.3
 INFORME DE PRÁCTICA DE LABORATORIO

Figura 8. Cuerpos de Barr identificados en células 2 y 6. S Mateo (2022)

La figura 4 muestra un ejemplar de célula con cuerpo de Barr muy notorio en comparación con las demás células
encontradas en las que se encontró el corpúsculo, la figura 5 al ser una imagen tomada con el objetivo de 40x , no
se aprecia corpúsculos de Barr.

En la figura 6 se puede observar 2 corpúsculos de Barr en las células 41 y 48.

Figura 9. Cuerpos de Barr en las células 41 y 49. T Lorena (2022)

En la figura 7 se pudo encontrar 4 cuerpos de Barr 2 ligeramente visibles y 2 visibles.

Código de documento: DCVA-INF-V2-2022-007 Rev. UPDI: 2022-may-17

Código de proceso: FRM.16.3
 INFORME DE PRÁCTICA DE LABORATORIO

Figura 10. Cuerpos de Barr en células 54,56,60 y 61. S Mateo (2022)

En las células donde hay presencia de cuerpos de Bar se encontraron 1 corpúsculo de Barr por cada núcleo, eso
significa que tiene un cromosoma X adicional es decir en total 2 cromosomas X, el uno se inactiva y el otro
permanece activo de acuerdo a la fórmula.

# 𝑑𝑒 𝑐𝑢𝑒𝑟𝑝𝑜𝑠 𝑑𝑒 𝑏𝑎𝑟𝑟 = # 𝑑𝑒 𝑐𝑟𝑜𝑚𝑜𝑠𝑜𝑚𝑎𝑠 𝑋 − 1

# 𝑑𝑒 𝑐𝑢𝑒𝑟𝑝𝑜𝑠 𝑑𝑒 𝑏𝑎𝑟𝑟 = 2 − 1,
# 𝑑𝑒 𝑐𝑢𝑒𝑟𝑝𝑜𝑠 𝑑𝑒 𝑏𝑎𝑟𝑟 = 1.

por tanto su cariotipo es 46 XX, ahora , la mujer presenta en un análisis de 100 células un aproximado del 40 % se
deben observar un corpúsculo de barr, como en esta práctica solo se logró contar 61 células y 9 cuerpos de Barr
tenemos que hacer una regla de 3

si 61 células equivalen al 100%

9 con cuerpos de Barr a cuanto equivale.

9𝑥100
61
= 14. 75%

lo que quiere decir que se debían encontrar al menos unas 25 células con corpúsculos de Barr para alcanzar un
aproximado del 40% de las 61 células que estudiamos

5. DISCUSIÓN:

como bien se sabe para lograr hacer un análisis completo y determinante, se necesita contar 100 células y encontrar
el 40% de corpúsculos de Barr, en esta práctica de laboratorio por cuestiones de tiempo y de falta de experiencia
para reconocer los corpúsculos , solo se logró contar 61 células en total, dentro de las cuales 9 se lograron
identificar con corpúsculos de Barr.
Código de documento: DCVA-INF-V2-2022-007 Rev. UPDI: 2022-may-17
Código de proceso: FRM.16.3
 INFORME DE PRÁCTICA DE LABORATORIO

no hay mejor manera de ver un corpúsculo de Barr que identificando una pequeña masa condensada de cromatina
sexual la cual se encuentra como si estuviera pegada a la pared del núcleo celular, si no está de esta manera no es
un corpúsculo de Barr, ya que este está condensado e inactivado.

6. CONCLUSIONES:
➔ Los corpúsculos de Barr o cuerpos de Barr son masas de heterocromatina sexual altamente condensada
encontrada en la superficie interna de la membrana nuclear en células somáticas que pueden visualizarse
durante la interfase del ciclo celular de hembras.
➔ En un total de recuento de células epiteliales de la muestra se encontró 61 núcleos diferenciados
(considerado el 100%), de los cuales se encontró 9 cuerpos de Barr (14.75% de la muestra), por lo que, el
resto de células no se encontraban en interfase.
La inactivación del X no es completa, alrededor del 65% de los genes presentes en el cromosoma X se
inactivan; el 20% se inactivan de forma parcial y el 15% no están inactivos
➔ Se encontró un cuerpo de Barr por cada célula en interfase, por lo que, se puede inferir que el cariotipo de
la persona propietaria de la muestra es 46XX.
Personas con un número anormal de cromosomas X presentan un corpúsculo de Barr menos al número de
cromosomas X. El número de corpúsculos de cromatina presentes en una célula guarda relación con el
número de cromosomas X que existen, así, el número de corpúsculos es uno menos que el número de X.
➔ En los seres humanos las células femeninas tienen dos cromosomas X, uno de ellos está condensado en
cada célula formando el cuerpo de Barr (hipótesis de Lyon). La presencia de cuerpos de Barr se relaciona
con el fenómeno de inactivación temprana del cromosoma X, de acuerdo con esta hipótesis
➔ Un cromosoma X debe estar activo por cada dos grupos de autosomas; el gen XIST es esencial para inicial
la inactivación del cromosoma X y, se observa mayor expresión cuanto mayor es el número de
cromosomas X..
➔ La inactivación es al azar, formando un mosaico, solo se puede invertir en la línea germinal cuando se
inicia la ovogénesis y está relacionada con la compensación de la dotación genética entre sexos.
➔ En etapas muy tempranas del desarrollo ambos cromosomas X son activos, sin embargo, su inactivación
(del X) inicia cuando los blastómeros se empiezan a diferenciar hacia la etapa del blastocisto; por lo que,
en cada célula del feto femenino XX se elige (de forma considerada aleatoria) la inactivación de uno de los
dos cromosomas X parentales a partir del cual todos los descendientes de la célula llevarán el mismo
patrón de inactivación de X que la célula progenitora. Por ende, se presentan mosaicos en todos los
mamíferos hembra debido a la mezcla de líneas celulares en las que se inactiva el X heredado del padre
paterno con el del materno; existen mosaicos en los heterocigotos femeninos XX para una enfermedad
dominante o recesiva ligada al X.

7. RECOMENDACIONES:

● Es recomendable que al momento de enfocar una célula epitelial a 100x, se deba jugar con la luz, el
enfoque, y con la apertura del diafragma para poder identificar un cuerpo de barr, por ejemplo en la
siguiente imagen no se puede distinguir un cuerpo de Barr en un ejemplar celular.

Código de documento: DCVA-INF-V2-2022-007 Rev. UPDI: 2022-may-17

Código de proceso: FRM.16.3
 INFORME DE PRÁCTICA DE LABORATORIO

Se puede evidenciar que no se observa un cuerpo de Barr, pero si se manipula bien la luz, el enfoque, y la
apertura del diafragma, se logra obtener la visión de un cuerpo de Barr, como en la siguiente imagen.

En el mismo ejemplar de la célula se pudo encontrar el objetivo siguiendo la recomendación mencionada.

8. BIBLIOGRAFÍA:

Carrillo, J. 2022. Concordancia entre las alteraciones de la cromatina sexual y las aberraciones del cromosoma X
en jóvenes con dificultad de aprendizaje de tres instituciones educativas, Lima 2019. Universidad Nacional
Mayor de San Marcos Universidad del Perú. Decana de América. Recuperado el 23 de noviembre del 2022
de: http://cybertesis.unmsm.edu.pe/bitstream/handle/20.500.12672/18526/Carrillo_mj.pdf?sequence=1

Gordillo, M., Arias, Y. & Hecravarría, L. 2022. Los métodos de microscopía en la antropología biológica: su
aplicación en estudios de poblaciones de Santiago de Cuba. ResearchGate. Recuperado el 23 de noviembre
del 2022 de:
https://www.researchgate.net/profile/Mario-Gordillo-Perez/publication/362694469_Los_metodos_de_microsco
pia_en_la_antropologia_biologica_su_aplicacion_en_estudios_de_poblaciones_de_Santiago_de_Cuba/links/
62f9d9f5c6f6732999cfb3fc/Los-metodos-de-microscopia-en-la-antropologia-biologica-su-aplicacion-en-estudi
os-de-poblaciones-de-Santiago-de-Cuba.pdf

Código de documento: DCVA-INF-V2-2022-007 Rev. UPDI: 2022-may-17

Código de proceso: FRM.16.3
 INFORME DE PRÁCTICA DE LABORATORIO

Hern+andez, E., Sanchez, A. & Meza, C. 2019. Guía de Genética Médica. Corporación Universitaria Rafael Núñez,
Institución Universitaria | Vigilada Mineducación, hecho en Colombia. Recuperado el 23 de noviembre del
2022 de:
http://site.curn.edu.co:8080/jspui/bitstream/123456789/341/1/GU%C3%8DA%20GEN%C3%89TICA%20%20
MEDICA%20-%20Medicina.pdf

Salamanca, F. 1992. Trastornos de la diferenciación sexual en el humano. GACETA MÉDICA DE MÉXICO Vol. 128
No. 1 1992. Recuperado el 23 de noviembre del 2022 de:
http://www.anmm.org.mx/bgmm/1864_2007/1992-128-1-57-79.pdf

Código de documento: DCVA-INF-V2-2022-007 Rev. UPDI: 2022-may-17

Código de proceso: FRM.16.3