Scribd Logo
Cargar

¡Te damos la bienvenida a Scribd!

  • 229 vistas

    Fundamentos de Tinción

    Cargado por

    KATHLEN RODRIGUEZ ZAMBRANO
    El documento describe los fundamentos de dos técnicas de tinción: la tinción de Papanicolaou y la tinción panóptica. La tinción de Papanicolaou utiliza tres colorantes para teñir selectivamente los núcleos y citoplasmas de las células, permitiendo una diferenciación celular. La tinción panóptica es una tinción diferencial rápida que utiliza colorantes básicos y ácidos para teñir componentes celulares específicos. Ambas técnicas proporcionan información sobre la morfología celular y el estado fisi

    Copyright:

    © All Rights Reserved
    Descargue como PDF, TXT o lea en línea desde Scribd

    Fundamentos de Tinción

    Cargado por

    KATHLEN RODRIGUEZ ZAMBRANO
    229 vistas6 páginas
    El documento describe los fundamentos de dos técnicas de tinción: la tinción de Papanicolaou y la tinción panóptica. La tinción de Papanicolaou utiliza tres colorantes para teñir selectivamente los núcleos y citoplasmas de las células, permitiendo una diferenciación celular. La tinción panóptica es una tinción diferencial rápida que utiliza colorantes básicos y ácidos para teñir componentes celulares específicos. Ambas técnicas proporcionan información sobre la morfología celular y el estado fisi

    Título original

    FUNDAMENTOS DE TINCIÓN

    Derechos de autor

    © © All Rights Reserved

    Formatos disponibles

    PDF, TXT o lea en línea desde Scribd

    ¿Le pareció útil este documento?

    ¿Este contenido es inapropiado?

    El documento describe los fundamentos de dos técnicas de tinción: la tinción de Papanicolaou y la tinción panóptica. La tinción de Papanicolaou utiliza tres colorantes para teñir selectivamente los núcleos y citoplasmas de las células, permitiendo una diferenciación celular. La tinción panóptica es una tinción diferencial rápida que utiliza colorantes básicos y ácidos para teñir componentes celulares específicos. Ambas técnicas proporcionan información sobre la morfología celular y el estado fisi

    Copyright:

    © All Rights Reserved
    Descargue como PDF, TXT o lea en línea desde Scribd
    Descargar como pdf o txt
    229 vistas6 páginas

    Fundamentos de Tinción

    Cargado por

    KATHLEN RODRIGUEZ ZAMBRANO
    El documento describe los fundamentos de dos técnicas de tinción: la tinción de Papanicolaou y la tinción panóptica. La tinción de Papanicolaou utiliza tres colorantes para teñir selectivamente los núcleos y citoplasmas de las células, permitiendo una diferenciación celular. La tinción panóptica es una tinción diferencial rápida que utiliza colorantes básicos y ácidos para teñir componentes celulares específicos. Ambas técnicas proporcionan información sobre la morfología celular y el estado fisi

    Copyright:

    © All Rights Reserved
    Descargue como PDF, TXT o lea en línea desde Scribd
    Descargar como pdf o txt
    de 6

    UNIVERSIDAD MAYOR DE SAN ANDRÉS

    FACULTAD DE CIENCIAS FARMACEUTICAS Y BIOQUIMICAS


    CARRERA BIOQUÍMICA
    CÁTEDRA CITOLOGIA APLICADA

    FUNDAMENTOS DE TINCIÓN
    Nombres y apellidos:
    ● Univ. Rodriguez Zambrano Kathlen
    ● Univ. Rosales Salas Izela
    ● Univ. Vela Ramirez Catherine Elena
    ● Univ. Zamorano Quispe Fanny
    ● Univ. Zarate Poma Sara Karina

    FUNDAMENTO DE LA TINCIÓN PAP

    Tinción de Papanicolaou
    La tinción de Papanicolaou es un método de tinción policromática que consta de una tinción
    nuclear y un contraste citoplasmático. Tiene como ventaja una buena definición del detalle
    nuclear, evidenciando el patrón de cromatina de las células, un aspecto transparente de los
    citoplasmas y una diferenciación
    celular, que permite apreciar
    grados de maduración celular y
    actividad metabólica, todo esto
    debido al uso de tres colorantes; la
    Hematoxilina que tiñe
    selectivamente los núcleos y el
    Orange G y la eosina Alcohol (EA)
    que tiñen los citoplasmas.
    La tinción de Papanicolaou tiene 4
    pasos principales:
    1.- Fijación realizada en el
    momento de tomar la muestra.
    2.- Tinción del núcleo con
    Hematoxilina
    3.- Tinción del citoplasma con Orange G y EA
    4.- Aclaramiento

    1) Tinción del núcleo:


    La hematoxilina de Harris tiene una afinidad por las estructuras ácidas, específicamente por
    la cromatina. Después de la hematoxilina las láminas se lavan en agua (Viraje).
    Luego se hace una diferenciación en una solución de HCl al 0,5% en agua destilada y luego
    lavado en agua corriente.

    Principio de la tinción del núcleo:

    La cromatina es una sustancia nuclear que se tiñe de


    oscuro con el colorante básico(hematoxilina).Cromatina
    está constituída por finas cadenas de ácido
    desoxirribonucleico unidas a una proteína base, por lo
    general histona; contiene la proteína no-histona y poca
    cantidad de ARN La hematoxilina tiene color transparente o blanco,se oxida por medio de
    un oxidante químico para unirse fuertemente con los componentes vitales.Si se agrega
    aluminio el cual es mordiente,forma el quelato y hace enlace iónico con la parte que tiene
    carga negativa de los componentes
    vitales,por consiguiente tiñe a esa
    parte con azul morado a azul.

    El PH de la hematoxilina y
    tinción:

    Dependiendo del pH de la solución


    de hematoxilina, cambia la
    disolución del radical funcional del
    anión. El radical funcional del anión
    de la célula, el cual se une con la hematoxilina, está
    mostrado en la diapositiva izquierda. Hasta pH 3.0, la
    hematoxilina se une con los tres radicales funcionales y tiñen
    de forma general.La hematoxilinade Harris de pH 2.7 2.8
    se une con el núcleo que tiene el radical fosfórico con el
    citoplasma que en tiene el radical carboxilo( COO), por esa
    razón, es necesario hacer el fraccionamiento.

    Tinción del Núcleo Ténue Tinción del núcleo fuerte

    1.Líquido De Tinción Deficiente. 1.Uso De Alcohol De Alta Concentración.


    2.Sequedad Antes La Fijación. 2.Exceso De Tiempo Para La Tinción Del
    3.Tiempo Insuficiente Para Fijación. Núcleo.
    4.Tiempo Insuficiente Para La Tinción del 3.Falta Fraccionamiento.
    Núcleo.
    5.Deterioro De Hematoxilina Por Dilución.
    6.Exceso de fraccionamiento con alcohol
    de ácido clorhídrico.
    7.Blanqueado Por El Cloro Del Agua de la
    Llave.
    8.Mezcla con el líquido de citospray para
    fijación.

    2) Tinción del Citoplasma:


    El Orange G es una tinción monocromática que colorea la queratina de un naranja brillante
    y penetra rápidamente al citoplasma. La queratina no se encuentra en condiciones normales
    en el epitelio cervical y vaginal, y si se encuentra en carcinomas queratinizados. Por lo
    tanto, la presencia
    de citoplasma orangeofílico brillante es significativa.
    La Eosina alcohol (EA) es una tinción policroma compuesta de eosina, verde luz y café
    Bismark (pardo) en la fórmula original (Puede variar la cantidad verde luz en las diferentes
    fórmulas de EA),
    y su fundamento es el siguiente:
    ● La Eosina tiñe el citoplasma de las células escamosas maduras, nucleolos y cilios.
    ● El Verde luz tiñe las células que son metabólicamente activas, como las células
    ● parabasales, intermedias y columnares.
    ● Las células superficiales se tiñen rosadas con la eosina, y por eso se describen
    como eosinofílicas.
    ● Las células parabasales e intermedias se tiñen verde o azul, dependiendo del tiempo
    de la tinción EA y se llaman cianófilas.
    Los componentes principales del
    citoplasma son azúcar, lípidos y
    proteínas anfóteras que contiene
    RNA y tiene la característica de tener
    carga negativa y positiva. Sin
    embargo, dependiendo de las
    condiciones de la tinción (pH),
    cambian estas cargas.Cuando el pH
    es neutro, muchas veces tiene carga
    negativa y cada vez que tiende a la
    acidez, el radical amino se ioniza y
    toma carga positiva poresarazonsemejoralatincion.

    3) Aclaramiento:
    El aclarado es el paso final de la tinción de Papanicolaou y produce la transparencia celular.
    Se suele usar el Xilol como solución aclaradora.
    En Última etapa de la Elaboración De Laminilla,si no se hace bien la deshidratación y
    desalcoholización,después del montaje,los colorantes,los cuales están en las células,se
    disuelven el material para montar.
    4) Montaje de las Láminas:
    El montaje es una unión entre el portaobjeto y el cubreobjeto, mediante una sustancia, con
    el fin de obtener una muestra cubierta y protegida contra el
    secado y arrugamiento del material celular y sellada para
    evitar la oxidación de la muestra.
    El medio de montaje debe ser soluble en el agente aclarante
    y debe tener un índice de refracción que coincida con la
    muestra y el cubreobjeto, logrando una imagen lo más
    transparente posible.
    Existen 2 opciones como medio de montaje: el bálsamo de
    Canadá y la resina sintética, siendo ésta última la más
    recomendable, ya que el bálsamo de Canadá es
    calor-dependiente.

    FUNDAMENTO DE LA TINCIÓN PANÓPTICA

    También es una tinción diferencial. Se caracteriza por su gran rapidez de ejecución ( 15


    segundos) y por la peculiaridad de ser un método de inmersión. El colorante, en vez de
    depositarse sobre la muestra, se encuentra en pequeños depósitos de tinción, donde se
    introduce el porta que contiene la muestra. En clase los tenemos en duquesitas, numerados
    por orden de inmersión.
    Los colorantes que forman el Panóptico Rápido combinan la policromía y calidad de los
    métodos clásicos de tinción hematológica (May Grünwald, Giemsa, Wright) con una gran
    rapidez de ejecución. Se trata de una técnica que se realiza por inmersión en las soluciones
    colorantes. Como en el resto de tinciones de tipo Romanowsky, los colorantes básicos se
    unen a los componentes ácidos de las células, ácidos nucleicos, gránulos en neutrófilos y
    proteínas ácidas que se tiñen de un color rojo púrpura más o menos intenso, mientras que
    los colorantes ácidos se une a la hemoglobina, componentes básicos de las estructuras
    celulares y los gránulos de los eosinófilos. Su utilización permite la tinción diferencial de las
    células sanguíneas. El resultado de la tinción puede ser influenciado por varios factores
    como son la fijación, el tiempo de tinción y el valor del pH del agua de lavado. Si el pH es
    demasiado básico la coloración será más azul y si el pH es demasiado ácido, la coloración
    será más rosada.

    FUNDAMENTO DE LA TINCIÓN DE GIEMSA

    La técnica de tinción de Giemsa es muy útil para estudios citológicos, ya que permite la
    observación de estructuras específicas de las células. Esta técnica tiñe los citoplasmas,
    núcleos, nucléolos, vacuolas y gránulos de las células, pudiéndo distinguir incluso finas
    trazas de Cromatina. Además, se pueden detectar cambios significativos en el tamaño,
    forma o coloración del núcleo, donde es posible visualizar la pérdida de la relación
    núcleo–citoplasma.
    Por otra parte, permite identificar células inmaduras en médula ósea y sangre periférica,
    siendo importante para el diagnóstico de enfermedades graves como la leucemia. También
    es posible detectar hemoparásitos, bacterias extra e intracelulares, hongos, entre otros.
    La tinción de Giemsa está catalogada como tinción tipo Romanowsky, el cual básicamente
    es una solución en metanol(es un solvente inicialmente fija las células), con un colorante
    ácido que es la eosina (es un colorante ácido con una carga neta negativa, tiñe los
    componentes celulares básicos como las proteínas catiónicas citoplasmáticas y tiñe de rojo
    anaranjado los componentes alcalinos de las células) y dos colorantes básicos azur y azul
    de metileno (que son colorantes básicos con una carga positiva neta, tiñen los
    componentes celulares ácidos como los ácidos nucleicos. El azul de metileno que tiñe de
    azul los componentes ácidos de las células. Azur que tiñe de rojo y violeta los componentes
    básicos de las células ). Estos colorantes teñirán las estructuras celulares dependiendo de
    su carácter ácido o básico.
    El valor de pH es importante para las propiedades de la tinción, un cambio de pH de la
    solución conduce a una reacción de tinción incorrecta. El rango de pH óptimo es de 6.5 a
    6.8.

    La diferenciación cito-morfológica según la afinidad del colorante, es la siguiente:


    ● Los núcleos celulares se tornan violeta intenso
    ● Eritrocitos: de rosa claro a marrón
    ● Plaquetas: como pequeños puntos de color púrpura
    ● Linfocitos: Azul con núcleo morado y su citoplasma de color azul
    ● Eosinófilo: azul violeta
    ● Gránulos eosinofílicos: presenta una tonalidad pardo rojizo
    ● Neutrófilo: azul profundo a azul violeta
    ● Gránulos de neutrófilos: rojo
    ● Basófilo: azul violeta
    ● Citoplasma de monocitos: - azul pálido

    FUNDAMENTO DE LA TINCIÓN DE ROMANOWSKY

    La tinción de Romanowsky es una técnicas de tinción prototípica que fue predecesora de


    varios métodos distintos, pero basados en principios similares entre los que se incluyen las
    tinciones de Giemsa, Jenner, Wright, Field, y Leishman, las cuales son utilizadas para
    diferenciar diferentes tipos de células en especímenes patológicos.
    Una tinción de Romanowsky consiste en azul de metileno y sus productos de oxidación, así
    como eosina Y o eosina B.
    La acción combinada de estos colorantes produce el efecto Romanowsky que da una
    coloración púrpura a los núcleos de los leucocitos y a los gránulos neutrófilos y da color
    rosado a los eritrocitos. Los componentes de este efecto son el azul B y la eosina Y.
    Las propiedades de tinción de Romanowsky dependen del enlace de los colorantes a las
    estructuras químicas y de las interacciones del azul B y la eosina Y. Los agrupamientos de
    ácidos nucleicos, las proteínas de los núcleos celulares y el citoplasma inmaduro reactivo,
    fijan el azul B, colorante básico. La tinción de Wright cuyo colorante está compuesto de azul
    de metileno (que tiñe de color azul las partes ácidas de las células) y eosina (que tiñe las
    partes alcalinas) disueltos en metanol (que permite la fijación de las células), adicionando a
    la preparación buffer de fosfatos (que rehidrata a las células después de la exposición con
    metanol).
    La eosina Y, colorante ácido, se fija a los agrupamientos básicos de las moléculas de
    hemoglobina y a las proteínas básicas.

    La tinción de la muestra permite distinguir la forma, tamaño y contorno de los hematíes,


    leucocitos y plaquetas y el núcleo, citoplasma y granulaciones de las distintas células ya
    que adquieren diferentes colores: azul, púrpura, rosa o salmón.

    Esta separación por colores es el llamado efecto Romanowsky, que tiñe de púrpura a los
    núcleos y gránulos neutrofílicos y de color rosa a los eritrocitos. Los ácidos nucleicos, las
    proteínas y el citoplasma se tiñen de azul, delatando a los posibles parásitos.

    REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:
    ● LA TINCIÓN DE PAPANICOLAOU. Bases y práctica JICA. Yoshikuni Taira - PDF

    Descargar libre. (s. f.). Bases y Práctica-Tinción de Papanicolau. Encontrado en:

    https://docplayer.es/37200357-La-tincion-de-papanicolaou-bases-y-practica-jica-yosh

    ikuni-taira.html

    ● QUÍMICA.ES. (s.f.). Tinción de Romanowsky. Obtenido de:


    https://www.quimica.es/enciclopedia/Tinci%C3%B3n_de_Romanowsky.html

    ● Obtenido de: file:///C:/Users/WINDOWS/Downloads/_folletos_993090.pdf

    ● Dean, D. (2020) May-Grunwald Giemsa Staining: A Method to Stain Bone Marrow


    Cells. Encontrado en:
    https://www.jove.com/es/v/20264/may-grunwald-giemsa-staining-a-method-to-
    stain-bone-marrow-cells

    También podría gustarte