C

SIGNIFICACION CLINICA La creatinina, compuesto sumamente difusible, se elimina del organismo casi exclusivamente por filtracin renal. Su determinacin en suero, as como la depuracin de creatinina endgena constituyen parmetros importantes para el diagnstico de diversas afecciones renales. FUNDAMENTOS DEL METODO La creatinina reacciona con el picrato alcalino (reaccin de Jaffe) produciendo un cromgeno rojo. La velocidad de esta reaccin, bajo condiciones controladas, es una medida de la concentracin de creatinina de la muestra puesto que se comporta como una reaccin cintica de primer orden para la creatinina. Por otra parte, se ha demostrado que los cromgenos no-creatinina que interfieren en la mayor parte de las tcnicas convencionales, reaccionan dentro de los 30 segundos de iniciada la reaccin. De manera que entre los 30 segundos y los 5 minutos posteriores al inicio de la reaccin, el incremento de color se debe exclusivamente a la creatinina. REACTIVOS PROVISTOS A. Reactivo A: solucin de cido pcrico 12,7 mmol/l y laurilsulfato de sodio 8,4 mmol/l. B. Reactivo B: solucin de borato 53 mmol/l e hidrxido de sodio 970 mmol/l. S. Standard*: solucin de creatinina 20 mg/l. REACTIVOS NO PROVISTOS Calibrador A plus de Wiener lab. INSTRUCCIONES PARA SU USO Reactivo A: listo para usar. A baja temperatura puede presentar turbidez o sedimento. En tal caso, colocar en bao de agua a 37oC unos minutos antes de usar. Reactivo B: listo para usar. Reactivo de Trabajo: de acuerdo al volumen de trabajo, mezclar cuatro partes de Reactivo A y una parte de Reactivo B. Rotular y fechar. A baja temperatura puede presentar turbidez o sedimento. En tal caso, colocar en bao de agua a 37oC unos minutos antes de usar. PRECAUCIONES El kit es para uso diagnstico "in vitro". Reactivo B: irritante. R36/38: irrita los ojos y la piel. S24/25: evitar el contacto con los ojos y la piel. S26: en caso de contacto con los ojos, lvense inmediata y abundantemente con agua y acdase a un mdico. S28: en caso de con* No provisto en todas las presentaciones

Creatinina
cintica AA
Mtodo cintico para la determinacin de creatinina en suero, plasma u orina tacto con la piel, lvese inmediata y abundantemente con agua. S37/39: usar guantes adecuados y proteccin para los ojos/la cara. Utilizar los reactivos guardando las precauciones habituales de trabajo en el laboratorio de anlisis clnicos. Todos los reactivos y las muestras deben descartarse de acuerdo a la normativa local vigente. ESTABILIDAD E INSTRUCCIONES DE ALMACENAMIENTO Reactivos Provistos: son estables a temperatura ambiente (menor a 25oC) hasta la fecha de vencimiento indicada en la caja. Reactivo de Trabajo: premezclado y en envase plstico, es estable una semana a temperatura ambiente. En analizadores automticos que emplean Reactivo de Trabajo nico (premezclado), referirse a las adaptaciones especficas de cada analizador. Evitar la exposicin prolongada al aire, manteniendo el frasco bien tapado cuando no sea utilizado. MUESTRA Suero, plasma u orina a) Recoleccin: el suero o plasma se deben obtener de la manera usual. Puede emplearse tambin orina de 2 horas o de 24 horas. Su recoleccin debe efectuarse en un recipiente perfectamente limpio que se mantendr en el refrigerador (2-10oC) durante el tiempo de la recoleccin. Medir la diuresis, tomar una alcuota y efectuar una dilucin 1:50 de la misma en agua destilada. En caso de que la diuresis sea de 2 horas, multiplicar el volumen medido por 12 para calcular la cantidad de creatinina eliminada durante 24 horas. b) Aditivos: en caso de utilizar plasma, recogerlo nicamente con heparina o EDTA. c) Sustancias interferentes conocidas: cuando la muestra es suero o plasma, no se observan interferencias por hemoglobina hasta 0,78 g/dl (7,8 g/l), triglicridos hasta 1.700 mg/l (1,7 g/l) ni bilirrubina hasta 24 mg/dl (240 mg/l); cuando la muestra es orina, no se observan interferencias por protenas hasta 500 mg/dl (5 g/l), cido ascrbico hasta 100 mg/dl (1 g/l) ni cetonas hasta 4 mmol/l. Referirse a la bibliografa de Young para los efectos de las drogas en el presente mtodo. d) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: el suero o plasma debe ser separado de los glbulos rojos antes de las dos horas de la extraccin. Conservados en refrigerador (2-10oC) su estabilidad es de 3 das.
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LINEA LIQUIDA

La orina puede mantenerse hasta 4 das en refrigerador (210oC) sin agregado de conservantes. MATERIAL REQUERIDO (no provisto) - Espectrofotmetro capaz de leer a 500 10 nm. - Micropipetas y pipetas para medir los volmenes indicados. - Cubetas espectrofotomtricas. - Bao de agua a 25oC. - Cronmetro. CONDICIONES DE REACCION - Longitud de onda: 500 nm - Temperatura de reaccin: 25oC El control de la temperatura no es crtico, pudiendo oscilar entre 22 y 28oC. Ver LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO. - Volumen de muestra: 0,2 ml - Volumen de Reactivo de Trabajo: 1,2 ml - Volumen final de reaccin: 1,4 ml PROCEDIMIENTO I- TECNICA PARA SUERO O PLASMA Equilibrar el Reactivo de Trabajo a la temperatura de reaccin (25oC). Antes de agregar la muestra, llevar el aparato a cero con agua destilada. En dos cubetas espectrofotomtricas marcadas S (Standard) y D (Desconocido), colocar: S Reactivo de Trabajo Standard Muestra 1,2 ml 0,2 ml D 1,2 ml 0,2 ml

Creatinina en orina (g/24 hs) =

D2 - D1 S2 - S1

0,020 g/l x 50 x V

donde: 0,020 g/l = concentracin del Standard 50 = factor de dilucin Para expresar la creatinina en orina en mg/Kg/24 hs: Creatinina en orina (g/24 hs) x 1000 mg/g Peso del paciente (Kg) 3) Depuracin de Creatinina Endgena (D.C.E.): D.C.E. ml/min = donde: g/24 hs 694 ml/min = mg/l = 1.000 mg x 1.000 ml 1 mg x 1.440 min = 1.000.000 ml 1.440 min Creatinina en orina (g/24 hs) Creatinina en suero (mg/l)
x

694 ml/min

Para expresar D.C.E. en ml/min/1,73 m2: D.C.E. (ml/min) x 1,73 Superficie corporal del paciente (m2) METODO DE CONTROL DE CALIDAD Procesar 2 niveles de un material de control de calidad (Standatrol S-E 2 niveles) con concentraciones conocidas de creatinina, con cada determinacin. VALORES DE REFERENCIA Suero o plasma: Hombre: 7 - 13 mg/l Mujer: 6 - 11 mg/l Orina: Hombre: 14 - 26 mg/Kg/24 hs Mujer: 11 - 20 mg/Kg/24 hs D.C.E.: Hombre: 94 - 140 ml/min/1,73 m2 Mujer: 72 - 110 ml/min/1,73 m2 Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia. CONVERSION DE UNIDADES AL SISTEMA SI Creatinina (mg/l) x 8,84 = Creatinina (umol/l) LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO Ver Sustancias interferentes conocidas en MUESTRA. Otras causas de resultados errneos son: - Temperatura: si bien la temperatura de reaccin admite una variacin entre 22 y 28oC, una diferencia entre la temperatura de incubacin del Standard respecto de las muestras disminuye la precisin del mtodo. - Tiempo de lectura: ligeras variaciones en la medicin del tiempo afectan notablemente la exactitud del mtodo. Las lecturas debern realizarse exactamente a los 30 segundos luego de haber mezclado la muestra con el reactivo y a los 5 minutos (4 minutos 30 segundos luego de la primera lectura).
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Mezclar inmediatamente, iniciando al mismo tiempo el cronmetro y proseguir la incubacin. A los 30 segundos exactos medir la absorbancia (S1 y D1) y continuar la incubacin. Medir nuevamente la absorbancia (S2 y D2) a los 5 minutos (4 minutos 30 segundos despus de la primera lectura). II- TECNICA PARA ORINA Recolectar y preparar la muestra como se describi en Recoleccin, efectuando una dilucin 1:50 de la misma en agua desionizada. Aplicar luego la tcnica I. CALCULO DE LOS RESULTADOS 1) Creatinina en suero (mg/l) = (D2 - D1) x f 20 mg/l f= S2 - S 1 2) Creatinina en orina (g/24 hs) = D2 - D1 S2 - S1
x

siendo: V = volumen de la diuresis expresado en litros/24 hs La frmula surge de:

PERFORMANCE a) Reproducibilidad: procesando de acuerdo al documento EP15-A del CLSI (ex-NCCLS), se obtuvo lo siguiente: Precisin intraensayo (n = 20) Nivel 7,1 mg/l 14,7 mg/l 54,9 mg/l 440 mg/l 2.620 mg/l 5.060 mg/l Nivel 7,1 mg/l 14,7 mg/l 54,9 mg/l 440 mg/l 2.620 mg/l 5.060 mg/l D.S. 0,27 mg/l 0,32 mg/l 1,09 mg/l 9,35 mg/l 62,4 mg/l 136 mg/l D.S. 0,30 mg/l 0,48 mg/l 1,47 mg/l 20,5 mg/l 119 mg/l 177 mg/l C.V. 3,8 % 2,2 % 2,0 % 2,1 % 2,4 % 2,7 % C.V. 4,3 % 3,3 % 2,7 % 4,6 % 4,5 % 3,5 %

SIMBOLOS Los siguientes smbolos se utilizan en todos los kits de reactivos para diagnstico de Wiener lab.

C
V
X
H l

Este producto cumple con los requerimientos previstos por la Directiva Europea 98/79 CE de productos sanitarios para el diagnstico "in vitro"

Suero

P Representante autorizado en la Comunidad Europea

Orina

Precisin total (n = 20)

Suero

?
F

Orina

b) Linealidad: la reaccin es lineal hasta 90 mg/l de creatinina. Para valores superiores, diluir la muestra 1:2 1:4 con solucin salina y repetir la determinacin. Corregir los clculos multiplicando por el factor de dilucin empleado. c) Lmite de deteccin: el mnimo cambio de concentracin detectable es 4,5 mg/l. PARAMETROS PARA ANALIZADORES AUTOMATICOS Para las instrucciones de programacin debe consultarse el Manual del Usuario del Analizador en uso. Para la calibracin, debe usarse Calibrador A plus de Wiener lab. PRESENTACION - 250 ml (2 x 100 ml Reactivo A + 2 x 25 ml Reactivo B) (Cd. 1260360) - 200 ml (4 x 40 ml Reactivo A + 2 x 20 ml Reactivo B) (Cd. 1009329) - 200 ml (4 x 40 ml Reactivo A + 2 x 20 ml Reactivo B) (Cd. 1009254) BIBLIOGRAFIA - Owen, J.A.; et al. - Biochem. J. 58:426 (1954). - Henry, R.J. et al. - Clinical Chemistry, Principles and Technics, 2nd ed., Harper and Row Publishers Inc., N.Y. (1974). - Butler, A.R. - J. Chem. Soc. (Perkin Trans. II), 853 (1975). - Labb, D et al. - Ann. Biol. Clin. 54:285 (1996). - Burtis, CA; Ashwood, ER - Tietz Fundamentals of Clin. Chem., 5th ed., 2001. - Young, D.S. - "Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests", AACC Press, 5th ed., 2000. - CLSI: Clinical and Laboratory Standards Institute (ex-NCCLS) - Protocol EP15-A, 2001 / EP 17A, 2004.

Contenido Nmero de lote Elaborado por: Nocivo Corrosivo / Castico

g
M
Xn

Xi

Irritante Consultar instrucciones de uso Calibrador Control Control Positivo Control Negativo Nmero de catlogo

i
Calibr.

b b c h

M Wiener Laboratorios S.A.I.C.

Wiener lab.

2000 Rosario - Argentina