Pruebas de Floculación e Inmunocromatografía

PRUEBAS DE FLOCULACIÓN (VDRL) E
INMUNOCROMATOGRAFÍA Guia N°6 – Laboratorio de

Inmunología
Escuela de Microbiología
Universidad de Antioquia
Elaboró:
Juilián Camilo Arango
Jehidys Montiel
Damaris Lopera
1. OBJETIVOS DE LA PRÁCTICA
1. Conocer el fundamento de las pruebas de floculación y de inmunocromatografía
2. Realizar con destreza e interpretar correctamente las pruebas de floculación,
aplicando diluciones seriadas de la muestra para identificar el título.
3. Realizar con destreza e interpretar correctamente pruebas de
inmunocromatografía como la prueba de embarazo.
2. PRINCIPIOS DE LAS PRUEBAS DE FLOCULACIÓN

En inmunología, la floculación es otra técnica que sirve para evidenciar la reacción
antígeno-anticuerpo in vitro. Es una reacción química donde un antígeno (Ag) de
naturaleza lipídica induce la aglomeración de partículas, formando agregados
microscópicos.
3. INTRODUCCIÓN A LA PRUEBA DE VDRL

La prueba denominada VDRL recibió su nombre por el laboratorio que la diseñó
“Venereal Diseases Research Laboratory”, y es una prueba serológica de bajo costo,
simple y rápida, utilizada en el tamizaje de la sífilis, infección de transmisión sexual
causada por la espiroqueta Treponema pallidum.
La infección por T. pallidum, induce la producción de anticuerpos anti-treponémicos y

no treponémicos. Estos últimos, van dirigidos contra componentes normales del
hospedero, tales como la cardiolipina, un fosfolípido abundante en membranas,
especialmente en la membrana mitocondrial. Se ha propuesto que la destrucción
tisular durante la infección treponémica hace que se produzcan este tipo de
autoanticuerpos. La prueba de VDRL detecta anticuerpos IgG e IgM contra la
cardiolipina (anticuerpos no-treponémicos) en el suero o en el líquido cefalorraquídeo
del paciente, mediante una aglutinación pasiva de microcristales (también llamada
microfloculación). La presencia de estos anticuerpos se correlaciona con la infección
por Treponema, sin embargo, también pueden generarse en pacientes con otras
entidades clínicas como paludismo, TBC, enfermedades del colágeno y además en
sujetos normales, en condiciones de embarazo y en pacientes de edad avanzada o
recientemente vacunados. Por esto, las muestras positivas deben evaluarse por
métodos de mayor especificidad diagnóstica, en los que se busca anticuerpos contra
componentes del agente infeccioso (anticuerpos treponémicos).
1
Inmunología
INDICACIONES DE LA PRUEBA VDRL
El médico puede indicar la prueba VDRL en los siguientes casos:

1. Paciente que presenta lesions cutáneas en áreas genitals, rasch cutáneo
generalizado y/o erupciones en palmas y plantas de los pies (ene stos casos se
incluirá la o las parejas sexuales de los pacientes).
2. Pacientes con otras enfermedades de trasmisión sexual (gonorrea, herpes genital,
verrugas genitales, uretritis, leucorrea, etc.) incluyendo también a su o sus parejas
sexuales.
3. Seguimiento serológico a pacientes sifilíticos ya tratados
4. Consulta preconcepcional
5. Mujeres embarazadas en el primero y tercer trimestre de gestación
6. Donantes de sangre.
Un paciente con sífilis puede tener una prueba serológica no reactiva en los siguientes
casos:
1. Durante el periodo de incubación de la enfermedad y hasta 15 días después de la
aparición del chancro sifilítico, pues no se ha producido aún anticuerpos por el
paciente.
2. En pacientes con títulos muy altos de anticuerpos anticardiolipina (1 o 2% de los
pacientes con sífilis) se observa una reacción prozónica. En estos casos no se
produce floculación a menos que se diluya el suero del paciente.
Fundamento del método

La técnica de VDRL es una técnica de floculación que utiliza el antígeno de cardiolipina
para detectar anticuerpos no-treponémicos producidos por el individuo ante una
infección sifilítica. Se practica normalmente en lámina de cristal, en la que se mezcla el
suero del paciente, con una suspensión fresca de antígeno de cardiolipina; esta mezcla
se agita de forma rotatoria y al cabo de pocos minutos puede observarse la floculación
utilizando un microscopio de bajo aumento; sus resultados pueden expresarse tanto
cualitativa como semi-cuantitativamente.
Procedimiento
1. Atemperar los reactivos y las muestras
2. En cada uno de los sectores delimitados de la placa colocar:
2.1. Antígeno: 50 ul
2.2. 1 gota del suero o plasma a evaluar
3. Agitar horizontalmente la placa a 180 rpm durante 4 minutos.
4. Observar inmediatamente en microscopio con poco aumento (60 a 100 X).
2
Inmunología
5. Para la prueba semicuantitativa, preparar diluciones de la muestra 1:2, 1:4, 1:8,

1:16 y 1:32 con solución fisiológica y realizar para cada dilución la prueba como se
describió anteriormente.
4. PRINCIPIO DE LAS PRUEBAS DE INMUNOCROMATROGRAFIA

En el laboratorio clínico, las pruebas de inmunocromatografía son pruebas rápidas y
fáciles de realizar, que brindan la posibilidad de hacer tamizaje y/o diagnóstico de
diferentes enfermedades o estado clínico del individuo.
La inmunocromatografía consiste en la migración de una muestra (suero, plasma,
orina, entre otros) en una membrana de nitrocelulosa la cual contiene anticuerpos
específicos contra el antígeno o analito que se desea detectar. Estos anticuerpos
específicos se encuentran en dos zonas o franjas: zona de prueba o test (T) y zona de
control (C). También se utiliza un reactivo de detección o anticuerpo de detección, que
por lo general son anticuerpos tipo IgG marcados con partículas de oro coloidal, si la
muestra contiene el antígeno de interés se unirá al anticuerpo formando
inmunocomplejos que migraran a través de la membrana de nitrocelulosa hasta llegar
a la zona de captura que está formada por un segundo anticuerpo que se une al
antígeno de interés, formando una línea de color. Si la muestra no contiene el analito
de interés, los componentes de esta seguirán migrando con el conjugado sin unirse,
por lo tanto la línea de color en la zona de test no se formará.
Por otra parte, existe un tercer anticuerpo en la zona de control, el cual es capaz de
reconocer el anticuerpo de detección. Cuando la muestra haya terminado de recorrer
la membrana de nitrocelulosa el exceso de anticuerpo que no haya sido fijado en la
zona de captura llegara hasta la zona de control, formando también una línea de color.
Esta línea es un control, que indica que la prueba ha funcionado correctamente, ya que
siempre debe aparecer, tanto con muestras positivas o negativas.
En el laboratorio clínico las pruebas de inmunocromatografía se utilizan para

diagnóstico de embarazo (detección de hormona gonadotropinica corionica hGC),
antígeno prostático, rotavirus, Chlamydia sp, Leptospira sp. , VIH, virus del dengue,
virus respiratorios, etc.
3
Inmunología
5. Procedimiento
INMUNOCROMATOGRAFIA:
Detección de hormona Gonatropina Coriónica Humana (hCG)
1 Dispensar 100ul de muestra en el dispositivo de inmunocromatografia en la zona

que dice muestra (S).
2 Esperar que aparezcan una o dos líneas rojas. Lea el resultado a los 5 minutos.
4
Inmunología
6. MATERIALES
Sueros o plasma a analizar Guantes
Microplatos de 96 pozos para diluciones Kits de inmunocromatografía
seriadas
Micropipetas Kit para VDRL
Puntas amarillas Guardián de seguridad
Solución salina fisiológica estéril
Agitador mecánico rotatorio
7. INFORME
1. Realice los dibujos correspondientes al resultado obtenido en cada prueba
2. Mencione dos ejemplos de enfermedades infecciosas, en los que se utiliza la
inmunocromatografía para el diagnóstico y describa dos de ellos. Para todos
mencione el analito que se detecta (Ag o Ac)
3. Menciones cinco ventajas y desventajas de la inmunocromatografía
4. Diseñe mediante esquema un experimento de inmunocromatografia para un
microrganismo en el que no se cuente con este método diagnóstico (especifique
tipo de analito a identificar, distribución de anticuerpos y/o antígenos y la
interpretación de los resultados).
5. Reporte los resultados de la medición de VDRL y realice un cuadro comparado
cuatro situaciones o factores biológicos o técnicos que puedan alterar los
resultados de esta prueba.
8. REFERENCIAS
1. Lomonte, B. Técnicas de Laboratorio en Inmunología Clínica, 122 pp. Universidad de
Costa Rica. (2009).
2. Surajit N, Basanti A. VDRL Test and its Interpretation. Indian J Dermatol. Jan-Feb; 57(1):
3–8 (2012).
3. http://www.wienerlab.com.ar/wiener/catalogo/archivos/8489_vdrl_c_controles_s
p.pdf
4. Larrondo R, González A, Hernández L y Larrondo R. La técnica serológica del VDRL.
Indicaciones y manejo en la atención primaria. Rev Cubana Med Gen integrg;15(5):
570-3 (1999).

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La infección por T. pallidum, induce la producción de anticuerpos anti-treponémicos y

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El médico puede indicar la prueba VDRL en los siguientes casos:

Fundamento del método

5. Para la prueba semicuantitativa, preparar diluciones de la muestra 1:2, 1:4, 1:8,

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En el laboratorio clínico las pruebas de inmunocromatografía se utilizan para

1 Dispensar 100ul de muestra en el dispositivo de inmunocromatografia en la zona

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