FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD 
PROGRAMA ACADÉMICO DE MEDICINA 

 
MATERIAL INFORMATIVO 
Programa de 
MEDICINA  Sesión N°9 
Estudios/Programa 
Experiencia Curricular:  BIOQUÍMICA Y BIOLOGÍA MOLECULAR  Semestre 2022‐1 
Contenido temático:  DETERMINACION DE ÚREA, CREATININA Y TRANSAMINASAS 
Docente:   
Tipo de Material 
GUÍA DE PRÁCTICA DE LABORATORIO 
Informativo 
 
PRÁCTICA N° 9. DETERMINACION DE ÚREA, CREATININA Y TRANSAMINASAS 
 
I. OBJETIVOS 
‐ Evaluar la concentración sérica de urea por el método de la ureasa. 
‐ Evaluar la concentración sérica de creatinina por el método de la reacción de Jaffé. 
‐ Evaluar  la  actividad  enzimática  de  la  transaminasa  glutámico  pirúvica  o  alanina 
aminotransferasa 
‐ Evaluar  la  actividad  enzimática  de  la  transaminasa  glutámico  oxalacética  o  aspartato 
aminotransferasa 
 
II. MATERIALES 
Tubos de ensayo, pipetas milimétricas, gradillas, guantes, alcohol, algodón, agujas N° 20, 
jeringas x 5cc., centrífuga, micropipetas x 10 ul, baño maría, espectrofotómetro. 
Kit para Úrea Wiener Lab. 
Sol. Estándar: solución de urea = 0.60 g/l (28.04 mg/dl de BUN). 
Reactivo A: Solución conteniendo buffer fosfatos 200 mmol/l, ácido salicílico 750 mmmol/l. 
nitroprusiato de sodio 20 mmol/l y EDTA 10 mmol/l. 
Reactivo B: solución concentrada de hipoclorito de sodio 10 mmol/l en hidróxido de sodio 
0.1 mol/l 
Reactivo C: ureasa ≥ 75 U/ml en solución glicerada. 
Kit para Creatinina Wiener Lab. 
Sol. Estándar: solución de creatinina = 20 mg/l.  

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Reactivo A: Ácido pícrico 41.4 mmol/l.  
Reactivo B: Buffer glicina/NaOH 1mol/l.  
Kit para GPT Wiener Lab. 
Sol. Estándar: solución de piruvato de sodio 2 mmol/l.  
Reactivo A: solución con 200 mM de dl‐alanina y 2 mM de α‐cetoglutarato en buffer 
fosfatos 100 mM, pH 7,4 
Reactivo B: solución conteniendo 1 mmol de 2,4‐dinitrofenilhidracina (2,4‐DNFH) en ácido 
clorhídrico 1 mol/l.  
Reactivo C: solución de hidróxido de sodio 4 mol/l.  
Kit para GOT Wiener Lab. 
Sol. Estándar: solución de piruvato de sodio 2 mmol/l. 
Reactivo A: solución con 100 mM de l‐aspartato y 2 mM de α‐cetoglutarato en buffer 
fosfatos 100 mM, pH 7,4   
Reactivo B: solución conteniendo 1 mmol de 2,4‐dinitrofenilhidracina (2,4‐DNFH) en ácido 
clorhídrico 1 mol/l. 
Reactivo C: solución de hidróxido de sodio 4 mol/l. 
 
III. DESARROLLO DE LA PRÁCTICA 
 
Determinación de Urea sérica. 
La secuencia de reacciones que se emplean en esta determinación es la siguiente: 
 
Urea  Ureasa 
     CO2 + NH3; 
pH 
NH3 + Salicilato + Hipoclorito       Indofenol (verde) 
Alcalino 
 
1) Extracción de muestras: previa limpieza de la zona con alcohol, se extraerá 5 cc de sangre 
de la flexura del codo con jeringa hipodérmica de 5 cc y aguja  N° 20, de un paciente en 
ayunas. 
2) Una vez obtenida la muestra, colocarla en un tubo de ensayo y dejarlas reposar durante 10 
minutos. 

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3) Terminado  el  reposo,  contrapesar  los  tubos  conteniendo  las  muestras  y  centrifugarlos  a 
3000 RPM durante 10 minutos. 
4) Finalizado el centrifugado separar el suero para trabajar la determinación. 
5) Para la determinación de úrea: En 3 tubos de ensayo marcados con B (Blanco), S (estándar) 
y D (Desconocido), se debe colocar: 
COMPONENTES  TUBOS DE ENSAYO 
B  S  D 
Muestra (suero / ul)  ‐‐  ‐‐  10 
Estándar (ul)  ‐‐  10  ‐‐ 
Reactivo A + C (ml)  1.0  1.0  1.0 
Mezclar e incubar por 5 minutos a 37 °C o 10 minutos a temperatura ambiente (18 
a 25 °C). Luego agregar: 
Reactivo B (ml)  1.0  1.0  1.0 
Mezclar e incubar por 5 minutos a 37 °C o 10 minutos a temperatura ambiente (18 
a 25 °C). Leer en espectrofotómetro a 570 nm. dentro del plazo de una hora. 
6) Cálculos de resultados: 
Cálculo del factor: 
𝟎. 𝟔𝟎 𝐠/𝐥
𝐅
𝐒
Cálculo de la concentración de Urea. 
Urea (g/l) = D x F 
7) Interpretación de los resultados. 
Valores Referenciales: 0.10 – 0.50 g/l 
 
Determinación de Creatinina sérica.  
La creatinina en medio alcalino reacciona con el ácido pícrico produciendo un cromógeno 
de picrato de creatinina de color rojo (Reacción de Jaffé). La determinación se realiza en 
un filtrado de proteínas obtenido a partir del suero (desproteinizado).  
1) Para  la  determinación  de  creatinina:  En  3  tubos  de  ensayo  marcados  con  B  (Blanco),  S 
(estándar) y D (Desconocido), se debe realizar lo siguiente: 
 

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Desproteinización del suero: Colocar en un tubo 0.4 ml de suero y agregar 2 ml 
de  Reactivo  A.  Mezclar  por  inversión.  Dejar  en  reposo  durante  10  minutos  y 
luego centrifugar a 3000 rpm por cinco minutos. Transcurrido el tiempo armar 
el siguiente sistema: 
COMPONENTES  TUBOS DE ENSAYO 
B  S  D 
Desproteinizado (ml)  ‐‐  ‐‐  1.5 
Estándar (ml)  ‐‐  0.25  ‐‐ 
Agua Destilada (ml)  0.5  0.25  ‐‐ 
Reactivo A (ml)  1.0  1.0  ‐‐ 
Reactivo B (ml)  0.25  0.25  0.25 
Mezclar por inversión. Incubar 20 minutos a temperatura ambiente. Luego leer 
en espectrofotómetro a 510 nm, llevando a cero el aparato con agua destilada. 
2) Cálculos de resultados: Corregir las lecturas S y D restándoles el blanco (B). 
Cálculo del factor: 
𝟐𝟎 𝐦𝐠/𝐥
𝐅
𝐒
Cálculo de la concentración de Creatinina. 
Creatinina (mg/l) = D x F 
3) Interpretación de los resultados. 
Valores Referenciales:  
 Suero = 8 a 14 mg/l 
 
Determinación de la actividad enzimática de la Transaminasa Glutámico Pirúvica (GPT) o 
Alanina aminotransferasa (ALT).  
La técnica empleada en la determinación de transaminasa ALT, es una técnica enzimática 
basada en la siguiente reacción:  
          GPT 
L‐alanina + alfa cetoglutarato        L‐Glutamato + Piruvato  
El piruvato reacciona con la fenilhidrazina dando un compuesto coloreado en medio alcalino 
que se lee a 505 nm.  

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1) Para la determinación de transaminasa GPT: En 2 tubos de ensayo marcados con B (Blanco) 
y D (Desconocido), se coloca: 

COMPONENTES  TUBOS DE ENSAYO   

B  D   

Reactivo A: GPT (ml)  0.5  0.5   

Colocar en baño de agua a 37°C unos cinco minutos.   

Muestra: Suero (ul)  ‐‐  100.0   

Agua Destilada (ul)  100.0     

Mezclar por agitación suave e incubar exactamente 30 minutos   
y luego agregar:   

Reactivo B (ml)  0.5  0.5   

 
Mezclar. Dejar 10 minutos a 37°C. Luego agregar: 
 
Reactivo C: diluido (ml)  5.0  5.0 
 
Mezclar por inversión y retirar del baño. Después de 2 minutos 
 
leer la absorbancia en espectrofotómetro a 505 nm, llevando el 
 
aparato a cero con agua destilada. 
 
2) Curva de Calibración para GPT:  
Se  construirá  usando  diferentes  concentraciones  del  Estándar  (piruvato  de  sodio)  de 
acuerdo al protocolo señalado por el laboratorio. Se obtuvieron las siguientes absorbancias 
para las unidades señaladas. 
Actividad:  Absorbancia  Absorbancia Neta 
Unidades (U/l) 
0  0.217  0.000 
9  0.264  0.047 
18  0.339   
25  0.384   
37  0.464   
46  0.519   
56  0.563   
79  0.679   

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113  0.786   
3) Calcular la absorción neta de cada actividad.  
4) Graficar la curva de calibración. 
5) Obtener la actividad del paciente. 
6) Interpretación de los resultados. 
Valores Referenciales:  
 Transaminasa GPT = Hasta 12 U/l. 
 
Determinación  de  la  actividad  enzimática  de  la  Transaminasa  Glutámico  Oxalacética 
(GOT) o Aspartato aminotransferasa (ALT).  
La técnica empleada en la determinación de transaminasa AST, es una técnica enzimática 
basada en la siguiente reacción:  
             GOT 
L‐aspartato + alfa cetoglutarato          L‐Glutamato + Oxalacetato 
El oxalacetato se convierte en piruvato, el cual reacciona con la fenilhidracina formando 
un compuesto de color marrón en medio alcalino, el que se lleva a lectura en el 
espectrofotómetro a 505 nm. 
1) Para la determinación de transaminasa GOT: En 2 tubos de ensayo marcados con B (Blanco) 
y D (Desconocido), se coloca: 

COMPONENTES  TUBOS DE ENSAYO 
B  D 
Reactivo A: GOT (ml)  0.5  0.5 
Colocar en baño de agua a 37°C unos cinco minutos. 
Muestra: Suero (ul)  ‐‐  100.0 
Agua Destilada (ul)  100.0   
Mezclar por agitación suave e incubar exactamente 30 minutos 
y luego agregar: 
Reactivo B (ml)  0.5  0.5 
Mezclar. Dejar 10 minutos a 37°C. Luego agregar: 
Reactivo C: diluido (ml)  5.0  5.0 

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Mezclar por inversión y retirar del baño. Después de 2 minutos   
leer la absorbancia en espectrofotómetro a 505 nm, llevando el   
aparato a cero con agua destilada.   
2) Curva  de 
Calibración para GOT: 
Se  construirá  usando  diferentes  concentraciones  del  Estándar  (piruvato  de  sodio)  de 
acuerdo al protocolo señalado por el laboratorio. Se obtuvieron las siguientes absorbancias 
para las unidades señaladas.  
 
 
Actividad:  Absorbancia  Absorbancia 
Unidades (U/l)  Neta 
0  0.223  0.000 
7  0.269  0.046 
12  0.295   
20  0.327   
28  0.358   
37  0.389   
48  0.426   
81  0.510   
3) Calcular la absorción neta de cada actividad.  
4) Calcular la absorbancia neta de cada actividad en el cuadro de calibración.  
5) Graficar la curva de calibración.  
6) Obtener  la  actividad  del  paciente.  (La  absorbancia  neta  se  obtiene  de  la  resta  de 
Desconocido – Blanco). 
7) Interpretación de los resultados.  
Valores Referenciales:  
• Transaminasa GOT = Hasta 12 U/l.  
 
IV. CONCLUSIONES 

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El estudiante debe plantear las conclusiones, en base al análisis de los resultados 
obtenidos en el desarrollo de la práctica de laboratorio. 
La conclusión es una afirmación en respuesta a los objetivos. 
 
V. EVALUACIÓN 
Según rubrica de evaluación (Anexos) 
 
VI. BIBLIOGRAFÍA 
1) Murray R. Harper Bioquímica Ilustrada. 31° edición, México 2019.  
2) Nelson D, Cox M. Lehninger. Principios de Bioquímica. 6ta Edición, Editorial Omega, 
España, 2011  
 
 

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