Prácticas Primera Semana 5°K - ONLINE

PRÁCTICA No. 1.
RECUENTO DE LEUCOCITOS
Recuento celular manual - Hemacitómetro
Materiales
• Sangre con EDTA
• Boquilla
• Pipeta de Thoma para leucocitos
• Agitador para pipetas de Thoma
• Cámara de Neubauer
• Cubrehemocitómetro
• Microscopio
Reactivos
• Líquido de Türk
Procedimiento
1. Recolectar 5 mL de sangre venosa en un tubo con EDTA y mezclar por inversión.
2. Con la pipeta en posición horizontal aspirar sangre hasta la marca de 0,5. El exceso de sangre se
elimina tocando la punta de la pipeta con una gasa.
3. Limpiar la sangre adherida a las paredes externas de la pipeta con una gasa procurando no tocar
la punta de la pipeta.
4. Introducir la pipeta en forma vertical en el líquido de Türk y aspirar diluyente hasta la marca 11.
Si se aspira más diluyente se desecha todo el contenido de la pipeta en un recipiente con cloro y se
inicia nuevamente con el paso 2.
5. Retirar el adaptador de la boquilla obturando con parafilm la punta de la pipeta para evitar la
pérdida de líquido, colocar parafilm en el extremo opuesto a la punta y manteniendo la pipeta
siempre en posición horizontal se coloca en el agitador mecánico durante 3 ó 4 minutos.
6. Colocar el cubreobjetos sobre las dos superficies elevadas de la cámara para cubrir las dos
cuadrículas.
7. Desechar las primeras 4 ó 6 gotas de la pipeta para eliminar el diluyente que queda en el capilar
y que no diluye la muestra.
8. Cargar ambos lados de la cámara manteniendo la pipeta en un ángulo de 45°, tocar con la punta
el borde del cubreobjetos donde se junta con la superficie elevada de la cámara. El hemocitómetro
se llena por capilaridad, el flujo de llenado debe ser constante y sin que este llene la hendidura en
forma de H de la cámara.
9. Colocar el hemocitómetro en la platina del microscopio y dejar reposar de 3 a 5 minutos, para dar
tiempo a que las células se distribuyan y se asienten en el fondo de las cuadriculas.
10. Con el objetivo de 10X, se localizan los cuatro cuadros secundarios y se comprueba que las
células estén distribuidas uniformemente. En caso contrario se carga otra cámara.
11. Se cuentan los leucocitos en cada uno de los cuadros marcados como A, B, C y D mostrados en
la Figura No. 11.
12. El conteo de las células en los 16 cuadros que forman cada cuadro secundario, se realiza como
se muestra en la Figura No. 13.
13. Se cuentan separadamente el número de leucocitos en cada cuadro secundario y se suman los
resultados. El recuento de cada cuadro no debe variar en más de 10 células.
14. Calcular el número de leucocitos/mm3 con la siguiente fórmula:
Preguntas de revisión.
1. ¿Qué es un hemacitometro o Cámara de Neubauer?
2. ¿Por qué el recuento de leucocitos se debe corregir a valores absolutos?
3. ¿Cuál es el papel que desempeñan los granulocitos desde el punto de vista
inmunológico?
4. ¿Qué función cumple el diluyente de Turk en este método?
5. Según tu propio punto de vista, ¿cuál consideras que es el mejor método
para realizar recuento de leucocitos?
PRÁCTICA No. 2. RECUENTO DIFERENCIAL DE LEUCOCITOS
Materiales y reactivos.
 Microscopio
 Contador de células mecánico / electrónico
 Pipeta Pasteur
 Portaobjetos
 Aceite de inmersión
 Sangre con E.D.T.A.
 Goteros con colorante de Wright
 Goteros con buffer de fosfatos pH=7.2 o Agua Destilada
 Puente de tinción
Técnica:
1. Realizar un frotis sanguíneo

2. Cubrir el Frotis con colorante de Wright durante 4 a 8 min
3. Sin volcar el colorante, agregar una cantidad igual del amortiguador o agua
destilada soplando ligeramente para mezclar ambos líquidos. Dejar actuar de
6 a 10 minutos. Se formará una superficie de brillo metálico.
4. Volcar con ayuda de unas pinzas y lavar con agua corriente y dejar secar.
Nota: Para el buen estudio morfológico, es necesario contar con un buen
microscopio, un buen Frotis y una buena tinción, de otra manera se pueden escapar
detalles importantes para el diagnóstico.
5. Una vez enfocado el Frotis, colocar una gota de aceite de inmersión y rotar
el “revolver” del microscopio para utilizar el objetivo de inmersión, contar de
izquierda a derecha y de arriba hacia abajo ayudándose de las pinzas para
mover el campo de observación o como indica la figura.
6. Contar cada tipo celular en el contador mecánico o electrónico hasta llegar a
contar una cifra total de 100 células. Los valores obtenidos son valores
“relativos” a un porcentaje o cantidad de 100.
7. Para obtener la cifra absoluta se emplea la siguiente fórmula:
Total de leucocitos X porcentaje

Cifra absoluta de leucocitos= ---------------------------------------------------------
100
PREGUNTAS DE REVISIÓN.
1. ¿Por qué se considera que una biometría hemática completa debe ir

acompañada de un recuento diferencial de leucocitos?
2. Según lo revisado, ¿consideras que el realizar un recuento diferencial es una
pauta importante en el diagnostico hematológico?
3. ¿Qué células se consideran no deberíamos observar en un frotis sanguíneo
de sangre periférica?
4. ¿Qué tipo de leucocitos se considera pertenecen a la serie granulocitica?
5. ¿Por qué se dividen a los leucocitos en granulocitos y no granulocitos?

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PRÁCTICA No. 1.

1. Realizar un frotis sanguíneo

7. Para obtener la cifra absoluta se emplea la siguiente fórmula:

Total de leucocitos X porcentaje

1. ¿Por qué se considera que una biometría hemática completa debe ir

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