Introduccion Fuentes

Avances en espectrometría de masas orgánica
Profa. Ana Agüera López ([email protected])

ESPECTROMETRÍA DE MASAS
Se basa en la generación de iones a partir de

moléculas neutras y en el estudio de la
fragmentación de los mismos.
ESPECTROMETRÍA DE MASAS. ¿POR QUÉ?
GRAN CAPACIDAD
DE
IDENTIFICACIÓN
CUALITATIVA
ANALIZA MEZCLAS
Y
COMPLEJAS
CUANTITATIVA
ESPECTROMETRÍA
UNIVERSAL
DE POSEE GRAN
Y
MASAS SENSIBILIDAD
ESPECIFICA
SUMINISTRA PROPORCIONA
INFORMACIÓN INFORMACION
ISOTÓPICA TÉCNICA ESTRUCTURAL
MUY
RÁPIDA
ESPECTRÓMETRO DE MASAS
FUNCIONES DEL ESPECTRÓMETRO DE MASAS ENTRADA
a) El espectrómetro de masas debe ser capaz
de vaporizar sustancias de volatilidades
muy diferentes IONIZACIÓN
b) Una vez volatilizada la muestra debe ser
capaz de generar iones a partir de las
moléculas neutras en fase gaseosa
c) Una vez generados los iones, el SEPARACIÓN
espectrómetro debe ser capaz de
separarlos en función de su relación
masa/carga (m/z)
DETECCIÓN
d) Una vez separados los iones, el
espectrómetro debe ser capaz de
detectarlos y registrar la información
adecuadamente REGISTRO
ESPECTRÓMETRO DE MASAS
ESPECTROS DE MASAS
Un espectro de masas es un gráfico de barras verticales, en el que cada barra

representa un ion que tiene una relación de masa/carga específica (m/z). La
longitud de la barra indica la abundancia relativa de los iones. Al ion más intenso se
le asigna una abundancia de 100, y se le conoce como el pico de base. La
mayoría de los iones formados en un espectrómetro de masas tienen una sola
carga, por lo que el valor m/z es equivalente a la masa en sí.
INTERPRETACION DE ESPECTROS DE MASAS
- Asignación del ion molecular

- Interpretación de fragmentos
- Pérdidas comunes
- Clusters isotópicos
INTERPRETACION DE ESPECTROS DE MASAS
1. Aprecie el aspecto general del espectro para observar si es interpretable

2. Seleccione el pico candidato para ión molecular (M+).
3. Examine en el espectro la existencia de “clusters” de determinadas
contribuciones isotópicas.
4. Confirme el M+. candidato buscando las correspondientes pérdidas
razonables.
5. Busque iones característicos de masas bajas.
6. Compare el espectro con espectros de referencia:
a. Utilizando recopilaciones en referencias publicadas
b. Utilizando búsqueda informática de espectros
7. La interpretación espectral debe ser contrastada con cualquier otra
información sobre la muestra.
8. Comprueba la interpretación obteniendo un espectro de la molécula
supuesta en las mismas condiciones instrumentales
INFORMACIÓN ISOTÓPICA: ABUNDANCIAS ISOTÓPICAS CLORO‐BROMO
Cl-Br X X+2 X+4 X+6 X+8 X+10

Cl 100 32.5
Cl2 100 65.0 10.6
Cl3 100 97.5 31.7 3.4
Cl4 76.9 100 48.7 10.5 0.9
Cl5 61.5 100 65.0 21.1 3.4 0.2
Cl6 51.2 100 81.2 35.2 8.5 1.1
ClBr 76.6 100 24.4

Cl2Br 61.4 100 45.6 6.6
Cl3Br 51.2 100 65.0 17.6 1.7
ClBr2 43.8 100 69.9 13.7

Cl2Br2 38.3 100 89.7 31.9 3.9
Cl3Br2 31.3 92.0 100 49.9 11.6 1.0
ClBr3 26.1 85.1 100 48.9 8.0

Cl2Br3 20.4 73.3 100 63.8 18.7 2.0
Br 100 98.0
Br2 51.0 100 49.0
Br3 34.0 100 98.0 32.0
Br4 17.4 68.0 100 65.3 16.0
INTERPRETACION DE ESPECTROS DE MASAS: PÉRDIDAS COMUNES
M–1 pérdida de radical hidrógeno M - H

M – 15 pérdida de radical metilo M - CH3
M – 29 pérdida de radical etilo M - CH2CH3
M – 31 pérdida de radical metoxilo M - OCH3
M – 43 pérdida de radical propilo M - CH2CH2CH3
M – 45 pérdida de radical etoxilo M - OCH2CH3
M – 57 pérdida de radical butilo M - CH2CH2CH2CH3
M–2 pérdida de hidrógeno M - H2
M – 18 pérdida de agua M - H 2O
M – 28 pérdida de CO o etileno M - CO or M- C2H4
M – 32 pérdida de metanol M - CH3OH
M – 44 pérdida de CO2 M - CO2
M – 60 pérdida de ácido acético M - CH3CO2H
M – 90 pérdida de silanol: HO-Si(CH3)3 M - HO-Si(CH3)3
SISTEMAS DE INTRODUCCIÓN DE LA MUESTRA
1. INTRODUCCIÓN INDIRECTA
• La vaporización se realiza en un recipiente externo a alta Tª (10‐2 mm Hg)
• El vapor fluye hacia la fuente de iones por diferencia de presión (10‐6 ‐10‐7 mm Hg)
• Aplicable a gases, líquidos (P.e < 200ºC) o sólidos sublimables.
2. INTRODUCCIÓN DIRECTA
• La muestra se introduce directamente en la fuente mediante un capilar calentado
• Útil para muestras puras
3. ACOPLAMIENTO A TÉCNICAS CROMATOGRÁFICAS (GC‐MS; LC‐MS)
• El eluyente de la columna se introduce en el MS mediante una interfase
• De interés para análisis de mezclas
SISTEMAS DE INTRODUCCIÓN DE LA MUESTRA
DEPENDEN DE: - VOLATILIDAD

- NATURALEZA DE LA MUESTRA
- MÉTODO DE IONIZACIÓN (Presión de la fuente)
GC HPLC
DEPÓSITO/ORIFICIO MEMBRANA
GASES
LÍQUIDOS
CAPILAR CALENTADO SEPTUM INLET
JET SONDA DIRECTA (DIP)
SONDA ROBÓTICA
SÓLIDOS
ABLACIÓN LASER
SONDA DE SÓLIDOS
INTRODUCCIÓN DE LA MUESTRA: ACOPLAMIENTO GC‐MS
ACOPLAMIENTO GC-MS
c
JET SEPARATOR PERMSELECTIVE MEMBRANE
From GC To MS From GC
To MS
Outlet
Vacuum
Pump
MOLECULAR EFFUSION DIRECT INTRODUCTION
From GC To MS
Column MS
Flow Source
Vacuum
Pump
JET
10-5-10-7 Torr
• Utilizado en GC‐MS con columnas empacadas

• Se basa en las velocidades de difusión relativas
• Moléculas ligeras (gas portador) difunden más rápidamente
desviándose de la trayectoria hacia el analizador
• Moléculas más pesadas (analito) difunden lentamente alcanzando
el tubo hacia el analizador
INTERFASE DIRECTA
VENTAJAS DESVENTAJAS
Bajo coste, diseño sencillo Limita el flujo de la columna
No volumen muerto Limita el DI de la columna
No selectivo Parte de la columna se pierde
REQUERIMIENTOS CROMATOGRÁFICOS
USO DE COLUMNAS CAPILARES
INYECCIÓN SPLITLESS U ON‐COLUMN
USO DE INSERTOS CON RELLENO
USO ACONSEJADO DE RETENTION‐GAP
USO DE COLUMNAS DE BAJO SANGRADO
ACONDICIONAMIENTO APROPIADO DE LAS COLUMNAS
APLICACIÓN DE PROCEDIMIENTOS DE CLEAN‐UP
MANTENIMIENTO FRECUENTE DEL SISTEMA
INTERFASE A Tª CTE. (ENSANCHAMIENTOS DE BANDA)
PROBLEMAS DE TEMPERATURA (INYECTOR, FUENTE...)
SISTEMAS DE IONIZACIÓN : ACOPLAMIENTO GC‐MS
IMPACTO ELECTRÓNICO (EI)

COMPUESTOS
VOLÁTILES
IONIZACIÓN QUÍMICA (CI)
DESORCIÓN POR CAMPO (FD)
BOMBARDEO CON ÁTOMOS RÁPIDOS (FAB)
COMPUESTOS SECONDARY ION MASS SPECTROMETRY (SIMS)

NO VOLÁTILES
DESORCION POR PLASMA (PD)
DESORCIÓN LÁSER ASISTIDA POR MATRIZ (MALDI)
ELECTROSPRAY (ESI)
SISTEMAS DE IONIZACIÓN: IMPACTO ELECTRÓNICO
EI (Electron Impact)
Schematic representation of an electron ionization ion source. M represents neutral

molecules; e-, electrons; M+· , the molecular ion; F+, fragment ions; Vacc,
accelerating voltage; and MS, the mass spectrometer analyzer.
RELACIÓN ENTRE LA ENERGÍA DE LOS ELECTRONES
UTILIZADOS Y LA CORRIENTE IONICA TOTAL
CONSEGUIDA
Corriente
iónica total
ITOTAL
POTENCIAL DE
IONIZACIÓN
eV
(Nota: >10 eV para ionizar la
mayoría de los compuestos
organicos)
10 eV 70 eV
RELACIÓN ENTRE LA ENERGÍA DE LOS ELECTRONES
UTILIZADOS Y LA INFORMACIÓN CONSEGUIDA
LENTES DE ACELERACIÓN:
Serie de electrodos de carga
Representación esquemática de una fuente de Impacto Electrónico
FILAMENTO: Fuente negativa creciente usados
de electrones (70 eV) para acelerar los iones y
enfocarlo hacia el analizador
about every 1/1000
con una energía cinética
molecule is ionized
constante
the sample is heated
up until a sufficient only cations
vapour pressure is
obtained
REPELLER:
PLACA DE SALIDA: las
Electrodo cargado
rendijas eliminan las
positivamente
ANODO:
sample pressure in the ion Usado
source junto con moléculas de portador
utilizado para is about 10 -5 torr
el filamento para producir y las moléculas no
impulsar los iones
la corriente de electrones ionizadas
positivos fuera de la
fuente de ionización
e- + [M]  [M]+. + 2e-
[M]+.  [F1]+ + [F2]+ + … + [N].
ESPECTRO DE MASAS
% Ab
B-C+
A-B+
A+ B+
A-B-C+
C+
m/z
E
A+ + BC
Uno de los factores Poco Abundante
principales que regulan la
abundancia relativa de los AB+ + C
iones producidos por Más Abundante
fragmentación es la
estabilidad de los
productos de ABC+
descomposición Ion Precursor
Entalpía de formación baja conduce a

fragmentos abundantes
Abundance tR = 10.48
3600000 Full scan
3200000 Chlorpyriphos
2800000
2400000 S
2000000 Cl N OP(OCH2CH3)2
1600000
1200000 Cl Cl
800000
400000
0
6.00 7.00 8.00 9.00 10.00 11.00 12.00 13.00 min
Abundance
280000 97
197
240000
200000
160000 314
120000
258
65 125 286
80000 213
43
169
40000 244
81 144 351
0 111
40 80 120 160 200 240 280 320 m/z
ESPECTRO DE LA MUESTRA
97 S
Abundance
197 Cl N OP(OCH2CH3)2
8000
6000 314
Cl Cl
4000 258
65 125
43 213 286
2000
169 244 351
0
40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 m/z
FIT = 99%
ESPECTRO DE BIBLIOTECA
Abundance 197 314
8000 97
6000
258
286
4000
212
2000 244 351
0
40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340
m/z
Muestra t30W 1.95 min

Abundancia
2.2e+07
CH3
1.8e+07
H3C O H
1.4e+07
CH3
1e+07
Abundancia
6000000
TBA 59 [M-CH3] TBA
8000 2000000
3.00 3.40 3.80 4.20 4.60 5.00 5.40 5.80 Tiempo
6000
4000
2000 31 41 57
27 34 37 45 50 53
0
10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80
m/z
Abundancia
59
8000 Espectro de masas de librería
6000
4000 31
41
2000
27
18 38 55
24 45 50 74
0
10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80
m/z
BASES DE DATOS DE ESPECTROS COMERCIALES
• NIST (1996): Contiene 75.000 espectros (62.000 compuestos) de interés

medioambiental.
• Wiley (6ª Ed): Contiene 275.000 espectros.
• Stan Pesticide Library: contiene 340 espectros de pesticidas.
• Pfleger Drug Library: Contiene espectros de 4370 compuestos.
CLORPIRIFOS
FIT: 650
INTERFERENCIA DEL
RUIDO DE FONDO
BACKGROUND
Fuentes:
• Sistema cromatográfico
• Analizador
• Muestras
CLORPIRIFOS
FIT: 999
Contaminantes habituales:
• Sangrado de columna (polisiloxanos)
• Sangrado del septum (polisiloxanos)
• Rotura del septum (dimetil polisiloxano)
• Aceite de la bomba de difusión.
• Plásticos (ftalatos)
• Hidrocarburos (fluido de la bomba)
Espectros típico de interferencias procedentes del aceite de la bomba
de vacío
Espectros típicos de ftalatos procedentes
de los plásticos
FENITROTION METIOCARB
FTALATO
FENITROTION METIOCARB
VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE EI-MS
CONSECUENCIAS
VENTAJAS
Método reproducible Identificación por bibliotecas de espectros

Abundante fragmentación Abundante información estructural
Eficiencia de ionización alta Método sensible
Ionización no selectiva Todas las moléculas vaporizadas pueden ionizarse
DESVENTAJAS
Solo iones positivos No ideal para algunas clases de compuestos

Sólo muestras volátiles Limitada a compuestos de bajo peso molecular (<600 Da)
Ionización no selectiva Todas las molec. vaporizadas contribuyen al espectro de masas
Elevada energía Posible ausencia del ion molecular
SISTEMAS DE IONIZACIÓN: IONIZACIÓN QUÍMICA
• Un gas reactivo (metano, amoniaco, isobutano, acetonitrilo) es introducido

en la fuente iónica de forma controlada.
• El gas reactivo es bombardeado con electrones (150‐200eV) generándose

una serie de especies nuevas (iones y electrones de baja energía).
• Las condiciones de la fuente (presión, temperatura y energía electrónica)

controlan el tipo y proporción de las nuevas especies generadas.
• Las moléculas de la muestra interaccionan con los iones del gas reactivo y se
ionizan.
• El sistema puede estar configurado para detectar iones positivos (PCI) o iones
negativos (NCI).
IONIZACIÓN QUÍMICA POSITIVA
Formación de cationes primarios e- + [R]  Cp+ + 2e-

Formación cationes secundarios Cp+ + [R]  [C]1+ + [C]2+ +….[C]n+
Reacciones ion molécula
Transferencia protónica C+ + [M]  [M+H]+ + [C-H]
Abstracción de hidruros C+ + [M]  [M-H]+ + [C+H]
Intercambio de carga C+ + [M]  [M]+. + C
Formación de aductos C+ + [M]  [M+C]+

SISTEMAS DE IONIZACIÓN: IONIZACIÓN QUÍMICA POSITIVA
EI
[M]+
[M+1]+
PCI
AUTO‐PCI
Transferencia protónica [M]+. + [M]  [M+H]+ + [M-H].
Fragmentación [M+H]+  [M+H-X]+ + [X]
Formación de dímeros [M+H]+ + [M] [2M+H] +
Si la presión del gas reactivo es baja y la de las moléculas de la muestra es alta.
Se obtienen espectros mezcla de EI y CI.

AUTO-PCI
182 430
139
125
103
PCI 430
182
139
125
182
EI
139
103
125 M=429
Sensibilidad (según compuestos)
¿Cuándo usar CI? Selectividad (muestras complejas)
Confirmación de pesos moleculares
Metano
Amoniaco
¿Qué gas reactivo utilizar? Isobutano
Acetonitrilo
Tª de la fuente
¿Qué parámetros afectan la CI? Presión de gas reactivo
Energía de los electrones
Abundance
¿Cuándo usar CI?
276
GC-MS/EI Confirmación de pesos
140000
moleculares
120000
100000
80000 262
60000
40000 194
125
20000 43
79 93 152 177
233
319
109
212 249
0
40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 m/z
Abundance
320 [M+H]+
GC-MS/PCI
44000
36000 M = 319
28000
20000 [M+C2H5]+
12000 180 348
[M+C3H5]+
4000 360
375 398 438 465 488
0
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500 m/z
¿Cuándo usar CI? Mayor selectividad
286 96
EI EI
EI/CI de procimidona y me-clorpy.
283
324 284
PCI PCI
¿Cuándo usar CI?
Mayor sensibilidad
¿Qué gas reactivo utilizar?
REACCIONES DE TRANSFERENCIA PROTÓNICA EN PCI
C+ + M  [M+H]+ + [C-H]
 H = AP (gas reactivo) – AP (molécula de la muestra)

Gas reactivo AP (kJ/mol) Molécula AP (kJ/mol)
H2 423 HCl 538

Fragmentación
CH4 550 C 2H 4 680

H 2O 697 C 6H 6 759
CH3OH 761 C2H5NO2 773
i-C4H10 823 C6H5 CH3 794
NH3 854 (CH3)2NH 923
CH4 H
CH4=H
550= –550
923– =794
-373
= -244
kJ/mol
kJ/mol MayorExotérmica
fragmentación
H3 = H
NH3 NH 854=–854
923–=794
-69=kJ/mol
+60 kJ/mol Menor
Endotérmica
fragmentación
PCI CON METANO: Mayor fragmentación, formación de aductos característicos
FORMACION DE IONES DEL GAS REACTIVO:
CH4 + e‐  CH4+. , CH3+. , CH2+. , CH+. + 2e‐ m/z=16, 15, 14
CH4+. + CH4  CH5+ + CH3. m/z=17
CH3+. + CH4  C2H5+ + H2 m/z=29
CH2+. + CH4 ‐‐‐‐‐> C2H4+ + H2 m/z=28
CH2+. + CH4 ‐‐‐‐‐> C2H3+ + H2 + H. m/z=27
C2H3+ + CH4 ‐‐‐‐‐> C3H5+ + H2 m/z=41
FORMACION DE IONES DE LA MUESTRA:
CH5+ + M  [M‐H] + + CH4 m/z=M+1
C2H5+ + M  [M‐ C2H5]+ m/z=M+29
C3H5+ + M  [M‐ C3H5]+ m/z=M+41
PCI CON METANO
Abundance
320 [M+H]+
44000 GC-MS/PCI
36000 Pyrimethanil PRESENCIA DE ADUCTOS CARACTERÍSTICOS

M = 319
28000
POSIBLE FRAGMENTACIÓN
20000 [M+C2H5]+
180 348
12000 [M+C3H5]+
360
4000
0 375 398 438 465 488
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

m/z
PCI CON OTROS GASES REACTIVOS
ISOBUTANO:
i-C4H10 + e -----> i-C4H10+. + 2e
i-C4H10+. + i-C4H10 ------> i-C4H9+ + C4H9 +H2
AMONIACO:
NH3 + e -----> NH3+. + 2e
NH3+. + NH3 ------> NH4+ + NH2. m/z=18
NH4+ + NH3 --------->N2H7+ m/z=35

METANO
N-nitroso-di-n-propilamina
M=130
ISOBUTANO AUSENCIA DE FRAGMENTACIÓN

DÍMEROS (aminas, alcoholes)
AMONIACO
¿Qué parámetros afectan la CI?
INSTRUMENTACIÓN
GAS
REACTIVO
INSTRUMENTACIÓN
• El diseño de la fuente varía con respecto a la de EI, por los requerimientos de

la técnica
• La fuente opera a alta presión (0.1‐2 Torr) con un vacío exterior de 10‐6 Torr
 Rendijas de salida más pequeña.
• Por la alta presión de la fuente los electrones de 70 eV penetran poco en la

misma  Es necesario electrones de mayor energía (150‐200eV)
• Es necesario utilizar bombas de difusión o turbo‐moleculares, con

velocidades de bombeo en el rango de 1000‐1500 L/sg, que permitan
mantener el vació en el analizador.
• Parámetros como voltaje del “repeller”, presión de gas reactivo y

temperatura de la fuente afectan a la sensibilidad y al espectro en PCI.
INSTRUMENTACIÓN
• Repeller (7‐10V) Se ajusta para obtener el máximo número de iones de gas

reactivo. Si el voltaje del repeller es muy bajo cationes con poca abundancia
pueden no estar presentes en el PCI espectro.
• La presión de la fuente iónica en PCI debe ajustarse para obtener iones

quasimoleculares intensos. Si la presión es baja el espectro se asemeja a un
espectro EI.
• La temperatura de la fuente también afecta al espectro en PCI. Un aumento

de la temperatura reduce la abundancia de los cationes de mayor masa y
aumenta la abundancia de los de menor masa.
SISTEMAS DE IONIZACIÓN: IONIZACIÓN QUÍMICA NEGATIVA
A la presión de 1 Torr a la que se trabaja en CI, la formación de iones

negativos puede ser también un proceso muy eficiente.
Los procesos por los cuales se pueden generar iones negativos son:
Compuestos con dobles Captura Electrónica Amortiguador o gas

enlaces conjugados o moderador. Actúa
- -
heteroátomos capaces e + M + B M + B absorbiendo el exceso
de capturar electrones de energía
Ionización química mediante iones reactivos

- -
e + R R
- -
R + M  [M-H] + RH Abstracción protónica
La energía que se genera se fija normalmente en la molécula B del gas

moderador, o en el enlace R-H de la especie neutra formada, por lo que
suele originarse muy poca fragmentación en este tipo de procesos
Captura electrónica e - + M + B  M- + B
La formación de M- requiere que la molécula tenga una afinidad

electrónica positiva: compuestos con sistemas  altamente conjugados
(anillos policíclicos aromáticos, especies policarbonílicas) anillos
aromáticos con sustituyentes electronegativos (nitro, ciano,
trifluorometil, carbonilo), dos o más halógenos en anillos aromáticos,
hidrocarburos polihalogenados)
Abstracción protónica R- + M  [M-H]- + RH
H = AP (M) – AP (R- )
La reacción se ve favorecida cuanto menor sea la afinidad protónica

(AP) de la muestra y mayor sea la del ion reactivo.
SENSIBILIDAD Y SELECTIVIDAD
6000
Agua de mar contaminada
5500 EI - SIM (25 ppt)
5000
NCI – SIM (CH4)
4500
4000 CN Cl Cl
Cl Cl Diclofluanida
3500
S
O N
3000
Cl CN C8H17
2500
Cl
2000
Sea-nine
1500 Irgarol 1051
Clortalonil
1000
TCMTB
500
0
5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.00 11.00 12.00 13.00 14.00 15.00
DIFERENCIACIÓN DE ESPECTROS
Diferencia: Pérdida
de la cadena lateral
DIFERENCIACIÓN DE ESPECTROS
IDENTIFICACIÓN DE COELUCIONES
74
9000
181
SAMPLE
7000 41
5000 251
57 214
89
3000 106 126 143 164 199
GC-MS (EI)
236 270
1000
297 334 355
1700000 20 40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340
74
1500000 9000 43 LIBRARY

7000
1300000 5000
59 143 227
3000 27 101 270
125 185200 242
1000
1100000
10.82 20 40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340
900000 Hexadecanoic acid, methyl ester

Match Quality: 93
700000
500000
300000
9.50 10.00 10.50 11.00 11.50 12.00

252
75000
65000
1700000
GC-MS (PCI)/CH3 55000 271
45000
1500000 35000
216
25000
1300000 280
15000 182 299
237
1100000 5000
292 231
10.82
60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300
900000
700000
500000
300000
9.50 10.00 10.50 11.00 11.50 12.00

[M+H]+
252
GC-MS (PCI)/CH3 75000
65000
55000
45000
200000 Ion 252.00 35000
216 [M+29]+
25000
150000 10.80 15000 182 280 [M+41]+
100000 5000 292
0 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300
50000
10.00 10.20 10.40 10.60 10.80 11.00 11.20 11.40 11.60 11.80
+
271 [M+H]
60000
50000
200000 Ion 271.00 40000
10.83 30000 [M+29]+
150000
20000 299 [M+41]+
100000
10000
237
311
50000 0 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300
10.00 10.20 10.40 10.60 10.80 11.00 11.20 11.40 11.60 11.80
GC-MS (EI)
74
65000
60000
Hexadecanoic acid, methyl ester
55000
50000
43 Match Quality: 95
45000
87
50000
Ion 270 40000
35000 55
30000
25000
40000 20000
15000
30000 143 227 251 270
10000 101 181 201
5000 297
20000 0
40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300
10000
10.00 10.20 10.40 10.60 10.80 11.00 11.20 11.40 11.60 11.80 12.00 12.20 12.40 12.60 12.80
181
75000 -Cl
65000
-Cl Cl CH3
55000
Ion 251 -CH3 251 H
50000 45000 N
35000 216
40000
25000 65 89
30000 51 Cl
15000 106 152
20000 125 166
5000 37 235 270 355
0 40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340
10000
10.00 10.20 10.40 10.60 10.80 11.00 11.20 11.40 11.60 11.80 12.00 12.20 12.40 12.60 12.80
VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE CI‐MS
CONSECUENCIAS
VENTAJAS
Ionización “blanda” Presencia de ion molecular (PCI)

Confirmación identidad
Formación de aductos (e.g. at M+17, M+29 o M+41 para CH4)
Menor fragmentación Señales más intensas: Mayor sensibilidad
Ionización selectiva La selección del gas reactivo determina la selectividad
Uso de metano Ioniza casi cualquier molécula
Especificidad NCI da métodos muy selectivos sin interferencias de matriz
DESVENTAJAS
Menor fragmentación Escasa información estructural

Ionización selectiva No todas las moléculas ionizan (NCI)
INTRODUCCIÓN DE LA MUESTRA: ACOPLAMIENTO LC‐MS
Es necesario eliminar la fase móvil (1 mL/min agua ≈ 1244 mL/min vapor a presión
atmosférica)
Sales y otros aditivos de la fase móvil son a menudo poco volátiles (fosfatos,
NaCl…)
Los analitos han de ionizarse eficientemente
ACOPLAMIENTO LC‐MS: INTERFASES
Historicas
Moving belt
Thermospray
Interfases comunes
Electrospray
APCI
Interfases especiales
Particle beam LC/MS
Continuous flow FAB
Atmospheric pressure photon ionization (APPI)
MALDI
Ambient ionization techniques
Desorption electrospray ionization (DESI)
Direct analysis in real time (DART)
Atmospheric pressure glow-discharge ionization
(APGDI)
MOVING BELT INTERFACE

LC ELUENT DEPOSITOR
(NEBULIZER)
ion
source
VAPORIZER
TO VACUUM
• Una cinta transporta el efluente de la columna hasta la fuente de ionización

• La fase móvil es eliminada por calentamiento suave y evaporación del disolvente a baja
presión en dos cámaras de vacío
• En la fuente, los analitos son desorbidos térmicamente, por evaporación instantánea en el
extremo de la cinta
THERMOSPRAY
TO ANALYZER
COLUMN FLOW
ION CONE
RESISTIVELY HEATED
INTERFACE FILAMENT
s s
M+
• El efluente de la columna es total o parcialmente evaporado mediante Tª a su paso por un capilar
calentado eléctricamente
• El vapor producido actúa como un gas de nebulización y ayuda a la desintegración de la corriente
de líquido en gotitas.
• Las gotas se someten a desolvatación a medida que atraviesan una región calentada de la interfaz
y los iones se forman a partir de analitos contenidos en la corriente de líquido por medio de
reacciones de ion‐molécula
• Se puede producir descomposición de algunos analitos térmicamente lábiles
• No es adecuado para analitos de elevado peso molecular (> 1000 Da).
• La reproducibilidad de los resultados analíticos se ve afectada por una serie de parámetros
experimentales y es a veces difícil de controlar.
• La formación de aductos puede confundir la asignación de peso molecular.
Direct Electron Ionization (Direct‐EI)
• Es una versión miniaturizada de una fuente de EI
• El acoplamiento del LC con MS se realiza de forma directa
• La fase móvil no influye la ionización por lo que no existen restricciones en cuanto a su
composición
• Es útil para velocidades de flujo muy bajas (<500 nL/min)
• Proporciona espectros informativos y reproducibles, compatibles con bases de datos
comerciales (Wiley y NIST)
ELECTROSPRAY (ESI)
ELECTROSPRAY
Drying gas
ATMOSPHERE VACUUM
500 µm i.d.
metal capillary.
Grounded
liquid sample To
0.5-5 µl/min Analyzer
3-5 KV
CHAMBER
Drying gas
• Se aplica una tensión de 3‐6 KV entre el capilar de entrada de la muestra y el contraelectrodo
• Por efecto del intenso gradiente de campo eléctrico presente, la muestra emerge del capilar
en forma de aerosol de pequeñas gotas, que adquieren una carga eléctrica muy elevada.
• Al avanzar estas gotas por la cámara de desolvatación, llega un momento en que su tamaño
es tan pequeño, que las fuerzas culombianas de repulsión entre los iones con múltiple carga
generados en su interior son capaces de vencer la tensión superficial, momento en que los
iones escapan a la fase gaseosa denominándose a este proceso evaporación iónica
• Esta técnica crea especies iónicas en el disolvente
IONIZACIÓN QUÍMICA A PRESIÓN ATMOSFÉRICA (APCI)
APCI INTERFACE
N2
SHEATH GAS HEATER
500 ºC
LC
ELUENT
NEBULIZER GAS CORONA DISCHARGE

NEEDLE
4-6 KV N2
• En APCI las gotas de disolvente viajan a través de un vaporizador (Tª entre 350 y 550 °C)
donde el disolvente se evapora.
• Posteriormente este vapor se ioniza mediante una fuerte descarga en la fuente que produce
un plasma de iones reactivos del disolvente que origina el mecanismo de ionización de la
muestra por ionización química (CI), normalmente por adición o cesión de un protón.
• Este mecanismo, que coexiste con el de evaporación iónica, produce abundantes iones
(M+H)+ positivos, y (M‐H)‐ negativos.
ATMOSPHERIC PRESSURE PHOTOIONIZATION (APPI)
AMBIENT IONIZATION TECHNIQUES
DESORPTION ELECTROSPRAY IONIZATION (DESI)
• El análisis se realiza en muestras sin pretratamiento. No requiere acoplamiento a LC por lo

que se obtienen métodos simples y económicos
• Un spray de microgotas cargadas a alta velocidad se dirige a la muestra, provocando la
desorción de los analitos en la forma de sub‐m gotas cargadas
AMBIENT IONIZATION TECHNIQUES
DIRECT ANALYSIS IN REAL TIME (DART)
• Se generan iones y especies metaestables mediante una descarga luminiscente que ocurre en
un compartimento separado de la zona de desorción de la muestra / ionización
• Las partículas cargadas se eliminan en un compartimiento de electrodos perforados, y la
especie metaestable pasa a través de él.
• El gas se calienta con el fin de termo‐desorber los analitos diana de la superficie de la
muestra, el electrodo de rejilla en la salida de la sonda de DART sirve como un reflector de
iones , lo que impide ion‐ion interacciones que pueden resultar en la pérdida de señal.
• Finalmente los analitos son ionizados por las especies gaseosas metaestables.
• Transferencia de protones a partir de estas especies da como resultado la formación de iones
[M+H]+ y los electrones formados a partir de interacciones de la superficie metaestables
inducen la formación de moléculas desprotonadas de [ M ‐ H ]
ESPECTROS EN API
EFECTO DEL
VOLTAJE DE
Ranitidine FRAGMENTACIÓN
XIC (m/z 315.1  0.1) 160 V EN LA SEÑAL
315.1491 CROMATOGRÁFICA
Intensity, cps
Intensity, counts
1.6e6 8.5e5 Y EN EL ESPECTRO
1.2e6 6.5e5
7.5e5 4.5e5
3.5e5 2.5e5
2 6 10 14 18 22 26 30 190 V 80 160 240

m/z, amu
320 400
Time, min
Intensity, counts 315.1491
Intensity, cps
1.6e6 4.8e5
1.2e6 3.2e5
7.5e5 270.0907
1.6e5
3.5e5 230 V 80 160 240 320 400
2 6 10 14 18 22 26 30
Time, min m/z, amu
Intensity, cps
224.0970
Intensity, counts
1.6e6 1.4e5
125.0048 270.0901
1.2e6 1.0e5 176.0480
7.5e5 6.0e4
315.1487
3.5e5
2.0e4
2 6 10 14 18 22 26 30 80 160 240 320 400
Time, min m/z, amu
Cl N CH 3
Diuron
LC-MS Cl O
N
CH 3
[M+H]+ 215
Cl N CH3 80 V
N
O CH3
HO
[M+H]+ 215
Cl N CH3
N
O CH3 142
180 V
HO
106

Introduccion Fuentes

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

Introduccion Fuentes

Cargado por

Información del documento

Descripción original:

Título original

Derechos de autor

Formatos disponibles

Compartir este documento

Compartir o incrustar documentos

Opciones para compartir

¿Le pareció útil este documento?

¿Este contenido es inapropiado?

Copyright:

Formatos disponibles

Introduccion Fuentes

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

Avances en espectrometría de masas orgánica

Profa. Ana Agüera López ([email protected])

Se basa en la generación de iones a partir de

Un espectro de masas es un gráfico de barras verticales, en el que cada barra

- Asignación del ion molecular

1. Aprecie el aspecto general del espectro para observar si es interpretable

Cl-Br X X+2 X+4 X+6 X+8 X+10

ClBr 76.6 100 24.4

ClBr2 43.8 100 69.9 13.7

ClBr3 26.1 85.1 100 48.9 8.0

M–1 pérdida de radical hidrógeno M - H

DEPENDEN DE: - VOLATILIDAD

MOLECULAR EFFUSION DIRECT INTRODUCTION

• Utilizado en GC‐MS con columnas empacadas

IMPACTO ELECTRÓNICO (EI)

DESORCIÓN POR CAMPO (FD)

BOMBARDEO CON ÁTOMOS RÁPIDOS (FAB)

COMPUESTOS SECONDARY ION MASS SPECTROMETRY (SIMS)

DESORCIÓN LÁSER ASISTIDA POR MATRIZ (MALDI)

Schematic representation of an electron ionization ion source. M represents neutral

e- + [M]  [M]+. + 2e-

[M]+.  [F1]+ + [F2]+ + … + [N].

Entalpía de formación baja conduce a

Muestra t30W 1.95 min

• NIST (1996): Contiene 75.000 espectros (62.000 compuestos) de interés

VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE EI-MS

Método reproducible Identificación por bibliotecas de espectros

Solo iones positivos No ideal para algunas clases de compuestos

• Un gas reactivo (metano, amoniaco, isobutano, acetonitrilo) es introducido

• El gas reactivo es bombardeado con electrones (150‐200eV) generándose

• Las condiciones de la fuente (presión, temperatura y energía electrónica)

Formación de cationes primarios e- + [R]  Cp+ + 2e-

Transferencia protónica C+ + [M]  [M+H]+ + [C-H]

Abstracción de hidruros C+ + [M]  [M-H]+ + [C+H]

Intercambio de carga C+ + [M]  [M]+. + C

Formación de aductos C+ + [M]  [M+C]+

Transferencia protónica [M]+. + [M]  [M+H]+ + [M-H].

Fragmentación [M+H]+  [M+H-X]+ + [X]

Formación de dímeros [M+H]+ + [M] [2M+H] +

Si la presión del gas reactivo es baja y la de las moléculas de la muestra es alta.

Se obtienen espectros mezcla de EI y CI.

 H = AP (gas reactivo) – AP (molécula de la muestra)

H2 423 HCl 538

CH4 550 C 2H 4 680

36000 Pyrimethanil PRESENCIA DE ADUCTOS CARACTERÍSTICOS

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

NH4+ + NH3 --------->N2H7+ m/z=35

ISOBUTANO AUSENCIA DE FRAGMENTACIÓN

• El diseño de la fuente varía con respecto a la de EI, por los requerimientos de

• Por la alta presión de la fuente los electrones de 70 eV penetran poco en la

• Es necesario utilizar bombas de difusión o turbo‐moleculares, con

• Parámetros como voltaje del “repeller”, presión de gas reactivo y

• Repeller (7‐10V) Se ajusta para obtener el máximo número de iones de gas

• La presión de la fuente iónica en PCI debe ajustarse para obtener iones

• La temperatura de la fuente también afecta al espectro en PCI. Un aumento

A la presión de 1 Torr a la que se trabaja en CI, la formación de iones

Compuestos con dobles Captura Electrónica Amortiguador o gas

Ionización química mediante iones reactivos