INSTITUTO POLITÉNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

INTRODUCCIÓN
Los lípidos son un grupo heterogéneo de sustancias, e) Desechar la fase superior acuosa y utilizar la fase
encontradas tanto en tejidos vegetales como animales, se
inferior orgánica para la separación cromatográfica.
caracterizan por ser relativamente insolubles en agua y
solubles en solventes orgánicos, como el éter, cloroformo 1. APLICACIÓN DE LA MUESTRA
y benceno. Los lípidos son una fuente importante de Colocar a 1 cm del extremo inferior y debidamente
energía metabólica (ATP), los lípidos se pueden clasificar separadas, 2 μL de dos muestras diferentes de
en:
Lípidos simples: Lípidos que son insaponificables, debido extracto de lípidos, en una o dos aplicaciones, en
a que no contienen ácidos grasos esterificados en su cuatro placas cromatográficas, teniendo cuidado de
molécula. En este grupo se incluyen moléculas formadas a no perforar la capa de sílica.
partir de la unión de dos o más unidades de isopreno 2. DESARROLLO DEL CROMATOGRAMA
como los terpenoides y terpenos o derivados de ellos
como los esteroides. Desarrollar las placas cromatográficas en la cámara de
Lípidos complejos: Son lípidos en los que existen unidades cromatografía, utilizando como fase móvil una mezcla
estructurales de las anteriores unidas por enlaces éster de cloroformo-metanol- ácido-acético-agua
con algún otro componente de naturaleza polar, como
(68:25:8:4).
fosfato, alcoholes e hidratos de carbono hidrofílicos.
Ácidos grasos: Son moléculas que presentan un único 3. REVELADO DE LOS CROMATOGRAMAS
grupo carboxílico unido a una cadena hidrocarbonada a) Rociar una de las placas cromatográficas con el
(cola no polar), en la cual el número de átomos de C es ≥ reactivo de molibdato para fosfolípidos en general. Se
3.
verán manchas de color azul.
Fosfolípidos: Los también llamados fosfoglicéridos,
fosfoacilglicéridos o glicerofosfolípidos están constituidos b) Rociar otra de las placas cromatográficas con el
por dos ácidos grasos esterificados al primer y segundo - reactivo de bismuto para revelar fosfolípidos que
OH del glicerol. El tercer grupo -OH está unido por un contienen colina, los cuales se verán de color amarillo-
enlace fosfodiéster a un grupo de cabeza muy polar.
El colesterol (3-hidroxi-5,6 colesteno) es una molécula naranja.
indispensable para la vida, desempeña funciones c) Rociar la tercera placa cromatográfica con el
estructurales y metabólicas que son vitales para el ser reactivo de ninhidrina para revelar fosfolípidos que
humano. Se encuentra anclado estratégicamente en las contienen grupos amino (calentar la placa a 100º C
membranas de cada célula donde modula la fluidez,
permeabilidad y en consecuencia su función. durante 2 a 3 minutos en el horno). Al terminar, se
revelarán manchas de color violeta.
OBJETIVOS d) Colocar una cuarta placa en una cámara que
contenga cristales de yodo para revelar lípidos que
Aplicar la técnica de cromatografía en la capa fina tengan dobles enlaces en su molécula. Estos se verán
para la separación de fosfolípidos de yema de huevo. de color café.
Comprender las ventajas de la técnica de separación 4. IDENTIFICACIÓN DE LOS LÍPIDOS
respecto a la cromatografía en papel. a) Hacer un esquema o tomar una fotografía de las
Determinar por medio del método Lieberman-
cromatoplacas obtenidas con los diferentes
Burchard la concentración de colesterol en la yema
de huevo. reveladores.
Comprender la importancia de los lípidos. Para la determinación de colesterol:
NOTA: Todo el material que se usará deberá estar
METODOLOGÍA perfectamente limpio y seco porque la reacción
ocurre en condiciones anhidras y el solvente es
Para la separación de fosfolípidos:
cloroformo.
1. EXTRACCIÓN DE LOS LÍPIDOS DE LA YEMA DE HUEVO
a) Mezclar media yema de huevo con 15 mL de cloroformo- Preparar una serie de tubos de acuerdo con la tabla
metanol (2:1 v/v). siguiente, tomando en cuenta las indicaciones del
b) Agitar enérgicamente durante 20 minutos en un baño de profesor.
hielo y filtrar (medir la cantidad de filtrado). Una vez que la tabla esté llena procederemos a
c) Mezclar el filtrado con 5 mL de KCl 0.1 M y agitar.
d) Dejar reposar para separar las dos fases o centrifugar a comparar los resultados para dar fin a la práctica.
2500 rpm por 5 min.
RESULTADOS DISCUSIÓN
En siguientes tablas se encuentran los resultado La yema de huevo está constituida en su mayor parte
obtenidos mediante la metodología, al realizar el por lípidos y proteínas, se muestra una discrepancia
en los valores reportados y el valor investigado (47.84
revelado de las muestras se procedió a realizar los
mmol/L), lo que nos indica que no se presenta un
calculos de Rf en la reacción el colesterol. valor estándar de dicha concentración, del mismo
modo que la reacción no es exactamente
específica para la determinación únicamente del
colesterol, por lo que la reacción no se llevó
únicamente con el colesterol de la yema de huevo. En
la reacción el colesterol sufre una reacción de
oxidación gradual. La etapa inicial de la reacción
consiste en la protonacióndel grupo OH del
colesterol, donde se da una pérdida de
aguaobteniendo al ion carbonio 3,5-colestadieno
que constituye elprimer paso de la reacción de
color. Para la realización de la cromatografía en
capa fina se implementaron 4 reveladores para la
identificación de grupos específicos de
Gráfica 1. Absorbancia vs μg de colesterol
fosfolípidos. En molinato se esperaban 5
compuestos de los que se detectaron 4, al no poder
diferenciar dos compuestos sobrepuestos por
tener el mismo Rf y parecerse estructuralmente
entre el fosfatidil colina (grupo colina) y fosfatidil
(grupo amino) serina, los reveladores restantes
ayudan a la identificación. El bismuto presenta
fosfatidil colina mientras que la ninhidrina fosfatidil
serina.
CONCLUSIÓN
Tabla 1. Datos de absorbancia y micromoles de colesterol,
para la construcción de la curva tipo. Para la muestras orgánicas el método por
Leibermann-Burchard da una prueba colorimétrica
positiva con la presencia de colesterol. El valor de
la absorbancia permite conocer la concentración de
colesterol en la muestra. En comparación es inexacta
con la prueba enzimática. El colesterol al ser
Tabla 2. Cálculos en tabla del rendimiento total de µg de componente de membranas celulares y precursora de
colesterol por yema de huevo. hormonas y vitaminas es una biomolécula
importante. La cromatografía por capa fina en cierto
grado es mejor que la de papel ya que se pueden
realizar diferentes pruebas de una o varias
muestras y poder determinar características
generales de sus componentes, es más rápida. Se
evidencio que la concentración de fosfolípidos
entre muestras depende de las demandas del
organismo que produce el huevo. Las propiedades
de polaridad de los fosfolípidos permiten su
separación por cromatografía.

REFERENCIAS
Argüeso R., Diaz L., Diaz J., Rodríguez A., Castro M., Diz-LoisF.
(2011). Lípidos, colesterol y lipoproteínas. Galicia Clin.
Lehninger, A., Nelson, D. y Cox, M. (2014). Principios de
bioquímica. 6a ed., Barcelona. Editorial Artmed. 200-224 p.
Lozano J. A., Galindo J. D., García-Borrón J. C., Martínez-Liarte J.
H. Martínez-Liarte, Peñafiel R. y Solano F. (2005). Bioquímica y
Imagen 2. Cálculos realizados para obtener los resultados. Biología Molecular para ciencias de la salud. 3.a ed., McGraw-

Hill - Interamericana de España. 52-68 p.
Universidad Nacional Autónoma de México. Facultad de
Química. 2007. Técnicas cromatográficas.
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/M.Cromatogrfic
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