GUIA PARA DETERMINACION DE SALMONELA (Carne)

SALMONELA TYPHI
Familia. Enterobacteriaceae
Morfologia. Bacilos Gram Negativos de 0,7-1,5 x 2-5 µm, moviles por flajelos peritricos
Anaerobios facultativos - No esporulados
Fermentan glucosa, maltosa y manitol, pero no fermentan lactosa ni sacarosa.
Son generalmente catalasa positiva, oxidasa negativa y reducen nitratos a nitritos.
Son viables en diferentes condiciones ambientales, sobreviven a la refrigeración y
congelación y mueren por calentamiento (mayor a los 70 °C).
Método para realizar la detección, aislamiento e identificación de Salmonella spp. en muestras de alimentos.
PREENRIQUECIMIENTO
10g de muestra en 100ml de A.P.B (Agua Peptonada Bufferada)
De ser necesario más cantidad de muestra, colocar siempre la cantidad de solvente para crear una dilución 1/10
Dejar es estufa 36-38°C durante 16-20hs
ENRIQUECIMIENTO SELECTIVO
Transferir 1 ml del cultivo obtenido anteriormente. A un tubo con 9 ml de caldo Selenito Cistina (10ml total)
incubar a 36-37 ºC, de 16 a 24 horas.
AISLAMIENTO E IDENTIFICACION
Tomar un ansada del cultivo obtenido y estriar en una placa de agar XLD. Proceder de la misma manera con el
segundo agar selectivo (S.S).
Incubar las placas de XLD a 37ºC ± 1ºC durante 24 h ± 3 h. Y a las placas de S.S incubar a 33-37 °C durante 18-24
horas.
INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
Examinar las placas después de incubar para la evaluacion de presencia o no de colonias típicas de Salmonella (y
colonias atípicas que podrían ser Salmonella).
XLD
Las colonias típicas de Salmonella en el agar XLD son transparentes, del mismo color del medio con centro negro.
Nota: las colonias de Salmonella H2S negativo (ej. S. Paratyphi A) en el XLD son rosadas con un centro rosa oscuro y
las de Salmonella lactosa positivas son de color amarillo con o sin centro negro.
S.S
Microorganismos no fermentadores de lactosa: colonias del color del medio, incoloras.
Microorganismos productores de SH2 : colonias con centro negro.
PROLIFERACION
Si en el paso anterior se identificaron 5 o mas colonias sospechosas, no es necesario realizar este paso
Seleccionar al menos una colonia sospechosa y estriar por agotamiento en superficie de placas de agar nutritivo para
obtención de colonias aisladas. Incubar las placas a 37°C ± 1°C durante 24 h ± 3 h.
CONFIRMACION BIOQUIMICA (Pruebas Bioquimicas)
Tomar al menos 5 colonias para la confirmación.
Para la confirmación bioquímica utilizar cultivos puros. Se siembra por puncion y en la superficie del medio.
En tubos de ensayo, realizar las siguientes pruebas:
TSI AGAR (Pico de flauta) - LIA AGAR (Pico de flauta)

Picar suavemente el centro de la colonia con aguja de inoculación e inocular el TSI por punción en el fondo y estriar
el pico de flauta. Sin flamear inocular el LIA por punción en el fondo 2 veces y estriar el pico de flauta. Como la
reacción de la lisina decarboxilasa es estrictamente anaeróbica, el LIA debe tener un fondo profundo (4 cm).
Incubar TSI y LIA a 35°C durante 24 h ± 2 h.
Tapar los tubos sin apretar para mantener condiciones de aerobiosis y prevenir la excesiva producción de H2S.
Las cepas de Salmonella típica producen:
En TSI:
Pico de flauta alcalino (rojo) y fondo ácido (amarillo) con o sin producción de H2S (ennegrecimiento del agar)
En LIA:
Fondo alcalino (violeta). Considerar sólo amarillo definido en el fondo del tubo como ácido (reacción negativa).
No descartar los cultivos que producen decoloración en el fondo del tubo basándose solo en esta reacción. La
mayoría de los cultivos de Salmonella producen H2S en LIA. Algunos cultivos que no son Salmonella producen un
color rojo ladrillo en LIA.
Deben ser retenidos para confirmación bioquímica los cultivos que dan:
- Fondo alcalino (violeta) en LIA sin importar la reacción en TSI
- Fondo ácido (amarillo) en LIA y pico de flauta alcalino (rojo) y fondo ácido (amarillo) en TSI.
Descartar como no Salmonella los cultivos que dan fondo ácido en LIA y pico de flauta y fondo ácidos en TSI.
MR-VP. Un mismo CALDO para 2 pruebas diferentes:
Inocular el caldo con colonias sospechosas. Incubar 48 h ± 2 h a 35°C pero examinar a intervalos de 24 h.
Voges Proskauer (VP):
Transferir una anzada (colonia sospechosa) a un tubo test e incubar el sobrante del caldo MR-VP 48 h más a 35°C .
Agregar 0.6 ml de αnaftol y mezclar bien. Agregar 0.2 ml de solución de KOH al 40% y mezclar.
Leer la reacción después de 4 h: una reacción positiva está indicada por coloración rosa a rojo rubí. La mayoría de las
especies de Salmonella dan una reacción negativa indicada por ausencia de desarrollo de color.
Rojo de metilo (MR):
A 5 ml del caldo MR-VP de 96 h agregar 5 a 6 gotas de indicador rojo de metilo.
Leer inmediatamente. La mayoría de las especies de Salmonella dan una reacción positiva indicada por desarrollo de
color rojo.
Descartar como no Salmonella los cultivos que dan reacción positiva para VP y reacción negativa para rojo de metilo.
SIM AGAR
Por punción profunda utilizando aguja de inoculación recta. Inocular el centro del tubo, y la punción debe abarcar 2
tercios de profundidad del medio de cultivo desde la superficie.
En aerobiosis. a 33-37 °C, durante 18-24 horas
Observar la movilidad y el color del medio de cultivo. Luego realizar la prueba de indol.
Movilidad:
Resultado positivo: presencia de turbidez o crecimiento mas allá de la línea de siembra.
Resultado negativo: crecimiento solamente en la línea de siembra.
Producción de SH2:
Resultado positivo: ennegrecimiento del medio de cultivo a lo largo de la línea de siembra o en todo el medio.
Resultado negativo: el medio permanece sin cambio de color.
Prueba del indol: Agregar al medio de cultivo 3 a 5 gotas de Indol Reactivo (REF B1550361).
Resultado positivo: color rojo.
Resultado negativo: el color del reactivo revelador permanece incoloro-amarillento.

KLIGER AGAR (Pico de flauta)
A partir de un cultivo puro del microorganismo en estudio, con aguja de inoculación inocular el medio de cultivo,
picando el fondo y extendiendo sobre la superficie del mismo.
En aerobiosis, a 33-37°C durante 18 a 24 horas.
Observar el color del medio de cultivo y la producción

de gas.
1- Superficie alcalina/profundidad ácida (pico

rojo/fondo amarillo):
El microorganismo solamente fermenta la glucosa.
2- Superficie ácida/Profundidad ácida (pico

amarillo/fondo amarillo):
El microorganismo fermenta glucosa, y lactosa.
3- Superficie alcalina/Profundidad alcalina (pico

rojo/fondo rojo):
El microorganismo es no fermentador de azúcares.
4- La presencia de burbujas o la ruptura del medio de

cultivo indican que el microorganismo produce gas.
5- El ennegrecimiento del medio indica que el

microorganismo produce ácido sulfhídrico.
CITRATO AGAR (Pico de flauta)
A partir de un cultivo puro del microorganismo en estudio, con aguja de inoculación inocular el medio de cultivo,
picando el fondo y extendiendo sobre la superficie del mismo.
En aerobiosis, a 33-37 ºC durante 24-72 horas
INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS –
Positivo: crecimiento bacteriano con un intenso color azul en el pico de flauta.
Negativo: ausencia de crecimiento y permanencia del color verde del medio de cultivo.

GUIA PARA DETERMINACION DE SALMONELA (Carne)

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

GUIA PARA DETERMINACION DE SALMONELA (Carne)

Cargado por

Información del documento

Derechos de autor

Formatos disponibles

Compartir este documento

Compartir o incrustar documentos

Opciones para compartir

¿Le pareció útil este documento?

¿Este contenido es inapropiado?

Copyright:

Formatos disponibles

GUIA PARA DETERMINACION DE SALMONELA (Carne)

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

SALMONELA TYPHI

Dejar es estufa 36-38°C durante 16-20hs

incubar a 36-37 ºC, de 16 a 24 horas.

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS

Microorganismos no fermentadores de lactosa: colonias del color del medio, incoloras.

Microorganismos productores de SH2 : colonias con centro negro.

CONFIRMACION BIOQUIMICA (Pruebas Bioquimicas)

Tomar al menos 5 colonias para la confirmación.

En tubos de ensayo, realizar las siguientes pruebas:

TSI AGAR (Pico de flauta) - LIA AGAR (Pico de flauta)

Incubar TSI y LIA a 35°C durante 24 h ± 2 h.

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS

Las cepas de Salmonella típica producen:

- Fondo alcalino (violeta) en LIA sin importar la reacción en TSI

Voges Proskauer (VP):

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS

Rojo de metilo (MR):

A 5 ml del caldo MR-VP de 96 h agregar 5 a 6 gotas de indicador rojo de metilo.

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS

En aerobiosis. a 33-37 °C, durante 18-24 horas

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS

Resultado positivo: presencia de turbidez o crecimiento mas allá de la línea de siembra.

Resultado negativo: crecimiento solamente en la línea de siembra.

Resultado negativo: el medio permanece sin cambio de color.

Resultado positivo: color rojo.

Resultado negativo: el color del reactivo revelador permanece incoloro-amarillento.

En aerobiosis, a 33-37°C durante 18 a 24 horas.

Observar el color del medio de cultivo y la producción

1- Superficie alcalina/profundidad ácida (pico

El microorganismo solamente fermenta la glucosa.

2- Superficie ácida/Profundidad ácida (pico

El microorganismo fermenta glucosa, y lactosa.

3- Superficie alcalina/Profundidad alcalina (pico

El microorganismo es no fermentador de azúcares.

4- La presencia de burbujas o la ruptura del medio de

5- El ennegrecimiento del medio indica que el

CITRATO AGAR (Pico de flauta)

En aerobiosis, a 33-37 ºC durante 24-72 horas

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS –

Positivo: crecimiento bacteriano con un intenso color azul en el pico de flauta.

También podría gustarte