La Celulosa

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CELULOSA

Las maderas están compuestas principalmente de tres polímeros


estructurales, la lignina, la celulosa y la hemicelulosa. La lignina es un
heteropolímero fenólico sin una composición estereoquímica regular,
con una función protectora de los otros dos componentes polisacáridos,
la celulosa y la hemicelulosa (colectivamente llamados holocelulosa) .La
celulosa es el componente más abundante que existe sobre la tierra, es
producida por las plantas formando parte de su pared celular. En
menores proporciones, es sintetizada también por algunos otros
organismos como bacterias, como las del género Acetobacter,
Agrobacterium, Rhizobium y Sarcina (entre otras) , y algunos
representantes del phyllum Chordata (o tunicados), que son un tipo de
animales marinos .La celulosa es uno de los materiales más utilizados
desde tiempos remotos, y en la actualidad es la fuente de combustibles
orgánicos, compuestos químicos, fibras y materiales necesarios para
cubrir necesidades humanas tales como el papel, la pulpa, las maderas,
etc. . Se estima que alrededor de 180 billones de toneladas de celulosa
son producidas por las plantas anualmente, por lo que constituye una de
las fuentes de carbono renovables más importantes que hay sobre la. El
contenido de celulosa en las plantas depende del grupo taxonómico al
que pertenezcan y oscila entre 35 y 50% en peso seco. La celulosa se
encuentra embebida en una matriz compuesta de un número de
moléculas (pectinas, proteínas, almidón y lípidos), y la hemicelulosa y la
lignina que comprenden del 20 al 35%, y del 5 al 30% en peso seco,
respectivamente. Estructura química de la celulosa. La celulosa es un
biopolímero lineal compuesto por moléculas de glucosa unidas entre sí
por enlaces glucosídicos tipo 1-4. Los extremos del polímero son
asimétricos, los que contienen el carbono anomérico libre de la molécula
de glucosa pueden reducir a un número de oxidantes (como el cobre,
etc.), y se conocen como extremos reductores. Mientras que el C4 con
un radical hidroxilo libre es el extremo no reductor. El arreglo de las
moléculas de celulosa en la pared celular de las plantas es jerárquico. La
configuración tridimensional es estabilizada mediante interacciones de
van der Vaals, y consiste de 30 molécula lineales, de entre 10,000 y
hasta 14,000 moléculas de glucosa, que forman una estructura conocida
como protofibrilla; ésta a su vez se asocia con otras protofibrillas para
formar la fibrilla de celulosa. Por último, las fibrillas se ensamblan entre
ellas para formar las fibras de celulosa que son entrelazadas mediante
interacciones no covalentes con la hemicelulosa y la lignina . Dentro de
las fibras de celulosa se distinguen diferentes regiones que van desde
las más organizadas (región cristalina) y hasta las desordenadas (región
amorfa) .La característica cristalina de la celulosa se debe a que los
componentes moleculares de las microfibrillas están organizados muy
compactamente mediante puentes de hidrógeno. Usando difracción por
rayos X se ha determinado que una unidad básica de celulosa cristalina
(conocida como tipo I) está formada por ocho moléculas de celobiosa
(dímeros de glucosa) arregladas en capas de moléculas paralelas
mediante interacciones débiles (ínter e intramoleculares) entre los
átomos de glucosas adyacentes. Aunque existen otros tipos de celulosas
cristalinas, la más importante es la celulosa tipo II, que se obtiene de la
regeneración de la celulosa nativa después de haber sido tratada con
bases fuertes para solubilizarla. La naturaleza estructural de la celulosa
cristalina la vuelve insoluble en la mayoría de los solvensolventes,
incluyendo el agua, y evitaque sea atacada por enzimas microbianas. A
este fenómeno se le conoce como recalcitrancia . Las regiones menos
ordenadas se conocen como celulosa para-cristalina, y las regiones
amorfas están compuestas de estructuras secundarias, que se
encuentran en menor proporción dentro del arreglo molecular de la
celulosa, tales como microfibrillas en formas de rosca o vueltas, o
regiones vacías que dan forma a microporos superficiales, grandes
hoyos y capilares. La celulosa amorfa por estas razones es menos
compacta que la región cristalina, por lo que tiene la capacidad de
absorber moléculas de agua que le confieren gran flexibilidad y cierta
solubilidad. La hemicelulosa. La hemicelulosa por su parte, es el
segundo polisacárido más abundante en la naturaleza. A diferencia de la
celulosa su estructura no es homogénea. Está formada de pentosas
(xilosa y arabinosa), hexosas (glucosa, galactosa y manosa) y
compuestos fenólicos (como el ácido ferúlico y p-cumárico). Las
hemicelulosas son polidispersas (lo que significa que tienen un grado de
polimerización variable) y altamente ramificadas, con sustituyentes de
diferentes tipos . La frecuencia y composición de las cadenas depende
de cada especie vegetal en particular y del método con el que fueron
extraídas. Se han identificado dos tipos de hemicelulosa: en las maderas
duras ésta existe mayormente en forma de xilanos, en las que los
esqueletos homopoliméricos del xilano son cadenas de residuos de D-
xilopiranosa con uniones 1,4. Mientras que las maderas suaves
contienen principalmente glucomanano. Se considera que las moléculas
de hemicelulosa se encuentran altamente entrecruzadas mediante
puentes diferúlicos formando una red en la que se encuentran
embebidas las microfibrillas de celulosa al tiempo que proteínas de la
pared celular también forman puentes con el ácido ferúlico, dándole
gran resistencia e insolubilidad a toda la estructura. Estas propiedades,
junto con la lignina, contribuyen a la elevada recalcitrancia de los
materiales celulósicos.

ORGANISMOS DEGRADADORES DE CELULOSA


El material celulósico es particularmente atractivo como fuente de
carbono y energía debido a su bajo costo y su gran abundancia. Sin
embargo, debido a su carácter recalcitrante solamente ciertos
organismos (como bacterias y hongos) producen las enzimas necesarias
para utilizarlo. Se han identificado dos importantes grupos con
capacidades celulolíticas. El primero de ellos es el grupo anaeróbico, que
comprende especies bacterianas y fúngicas habitantes de aguas
residuales y el rumen y tracto intestinal de los animales herbívoros y
algunos insectos como escarabajos y termitas. Como ejemplos
bacterianos pertenecientes a este grupo, entre otros, se encuentran los
géneros Clostridium y Ruminococcus. Mientras que algunos hongos
identificados son: Anaeromyces mucronatus, Caecomyces communis,
Cyllamyces aberencis, Neocallimastix frontalis, Orpinomyces sp. y
Piromyces sp. . El segundo grupo incluye especies aeróbicas habitantes
de los suelos, especialmente los boscosos, tales como las bacterias
Cellulomonas (Elberson et al., 2000) y Streptomyces, y los hongos
basidiomicetos responsables de la pudrición de la madera.

Sistemas celulolíticos. Los microorganismos encargados de la


degradación de sustratos celulósicos producen múltiples enzimas que
actúan en sinergismo directamente sobre la celulosa .Un tipo de
enzimas de bacterias anaeróbicas actúan a través de un complejo
multimérico asociado a la célula, en el que una proteína no catalítica
sirve de andamio a lasvarias subunidades enzimáticas mediante
interacciones
proteína-proteína de tipo cohesina- dockerina. A este complejo se le
conoce como celulosota (Bayer et al., 2004). Por otra parte, las celulasas
de muchas otras bacterias aeróbicas y las fúngicas, son solubles y
actúan de forma independiente (Ng, 2004). Las celulasas son glicosil
hidrolasas, y utilizan dos mecanismos de hidrólisis del enlace glucosídico
que generan dos posibles configuraciones estereoquímicas finales
(Figura 3). Un tipo de enzimas llevan a cabo una reacción en la que el
carbono anomérico mantiene su posición __ (mecanismo de retención) y
otro tipo en la que se pierde (mecanismo de inversión) (Withers, 2001).
Las glicosil hidrolasas se clasifican en base a su secuencia de
aminoácidos. Este tipo de clasificación, por familias, permite identificar
características estructurales de las enzimas, inferir su mecanismo de
acción y determinar relaciones evolutivas entre ellas (Henrissat &
Romeu, 1995). De acuerdo al sitio en el que cortan la fibrilla de celulosa
se dividen en tres grandes grupos. Endocelulasas. También
denominadas endoglucanasas. Éstas son glucanohidrolasas que se
agrupan en las familias 5, 6, 8, 9 y 12 principalmente, de las glicosil
hidrolasas (Baldrian & Valaskova, 2008; Goedegebuur et al., 2002;
Henrissat & Bairoch, 1993). Las endocelulasas actúan de forma azarosa
sobre las regiones de celulosa amorfa en el interior del polisacárido,
generando oligosacáridos de diferentes tamaños y, por lo tanto, nuevas
cadenas terminales.
Exocelulasas. Son también conocidas como exoglucanasas, y actúan
procesivamente en los extremos terminales del polímero liberando ya
sea moléculas de glucosa, las glucohidrolasas (1,4-_-D-glucan
glucohidrolasa; o celobiosa, las celobiohidrolasas
glucosidasas. Son enzimas _-D-glucósido glucohidrolasas (EC 3.2.1.21),
pertenecientes a las familias 1 y 3 de las glicosil hidrolasas y se
encargan de degradar la celobiosa a monómeros de glucosaPara la
efectiva digestión de la celulosa las enzimas fúngicas han evolucionado
mecanismos sinérgicos que les permiten contender con su recalcitrancia
(Henrissat et al., 1985). Este fenómeno se refiere a la observación de
que la actividad máxima de degradación de la celulosa no se da por
enzimas individuales, sino por mezclas de tres o más
enzimas .Sinergismo modular. Muchas celulasas presentan una
estructura modular. Típicamente, un péptido no catalítico comprende el
módulo con la función de unión a carbohidratos (conocido como CBM).
Éste se une mediante una bisagra flexible de aminoácidos hidroxilados
(Ser y Tre) y altamente glicosilados, al siguiente módulo en donde se
encuentra el sitio catalítico de la enzima, aproximándolo íntima y
prolongadamente al sustrato y potenciando su acción (Figura 4) (Linder
& Teeri, 1996). También se conocen enzimas compuestas de varios CBM
y módulos catalíticos. Los CBM se clasifican a su vez, en familias según
su secuencia de aminoácidos, y los fúngicos mayoritariamente
constituyen la familia. Los CBM contienen desde 30 y hasta 200
aminoácidos, localizados hacia los extremos carboxilo o aminoterminal,
aunque ocasionalmente se encuentran posicionados en el centro de la
cadena polipeptídica. A pesar de que cada familia de CBMs tiene
características únicas se sabe que su afinidad por la celulosa se debe en
parte a su superficie planar compuesta de aminoácidos aromáticos que
le proporcionan cualidades hidrofóbicas (Hilden & Johansson, 2004). Se
sabe también que mediante un mecanismo no catalítico el CBM de la
endoglucanasa III de T. reesei altera la estructura de la celulosa
cristalina (Xiao et al., 2001). Otra evidencia del papel del CBM en la
modificación de la estructura de la celulosa, es que sus homólogos en
plantas, las expansinas (involucradas en la expansión de la pared celular
durante el crecimiento), tienen actividades no hidrolíticas sobre las
interacciones entre la celulosa y la hemicelulosa.

El siguiente nivel de sinergismo ocurre entre las diferentes enzimas


secretadas al medio externo. Aunque los mecanismos que estas enzimas
utilizan para potenciar su acción son controvertidos se han propuesto
diferentes modelos (Valjamae et al., 1998), de los que sobresalen los
siguientes: Sinergismo exo-endo. En éste las endoglucanasas inician el
ataque de la molécula en los múltiples sitios internos de las regiones
amorfas de la fibrilla y crean extremos terminales para el subsecuente
ataque de las exoglucanasas. Las endoglucanasas también modifican la
estructura de la celulosa al reducir las fuerzas de cohesión entre las
fibrillas, lo que resulta en el hinchamiento de la estructura que permite
un mejor acceso a las celobiohidrolasas (Josefsson et al., 2008).
Sinergismo exo-exo. Se descubrió al analizar dos celobiohidrolasas de T.
reesei
(Cel7A/CBHI y CBHII), y observar que las actividades de las dos era
mayor que la suma de las actividades individuales (Barr et al., 1996). Se
ha descubierto que estas enzimas tienen al sitio catalítico embebido en
un túnel con sitios (desde 6 hasta 10) de unión para glucósidos. Estos
sitios de unión permiten que la enzima siga en contacto con la hebra de
glucano, aun después de la hidrólisis de la celobiosa (que es liberada del
extremo más lejano del túnel lo que resulta en una alta procesividad
(Kipper et al., 2005). El pretratamiento de celulosa con Cel7A/ CBHI (que
degrada el extremo reductor), con CBHII (que actúa sobre el no
reductor), la hace más susceptible que si se tratara con cada enzima
individualmente, debido a que la acción de la primera enzima expone
cadenas ocultas que son sustrato de la siguiente (Eveleigh, 1987). La
combinación de estas dos enzimas es tan potente que llevan a cabo la
solubilización de cristales de celulosa, a baja velocidad, aun en ausencia
de endoglucanasas (Teeri, 1997). Inicialmente, los sistemas celulolíticos
que recibieron mayor atención fueron los de organismos productores de
grandes cantidades de enzima, tales como T. reesei y Phanerochaete
chrysosporium. Este último degrada la celulosa y la hemicelulosa y es
uno de los pocos basidiomicetos que se han utilizado como modelo para
el estudio de la degradación de celulosa. Del análisis de la secuencia de
su genoma se han predicho 240 enzimas que actúan sobre
carbohidratos, de las que 40 son probables endoglucanasas, 7
celobiohidrolasas y 9 _-glucosidasas (Martínez et al., 2004). En P.
chrysosporium también ha sido detectado el sinergismo de tipo endo-
exo, en el que la endoglucanasa 28 y la celobiohidrolasa II actúan
sinérgicamente para degradar microcelulosa cristalina comercial
Actividades celulolíticas hacia la celulosa amorfa y la cristalina, y dos
tipos de xilanos han sido observadas también en otros dos
basidiomicetos de la pudrición blanca

REGULACIÓN TRANSCRIPCIONAL DE CELULASAS

El estudio de la regulación de los promotores de los genes que codifican


para estas enzimas se ha realizado en algunos hongos, e incluye
celobiohidrolasas, endoglucanasas, _-glucosidasas, endoxylanasas y _-
xylosidasas. Su expresión es regulada por tres mecanismos principales,
i) la regulación por activadores específicos, ii) por activadores
universales que controlan la expresión de más de un gen, y iii) mediante
la regulación integradora (Suto & Tomita, 2001). Se ha determinado que
la expresión de celulasas y hemicelulasas está controlada
principalmente por fuentes de carbono. En presencia de D-glucosa la
transcripción se encuentra reprimida, mientras que en ausencia de ésta
y en la presencia de celulosa la transcripción es fuertemente inducida.
Aún más, las enzimas celulolíticas pueden co-inducirse por diversos
mono y disacáridos, como soforosa, xylobiosa, lactosa, D-xylosa y L-
sorbosa

Por otro lado, la represión de la expresión por glucosa en especies de


Trichoderma y Aspergillus está mediada por los represores catabólicos
Cre1 y CreA, respectivamente, similares a Mig1 de Saccharomyces
cerevisiae (Hou et al., 2007; Murray et al., 2003). Este represor reconoce
específicamente la secuencia 5’-SYGGRG-3’ en los promotores de los
genes regulando negativamente la transcripción (Suto & Tomita, 2001).
Sin embargo, en Hypocrea jecorina (Trichoderma reesei) sólo algunas de
las principales hidrolasas (Cel7A/CBHI y XYN1) están bajo el control
directo de Cre1, y otros genes como CBHII, XYN2 y Bgl1 se regulan de
forma independiente de Cre1. En Aspergillus niger, el sistema
xylanolítico se encuentra bajo el control de XlnR, que es un regulador
transcripcional central de tipo GAL4 que, presumiblemente, no sólo es
el regulador de la expresión de más de 20 genes involucrados en la
degradación de xylano, sino también de la expresión de genes de la
degradación de celulosa (Rauscher et al., 2006). En H. jecorina, se ha
descrito que Xyr1 es un ortólogo de XlnR, con funciones similares pero
con mecanismos diferentes (Stricker et al., 2006). En un trabajo
desarrollado con el sistema de un-híbrido, se determinó que ACE II es un
activador esencial y universal para el control de la transcripción de
celulasas y hemicelulasas (Liu et al., 2004). XlnR y Xyr1, trabajan en
coordinación con por lo menos tres activadores, Ace1, Ace2 y Hap2/3/5,
sin embargo los mecanismos de activación no son del todo claros
(Schmoll et al., 2004; Wurleitner et al., 2003). Se ha propuesto un
mecanismo coordinado de XlnR y Xyr1 y los activadores, en el que la
acción combinada de los mismos regula la expresión de genes como
Xyn2, que presenta una expresión basal mediada por Hap2/3/5 y XlnR.
Aunque Xyn2 es expresado por Ace2 en condiciones de inducción, al
parecer sin asociación con XlnR (Wurleitner et al.,2003). En el caso de la
expresión de Xyn1, la actividad del complejo Xyr1/Ace1 reprime la
expresión de Xyn1 en concentraciones de glucosa y presencia de Aip
(Ace1-interacting protein). Por otro lado, en presencia de celulosa se
forma el complejo Xyr1/Xyr1 activador de Xyn1 (Rauscher et al., 2006;
Stricker et al., 2008). La búsqueda de fuentes de carbono alternas que
permitan una alta expresión de celulasas es esencial para la industria y
en la expresión heteróloga de estos genes. La lactosa es muy utilizada
debido a su bajo costo y abundancia; y los mecanismos de regulación
por lactosa han comenzado a esclarecerse. Se ha caracterizado el papel
de GAL1, una galatocinasa de Hypocrea jecorina, como activador
esencial de los genes celulolíticos en presencia de lactosa (Hartl et al.,
2007; Seiboth et al., 2004). La sobreexpresión de BGA1, un gen que
codifica para una galactosidasa extracelular, reprime la expresión de
genes celulolíticos, sin embargo, su deleción no tiene efectos en la
expresión de celulasas (Seiboth et al., 2005). Mediante bancos
sustraídos de cDNA se ha determinado que algunos genes son
expresados únicamente en presencia de celulosa, pero no con soforosa
o lactosa (Schmoll et al., 2004). Al analizar el transcriptoma de enzimas
involucradas en la degradación de biomasa, (Foreman et al., 2003),
describieron un número importante de genes que codifican para
enzimas degradadoras, pero también un conjunto de proteínas
relacionadas con el transporte, secreción y modificación de estas
enzimas, demostrando así mismo que la soforosa es mejor inductor que
la lactosa (Foreman et al., 2003).

Debido a la importancia económica de las celulasas, su regulación


durante la degradación de la biomasa ha tenido más atención. Sin
embargo, se sabe que eventos bióticos y abióticos afectan también la
expresión de estos genes. El gen Env1 es expresado en condiciones de
inducción por celulosa. Env1 codifica una proteína pequeña miembro de
la familia de dominios PAS/LOV, relacionadas con la regulación en
respuesta a la luz. Se ha observado que mutantes de H. jecorina en
env1 son incapaces de expresar celulasas, aun en condiciones de
inducción

CELULASAS EN LA INDUSTRIA ENERGÉTICA:


BIOCOMBUSTIBLES

El reto principal de la industria y la biotecnología en la producción de


combustibles es la bioconversión de la celulosa, por lo que las celulasas
han adquirido una importancia enorme en estos procesos. Para
contender con los grandes volúmenes de materiales lignocelulósicos
requeridos en la producción de etanol a niveles industriales, se hacen
necesarias enzimas con altas actividades en diferentes condiciones de
temperatura,
salinidad y pH (Sun & Cheng, 2002). En la Figura 5 se muestra un
resumen del proceso de obtención de etanol, y y a continuación se
detallan algunos pasos del proceso.
Sustratos celulósicos. La producción mundial de bioetanol en 2007 fue
de 50 x 109 millones de litros, lo que equivale a más de cuatro veces de
lo que se produjo en 2003 (Tollefson, 2008). Sin embargo, este aumento
cubre solamente el 1% de las necesidades totales de combustible.

Sin embargo, una variedad de pastos de crecimiento rápido podrían ser


una posibilidad más real mientras se desarrollan las tecnologías que
permitan el uso de otros sustratos. Las especies estudiadas hasta el
momento son: Panicum virgatum (Sarath et al., 2008; Schmer et al.,
2008), Pennisetum purpureum (Anderson et al., 2008), y Miscanthus x
giganteus (Murnen et al., 2007), este último originario del Este de Asia,
ha podido sembrarse en América y Norte y Sur de Europa. Miscanthus x
giganteus un tipo de pasto alto perenne que presenta grandes ventajas,
crece con altos rendimientos (7.41 kg/m2 [e decir, aproximadamente 30
toneladas/acre] en el Sur de Europa) en suelos poco fértiles y con
mínimos requerimientos de fertilizantes, nitrógeno, herbicidas y agua.
Su contenido de celulosa es mayor al de muchos residuos agrícolas y
semejante al de las maderas duras. Se han logrado rendimientos de
sacarificación de glucano y xilano de Miscanthus, tan altos como 90-95 y
80-85%, respectivamente, mediante el tratamiento químico conocido
como AFEX (ver adelante), seguido de mezclas comerciales de celulasas,
xilanasas, pectinasas y Tween-80 (Murnen et al.,
2007). Estrategias de cultivos mixtos de pastos nativos de Norteamérica
han demostrado ser más limpios, ya que la liberación de CO2 por la
combustión de biocombustibles es menor que la cantidad secuestrada
por estos cultivos (0.32 vs 4.4 Mg hectárea-1 año-1), y dado que estos
pastizales son nativos, la biodiversidad de la zona no se vería
grandemente afectada (Tilman et al., 2006). Pretratamiento. Una vez
elegidos los materiales celulósicos es necesario tratarlos mediante
métodos fisicoquímicos y biológicos (Galbe & Zacchi, 2007; Lee et al.,
2007). Se ha determinado que la insolubilidad de la celulosa cristalina,
responsable de su resistencia ante la hidrólisis, no es un criterio absoluto
ni indicativo de la susceptibilidad a la digestión enzimática, sino que
más bien el grado de hinchamiento y la estructura fibrilar son los
parámetros importantes.

Un mayor número de poros formados durante tratamientos previos a la


acción enzimática permite un mejor acceso de las enzimas a las
microfibrillas, al aumentar el área superficial del sustrato (Mosier et al.,
2005). Los pretratamientos se llevan a cabo en medios líquidos, lo que
resulta en una fracción líquida compuesta entre otros compuestos, de
carbohidratos monoméricos y poliméricos, y una fracción de material
sólido. Para obtener los máximos rendimientos de la biomasa el
pretratamiento debe ser muy eficiente, y permitir una alta recuperación
de los carbohidratos y la lignina (sin descomponerlos). Y para permitir
una alta eficiencia de la subsiguiente hidrólisis enzimática de la celulosa,
el líquido debe contener pocos o nulos inhibidores de la fermentación
(ej. fenol, proveniente de la lignina, y ácido acético y 5-
hidroximetilfurfural –que son compuestos derivados de la degradación
de hexosas y pentosas) evitando un paso extra para su eliminación, y
mantener bajos los costos de operación. Diferentes tipos de
pretratamientos han sido usados buscando satisfacer las necesidades
anteriores, y en general son una combinación de condiciones físicas y
químicas (Mosier et al., 2005). En primer lugar la biomasa es cortada o
pulverizada mediante trituración, astillamiento o molienda para
aumentar la superficie de celulosa. El método usado a escalas casi
industriales es el de explosión de vapor en presencia de un catalizador
que puede ser H2SO4 o SO2 (Ewanick et al., 2007). A pH ácido la
hemicelulosa se descompone en sus azúcares componentes, evitando de
esta manera el uso subsecuente de hemicelulasas. A pH neutro la
hemicelulosa es sólo parcialmente hidrolizada debido a los ácidos (como
el acético) liberados en la reacción. Otro tipo de pretratamiento se lleva
a pH básico y consiste en la explosión de las
fibras en presencia de amonio (conocido como AFEX, ammonia fiber
expansion), o la percolación de amonio acuoso a través de la biomasa
(conocido como ARP, de ammonia recycle percolation) En este tipo de
medios alcalinos la estructura de la hemicelulosa queda íntegra, pero
tienen la ventaja de no producir inhibidores de la fermentación. Todas
las reacciones anteriores son llevadas a cabo a presiones altas y
temperaturas de moderadas (100 °C) a altas . Los pretratamientos
biológicos, por otro lado, implican el uso de los hongos directamente
sobre la biomasa (Lee et al., 2007; Zhang et al., 2007). Estos métodos
son más limpios, baratos y no requieren de infraestructura
especializada, pero tienen la desventaja de ser poco eficientes y muy
lentos comparados con los métodos fisicoquímicos. Por ejemplo,
mediante pretratamiento biológico, la sacarificación del 35% de los
azúcares de paja de trigo se produce en cinco semanas (Taniguchi et al.,
2005), en comparación con las pocas horas que requieren los métodos
fisicoquímicos.
Hidrólisis y expresión heteróloga de celulasas. La hidrólisis de la celulosa
con celulasas de origen fúngico se
lleva a cabo en un rango de 50 a 55 °C y alrededor de pH5.
Comercialmente se encuentra disponible una mezcla de celulasas
conocida como AccelleraseTM (de Genencor producida por una cepa
recombinante de Trichoderma reesei.

Sin embargo, otras enzimas necesitan ser estudiadas para el desarrollo


de nuevas formulaciones comerciales.
Para generar organismos recombinantes productores de grandes
cantidades de enzimas, o para estudiar y mejorar su función enzimática
se llevan a cabo experimentos de expresión heteróloga de celulasas.
Mediante estas técnicas también se pretenden generar cepas de
Saccharomyces capaces de usar celulosa para la producción de etanol.
Para el caso de organismos superproductores, existen reportesde
expresión heteróloga en varios sistemas, tanto bacterianos como
fúngicos e incluso en células de animales. Los sistemas bacterianos no
suelen ser eficientes para expresar celulasas de hongos debido a que la
formación de puentes disulfuro no se lleva a cabo y el plegamiento no es
el correcto, o porque las proteínas quedan atrapadas formando cuerpos
de inclusión. Se han expresado celulasas bacterianas en otras bacterias
con un éxito razonable (Yao et al., 2007). Los sistemas fúngicos ofrecen
mejores perspectivas de obtener enzimas con actividad y propiedades
similares a las originales. Sistemas como Trichoderma y Aspergillus
suelen ser buenos productores pero no son apropiados para estudios de
la estructura-función dadas las bajas frecuencias de transformación en
estos hongos (Boer et al., 2000). Como una alternativa a este problema,
se han usado distintas especies de levaduras para la expresión
heteróloga de celulasas entre las que destacan Saccharomyces
cerevisiae, Pichia pastoris, Yarrowia lipolyticia y Kluyveromyces lactis
(Kawai et al., 2006; Park et al., 2000; Penttila et al., 1988; Wamalwa et
al., 2007). En levaduras se obtienen buenos niveles de producción
(alrededor de 100-150 _g/mL) pero con la desventaja de que estos
organismos llevan a cabo la hiperglicosilación de las proteínas, en
algunas ocasiones alterando sus actividades y parámetros cinéticos.
Otros grupos han intentado resolver este problema usando mutantes de
S. cerevisiae, por ejemplo, alteradas en sus rutas de O-glicosilación
aunque se han obtenido resultados similares (Gorka-Niec et al., 2007).
Por último, con miras a la producción de etanol a partir de material
celulósico se han reportado trabajos de cepas transgénicas de S.
cerevisiae. Se han clonado enzimas de diferentes orígenes
(Trichoderma, Aspergillus, Streptomyces y de varias clases (endo y
exoglucanasas, _-glucosidasas, glucoamilasas, etc.) (Ito et al., 2004;
Shigechi et al., 2004). Por ejemplo, expresaron celulasas de Trichoderma
reesei con resultados aceptables (aunque algo lejanos de los máximos
teóricos posibles) para la producción de etanol usando como sustrato _-
glucano (Fujita et al., 2002). En otro reporte se logró la expresión
eficiente y la degradación sinérgica de celulosa amorfa al expresar una
exoglucanasa, una endoglucanasa y una _-glucosidasa (Fujita et al.,
2004). Usando este tipo de cepas transgénicas de levadura, pocos
trabajos han abordado el problema de la degradación de sustratos
naturales (rastrojos o bagazos) nativos o pretratados, aunque existe un
reporte interesante en donde se logró la degradación de xylosa y
celooligosacáridos de un hidrolizado de aserrín de madera por una cepa
de S. cerevisiae transformada con genes de Pichia stipits para la
asimilación de xylosa (xilosa reductasa y xilitol deshidrogenasa) y una _-
glucosidasa de Aspergillus aculeatus. Fermentación. Una vez liberados
los azúcares de la holocelulosa, el siguiente paso es la fermentación
microbiana para la producción de etanol que ha sido el primer
biocombustible de uso industrial. La fermentación puede llevarse a cabo
de dos maneras: simultánea a la sacarificación de los materiales
celulósicos (Wingren et al., 2005), o de manera independiente a la
hidrólisis (SHF-separate hydrolysis and fermentation) (Tomás-Pejó et al.,
2008). Los microorganismos tradicionalmente usados en la industria del
alcohol son la levadura Saccharomyces cerevisiae que llega a crecer
hasta en 146 g/l de etanol (van Maris et al., 2006), y la bacteria
Zymomonas mobilis que tiene una resistencia 2.5 veces más que la
primera (Rogers et al., 2007). Las dos especies derivan su energía de la
glucosa, y el etanol es el último producto de las vías Embden-Meyerhof
,Otras levaduras, tales como Kluyveromyces fragilis, Kluyveromyces
marxianus y Candida utilis han mostrado fermentaciones con
rendimientos máximos de entre 40 y 50 g/l de etanol (Lin & Tanaka,
2006). Pachysolen tannophilus es otra levadura que aunque menos
eficiente (7.8 g/l) puede utilizar también xilosa como fuente de carbono,
a diferencia de las anteriores. En este sentido Pichia stipitis, es una
levadura naturalmente fermentadora de xilosa de la que su genoma ha
sido secuenciado (Jeffries et al., 2007), permitiendo identificar las vías
fermentativas para la posterior manipulación de S. cerevisiae, por
ejemplo, que le permita el metabolismo de xilosa. También han sido
estudiadas diversas bacterias fermentadoras, entre ellas algunas del
género Clostridium, Spirochaeta y Klebsiella, y las especies Leuconostoc
me senteroides y Streptococcus lactis (Lin & Tanaka, 2006). Además se
han introducido vías fermentativas en Escherichia coli obteniendo
rendimientos comparables a los de cepas naturalmente productoras de
etanol
Las enzimas son proteínas producidas por organismos vivos, que tienen
la función de acelerar reacciones químicas dentro de sus cuerpos. Ellas,
por ejemplo, actúan en el sistema digestivo humano para fragmentar las
moléculas de almidón o de proteínas en pequeños trozos que puedan
ser absorbidos por los intestinos.
Las enzimas también se utilizan para producir pan, se añaden a
detergentes para limpiar con mayor eficacia ciertas manchas, y se
emplean en el acondicionamiento del cuero para diferentes usos.
Como las enzimas pueden descomponer a la celulosa produciendo
azúcares simples que luego pueden ser fermentados dando lugar a
alcohol, desempeñan un papel muy importante en la producción de
etanol a partir de la celulosa.
Peter Reilly, de la Universidad Estatal de Iowa, está particularmente
interesado en las enzimas que actúan sobre la celulosa. El
Departamento de Agricultura de Estados Unidos le ha concedido una
subvención de 306.000 dólares para que él y sus colaboradores lleven a
cabo una investigación detallada sobre cómo operan estas interesantes
proteínas.
Tales enzimas son conocidas como celulasas. Y están presentes de
manera habitual en hongos y bacterias.
El trabajo que llevan a cabo las celulasas no es fácil en absoluto. La
celulosa es muy dura. Está en las paredes celulares de los vegetales. Les
aporta a estos su estructura rígida. Gracias a ella, los árboles se
mantienen erguidos.
Pero las diferentes enzimas tienen distintas maneras de atacar a la
celulosa.
Los colaboradores de Reilly emplean muchos recursos informáticos para
poder comprender cómo se agrupan las enzimas. Emplean para ello las
supercomputadoras CyBlue y Lightning.
Al incorporar al conocimiento básico de las enzimas los nuevos datos
que el equipo de Reilly va obteniendo, se están abriendo puertas a
nuevas y mejores aplicaciones de las enzimas. Enzimas de mayor
eficacia, por ejemplo, podrían ser la clave para hacer que la producción
de etanol a partir de la celulosa fuera más eficiente y barata.
No obstante, aún les queda mucho por aprender a los ingenieros
químicos acerca de estas proteínas especializadas. Como bien señala
Reilly, “Después de todo, la naturaleza ha ensayado infinidad de
maneras diferentes para descomponer la celulosa”.
REFERENCIAS

1. Alani, F., Anderson, W. & Moo-Young, M. 2008. New isolate


of Streptomyces sp. with novel thermoalkalotolerant cellulases.
Biotechnol Lett. 30, 123-126.
2. Ander, P. & Marzullo, L. 1997. Sugar oxidoreductases and veratryl
alcohol oxidase as related to lignin degradation. J Biotechnol.
53, 115-31.
3. Anderson, W., Dien, B., Brandon, S. & Peterson, J. 2008. Assessment
of bermudagrass and bunch grasses as feedstock for
conversion to ethanol. Appl Biochem Biotechnol. 145, 13-21.
4. Atsumi, S., Cann, A. F., Connor, M. R., Shen, C. R., Smith, K.
M., Brynildsen, M. P., Chou, K. J., Hanai, T. & Liao, J. C.
2007. Metabolic engineering of Escherichia coli for 1-butanol
production. Metab Eng. Epub ahead of print, doi:10.1016/
j.ymben.2007.08.003.
5. Aust, S. D. 1995. Mechanisms of degradation by white rot fungi.
Environ Health Perspect. 103, 59-61.
6. Baldrian, P. & Valaskova, V. 2008. Degradation of cellulose
by basidiomycetous fungi. FEMS Microbiol Rev. Epub ahead
of print, doi:10.1111/j.1574-6976.2008.00106.x.
7. Barr, B. K., Hsieh, Y. L., Ganem, B. & Wilson, D. B. 1996.
Identification of two functionally

http://www.medigraphic.com/pdfs/lamicro/mi-2008/mi08-3_4i.pdf

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