UNIVERSIDAD TECNOLÓGICA DEL VALLE DE TOLUCA

T.S..U Química Área Tecnología Ambiental

Microbiología

“Organismos mesófilos en suelos agrícolas”

Grupo:
QTA-31

Equipo: 4

Integrantes:
Aguilar del Razo Karina
Arroyo Guzmán Paola
Chávez Hernández Karen Lorelei
Escalante Castro Cristian
Flores Hernández Estefanía
Neria García Jothan Ituriel

Catedrático:
Dra. Guillermina Gómez Beltrán

Fecha de entrega:
10 de agosto del 2021
En microbiología el término mesófilo se refiere a un organismo cuya temperatura de
crecimiento óptima está entre los 20 y los 45 °C. El hábitat de los microorganismos mesófilos
incluye el suelo, el cuerpo de un animal, la superficie del mar, etc. Esta clase comprende la
mayor parte de los organismos que tienen como huésped el hombre y otros animales de sangre
caliente, por ejemplo: la Salmonella y el Staphylococcus aureus.

Lerma es un municipio rico en suelos fértiles en donde se cultiva maíz, cebolla, jitomate, frijol
y chile esto se debe; a que en Lerma se encuentra 3 tipo de suelos predominantes estos son
Andosoles (22%), Feozem (21%) y Vertisoles (14%). Entre estos resaltamos el Feozem el cual
es rico en materia orgánica y por tal motivo lo hace un buen suelo para la agricultura.

En el presente proyecto se planea realizar un análisis microbiológico de suelo, se realizo un

muestreo en un area de la universidad tecnologica del valle de toluca siguiendo asi
procedimientos establecidos por la norma. Para los analisis microbiologicos se tomo un gramo
de muestra y esta se diluyo en caldo, se hicieron diluciones para luego sembrar en 2 medios
de cultivos diferentes y cultivar los microorganismos mesofilos.

Los microorganismos del suelo contribuyen al mantenimiento de la fertilidad química, física y

biológica del suelo. Transforman nutrientes inorgánicos, que de otra forma no pueden ser
absorbidos por la planta; además favorecen la descomposición y mineralización de la materia
orgánica. Y aunque son más los organismos benéficos que los patógenos es de mucha
importancia realizar análisis microbiológicos en su mayoría para determinar los patógenos que
puedan dañar o consumir cultivos y de esta manera no afectar a todos los organismos
benéficos que su única función es ayudar al suelo o al terreno donde se cultiva.
Evaluar y cuantificar la presencia de microorganismos mesófilos de suelos agrícolas en los
terrenos aledaños a la Universidad Tecnológica Del Valle de Toluca conforme a la normatividad
ambiental aplicable.

Suelo

El suelo es la porción más superficial de la corteza terrestre, constituida en su mayoría por

residuos de roca provenientes de procesos erosivos y otras alteraciones físicas y químicas,
así como de materia orgánica fruto de la actividad biológica que se desarrolla en la superficie.

Suelo Agrícola

Llamamos suelo agrícola aquellos con buena estructura y con una baja compactación que
permite un funcionamiento equilibrado. Con buenos niveles de materia orgánica, que propicia
y facilita una mejor reserva de nutrientes, incrementa la capacidad de intercambio catiónico,
aporta energía para la actividad de los microorganismos, aumenta la capacidad calorífica y
reduce las oscilaciones térmicas.

Microorganismos del suelo

La microflora del suelo está compuesta por bacterias, hongos, algas, virus y protozoarios.

● Bacterias: se consideran el grupo más diverso de microorganismos en el suelo y pueden

ser beneficiosos o fitopatógenos.
● Hongos: Pueden ser de vida libre o estar unidos con las raíces de las plantas como es
el caso de las micorrizas. La importancia de este grupo radica en que muchos de ellos
desempeñan un rol importante en los procesos de descomposición de la materia
orgánica.
● Protozoarios: son aquellos organismos que requieren de oxígeno para vivir por lo que
están presentes cerca de la superficie del suelo. Su alimentación consiste en algas y
bacterias del propio suelo.
● Microalgas: al igual que los anteriores, se encuentran presentes cerca de la superficie
del suelo y constituyen una fuente de alimento para protozoarios, hongos, lombrices de
tierra y nemátodos.
Clasificación de Microorganismos mesófilos

Se definen como aquellos organismos que alcanzan su desarrollo óptimo a temperaturas que
oscilan los 20 y 45°C y no prosperan por debajo de los 10°C, es de gran importancia conocer
este tipo de microorganismos debido a que estos se encuentran en su mayoría en cualquier
lugar sitio, e incluso en el cuerpo humanos, en donde llegan a vivir debido a que la temperatura
del cuerpo humano oscila los 37°C.

Tanto baterías como hongos mesófilos son uno de los principales organismos mesófilos, su
habitad incluye suelos, cuerpos de animal, superficie de mar y hasta en ocasiones el cuerpo
de un humano al igual que toda esta familia de mesófilos su temperatura de crecimiento optima
esta entre los 20 y 45°C.

Medio de cultivo

En microbiología, un cultivo es un método para la multiplicación de microorganismos, tales

como lo son bacterias en el que se prepara un medio óptimo para favorecer el proceso
deseado. Para permitir el crecimiento de microorganismos en el laboratorio, es necesario
aportarles un medio con nutrientes y condiciones fisicoquímicas adecuadas para su desarrollo.
El medio de cultivo es aquel que contiene agua y una serie de nutrientes, necesarios para su
metabolismo.

Identificación de microorganismos

Una vez listo el medio de cultivo sembrado con un tipo de microorganismo y encubado se
procede a la identificación de este. La identificación de los microorganismos es un proceso de
gran importancia para una colección de cultivos microbianos. Es uno de los requisitos
esenciales para que una cepa sea ingresada oficialmente a una colección y, a su vez, permite
direccionar la búsqueda de una aplicación al microorganismo identificado.

Técnicas para la obtención de cultivos puros:

Los métodos más utilizados para la identificación microbiana, los podemos clasificar en:

● Métodos basados en criterios morfológicos.

● Métodos basados en tinción diferencial.
● Métodos basados en pruebas bioquímicas.
● Métodos basados en tipificación con fagos.
 ● Métodos basados en pruebas serológicas.
● Métodos basados en detección molecular.

La técnica de obtención de cultivos puros según es mediante una técnica de aislamiento. Es

la técnica más utilizada que consiste en sembrar en un medio de cultivo solido en placa una
sola bacteria o microorganismo de interés de esta manera solo crecerá un solo cultivo puro de
una colonia de bacterias.

Conteo de microorganismos

El recuento en placa es uno de los métodos más utilizados para determinar el número de
microorganismos viables en un medio líquido. Cuando la concentración es baja se procede a
filtrar la muestra a través de una membrana que será pasada al medio de cultivo, en una placa
de Petri. Los microorganismos retenidos en la membrana se desarrollarán formando colonias,
permitiendo su cuantificación. Se divide en dos variables muy utilizadas: El recuento en placa
por siembra en profundidad y el recuento en placa por siembra en superficie.

Unidades Formadoras de Colonias (UFC)

Es un indicador de la cantidad de microorganismos vivos en un líquido. Este valor, determinado

por el número de colonias individuales, describe el número de células de un organismo en el
agua. Estos pueden ser bacterias u hongos que viven y se multiplican en el agua. En la
microbiología, las unidades que describen las colonias son importantes para ver, por ejemplo,
el desarrollo de un cultivo celular y para averiguar cuántos microorganismos hay en el agua.

Numero Más Probable (NMP)

Es una estrategia eficiente de estimación de densidades poblacionales especialmente cuando

una evaluación cuantitativa de células individuales no es factible. La técnica se basa en la
determinación de presencia o ausencia en réplicas de diluciones consecutivas de atributos
particulares de microorganismos presentes en muestras de suelos u otros ambientes. Por lo
tanto, un requisito importante de este método es la necesidad de poder reconocer un atributo
particular de la población en el medio de crecimiento a utilizarse. El estimado de densidad
poblacional se obtiene del patrón de ocurrencia de ese atributo en diluciones seriadas y el uso
de una tabla probabilística. El atributo particular para usarse esta técnica es la capacidad de
microorganismos a formar colonias en medios sólidos de crecimiento.
Importancia ambiental

La microbiología ambiental tiene gran importancia en nuestras vidas. Los microorganismos

están presentes en el ambiente en el que vivimos, tanto en su sentido benéfico como dañino.
Así, algunos de los puntos claves sobre la importancia de la microbiología ambiental son:

● Los microorganismos colaboran en el reciclaje, descomposición y mineralización de

toda materia orgánica en proceso de putrefacción.
● Los microorganismos patógenos presentes en el agua pueden convertir este bien
esencial para la supervivencia del ser humano en nociva, de igual modo que si esos
organismos se encuentran en el aire.
● Se ocupa de estudios y problemas relacionados con la medicina humana, animal y
vegetal, la agricultura, la producción animal, la fertilidad del suelo, la industria, etc.

El proceso biológico es fundamental, pues es el soporte, tanto físico como de nutrientes, para
el desarrollo de las plantas, las cuales son la base de las cadenas tróficas. Sin el suelo no
habría plantas, y sin plantas no habría vida como la conocemos. El suelo es la base de
sustentabilidad para cualquier ecosistema terrestre. Es receptor de un flujo de energía
contenido en la materia orgánica en descomposición (necromasa) que se incorpora a este,
aunado que le dio origen, da como resultado una heterogeneidad de los tipos de suelo en
espacio y tiempo. Esto da lugar a una gran diversidad estructural de la biocenosis edáfica
heterótrofa, comunidad que es influenciada por factores físicos, que es capaz de utilizar dicha
energía (García y Bello, 2004).

Para la determinación de microorganismos y evidenciar su presencia, existen diferentes

normas. Algunas de la cuales se presentan a continuación:

● NMX-AA-042-SCFI-2015 - Enumeración de organismos coliformes totales, organismos

coliformes fecales (termotolerantes) y Escherichia coli - Método del número más
probable en tubos múltiples.
● NOM-065-SSA1-1993 - Especificaciones sanitarias de los medios de cultivo.
Generalidades.
● NOM-210-SSA1-2014 - Determinación de microorganismos indicadores.
 ● NOM-021-SEMARNAT-2000 - Establece las especificaciones de fertilidad, salinidad y
clasificación de suelos, estudio, muestreo y análisis.

a. Preparación del material

Para este paso es necesario contar con una pala de punta o recta, bolsas de plástico y una
cinta métrica.

b. Toma de muestra

Se determina el lugar donde se realizará la toma de muestra. Con la cinta métrica se miden
dos cuadrados de 30x30 cm con una profundidad de 30 cm, con ayuda de la pala se comienza
a realizar la excavación de estos y al ya tenerlos se miden 5 cm hacia afuera, con la misma
pala se comienza a hacer la excavación para obtener las muestras de suelo como mínimo 2
kg por cada muestra.

c. Traslado de la muestra al laboratorio.

Una vez obtenidas las muestras de campo, éstas deben ser cuidadosamente mezcladas y
reducidas de tamaño las partículas más grandes. Cada muestra debe ir acompañada de una
identificación, donde se indique claramente su procedencia, nombre del interesado,
profundidad de colecta, relieve, cultivo, historial de fertilización, aplicación de mejoradores,
etc., así como las determinaciones requeridas, según el propósito del estudio. La identificación
de campo de la muestra debe incluir los siguientes datos: (a) nombre del interesado; (b)
procedencia; (c) fecha del muestreo; (d) número de muestras o submuestras; (e) profundidad
de colecta: (f) pendiente del terreno; (g) manejo del terreno, etc.

a. Cajas Petri.
Después de lavadas y secas se colocan con el cristalizador más grande (TAPA) como base,
se envuelven con papel de estraza y se le coloca cinta testigo (Figura 1).
 Figura 1.- Preparacion de cajas Petri

b. Tubos bacteriologicos
Después de lavados y secos se les pone un tapón que puede ser de baquelitas o algodón. El
tapón debe ajustarse a la boquilla del tubo.

c. Pipetas
Ya limpias y secas se les hace un filtro de algodón de aproximadamente 1.5 cm de longitud, ni
muy floja ni muy compacta, quemando en el mechero el exceso que sobresalga. Se envuelven
en papel de estraza con una tira empezando por la punta. Toda la pipeta deberá quedar
perfectamente cubierta, con el papel ajustado y asegurándose que no hay perforación en la
punta. Utilizar finalmente cinta testigo (Figura 2).

Figura 2.- Preparacion de pipetas

d. Matraces Erlenmeyer
Ya limpios y secos se les hace un tapón de algodón con gasa, el cual se cubre con papel de
estraza (Figura 3).

Figura 3.- Preparacion de Matraz Erlenmeyer

Por lo general, se prepara un medio sólido, partiendo de un medio líquido y añadiéndole un
coagulante, el que nosotros utilizamos el Agar. Sustancias complejas de origen animal o
vegetal, generalmente complementadas con la adición de minerales y otras sustancias.

1. Leer cuidadosamente las instrucciones de preparación del medio de cultivo.

2. Pesar la cantidad exacta del medio deshidratado o las porciones correctas de cada uno
de los ingredientes.
3. Disolver la porción pesada de acuerdo con las indicaciones del fabricante. Si es
necesario calentar, sin sobrecalentar.
4. Identificar el lote de medio de cultivo preparado indicando su nombre.

Las cajas Petri, tubos bacteriológicos, pipetas y medios de cultivo, se esterilizan por calor
húmedo en una autoclave a una temperatura de 121°C por 30 minutos y se deja enfriar durante
20 minutos.

Los medios de cultivo que se utilizaran en este método son los que marca la tabla siguiente
en la cual se especifica el tipo de morfología que se determinara.

Medio de cultivo Dextrosa Soya

Morfología Hongo Bacteria

1. Marca la base de la caja de Petri donde se depositó el inóculo y donde comenzarán las
estrías.
2. Esterilizar el asa bacteriológica en el mechero y dejar enfriar en una superficie del agar.
3. Tomar una asada de la muestra y colocarla en el medio de cultivo, haciendo estrías
continuas hacia el final de la caja petri como se muestra en la figura 4.
4. Esterilizar el asa nuevamente y enfriar en el agar.

Figura 4.- Método de siembra por estría simple

Para la determinación de este método es importante considerar la tabla siguiente y la Figura
5, para describir la morfología de cada una de las colonias presentes en el análisis. Si es
necesario, utilice el asa bacteriológica y el microscopio estereoscópico para una mejor
determinación de este.

Figura 5.- Morfología colonial

a. Recuento en placa por UFC

Para llevar a cabo el recuentro en placa de una bacteria, se necesita que ésta sea aislada en
cultivo puro, y el aislamiento en caja Petri es el primer paso para ello. Una vez que ha sido
preparado un medio de cultivo, puede ser utilizado para ser inoculado y a continuación
incubado en condiciones que favorezcan el crecimiento microbiano. Los medios de cultivo son
las soluciones nutritivas que se utilizan en el laboratorio para el cultivo de microorganismos.

Consiste en realizar diluciones seriadas 1:100 y extender 1mL de cada dilución en una placa;
las placas se incuban hasta que las colonias son apreciables para su recuento. Esta
metodología tiene la ventaja de tener un buen límite de detección, sin embargo, consume
mucho tiempo durante los plaqueos (Figura 6).

1x10-2 36 26

1x10-3 1 8

1x10-4 10 8

Testigo 1 (Medio) 1 0

Testigo 2 (Agua peptonada) 0 1

Figura 6.- Conteo en placa por el método de UFC

b. Recuento de microorganismos por NPM

El método del número más probable (NMP) se emplea habitualmente realizando diluciones en
serie de un cultivo de bacterias en un medio de crecimiento, y luego divisiones adicionales en
serie hasta obtener alícuotas. Se pesa 1 gr de muestra de suelo y se diluye con agua
peptonada a 100 mL, de esta dilución se toma 1 mL y se traspasa a un tubo de ensaye que
contiene 10 mL de agua peptonada, al tener esta dilución se vuelve a tomar 1 mL del mismo
tubo y se traspasa a un segundo, nuevamente se toma 1ml y se vuelve a traspasar esto a otro
tubo de manera que tendremos triplicado de cada dilución, como se muestra en la figura 7.

Figura 7.- Conteo por el método de NMP

Tabla 6.1. Morfología colonial Bacteriana (Características)

Caracteristicas Colonia 1 Colonia 2

Tamaño 4mm 3mm
Color Blanco Blanco
Forma Ovalada Filamentado
Borde Papilalda Convexa
Elevación Circular Circular
Supérior Lisa Lisa
Aspecto Húmedo Húmedo
Luz trasmitida Brillante Brillante
Consistencia Butiosa Butiosa
Producción de
pigmento Amarrillenta Amarillenta
Se identificaron 2 tipos de colonias, en la primera que fue papa dextrosa se pudo observar que
tuvo un tamaño de 4mm con un color blanco, de forma ovalada, con aspecto húmeda y con
consistencia butirosa la cual quiere decir que tiene una consistencia de un tanto brillante y
húmeda. En la segunda colonia que fue soya tripticaseina se puedo observar un tamaño de
3mm, con un color igualmente blanco de una forma filamentada, con un borde convexo y
consistencia butirosa. Por ello la morfología colonial nos permite determinar las características
en forma general, la elevación o márgenes de las pocas colonias que lleguen a estar presentes.

Tabla 6.2. Conteo en placa (UFC)

Colonias
Testigo 2
Dilución Dilución Dilución Testigo 1
Medio de cultivo (Agua
1x10-2 1x10-3 1x10-4 (Medio)
peptonada)
Agar tripticasa de
26 8 8 0 1
soya
Papa dextrosa
36 1 10 1 0
agar

Nota: Son medios de uso general que favorecen el crecimiento de bacterias y hongos, en el
que se observaron diferentes tipos de colonias de mesófilos las cuales se identificaron con
facilidad por su morfología.

Microorganismos= 36 x 100 = 3600 microorganismos

El número total de microorganismos presentes en este método es de 3600 por gramo de suelo,
debido a que la primera dilución es 1x10-2.

Tabla 6.3. Conteo en placa (NPM)

Tubos inoculados
Dilución Dilución Dilución
1x10-2 1x10-3 1x10-4
2 positivos 2 positivos 0 positivos

2 2 0

Nota: De acuerdo con la norma NOM-210-SSA1-2014, los resultados obtenidos en

este análisis se determinaron 21 microorganismos.
Microorganismos= 21 x 100 = 2100 microorganismos

El número total de microorganismos presentes es de 2100 por gramo de suelo, debido a que
la primera dilución es 1x10-2.

Por otra parte, el análisis de NMP permite obtener los datos cuantitativos de las
concentraciones a partir de datos de incidencia positiva/negativa y de esta manera calcular el
número de microorganismos mediante una tabla estadística de NMP conforme a la NMX-AA-
042-SCFI-2015.

Se hizo una evaluación y cuantificación de microorganismos mesófilos de suelos, por medio

del crecimiento obtenido de bacterias y hongos en los diferentes medios de cultivo.

El análisis de reencuentro de microorganismos por NMP se determinaron 2100

microorganismos por gramo de suelo, lo cual está por debajo del rango permisible conforme la
norma oficial. Se utilizó eficientemente para la evaluación cuantitativa de los microorganismos,
dio mejores resultados mediante el apoyo de la tabla estadística con respecto a la NOM-210-
SSA1-2015

● Una vez que ya se tiene la muestra de suelo, no dejar pasar más de una hora para llevar
a cabo el análisis, de tal forma que no haya alteraciones en la actividad microbiana.
● Mantener en constante observación la temperatura de la incubadora para lograr un
óptimo crecimiento microbiano en placa.
● Llevar un buen control respecto a las cantidades de diluciones que se hara en cada tubo
para que de esta manera se obtenga un mejor resultado.
● Tener el material en el mejor estado posible, en este caso el Asa bacteriológica para
llevar a cabo la realización de siembra en placa y asi evitar el rompimiento de estas al
momento de hacerlas.

● Los análisis correspondientes para que estas evaluaciones se hicieran de la mejor

manera, se llevó a cabo la buena preparación del material para evitar lo menos posible
que se contaminaran. De igual manera es de vital importancia que se mantenga alerta
de los equipos en donde se lleva a cabo la esterilización para que de esta manera se
evite perdidas en los medios de cultivo.
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