Avances en El Desarrollo de Bioprocesos
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recombinante
Para esto primeramente se evaluó en la fermentación líquida distintos medios de cultivo, donde el
mejor resultado se obtuvo con el medio de cebada con 2,0 x 10 8 conidios/ml al tercer día de
fermentación y al presentar numerosas complicaciones, como contaminación bacteriana y
producción de otras estructuras, se decidió continuar con la fermentación sólida y optimizar las
condiciones bajo estos otros sistemas de cultivo. Los sustratos evaluados en la fermentación
sólida fueron: arroz, puntilla-granza, puntilla-granza-linaza y puntilla-broza, bajo diferentes
condiciones: distintas concentraciones de inóculo (2,0 x 105 y 2,0 x 106 conidios/ml),
temperaturas de 25°C y 30°C, fotoconidiación (luz azul y luz blanca), tiempo de apertura de la
bolsa e inóculo micelial. Resultando como mejores sustratos la puntillagranza-linaza y la puntilla-
granza con el mayor inóculo, y por otro lado el inóculo micelial o fermentación bifásica logra
acortar los tiempos de fermentación. Mientras que la utilización de la temperatura de 30°C
permite usar el sustrato Puntilla-Broza, además de mejorar el proceso de secado sin afectar la
germinación.
CONCLUSIONES
Se determinó que un tratamiento en RITA con 5 minutos de inmersión cada 8 horas favorece las
características de color, vigorosidad y desarrollo radical de los explantes, además de generar
excelentes resultados en cuanto a brotación, elongación, número de hojas, masa seca y masa
fresca. El crecimiento en mediosemisólido se vio afectado por la temperatura, y la incidencia de
luz directa ocasionó la acumulación de antocianinas en los explantes. El crecimiento de biorreactor
no se recomienda para la micropropagación de S. rebaudiana, ya que causa malformaciones y
decoloración en las hojas, que constituyen la principal fuente de compuestos de interés.
CONCLUSIONES
La inmersión temporal en RITA durante 5 minutos cada 8 horas (T9) generó los mejores
resultados para la micropropagación in vitro de Stevia rebaudiana, con explantes color verde
intenso, sin estrés por luz o temperatura, y vigorosidad y desarrollo radical dados por un adecuado
desarrollo anatómico y fisiológico, en ausencia de hiperhidricidad. Además fue superior a
cualquier otro tratamiento en cuanto a tasa de brotación, el desarrollo de hojas, y el crecimiento
de los explantes. La micropropagación de S. rebaudiana en el biorreactor de burbujeo utilizado
es este ensayo, ocasionó la deformación y decoloración de las hojas, que constituyen el órgano
más importante para la extracción de esteviósidos, por lo que no resulta recomendable para
esta especie, dada su importancia comercial. El sistema de cultivo de S. rebaudiana en medio
semi-sólido es severamente afectado por la luz directa y temperaturas inferiores a 25°C,
perjudicando mayoritariamente el crecimiento, y provocando la acumulación de antocianinas, lo
que indica estrés en las plántulas. Todos los tratamientos comparados presentaron un insuficiente
desarrollo radical, en comparación con el subcultivo de S. rebaudiana en medio semi-sólido a 25
°C, por lo que se requieren estudios alternativos enfocados en el desarrollo de este órgano para
que sea posible su aclimatación en invernadero
. Se logró obtener un crecimiento de biomasa máximo de 10, 51 g/L en 20 días de cultivo, con 9,89
mg EAG/g de extracto liofilizado. En las suspensiones celulares se determinó que con el pH 11 se
obtenía la mayor acumulación de compuestos fenólicos (4,38 mg EAG/g de extracto liofilizado),
con un crecimiento en la producción del 92,02%, en los biorreactores se logró aumentar la
producción fenoles de 2,0 mg EAG/g de extracto liofilizado a 3,52 mg EAG/g de extracto liofilizado,
después de 6 hora de elicitar. Por medio de Cromatografía Líquida de Alta Eficiencia (HPLC) se
determinó que 6 horas después a la elicitación, se presentó la mayor concentración e intensidad
de compuestos. Esto también se percibió al realizar la espectrometría de masas, donde se
determinó la presencia de antraquinonas como: alizarina, antragalol, purpurina, rubiadina,
sorajidiol y munjistin. Las diferencias entre los tratamientos de pre y post elicitación, sugieren que
el hidróxido de sodio tuvo un efecto inductor en la síntesis de antraquinonas.
CONCLUSIONEs