Discucion Grupal 2019

Bioquímica-‐BCM-‐
2018

Problemas de Bioquímica
Unidad Curricular: Biología Celular y Molecular
1
Bioquímica-‐BCM-‐ 2018

I. Enzimas-‐ Cinética enzimática

Al finalizar el tema, el estudiante debe conocer los fundamentos teóricos referidos a:
Aspectos moleculares de las reacciones enzimáticas: sustrato, centro activo, grupos prostéticos,
coenzimas. Medida de la actividad enzimática: Definición de enzima, métodos de medida, definición de
unidades.
Cinética de las reacciones enzimáticas: Cinética química. Velocidad inicial de reacción (v0), dependencia de
la velocidad inicial con la concentración de enzima y sustrato. Formación del complejo enzima-‐sustrato.
Ecuación de Michaelis-‐Menten. Representaciones gráficas. Significado de Vm, Km, y constante catalítica Kcat.
Efecto del pH y la temperatura sobre la actividad enzimática. Gráfico de doble recíprocas: determinación de
Vm y Km. Inhibidores.
Control de la Actividad Enzimática: Modulación alostérica, covalente y mediada por proteólisis. Enzimas
alostéricas: velocidad en función de concentración de sustrato, efecto de los moduladores.

1. Dada la siguiente reacción donde (E) es enzima, (S) el sustrato y (P) el producto de la reacción
(modelo simplificado de reacción catalizada por enzima con un solo complejo intermedio y asumiendo que
la k-‐2 es despreciable).

k1 k2
E + S ↔ ES → E + P
k-‐1

a. Indique qué es ES y plantee la ecuación para la misma reacción en ausencia de enzima.
b. Plantee las ecuaciones de velocidad para cada uno de los pasos de la reacción (v1, v-‐1 y v2)
Ejemplo: para una reacción del tipo: A + B à C, la velocidad de formación de C es: v1 = k1 [A][B] y la
velocidad de formación de A+ B, v-‐1 = k-‐1 [C]
Iguale la velocidad de formación y de deformación del complejo ES, tal como ocurre en el estado
estacionario (donde la concentración de ES se mantiene constante). Plantee la ecuación para el
cálculo de Km en estas condiciones.
c. Calcule Km para los siguientes valores: k1 = 1 x 107 M-‐1s-‐1, k-‐1 = 2 x 104 s-‐1 y k2 = 4 x 102 s-‐1.

2. En el laboratorio se realiza un ensayo para determinar la actividad de una enzima que cataliza la
reacción de transformación de A en B. Observando el gráfico indique:
Tubo 2
a. ¿Cómo se mide la actividad de las enzimas? ¿Qué se mide en

este caso?
b. ¿Cómo se calcula la velocidad de reacción? ¿Porqué se le
denomina velocidad inicial (Vo)?
Tubo 1
c. ¿Cuál puede ser la diferencia entre el tubo 1 y 2?
d. Represente sobre el mismo gráfico lo que se observaría
poniendo la mitad de enzima que en el tubo 2.
e. Represente gráficamente como sería el resultado si se midiera la concentración del compuesto A.
2
3. Cinética de Michaelis-‐Menten.

En el laboratorio de clases prácticas se trabaja con un preparado de enzima invertasa extraída de levaduras
para catalizar la hidrólisis de la sacarosa.

H 20
+

Para medir la actividad de la enzima se usa el ensayo de medida de poder reductor con un reactivo llamado
dinitrosalicilato (DNS) que aumenta su color cuanto más se reduce.
a. ¿Cuál/es es el sustrato y productos de esta reacción?
b. ¿Por qué se puede usar la medida de poder reductor para determinar la actividad de la enzima? En
este caso, se está midiendo formación de producto o desaparición de sustrato?
Se establece que la concentración de enzima que se va a utilizar es de 50 µM y las concentraciones de
sustrato entre 0 y 400 mM.

c. En la siguiente gráfica se representan los datos obtenidos en presencia de 400 mM de sacarosa,
midiendo cada 2 minutos la actividad. ¿Qué dato se obtiene de este gráfico?

Teniendo en cuenta los datos del gráfico se decide medir la
[Producto] (mM)
10
formación de producto a los 10 minutos con distintas
5 concentraciones de sustrato.
En la tabla se presentan los resultados obtenidos de las
0 medidas de formación de producto
0 10 20 en 10 minutos de actividad para cada condición.

Tiempo (min)

d. Complete la tabla con los valores de velocidad inicial y grafique Vo= f([S]). Determinar gráficamente (en
cualquier programa de gráficos) los parámetros Vmax y Km utilizando el gráfico de los dobles recíprocos, en
que se representa: 1/Vo = f(1/[S])
e. Con los valores obtenidos plantee la ecuación de Vo=f([S]) que representa la cinética de este ensayo.

[Sacarosa] (mM) [Glucosa] (mM) en 10 min Vo (mM/min)
0 0
10 1.0
20 1.8
40 2.6
60 3.3
100 4.0
140 4.2
200 4.7
300 5.0
400 5.5
3
Ecuación de Michaelis-‐Menten.

4. Considerando una enzima con cinética Michaeliana y sabiendo que la velocidad máxima (Vmax) para esa
concentración de enzima es de 100 μM/min, determine la velocidad inicial (Vo) de la reacción para los
siguientes valores de concentración de sustrato: [S]= 1/3 Km y [S] = 10 Km .
Para este problema se debe considerar la ecuación de Michaelis-‐Menten y que el valor de Km corresponde a
una concentración de sustrato, por lo tanto la concentración de sustrato puede referirse en función de ese
valor.

5. Considerando que una enzima con cinética Michaeliana cuyo Km para el sustrato es 2 x 10-‐5 M, cataliza la
reacción a una velocidad inicial de 35 μM/min para una concentración de sustrato de 0.01M.
¿Cuál será la velocidad inicial para las siguientes concentraciones de sustrato: 2 x 10-‐6 M, 2 x 10-‐5 M, 2 x 10-‐4
M, 2 x 10-‐3 M y 2 x 10-‐2 M? ¿Qué observa en los valores de velocidad obtenidos? Represente
esquemáticamente estos valores en un gráfico Vo = f [S].

6. Aplicando la ecuación de Michaelis-‐Menten defina qué fracción de la velocidad máxima (Vmax ) se
alcanza cuando la concentración de sustrato corresponden a los siguientes valores: [S] = 2Km, [S] = 6 Km,
[S] = 10 Km y [S]= 14 Km.

En los ensayos enzimáticos se trabaja con una [S]= 10 Km para asegurar que se alcanza la Vmax; discuta esa
estrategia en función de sus cálculos del ejercicio 5 y 6.

7. Los siguientes resultados de velocidad inicial fueron obtenidos a partir de una reacción catalizada
enzimáticamente, con la utilización de diferentes concentraciones de sustrato:

vo a. Determinar gráficamente los parámetros Vmax y Km utilizando el
[S] (mM)
(mmol/L/min) gráfico de los dobles recíprocos, en que se representa: 1/Vo = f(1/[S])
0.50 8.0 b. ¿Cuál sería la velocidad de reacción para [S] = 600 mM y [S] = 1200
0.75 10.0 mM?
1.00 11.4 c. Calcular k2 (kcat) si la concentración de enzima en el ensayo es 8 nM,
1.50 13.0 sabiendo que Vo= kcat [ES] y que por lo tanto: Vmax= kcat [Et]
2.00 15.0
La kcat corresponde a la cantidad de sustrato transformado en el sitio
activo por unidad de tiempo y se conoce como el número de recambio de la enzima. La unidad de kcat es la
inversa de la unidad de tiempo (s-‐1, min-‐1). Ejemplo: Kcat = 500 s-‐1, quiere decir que esa enzima cataliza la
transformación de 500 moléculas de sustrato por segundo en su sitio activo.
El recíproco de kcat (1/kcat) corresponde al tiempo que dura un ciclo catalítico, es decir el tiempo que
transcurre entre la unión de un sustrato al sitio activo y la entrada del siguiente sustrato en condiciones de
saturación (hay suficiente sustrato disponible para que siempre haya sustrato en el sitio activo).
Para conocer la eficiencia de una enzima se recurre a la relación kcat/KM – Una enzima de una kcat alta y un
bajo KM es una enzima de “gran eficiencia”. Mayor número de S transformados y a menores concentraciones
de sustrato.
4

d. Determinar la proporción de enzima libre (EL) cuando [S] = 1 mM y cuando [S] = 100 mM.
Debemos considerar que para cada valor de concentración de S se cumple que:
ETotal = ES + ELibre,
y cuando se alcanza la Vmax es porque toda la enzima se encuentra formando complejo ES, es decir, está
saturada, no puede actuar a mayor velocidad, Etotal = ES.

e. Estas velocidades de reacción fueron obtenidas en presencia de una concentración 8 x 10-‐9 M de la
enzima. ¿Cuál sería la velocidad de reacción para [S] = 10 mM si la concentración de enzima hubiese sido 1 x
10-‐8 M? Justifique su respuesta.

8. Se purificó una enzima a partir de un cultivo de bacterias que cataliza la reacción A→P. Se estudió la
cinética de dicha enzima y el efecto de una molécula llamada J, siendo la concentración de J, [J] =
0,25mM.
Vo (nmol P/min) a. Determinar Km y Vmax en las

[A] mM Vo (nmol P/ min) en presencia de J condiciones del estudio en ausencia y en
(0.25 mM) presencia de J. Representar ambas
condiciones en el mismo grafico.
1,00 1,00 0,66
b. ¿Cuál es el efecto de J sobre los
0,55 0,71 0,41 parámetros cinéticos evaluados? ¿A qué tipo
de modulador corresponde J?
0,25 0,50 0,25 c. ¿Cuál seria el efecto de aumentar la
concentración de J sobre la Vmax?
0,20 0,41 0,20

9-‐ Cooperatividad y alosterismo
En la figura se representa velocidad inicial (Vo) en función de concentración de
S ([S]) para una enzima de la glucólisis.
a. Indique cuales son las diferencias con los gráficos anteriores y discuta
el significado de este comportamiento. ¿Con qué tipo de enzimas se relaciona
esta cinética?
b. Dibuje sobre la gráfica el efecto de un modulador negativo y de un
modulador positivo para esta enzima.
c. Identifique gráficamente el K0.5 y cómo cambia con los moduladores.

5

Preguntas de Parciales y Exámenes.

El gráfico muestra la actividad de una enzima de la vía de síntesis de pirimidinas, la aspartatocarbamoil
transferasa, cuyo sustrato es el aspartato..

Teniendo en cuenta el gráfico marque la opción correcta de las preguntas:

1-‐ La aspartatocarbamoil transferasa es una enzima con
6
+ 2 mM ATP características cinéticas de:
Vo (umoles/min/mg)
5
4 a-‐ Michaelis-‐Menten
3 b-‐ cooperatividad
c-‐ inhibición competitiva
2
d-‐ inhibición irreversible
1

0
0 5 10 15
[Aspartato] (mM)

2-‐ La línea punteada corresponde a la reacción en presencia de 2 mM de ATP. Indique cuál de las siguientes
opciones describe el rol del ATP en la actividad de esta enzima:

a-‐ el ATP actúa como modulador alostérico positivo de la enzima
b-‐ el ATP actúa como modulador alostérico negativo de la enzima
c-‐ el ATP actúa como inhibidor competitivo de la enzima
d-‐ el ATP actúa aumentando el K0.5 de la enzima por el aspartato

Las preguntas 3 y 4 refieren a la gráfica que representa la actividad de la enzima hexoquinasa.

30

Vo (µmoles/min/mg)
20

+ inhibidor

10

0
0.0 0.5 1.0 1.5 2.0
[Glucosa] (mM)

3-‐ Indique la opción correcta referida al K0.5 de la enzima para la glucosa en ausencia y en presencia del
inhibidor:
a-‐ en ausencia del inhibidor, el K0.5 es de aproximadamente 10 mM
b-‐ en presencia del inhibidor, el K0.5 es de aproximadamente 5 mM
c-‐ en ausencia y en presencia del inhibidor, el K0.5 es menor a 0.25 mM
6
d-‐ en presencia del inhibidor el K0.5 es de aproximadamente la mitad que en
ausencia del inhibidor.

4-‐ Indique la opción correcta respecto a la actividad de la enzima:
a-‐ La presencia de la enzima aumenta la energía de activación de la reacción
b-‐ La presencia de la enzima aumenta la energía libre de la reacción
c-‐ La presencia de la enzima disminuye la energía de activación de la reacción
d-‐ La presencia de la enzima disminuye la energía libre de la reacción.

5-‐ La enzima gliceraldehído-‐3-‐P deshidrogenasa (GAPDH) presenta un Km para el gliceraldehído-‐3-‐P (GAP)
de 0.1 mM. La concentración intracelular de gliceraldehido-‐3-‐P varía entre 0.04 y 0.1 mM. Teniendo en
cuenta estos datos indique cual de las opciones sobre la actividad intracelular de la GAPDH es correcta.

a. Cuando la concentración de GAP es 0.01 mM, la velocidad inicial corresponde a 0.9Vmax.
b. Cuando la concentración de GAP es 0.04 mM, la velocidad inicial corresponde a 0.28Vmax.
c. Cuando la concentración de GAP es 0.05 mM, la velocidad inicial corresponde a 0.5Vmax.
d. Cuando la concentración de GAP es 0.1 mM, la velocidad inicial corresponde a Vmax.
e. Cuando la concentración de GAP es 0.5 mM, la velocidad inicial corresponde a Vmax.
6-‐ Las enzimas permiten que diversas reacciones ocurran a velocidades compatibles con la vida. Teniendo
en cuenta sus conocimientos sobre las enzimas, señale la afirmación correcta.

a. una enzima permite que la reacción ocurra cuando el ΔG es mayor a 0.
b. durante el trascurso de la catálisis la velocidad aumenta hasta alcanzar la Vmax
c. una enzima cataliza la reacción disminuyendo su constante de equilibrio (Keq)
d. una enzima cataliza la reacción sin afectar su constante de equilibrio (Keq)

En el laboratorio se evaluó la actividad enzimática de un preparado de la enzima invertasa de Saccaromyces
cerevisae obteniendo los resultados representados gráficamente en la siguiente figura:

7

7-‐ Teniendo en cuenta los datos representados en la gráfica indique cuál de las siguientes opciones
representa la ecuación de Michaelis-‐Menten para este preparado enzimático.
!.!" [!]
a. Vo =
!".!![!]

!.! [!]
b. Vo =
!.!"![!]

!.! !! [!]
c. Vo =
!".![!]

!.!" [!]
d. Vo =
!![!]

8-‐ Los resultados anteriores fueron obtenidos con una concentración de enzima de 0.2 mg/mL. Si realizamos
el mismo ensayo con 0.1 mg/mL, indique cual de las siguientes afirmaciones es correcta:

a. el Km aumenta al doble
b. el Km disminuye a la mitad
c. la Vmax aumenta al doble
d. la Vmax disminuye a la mitad

9-‐ En el mismo preparado se estudió la actividad fosfofructoquinasa 1 (PFK-‐1) en dos condiciones A y B
obteniendo resultados esquematizados en la figura. Indique cual de las siguientes opciones es correcta:

a. El K0,5 para la unión de la fructosa-‐6-‐fosfato a la PFK-‐1 es el
mismo en las condiciones A y B.
b. La gráfica A se obtuvo en presencia de altas
concentraciones de ADP.
c. La gráfica A se obtuvo en presencia de altas
concentraciones de ATP.
d. La PFK-‐1 es una enzima con cinética de Michaelis-‐Menten

8
Se estudia la cinética de una enzima en presencia y en ausencia de una sustancia X.
A continuación se muestra un gráfico de doble recíprocas con la misma cantidad de enzima y en ausencia
(0) o, en presencia de dos concentraciones de X (0.5 y 2 mM).

[X]
1.0
0.9 2
0.8
1/vo (min/µM)
0.7
0.6 0.5
0.5 0
0.4
0.3
0.2
0.1
-6 -5 -4 -3 -2 -1 0 1 2 3 4 5 6
-1
1/[S] mM
10-‐ De acuerdo a los datos del gráfico podemos afirmar que :
a. X es un activador de la enzima.
b. X es un inhibidor de la enzima.
c. X es un inhibidor competitivo.
d. X induce un aumento de la Vmax
e. X induce un aumento de la relación Km/Vmax.
11-‐ De acuerdo al gráfico podemos afirmar que en ausencia de X los parámetros cinéticos del preparado
tienen valores aproximados a los planteados aqui:
a. la Vmax es 10 µM/min
b. la Vmax es 5 µM/min
c. la Vmax es 0.1µM/min
d. el Km es 0.5 mM
e. el Km es 0.2 mM

12-‐ Sabiendo que el ensayo fue realizado con una concentración de enzima de 1x 10-‐4 µM, como calcularía
el valor de kcat?
a. kcat = Km/Vmax
b. kcat = Vmax/1x 10-‐4
c. kcat = Km/1x 10-‐4
d. kcat = 1x 10-‐4/Vmax
e. kcat = 1x 10-‐4 x Vmax

9
II. Bioenergética

-‐ La célula como un sistema termodinámico: Sistema, entorno y universo. Primera y segunda ley de la
termodinámica. La energía libre como energía capaz de efectuar trabajo (ΔG =ΔH -‐ TΔS). Relación entre el
equilibrio y la energía libre estándar (ΔGo = -‐RTlnKeq). Criterio de espontaneidad. Sistemas acoplados.
Naturaleza aditiva de los cambios de energía libre en una vía metabólica. Utilización de los enlaces de alta
energía del ATP para realizar trabajo. Bioenergética de reacciones de óxido-‐reducción.

-‐ Termodinámica de las reacciones catalizadas por enzimas. Energía libre de activación y efecto de
catalizadores, ΔG de activación. Ley de acción de masas, orden de una reacción. Teoría del estado de
transición.

1. Cálculo de ΔGo’ a partir de constantes de equilibrio
(Keq).
Calcular las variaciones de energía libre estándar de
las siguientes reacciones, a 25oC y pH 7, a partir de las
constantes de equilibrio dadas.

a. L-‐glutamato + oxalacetato <-‐> aspartato + α-‐
cetoglutarato K’eq= 6,8
b. L-‐glutamato + H2O + NADP+ <-‐> α-‐cetoglutarato + NH3 +
NADPH K’eq= 0.0038

Compare los valores de ΔGo’. ¿Qué significado tienen
estos valores? ¿Sirven para predecir qué ocurre con el
glutamato en una célula? Justifique su respuesta.

2. Cálculo de Keq a partir de ΔGo’ .
Para cada una de las siguientes reacciones a pH=7 y 25oC, utilizando los valores de ΔGo’, indique si la
constante de equilibrio (Keq) será mayor, igual o menor de 1 para cada una y luego calcule el valor de
estas contantes.
a. ATP + H2O → ADP + Pi ΔGo’= −30.5 kJ/mol
b. ADP + Pi → ATP + H2O ΔGo’= 30.5 kJ/mol
c. 1,3-‐bifosfoglicerato + ADP à 3-‐fosfoglicerato + ATP ΔGo’= −18.8 kJ/mol
d. creatina + Pi à fosfocreatina ΔGo’= 43.1 kJ/mol
e. (A)ext à (A)int ΔGo’= 0 kJ/mol (ej. Transporte de moléculas a través de membranas biológicas)

3. Reacciones acopladas.
Se sabe que la variación de la energía libre estándar (∆Go´) de la hidrólisis de glucosa-‐6-‐fosfato es –12.4
kJ/mol y la variación de energía libre estándar de la hidrólisis de ATP es -‐30.5 kJ/mol.

10

a. Identifique las moléculas de la figura
b. Plantee las ecuaciones para la hidrólisis de la Glucosa 6-‐fosfato y para la hidrólisis del ATP sabiendo que
refiere a la pérdida del grupo fosfato para ambas moléculas.
b. Calcule la variación de energía libre estándar (∆Go´) para la reacción catalizada por la hexoquinasa:
GLUCOSA + ATP → GLUCOSA-‐6-‐P + ADP

4. Diferencia entre ΔGo’ y ∆G.
Calcule la variación de energía libre de hidrólisis (∆G) del ATP a pH 7 y 25oC bajo condiciones de estado
estacionario (tal como existen en las células), en las cuales las concentraciones de ATP, ADP y Pi son
mantenidas en 1.0 mM, 0.1 mM y 10 mM, respectivamente. La variación de energía libre estándar (ΔGo’) de
la hidrólisis de ATP a 25oC y pH 7 es -‐30.5 kJ/mol.

El ∆G real de una reacción depende de las características de la reacción (ΔGo’), de las condiciones en que se
produce la reacción (RT) y de la relación de concentraciones de los productos y los reactivos de esa reacción.
Esto se establece en la ecuación:

El gráfico representa lo que ocurre con la energía libre de una reacción
cuando pasamos de 100 % reactivos a 100% producto. Esta
representación nos permite comprender en forma gráfica porqué la
reacción ocurre hasta alcanzar el equilibrio, dado por una determinada
relación de productos/reactivos que es característica de cada reacción.
Recordemos que el equilibrio está dado por la igualdad de las velocidades

de formación de productos y de reactivos y NO por la igualdad de las concentraciones de estos.
5. Si analizamos la energía libre de la reacción de isomerización de la glucosa 6 fosfato (G-‐6-‐P) en fructosa

6 fosfato (F-‐6-‐P) catalizada por la glucosa-‐fosfato isomerasa:
Glucosa -‐6-‐P ⇔ Fructosa-‐6-‐P
a. Utilizando el gráfico, calcule la constante de
equilibrio, Keq, y ΔGo’ para la reacción descrita, considerando
la temperatura como 25oC.
b. Si se tienen iguales cantidades de G-‐6-‐P y F-‐6-‐P y se
agrega la enzima, ¿hacia dónde se desplaza la reacción?
c. ¿Cuál será el ∆G real de esta reacción en la célula si las
concentraciones intracelulares medidas en estado estacionario
de G-‐ 6-‐P y F-‐6-‐P son de 83 y 14 µM respectivamente?

11
6. Bioenergética de la reacción catalizada por enzima.

a. ¿Cuál de las gráficas corresponde a la reacción sin
catalizador y la reacción en presencia de enzima?
b. Indique a qué corresponde:
I:
II:
III:
IV:
c. ¿La reacción representada en la figura es exergónica o
endergónica? ¿Cómo sería la gráfica del otro tipo de
reacción y qué pasa si se hace en presencia de una enzima?

7. Bionergética de las reacciones redox .
Las reacciones de óxido-‐reducción, proceso de transferencia de electrones, son centrales en el estudio de
la bioenergética celula, ya que la mayoría de los organismos vivos obtienen la mayor parte de la energía
usando este tipo de reacciones.
La transferencia de electrones ocurre desde un par
re-‐dox con menor potencial estándar de reducción a
uno con potencial mayor y el calculo de energía libre
del proceso se realiza según la siguiente ecuación:
∆Go´= -‐nƒ∆Eo´.
n es el número de electrones que se transfieren
ƒ es la constante de Faraday
∆Eo´ es la diferencia entre el Eo´ del aceptor menos el
Eo´ del dador

Nótese que un ∆Eo´ positivo genera un ∆Go´ negativo,
por lo tanto una reacción espontanea. Un ∆Eo´
positivo implica la transferencia de los electrones
desde un par de menor potencial a otro de mayor
potencial.

Las siguientes son hemi-‐reacciones de reducción con
su Potencial Estándar de reducción (Eo´) a pH 7.0 y
25oC.
Piruvato + 2H+ + 2 e-‐ <-‐> Lactato Eo´ = -‐0.185 V
NAD+ + 2H+ + 2 e-‐ <-‐> NADH + H+ Eo´ = -‐0.320 V

a. Identifique el par re-‐dox que será el dador de los electrones (agente reductor) y cual será el aceptor (
agente oxidante). Determine cual de las ecuaciones debe plantearse en el sentido de la oxidación o perdida
de electrones.
b. Escribir la ecuación equilibrada para la reacción global de transferencia de electrones entre los pares
redox Piruvato/Lactato y NADH/NAD+.
c. Determine su ∆Go´.

12
Otros ejercicios

8. Si consideramos una reacción hipotética donde X à Y con ΔGo’= −20 kJ/mol, indique cual es la relación
de concentraciones entre X y Y en el equilibrio. Si la concentración de X en el equilibrio es igual a 1M,
cual será la concentración de Y?

9. Reacciones acopladas
La fosfocreatina es una molécula usada, por ejemplo, por el músculo esquelético como reserva energética.
Durante los primeros segundos del ejercicio intenso la fosfocreatinquinasa cataliza la transferencia del grupo
fosfato desde la fosfocreatina al ADP para generar rápidamente ATP.

Calcule la variación de energía libre estándar para la siguiente reacción, usando los valores de ΔGo’ que
considere necesarios;
Fosfocreatina + ADP → creatina + ATP
10. Saccharomyces cereviseae (levadura) es un organismo eucariota unicelular que se caracteriza por tener
como principal ruta catabólica la fermentación alcohólica. En esta vía la glucosa se degrada hasta etanol
y anhídrido carbónico:
Glucosa → 2Etanol + 2CO2 ∆Go´ = -‐ 186.2 kJ/mol

a) ¿Qué tipo de sistema termodinámico es la levadura: cerrado, abierto o aislado?
b) ¿En qué utiliza la célula la energía libre obtenida de la fermentación alcohólica?
c) Calcule cuántos moles de ATP podría sintetizar con la energía que obtiene de la fermentación por mol de
glucosa si los procesos ocurrieran en condiciones estándar.
d) En estado estacionario las levaduras tiene una concentración de glucosa de 5 mM y de etanol y dióxido
de carbono de 50 y 5 mM, respectivamente. Las concentraciones de ATP, ADP y Pi son mantenidas en 1.0
mM, 0.1 mM y 10 mM, respectivamente.
¿Cuántos moles de ATP se podrían formar por mol de glucosa oxidado en estas condiciones?
¿Cuántos moles de ATP forma por mol de glucosa si el rendimiento en utilización de la energía de la
fermentación alcohólica es del 31%?

13

1. La fosfofructoquinasa-‐1 (PFK-‐1) cataliza la fosforilación de la fructosa 6-‐fosfato:
F-‐6-‐P + ATP ó F-‐1,6-‐biP + ADP ∆G0' = -‐14.2 kJ/mol.

Con respecto a la constante de equilibrio (Keq) de la reacción señale la opción correcta:
a. La constante de equilibrio de esta reacción es menor a 1.
b. La constante de equilibrio de esta reacción es igual a 1.
c. La constante de equilibrio de esta reacción es mayor a 1.
d. En presencia de la enzima (PFK-‐1) la constante de equilibrio se acerca a 0.

2-‐ Una reacción catalizada por una enzima tiene un ∆G = -‐20 kJ/mol. ¿Cuál será el ∆G de la reacción si se
duplica la cantidad de enzima?
a. ∆G = -‐10 kJ/mol
b. ∆G = -‐20 kJ/mol
c. ∆G = -‐40 kJ/mol
d. ∆G = +40 kJ/mol
e. No es posible determinar el ∆G con los datos suministrados.

3-‐ Dada la siguiente reacción de transferencia de fosfato indique la opción correcta:
1,3-‐ bifosfoglicerato + ADP → 3-‐fosfoglicerato + ATP ∆G 0' = -‐18.5 kJ/mol
a. En condiciones estándar, la hidrólisis de ATP para dar ADP es más exergónica que la hidrólisis del
fosfato del 1,3-‐bifosfoglicerato.
b. Siendo que la reacción de hidrólisis de ATP para dar ADP tiene un ∆G'0 = -‐30.5 kJ/mol, podemos
calcular el ∆G'0 de hidrólisis de 1,3 -‐bifosfoglicerato en -‐49 kJ/mol.
c. Siendo que la reacción de hidrólisis de ATP para dar ADP tiene un ∆G'0 = -‐30.5 KJ/mol, podemos
calcular el ∆G'0 de hidrólisis de 1,3 -‐bifosfoglicerato en 12 KJ/mol.
d. En condiciones de estado estacionario en la célula la reacción no ocurre.
e. En condiciones estándar la reacción ocurre espontáneamente en dirección de la formación de 1,3-‐
bifosfoglicerato.

4-‐ La reacción catalizada por PFK-‐1 es :

fructosa-‐6-‐fosfato (F-‐6P) + ATP fructosa-‐1,6-‐bifosfato (F-‐1,6BP) + ADP ΔGo’ = -‐14.2 kJ/mol.
Las concentraciones intracelulares de los metabolitos son :
F-‐6P = 0.07 mM
F-‐1,6-‐BP = 0.03 mM
ATP= 10 mM
ADP= 1 mM
El ΔG real (en KJ/mol) para la reacción en estas condiciones es
a. -‐25.2 kJ/mol
b. – 22 kJ/mol
c. -‐14.2 kJ/mol.
14
d. 0 kJ/mol
e. + 21.9 kJ/mol

5-‐ La fosfoglucoisomerasa cataliza la reacción de isomerización de glucosa 6-‐fosfato a fructosa 6-‐fosfato.
Glucosa 6-‐P ↔ Fructosa 6-‐P ΔG°´ = +1.7 kJ/mol
Indique cuál de las siguientes afirmaciones referidas a esta reacción es correcta,
a. La constante de equilibrio (Keq) de la reacción es menor a 1.
b. Cuando la [glucosa 6-‐P] es igual a la [fructosa 6-‐P] el ΔG es igual a 0
c. La presencia de la enzima asegura que toda la glucosa-‐6-‐P sea transformada en fructosa-‐6-‐P
d. En la célula esta reacción se encuentra generalmente muy alejada del equilibrio.

6-‐ La reacción catalizada por la hexoquinasa para su sustrato D-‐Glucosa es la siguiente:
ATP + glucosa <-‐-‐> glucosa-‐6-‐P + ADP ∆G0’= -‐16,7kJ/mol y K’eq = 2210
Conociendo estos datos podemos afirmar que cuando esta reacción alcanza el equilibrio:

a. las concentraciones de productos y reactivos son iguales
b. la concentración de productos es mayor que la concentración de reactivos
c. la concentración de productos es menor que la concentración de productos

7-‐ Sabiendo que la energía necesaria para la síntesis de un mol de ATP en condiciones estándar es de 30.5
kJ/mol, indique cuál de las siguientes reacciones del metabolismo celular puede estar acoplada a la síntesis
de ATP en condiciones estándar.

a. Fosfoenolpiruvato + H2O ↔ Piruvato + Pi ∆Go´= -‐61.9 kJ/mol
b. 3-‐fosfoglicerato ↔ 2-‐fosfoglicerato ∆Go´= 4.4 kJ/mol
o
c. Fructosa-‐6-‐P + H2O ↔ fructosa + Pi ∆G ´= -‐13.8 kJ/mol
d. Gliceraldehido-‐3-‐P + Pi + NAD+↔ 1,3-‐bifosfoglicerato + NADH+H+ ∆Go´= +6 kJ/mol

8-‐ Con respecto a los conceptos discutidos sobre termodinámica y bioenergética, indique cuál afirmación es
correcta con respecto a una reacción que sigue el modelo siguiente:
Reactivos Productos

a. Si el ΔH=0, la reacción está en equilibrio
b. Si el ΔG de la reacción de formación de productos es positivo la misma ocurre espontáneamente.
c. Una reacción exotérmica indica que la misma se producirá espontáneamente
d. La variación de energía libre (ΔG) se refiere a la porción de energía de un sistema que es capaz de
realizar trabajo a P y T constantes
e. Cuanto más negativo es el ΔG real de una reacción, mayor será su velocidad

La reacción catalizada por la fosfoglicerato mutasa presenta la siguiente ecuación y constante de
equilibrio:
3-‐fosfoglicerato ↔ 2-‐fosfoglicerato Keq = 0.2
9-‐ Considerando el valor de la Keq ¿cuáles de las siguientes concentraciones de reactivos y productos
podrían ser las concentraciones de estos metabolitos en el equilibrio?
15
a. [3-‐fosfoglicerato] = 10 mM y [2-‐fosfoglicerato] = 10 mM.

b. [3-‐fosfoglicerato] = 5 mM y [2-‐fosfoglicerato] = 10 mM.
c. [3-‐fosfoglicerato] = 10 mM y [2-‐fosfoglicerato] = 5 mM.
d. [3-‐fosfoglicerato] = 50 mM y [2-‐fosfoglicerato] = 10 mM.
e. [3-‐fosfoglicerato] = 10 mM y [2-‐fosfoglicerato] = 50 mM.

10-‐ Tomando en cuenta el valor de Keq ¿cuál sería un valor compatible para el ΔGo´ (ΔG estándar) de la
reacción catalizada por la fosfoglicerato mutasa?
a. ΔGo´ = 0 KJ/mol.
b. ΔGo´ = 1 KJ/mol.
c. ΔGo´ = -‐1 KJ/mol.
d. ΔGo´ > 0 KJ/mol.
e. ΔGo´ < 0 KJ/mol.

Tomando en cuenta las siguientes reacciones de reducción de dos pares redox:
GSSG + 2H+ + 2e-‐ ↔ 2GSH Eo´ = -‐0.23 V
NADP+ + 2H+ + 2e-‐ ↔ NADPH + H+ Eo´ = -‐0.32 V
11-‐ Podemos describir a la reacción que ocurre espontáneamente en condiciones estándar como aquella en
la que:
a. el NADP+ es reducido por GSH.
b. el NADP+ es reducido por GSSG
c. el GSSG es reducido por NADPH
d. el GSSG es reducido por NADP+
e. el NADPH es reducido por GSSG

12-‐ El valor de ΔGo´ (ΔG estándar) para la reacción de trasferencia de electrones planteada en la siguiente
ecuación se calcula de la siguiente forma:
NADPH + H+ + GSSG ↔ NADP+ + 2GSH
a. ΔGo´= -‐2 x 96,4 kJ/V.mol x 0.09
b. ΔGo´= -‐ 2 x 96,4 kJ/V.mol x (-‐0,09)
c. ΔGo´= -‐2 x 96,4 kJ/V.mol x (-‐0.55)
d. ΔGo´= -‐1 x 96,4 kJ/V.mol x 0.09
e. ΔGo´= -‐1 x 96,4 kJ/V.mol x (-‐0.09)
16
III. Introducción al metabolismo intermediario y Glucólisis


Metabolismo intermediario: Rutas centrales del metabolismo energético celular. Anabolismo y
catabolismo. Estructura y propiedades del ATP. Topografía del metabolismo: principales organelos y
compartimientos celulares, asociación de estructuras y funciones celulares.

Glucólisis: Localización subcelular, etapas, balance y regulación de la glucólisis. Destinos del piruvato.
Estudio de una enzima alostérica: Fosfofructoquinasa

1. Explique la siguiente figura extraída del texto Principios de Bioquímica de Lehninger..

a. Discuta el rol central que ocupa el ATP.
b. Busque los valores de ∆Go´ para cada uno de los
compuestos representados en la figura.
c. Explique porqué se les denomina compuestos de
“alta energía” y compuestos de “baja energía”.

2. La glucosa entra en la vía glucolítica por su fosforilación a glucosa-‐6-‐fosfato catalizada por dos enzimas:
la hexoquinasa, presente en todas las células y la glucoquinasa exclusiva del hígado.
a) ¿Cuáles son los posibles destinos (rutas metabólicas) de la glucosa 6-‐P en los distintos tejidos?
b) Altos niveles de ATP y bajos de AMP inhiben a la fosfofructoquinasa. ¿Qué sucede con la actividad de la
hexoquinasa y glucoquinasa en esta situación? Analice la regulación de ambas isoformas.

3. La glucólisis es una secuencia de 10 reacciones catalizadas por enzimas por la cual una molécula de
glucosa se convierte en 2 moléculas de piruvato.
En la figura se representan los pasos de la fase I y II.
Asocie cada enzima al paso que cataliza en la vía glucolítica e indique qué otras moléculas intervienen
en cada paso.

17
Piruvato quinasa
Aldolasa
Fosfoglicerato mutasa

Hexoquinasa
Gliceraldehido-‐3-‐P deshidrogenasa
Triosa-‐fosfato isomerasa
Enolasa
Fosfofructoquinasa-‐1
Piruvato quinasa
Glucoquinasa
Fosfoglicerato quinasa
Hexosa-‐fosfato isomerasa

4. Con el objetivo de estudiar termodinámicamente la vía se determinaron los valores de variación de
energía libre (ΔG) para todas las reacciones en el músculo cardíaco. En la tabla se presentan estos
valores y las variaciones de energía libre estándar a pH 7 (ΔGo’)

Reacción Enzima ΔGo’ (kJ/mol) ΔG (kJ/mol)
1 Hexoquinasa -‐20.9 -‐27.2
2 Fosfoglucosa isomerasa +2.2 -‐1.4
3 Fosfofuctoquinasa -‐17.2 -‐25.9
4 Aldolasa +22.8 -‐5.9
5 Trisoa fosfato isomerasa +7.9 +4.4
6+7 Gliceraldehído-‐3-‐PDH -‐16.7 -‐1.1
+ Fosfogliceratoquinasa
8 Fosfoglicerato mutasa +4.7 -‐0.6
9 Enolasa -‐3.2 -‐2.4
10 Piruvato quinasa -‐23.0 -‐13.9

a) ¿Qué reacciones se encuentran cercanas al equilibrio y cuáles se encuentran alejadas del equilibrio, en
el músculo cardíaco?
b) ¿Qué enzimas serían candidatas a controlar el flujo de metabolitos por la vía glicolítica? ¿Por qué?
18
c) ¿Cómo se explica la diferencia de energía en condiciones estándar y fisiológicas, de la reacción

catalizada por la aldolasa?

5. Durante la actividad intensa el tejido muscular demanda altas cantidades de ATP comparado con el
tejido en reposo. Este proceso se produce casi exclusivamente por fermentación láctica y el ATP es
producido por las reacciones catalizadas por las enzimas fosfogliceratoquinasa y piruvato quinasa. ¿Si el
músculo esquelético fuera desprovisto de la enzima lactato deshidrogenasa podría llevar a cabo
actividad física intensa, es decir, generar ATP a alta velocidad por la glucólisis? Explique.

6. Análisis cinético y termodinámico de la fosfofructoquinasa (PFK). Modulación alostérica.
I-‐ Bioenergética de la reacción catalizada por la fosfofructoquinasa.
La PFK cataliza la fosforilación de la fructosa-‐6-‐fosfato (F-‐6-‐P) para formar fructosa-‐1,6-‐bifosfato (F-‐1,6-‐BP)
reacción catalizada por la fosfofructoquinasa-‐1 (PFK-‐1).
2+
Fructosa-‐6-‐P + ATP Mg Fructosa-‐1,6-‐BP
+ ADP

I. A continuación se muestran las concentraciones intracelulares de los sustratos que intervienen en la
fosforilación de la fructosa-‐6-‐fosfato en tejido cardíaco de rata, medidas por técnicas de criocompresión:

Metabolito Concentración (mM)
Fructosa-‐6-‐P 0.087
Fructosa-‐1,6-‐BP 0.022
ATP 11.4
ADP 1.32

a) Calcular la relación de acción de masas: [F-‐1,6-‐BP][ADP]/[F-‐6-‐P][ATP]
b) Dado que el ΔGo’= -‐14.2 kJ/mol, calcular la Keq.
Comparar la relación de acción de masas y la Keq.¿Se encuentra en equilibrio esta reacción?¿Qué nos dice
esto sobre el papel de la PFK1 como enzima reguladora?

II. Cinética de la PFK en función de la concentración de ATP y de F-‐6-‐P.
Se presentan a continuación datos experimentales que ilustran su rol en la regulación de la vía glucolítica.
Se pide que las gráficas sean realizadas en el domicilio previo a la discusión de los resultados.

El ensayo cinético consistió en medir la desaparición de NADH (0.2 mM) a 340 nm en función del tiempo en
presencia de fructosa 6-‐fosfato, ATP, MgCl2, NADH:

1) F-‐6-‐P + ATP -‐-‐> F-‐1,6-‐biP + ADP
2) F-‐1,6-‐biP ßà G-‐3-‐P + DHA-‐P
3) Gliceraldehido-‐3-‐P ßà DHA-‐P
A) Gliceraldehido-‐3-‐P + NAD+ + Pi ßà 1,3-‐ biP-‐ Glicerato + NADH + H+
B) DHA-‐P + NADH ßà Glicerol-‐3-‐P + NAD+
Agregue para cada reacción la enzima que la cataliza.
19
¿Cual es la secuencia de reacciones en el ensayo acoplado usado en estos experimentos para medir la
velocidad de la PFK? ¿Cuál es la ultima reacción? ¿A o B?
¿Porqué es valido medir la desaparición del NADH para determinar la velocidad de la reacción catalizada por
PFK-‐1 si no consume NADH?
¿Por qué se agrega MgCl2 en el ensayo enzimático?

El ensayo fue realizado a pH 7.0 con una concentración fija de F-‐6-‐P 2 mM o a una concentración fija de
ATP 3 mM. En ambos casos se inició el ensayo con el agregado de 0.1 µg/ml de PFK-‐1.

a) Velocidad en función de [ATP] y [GTP] a una
concentración fija de F-‐6-‐P

1-‐ Analice el diferente comportamiento de los
sustratos ATP y GTP.
2-‐ La concentración intracelular de ATP en estado
estacionario es de 2,5 y 5 mM según el tipo celular
¿Cómo será la actividad de la enzima en esas
condiciones?
3-‐ Si la concentración de ATP baja en la célula desde
3 mM a 1 mM, ¿qué sucede con la actividad de la
PFK?

b) Velocidad de la PFK en función de la concentración de F-‐6-‐P a una concentración fija de ATP (3 mM).

F-‐6-‐P (mM) v (U/mg)
1 1.5
2 2
3 4.5
4 8.5
5 15
6 30
8 48
10 60
12 63
14 68
15 69
20 70

1 unidad (U) es la cantidad de enzima que cataliza la transformación de 1 µmol de sustrato por minuto.

1-‐ Graficar la velocidad en función de concentración de F-‐6-‐P. (Asistir a la discusión grupal en computadora)
20
2-‐ ¿Cómo es la cinética de la PFK en función de F-‐6-‐P?. ¿Cómo es la unión de la F-‐6-‐P a la enzima? ¿Cuál es
su K0.5?

III-‐ Cinética de la PFK en presencia de citrato y AMP.
a) Efecto del AMP:

¿Cuál es el efecto de AMP sobre la cinética de la PFK? ¿Como describiría el rol del AMP para la reacción?

b) Efecto del citrato

Citrato (mM)
0 0.2 1 5
F6P (mM)
v (U/mg)*
2 2 1.8 0.5 0.2
4 8 7.5 1 0.45
6 25 20 8 2
8 50 42 18 3
10 65 60 30 8
12 69 65 45 10
14 70 69 58 18
16 72 70 62 28
20 -‐ -‐ 65 45
25 -‐ -‐ 66 55
30 -‐ -‐ -‐ 60

*Una unidad de actividad enzimática (U) es la cantidad de enzima que cataliza la transformación de 1 µmol de S por
minuto.
21
1-‐ Graficar velocidad de la PFK en función de concentración de F-‐6-‐P para cada concentración de Citrato.
Representar sobre los mismos ejes las 4 graficas (gráfico similar al representado en el punto anterior con
AMP)
(Asistir a la discusión grupal con las gráficas realizadas en computadora)
2-‐ ¿Cuál es el efecto del citrato sobre la cinética de la PFK?
3-‐ En las células hepáticas, ¿cuál es el principal modulador alostérico de la PFK y cómo se regula su síntesis?

Otros ejercicios.

7. Como podemos observar en la tabla del ejercicio anterior la reacciones 6 y 7 de la glucólisis se colocan
juntas. Esto se debe a que una reacción que no es favorable puede ser acoplada a una altamente
favorable de forma que la suma de las reacciones ocurra en la dirección favorable (reacciones
acopladas)
a. Plantee las reacciones 6 y 7 y la suma proveniente de ambas.
b. ¿Qué nombre recibe esta reacción de síntesis de ATP? ¿Qué otro mecanismo de síntesis de ATP
posee la célula?

8. El arsénico pentavalente o arsenato (HAsO42-‐) puede sustituir al fosfato (HPO42-‐) y formar ésteres de
arsenato que se hidrolizan espontáneamente. Su efecto se puede observar en la reacción catalizada por
la gliceraldehído-‐3-‐P deshidrogenasa. Plantee la reacción catalizada por esta enzima durante una
intoxicación por arsenato.
a. Plantee un balance para la transformación de una molécula de glucosa en dos moléculas de
piruvato en presencia de ATP, ADP, NAD+ y a) fosfato b) arsenito. ¿Cuál es la diferencia entre
ambos?
b. Si se cultivan células en presencia de Pi o de As, consumen igual cantidad de glucosa?
c. El efecto de esta exposición es el mismo en los distintos tipos celulares?, cuáles se verían mas
afectadas por la presencia del As?


La glucólisis es una vía central para el metabolismo energético de la gran mayoría de los organismos tanto
de vida aeróbica como anaeróbica. Se esquematizan 3 vías posibles (A, B y C) para este proceso, de las
cuales una es la correcta y se indica como “x” un compuesto intermediario de la vía.

A B C
1"Glucosa"(6C)" 1"Glucosa"(6C)" 1"Glucosa"(6C)"
2"ATP" 2"ATP" 2"ADP"

2"ADP" 2"ADP" 2"ATP"
2"Compuesto"“X”"(3C)" 2"Compuesto"“X”"(2C)" 2"Compuesto"“X”"(3C)"
2"NAD " +
2"NADP " + 2"NAD+"

2"ADP" 2"NADH" 2"ADP" 2"NADPH"
2"PPi" 2"NADH"

2"ATP" 2"ATP" 2"PPi"
2"ADP" 2"ADP" 2"ADP"
2"ATP" 2"ATP" 2"ATP"

22
2"Piruvato"(3C)" 2"Piruvato"(3C)" """2"Lactato"(3C)"

Entre paréntesis se indica el número de carbonos de los compuestos señalados
1. La secuencia correcta es la postulada en:

a. A en ausencia o presencia de oxígeno.
b. B en ausencia o presencia de oxígeno.
c. C en ausencia o presencia de oxígeno.
d. C en ausencia de oxígeno.

2. El compuesto denominado como “X” en el esquema puede corresponder a:

a. Fructosa 1,6 bifosfato
b. Gliceraldehído 3-‐fosfato
c. 1,3-‐Bifosfoglicerato
d. Fosfoenolpiruvato
e. Piruvato

3. Respecto a los destinos de los productos de la glucólisis en ausencia de oxígeno indique cual de las
siguientes afirmaciones es correcta:

a. el piruvato es oxidado por la piruvato deshidrogenasa
b. el piruvato es oxidado en el ciclo de Krebs
c. el NADH ingresa a la mitocondria por los sistemas de lanzaderas.
d. el NADH es oxidado en la reacción de la lactato deshidrogenasa.
e. el NADH es oxidado por el complejo NADH deshidrogenasa
Las siguientes dos preguntas refieren a la figura en que se representa la actividad de la

Fosfofructoquinasa-‐1 (PFK-‐1) para distintas concentraciones de su sustrato Fructosa-‐6-‐P.
4. Indique la opción correcta referida a la

actividad de la PFK-‐1:

a-‐ la enzima PFK-‐1 presenta cinética de
Michaelis –Menten
b-‐ la unión de la enzima con la
Fructosa-‐6-‐P es cooperativa
c-‐ la unión de la enzima con el ATP es
cooperativa
d-‐ a concentraciones de F-‐6-‐P mayores
a 20 mM la enzima está inhibida

5. El agregado de distintas sustancias moduladoras desplaza la curva representada en la figura. Según sus
conocimientos, ¿cuál de las siguientes observaciones es correcta?
a. la adición de AMP desplaza la curva hacia la derecha
b. la adición de Fructosa-‐2,6-‐biP desplaza la curva hacia la derecha
c. la adición de citrato desplaza la curva hacia la derecha
23
d. la adición de citrato desplaza la curva hacia izquierda

e. la adición de ATP desplaza la curva hacia la izquierda

6. Uno de los destinos posibles de la glucosa-‐6-‐fosfato es la glucólisis, indique cuales de las siguientes
enzimas consiste en un punto de regulación de esa ruta:

a. Glucosa-‐6-‐fosfato isomerasa
b. Glucosa-‐6-‐fosfato deshidrogenasa
c. Aldolasa
d. Gliceraldehído-‐3-‐fosfato deshidrogenasa
e. Piruvato quinasa

7. Indique cuál de las siguientes enzimas de la glucólisis cataliza uno de los pasos de síntesis de ATP en la
ruta.
a. Hexoquinasa
b. Fosfofructoquinasa-‐1
c. Gliceraldehído-‐3-‐fosfato deshidrogenasa
d. Piruvato quinasa

8. El balance global de la ruta glucolítica es el siguiente:

a. Glucosa + 2 NAD+ + 2 ADP + 2 Pi à 2 Piruvato + 2 NADH + 2H+ + 2ATP
b. Glucosa + 2 NAD+ + 4 ADP + 4 Pià 2 Piruvato + 2 NADH + 2H+ + 4ATP
c. Glucosa + 2 NAD+ + 2 ADP + 2 Pià 2 Lactato + 2 NADH + 2H+ + 2ATP
d. Glucosa + 2 NAD+ + 4 ADP + 4 Pià 2 Lactato + 2 NADH + 2H+ + 4ATP

9. Con respecto a la regulación de la fosfructoquinasa-‐1 (PFK-‐1) es correcto afirmar:

a. el ATP es un modulador negativo de la enzima
b. la fructosa-‐1,6-‐bifosfato es el principal inhibidor de la enzima .
c. la fructosa-‐2,6-‐bifosfato es el principal inhibidor de la enzima.

10. Indique la afirmación correcta referida a la PFK-‐1:
a. En condiciones fisiológicas la reacción que cataliza se encuentra cercana al equilibrio
b. El ATP es a la vez sustrato e inhibidor alostérico de la enzima
c. El citrato es a la vez sustrato e inhibidor alostérico de la enzima
d. El ADP es a la vez sustrato y activador alostérico de la enzima

A continuación se representa un esquema de las dos etapas de la vía glucolítica.

11. De acuerdo a los conocimientos adquiridos, indique la afirmación correcta:
A"
a. El compuesto marcado como B en el esquema corresponde a ATP
b. El compuesto marcado como B en el esquema corresponde a NADH. B"
c. El compuesto marcado como A corresponde una molécula de 6
carbonos.
B"
24
d. El compuesto marcado como A corresponde a Pi

12. En cuanto a la regulación de la glucólisis es correcto afirmar:
a) El único paso de regulación de la vía es catalizado por la piruvato quinasa
b) El paso regulador de la ruta es catalizado por la gliceraldehido-‐3-‐P deshidrogenasa.
c) La hexoquinasa se inhibe por el aumento de ADP.
d) La hexoquinasa se inhibe por su producto, la glucosa-‐6-‐P

13. Además del ATP ¿cuáles de las siguientes moléculas son productos de la glucólisis?:
a) CO2 + H2O
b) CO2 + NADH+H+
c) Piruvato + NADH + H+
d) Acetil-‐CoA + CO2
e) Lactato + NADH+H+

14. ¿En cuál de las siguientes condiciones se activa la vía glucolítica en una célula muscular?

a) Un aumento de la relación NADH/NAD+ en el citosol
b) Un aumento del citrato en el citosol
c) Un aumento de la glucosa-‐6-‐fosfato en citosol
d) Un aumento de la concentración de AMP en citosol
e) Un aumento de la concentración de ATP en citosol

Se realiza un ensayo con un preparado de invertasa. Se incuba la enzima con 360 mM de sacarosa y se
toman muestras a distintos tiempos. Se mide la absorbancia con dinitrosalicilato (DNS) y se grafica la
absorbancia en función del tiempo:

15. Para calcular la velocidad inicial se debe usar la diferencia de absorbancia (∆ Abs) entre los siguientes
tiempos:
a) De 0 a 10 min
b) De 0 a 15 min
c) De 0 a 30 min
25
d) De 0 a 40 min
e) De 10 a 30 min

16. De la curva de calibración obtuvimos el valor del epsilón para calcular la concentración de glucosa:
ε= 0.025 mM-‐1cm-‐1 y Abs= 0.025 mM-‐1cm-‐1 x [Glu]
¿cuál es el valor de velocidad inicial obtenido en las condiciones del ensayo?
a) aproximadamente 0.4 mM/min
b) aproximadamente 0.65 mM/min
c) aproximadamente 1.2 mM/min
d) aproximadamente 2 mM/min.

17. En el laboratorio se decide estudiar la formación de CO2 en cultivos de levaduras incubados con
distintas moléculas para evaluar su capacidad para inhibir la glucólisis.
El método de evaluación de la producción de CO2 consiste en observar si crece el volumen de un globo
localizado en la boca de cada matraz y si cambia el color de la solucion de rojo fenol colocada en un tubo
dentro del matraz.
¿Cuál de las sustancias evaluadas (a, b, c o d) podría ser un buen inhibidor de la glucólisis en levaduras?

Color de la solución
Globo de Rojo Fenol
a) Sustancia a inflado amarillo
b) Sustancia b inflado rojo
c) Sustancia c No inflado amarillo
d) Sustancia d No inflado rojo

26
IV. Ciclo de Krebs. Cadena Respiratoria. Fosforilación Oxidativa


Ciclo de Krebs. Localización subcelular del Ciclo de Krebs. Panorámica general del ciclo. Decarboxilaciones
oxidativas: isocitrato deshidrogenasa y a-‐cetoglutarato deshidrogenasa. Fosforilación a nivel de sustrato:
succinil-‐CoA sintetasa. Balance energético del ciclo. Regulación del ciclo. El ciclo de Krebs como ruta
anabólica y reacciones anapleróticas.

Reacciones de oxidación-‐reducción: Potencial redox estándar. Cambios de energía libre en las reacciones
de oxidación reducción (ΔGo ʹ′ = -‐ nF ΔEo ʹ′).
ʹ′ ʹ′
Cadena Respiratoria. Componentes de la cadena de transporte de electrones: flavoproteínas, citocromos,
ferro-‐sulfo proteínas y coenzima Q. Secuencia del transporte de electrones: complejos de la cadena
respiratoria. Ingreso de electrones a la cadena respiratoria. Lanzaderas para el ingreso del NADH.

Fosforilación oxidativa. Síntesis de ATP acoplado al flujo de electrones. Hipótesis quimiosmótica:
generación del gradiente de protones. Mecanismo de la síntesis de ATP; estructura de la ATPasa.
Desacoplamiento de la fosforilación oxidativa e inhibidores. Balance y regulación global. Índice P/O.

Ejemplos de Utilización del ATP por la célula: transporte de metabolitos a través de membranas, trabajo
mecánico y síntesis de biomoléculas.

1. La formación de acetil-‐CoA a partir de piruvato es una decarboxilación oxidativa catalizada por el
complejo piruvato deshidrogenasa.

a) ¿Cuáles son los componentes del complejo y qué reacciones catalizan? ¿Qué ventajas presenta el
hecho que el complejo piruvato deshidrogenasa sea multienzimático?
b) ¿Cuál es el sustrato oxidado y cuál el reducido?
c) ¿En qué compartimiento subcelular ocurre la decarboxilación oxidativa del piruvato

2. En los experimentos que permitieron dilucidar el ciclo del ácido cítrico, Krebs observó que la adición de
malonato a extractos de músculo esquelético de paloma inhibe la utilización de piruvato y provoca la
acumulación de succinato.
a. ¿Por qué inhibe el malonato?
b. ¿Qué fue capaz de concluir cuando encontró que se acumulaba el succinato en las preparaciones tratadas
con malonato, luego de la adición de citrato, isocitrato o α-‐cetoglutarato?
c. ¿Por qué fue también significativa la acumulación de succinato en las preparaciones tratadas con
malonato cuando el sustrato añadido era fumarato, malato u oxalacetato?
d. Explique por qué cuando las preparaciones son tratadas con un exceso de oxalacetato se puede superar
la inhibición causada por malonato.

3. Los enfermos de Beri-‐beri, enfermedad ocasionada por un déficit de tiamina en la dieta, tienen niveles
sanguíneos de piruvato y α-‐ cetoglutarato elevado, en especial después de comidas ricas en glucosa.
¿Qué relación existe entre esos efectos y el déficit de tiamina?
27

4. Aunque el oxígeno no participa directamente del ciclo de Krebs, explique porqué el ciclo sólo opera en
condiciones aeróbicas. ¿Cuál es la molécula reguladora?

5. Producción de ATP a partir de la oxidación del NADH-‐ Cadena respiratoria y Fosforilación oxidativa
El dinucleótido de adenina y nicotinamida (NAD+) es la principal molécula transportadora de electrones
a nivel celular que luego puede cederlos a la cadena respiratoria y de este modo al oxígeno. Dadas las
siguientes semi-‐reacciones y sus potenciales redox estándar (Eº):

NAD+ + 2H+ + 2e-‐ → NADH + H+ Eº = -‐ 0.315 V
½ O2 + 2H+ + 2e-‐ → H2O Eº = 0.815 V

a. Si el par NAD+/NADH y el par ½ O2/H2O reaccionan directamente en condiciones estándar ¿quién se
lleva los electrones, es decir quién es el agente oxidante? Plantee la reacción global y determine la
variación de energía libre en condiciones estándar.
Recuerde que el calculo de ΔG para un proceso redox se plantea como: ∆Go´= -‐nℑ∆Eo´.
b. Desde el punto de vista bioenergético, ¿cuántos moles de ATP se podrían formar por mol de NADH
oxidado en esta reacción? Recuerde cuánta energía es necesaria para sintetizar un mol de ATP en
condiciones estándar. ¿Coincide este dato con lo que ocurre en la cadena respiratoria?

En 1961 Mitchell desarrolló la denominada hipótesis quimiosmótica para explicar la génesis
mitocondrial de ATP. Postuló que la energía libre del transporte mitocondrial de electrones es
conservada “bombeando” protones (H+) desde la matriz mitocondrial al espacio intermembranoso,
creándose así un gradiente electroquímico de protones a través de la membrana mitocondrial interna. El
retorno exergónico de los protones a la matriz mitocondrial impulsa la síntesis de ATP, es decir que el
potencial electroquímico de dicho gradiente es utilizado para sintetizar ATP.

c. Sabiendo que el potencial de membrana a través de la MMI de una mitocondria de hígado es 0.168
V (interior negativo) y el gradiente de pH 0.75 (pH matriz – pH espacio intermembranoso), calcule el
ΔG real asociado al transporte de 1 mol de protones desde la matriz hacia el espacio
intermembrana. Eso es la energía que se consume para el “bombeo de 1 mol de H+” en esas
condiciones.
ΔG= RT ln [H+]ext/[H+]int + zℑ∆Ψ
28
d. Si las concentraciones intracelulares en

estado estacionario de ATP, ADP y Pi
son 5, 0.5 y 1 mM respectivamente, ¿la
reentrada de 1 protón a la matriz
mitocondrial es suficiente para impulsar
la síntesis de ATP? ¿Cuánta energía se
necesita para sintetizar

6. Un mitoplasto es una mitocondria sometida a permeabilización con detergentes de forma que se le
extrae selectivamente la membrana externa. Si se le elimina el citocromo c por extracción salina
dejando intactos el resto de los componentes y luego se le adicionan sustratos generadores de NADH y
succinato:

a. ¿Cuál será el estado redox
(reducido u oxidado) de la NADH
deshidrogenasa, succinato
deshidrogenasa, CoQ, Cit b y a?
Indique en la figura el estado de cada
complejo.
b. Previo a la eliminación del
citocromo c, ¿Consume O2? ¿Forma
ATP?
c. Luego de la eliminación del
citocromo c, ¿Consume O2? ¿Forma
ATP?

7. ¿Cómo entran a la cadena respiratoria todos los equivalentes de reducción provenientes de:
a. glucólisis (incluyendo lanzaderas)
b. β-‐oxidación u oxidación de ácidos grasos
c. Piruvato deshidrogenasa
d. Ciclo de Krebs
Realice un esquema con todos los sitios de ingreso de electrones a la cadena.

8. Mucha de la información acerca de la cadena respiratoria se obtuvo utilizando inhibidores, los cuales
pueden ser inhibidores de la cadena respiratoria, inhibidores de la fosforilación oxidativa y
desacoplantes. En la tabla indique el tipo de inhibidor que es cada sustancia y el efecto de cada uno
sobre los procesos indicados.

29
Transporte de electrones,

inhibidor Tipo de inhibidor Síntesis de ATP
salida de H+ y consumo de O2
Rotenona
CO (monóxido de C) y
.
NO (óxido nítrico)
Cianuro (CN-‐)
Oligomicina
2, 4-‐Dinitrofenol (DNP)
Malonato

9. Estudio de la cadena respiratoria y fosforilación oxidativa por oximetría
El estudio del consumo de oxigeno por un preparado de mitocondrias y el efecto sobre ese consumo
que tienen distintas moléculas aporta mucha información sobre la funcionalidad de esas mitocondrias.

En este registro se evidencian cambios en la velocidad del
consumo de O2 cada vez que se agrega al preparado alguna
de las siguientes sustancias:
ADP, 2,4-‐DNP (desacoplante), CN-‐ (inhibidor de citocromo
oxidasa), SR-‐ sustratos respiratorios (piruvato/malato o
succinato).
Indique en cada momento cual se agrega y justifique su
respuesta.

10. Estudio de una enfermedad mitocondrial: análisis de las bases moleculares de una patología OxPhos
Un niño que nació luego de 40 semanas de gestación desarrolló en las primeras 24 horas de vida problemas
respiratorios y a las 6 semanas problemas neurológicos y cardíacos, revelando los exámenes la existencia de
una miocardiopatía. Entre las 15 y las 16 semanas se detectó además una acidemia láctica progresiva, con
un valor de pH de 7.30 (rango normal 7.38-‐7.44), con valores de piruvato y de la relación lactato / piruvato
elevados.
La acidemia láctica persistió hasta que el niño murió de un paro cardio respiratorio a las 16 semanas de
vida.

A fin de comprender las bases moleculares de la patología que provocó la muerte de este niño se evaluó la
funcionalidad de las vías del metabolismo energético en el tejido cardíaco con los siguientes resultados:
• Las actividades de las enzimas de la vía glucolítica y de la piruvato deshidrogenasa eran normales.
• Estudios de resonancia paramagnética de electrones (EPR) indicaron que el contenido de hierro de
las mitocondrias era menor al normal y lograron identificar qué tipo de grupo prostético se hallaba
afectado.

I-‐ Oximetría-‐ Se purificaron mitocondrias de músculo cardíaco y se valoró su funcionalidad.

30
La gráfica A presenta el consumo de oxígeno mitocondrial en función del tiempo en presencia de piruvato y
malato, antes y después de agregar 6 µmoles de ADP
La gráfica B presenta el consumo de oxígeno mitocondrial en función del tiempo en presencia de succinato
antes y después de agregar 6 µmoles de ADP.

1 µmol
de O2
1 min

a) Analice qué ocurre cuando a un preparado de mitocondrias se le agrega como sustrato respiratorio
Piruvato-‐Malato o Succinato. ¿Las graficas A y B representan lo esperado para cualquier preparado
mitocondrial?

b) El agregado de ADP a un preparado mitocondrial nos permite determinar si las mitocondrias se
encuentran acopladas, ¿por qué?
¿las mitocondrias obtenidas del miocardio del paciente se encuentran acopladas? ¿Son capaces de
sintetizar ATP?

c) La relación P/O es la relación que se establece como Fosfato (P) consumido por átomo de oxigeno (O)
consumido. El fosfato se consume cuando se une al ADP para formar ATP, por lo que es igual a la cantidad
de ATP formado y también igual a la cantidad de ADP que desaparece. Cada átomo de oxigeno se reduce
con un par de electrones que proviene de NADH o FADH2 para formar H2O al finalizar el transporte de
electrones en la cadena respiratoria.
¿Cómo calcularía la cantidad de P consumido para formar ATP?
¿Cómo calcularía la cantidad de átomos de O consumidos al mismo tiempo?
¿Cuál es la relación P/O con succinato? ¿Es la esperada?
¿Se puede calcular la relación P/O con piruvato/malato?
¿Cuál es la relación P/O esperada en mitocondrias normales con NADH como sustrato? ¿Y con FADH2?

A partir de los datos obtenidos con las mitocondrias plantee a que nivel podríamos encontrar un defecto
en el metabolismo mitocondrial.

31
a) Diseñe un esquema que presente las vías metabólicas estudiadas y plantee cómo será la actividad de
cada una. ¿Qué conclusiones pueden sacar con respecto a la funcionalidad mitocondrial del tejido
cardíaco de este niño?
b) ¿Cómo puede explicar la debilidad muscular y los problemas neurológicos del niño tomando en cuenta
los datos aportados?
c) La enfermedad de este niño se encuentra dentro del grupo de las acidosis lácticas congénitas. ¿Por qué?

Las enfermedades que involucran a componentes de la cadena respiratoria y la fosforilación oxidativa se
conocen como enfermedades OXPHOS, y se encuentran entre las enfermedades degenerativas más
comunes. Algunos de los componentes de la cadena respiratoria y la fosforilación oxidativa son codificados
por el ADN mitocondrial: 7 subunidades del complejo I, 1 subunidad del Complejo III, 3 subunidades del
complejo IV y 2 subunidades del complejo ATP sintasa. El resto son codificados por el ADN nuclear.
• Plantee una hipótesis sobre la causa de la enfermedad de este niño y que experimentos realizaría
para probarla.
• La mayoría de los casos reportados hasta el momento se deben a fallas en los componentes
codificados por el ADN mitocondrial. ¿A qué puede deberse esto?

Otros ejercicios.

11. El Ciclo de Krebs oxida el Acetil-‐ CoA:
a) Escriba una ecuación equilibrada que describa la reacción catalizada por cada enzima del ciclo
b) ¿Qué cofactores son necesarios para cada reacción?
c) Identifique qué tipo de reacción cataliza cada enzima: condensación (formación de enlace C-‐C),
deshidratación, hidratación, descarboxilación, óxido-‐reducción, fosforilación a nivel de sustrato.
d) Escriba la ecuación que describe la oxidación de Acetil-‐CoA a CO2. (Balance global del Ciclo).

12. Existen vías metabólicas que consumen intermediarios del Ciclo de Krebs. Un ejemplo es la síntesis del
neurotransmisor ácido γ-‐aminobutárico (GABA) a partir de glutamato en el tejido nervioso.¿A partir de
que intermediario del ciclo se sintetiza el neurotransmisor? ¿Cómo se repone el intermediario para que
el ciclo siga funcionando? Describa otra reacción vinculada a la condición de ruta anfibólica del ciclo de
Krebs.


1. A continuación se muestra el consumo de oxígeno por parte de mitocondrias purificadas (Mit) y
expuestas a distintas condiciones experimentales:

¿Qué podemos afirmar analizando los resultados representados en los gráficos A y B?

32

a. En la figura A se mide el consumo de O2 en presencia de sustratos del complejo II (succinato
deshidrogenasa).
b. En la figura B se mide el consumo de O2 en presencia de sustratos del complejo I (NADH
deshidrogenasa).
c. El efecto de que la adición de ADP observado en las figuras A y B indica que las mitocondrias
están acopladas.
d. El efecto de que la adición de ADP observado en las figuras A y B indica el desacoplamiento de
las mitocondrias.
e. El agregado de cianuro inhibiría el consumo de O2 en las condiciones de la Figura A pero no en la
Figura B.

2. 9-‐ En relación a la fosforilación oxidativa y el transporte de electrones por la cadena respiratoria
mitocondrial, indique la opción que considere correcta:

a. En presencia de un agente desacoplante la energía derivada del transporte de electrones se
disipa en forma de calor.
b. Los citocromos de tipo a, b y c presentes en la cadena respiratoria contienen FAD como grupo
prostético.
c. El complejo I de la cadena mitocondrial no contiene centros Fe-‐S
d. La succinato deshidrogenasa recibe electrones del NADH generado en el Ciclo de Krebs.
e. La succinato deshidrogenasa recibe electrones del FADH2 generado en la beta-‐oxidación.

Problema
A continuación se muestra distintas actividades de enzimas mitocondriales medidas en muestras de la
sustancia negra (sector del mesencéfalo) obtenidas de sujetos control e individuos que sufrían la
Enfermedad de Parkinson:

Actividades
(nmol/min/mg de proteína)

Controles Enf. Parkinson
(n=9) (n=9)
Citrato sintasa 110.4 110.0
NADH-‐cit c reductasa
(desde complejo I hasta citocromo 4.36 2.68*
c)
NADH-‐CoQ reductasa (complejo I) 3.36 2.34*
Succinato-‐ cit c reductasa (desde

9.46 9.59
complejo II hasta citocromo c)

Los datos marcados con * tienen una diferencia estadísticamente significativa en relación al control.
33
3. De acuerdo a los datos obtenidos en la tabla podemos afirmar que:
a. El ciclo de Krebs estaría afectado en la enfermedad de Parkinson.
b. El complejo I estaría afectado en la enfermedad de Parkinson.
c. El complejo II estaría afectado en la enfermedad de Parkinson.
d. El complejo III estaría afectado en la enfermedad de Parkinson.
e. El complejo IV estaría afectado en la enfermedad de Parkinson.

4. Si analizáramos el metabolismo en las neuronas afectadas en esta enfermedad, indique cual de las
siguientes afirmaciones esperaría observar:
a. un aumento en la actividad de la piruvato deshidrogenasa
b. un aumento en la actividad de la lactato deshidrogenasa produciendo mas lactato
c. un aumento en la actividad de las enzimas de la gluconeogénesis
d. un aumento de la difusión del NADH desde la mitocondria al citosol
e. un aumento en la actividad de la malato deshidrogenasa produciendo mas oxalacetato
Problema
Las rutas catabólicas u oxidativas producen NADH y FADH2 y los electrones de estas moléculas son cedidos
en la cadena respiratoria con el objetivo de sintetizar ATP. La inhalación de cianuro de hidrogeno o la
ingestión de cianuro de potasio produce una rápida y extensa inhibición del complejo citocromo oxidasa por
unión al citocromo a3.
5. Indique cual de las siguientes opciones es la correcta en cuanto a la intoxicación con cianuro (CN-‐):
a. En la intoxicación con CN-‐ no hay transporte de electrones pero se mantiene la síntesis de ATP en la
ATP sintasa.
b. En la intoxicación con CN-‐ se mantiene el transporte de electrones pero no hay síntesis de ATP en la
ATP sintasa.
c. En la intoxicación con CN-‐ se mantiene el transporte de electrones y la síntesis de ATP en la ATP
sintasa.
d. En la intoxicación con CN-‐ no hay transporte de electrones ni síntesis de ATP en la ATP sintasa.
e. En la intoxicación con CN-‐ aumenta el consumo de oxígeno debido a que las mitocondrias se
encuentran desacopladas

6. Con respecto al estado de óxido-‐reducción de los complejos de la cadena respiratoria indique lo
correcto:
a. En la intoxicación con CN-‐ los complejos I, II y III y el citocromo c se encuentran en estado reducido
b. En la intoxicación con CN-‐ los complejos I, II y III y el citocromo se encuentran en estado oxidado.
c. En la intoxicación con CN-‐ los complejos I, II y III se encuentran en estado oxidado y el citocromo c
reducido.
d. En la intoxicación con CN-‐ los complejos I, II y III se encuentran en estado reducido y el citocromo c
oxidado.

7. Con respecto a los complejos de la cadena respiratoria mitocondrial indique lo correcto:
a. El complejo I (NADH deshidrogenasa) es un complejo mono-‐enzimático que presenta un citocromo
a en su sitio activo.
b. El complejo II (succinato deshidrogenasa) pasa electrones desde el succinato a la ubiquinona,
acoplando esta reacción al pasaje de 2 protones al espacio intermembrana.
c. El complejo III (citocromo bc1) capta electrones desde la ubiquinona reducida y los transfiere al
citocromo c.
d. El complejo IV (citocromo c oxidasa) capta dos electrones desde el citocromo c reduciendo una
molécula de O2 a H2O.
34
e. El complejo V (ATP sintasa) usa la fuerza generada por el gradiente de protones para generar ATP a
partir de AMP y PPi.

8. La membrana mitocondrial interna contiene transportadores para: (señale la opción correcta)
a. NADH
b. FADH2
c. Acetil-‐CoA
d. ATP
e. NADPH
Se estudia al consumo de oxígeno en preparados de

mitocondrias de músculo frente al agregado de distintos
sustratos respiratorios (sustratos dadores de NADH y
succinato), observando en ambos casos registros como el que
se presenta en la siguiente figura.
9. Según lo que se observa en el registro indique cual de las
siguientes observaciones respecto al preparado mitocondrial es
correcto:
a. las mitocondrias estudiadas no consumen O2
b. las mitocondrias estudiadas no producen ATP
c. las mitocondrias estudiadas presentan un trastorno a
nivel de complejo II (succinato deshidrogenasa)
d. las mitocondrias estudiadas se encuentran acopladas
e. las mitocondrias estudiadas se encuentran desacopladas

10. En la figura se observa el efecto sobre el consumo de O2 del agregado de una sustancia X. Teniendo en
cuenta los datos proporcionados, cual le parece a usted que es la naturaleza de dicha sustancia? Indique
la opción correcta:
a. X es un inhibidor del transporte de electrones
b. X es una molécula desacoplante
c. X es un inhibidor de la glucólisis
d. X es un inhibidor de la glucosa-‐6-‐fosfato deshidrogenasa
e. X es un inhibidor de la ß-‐oxidación

11. Si le agregáramos a un preparado de mitocondrias intactas un agente desacoplante y analizáramos el
comportamiento de distintas vías metabólicas podríamos observar que: (indique la opción correcta)
a. Consumen oxígeno y producen ATP
b. No consumen oxígeno y si producen ATP
c. Consumen oxígeno y no producen ATP
d. Ni consumen oxígeno ni producen ATP
e. Se incrementa la producción de ATP

12. Indique cual de los siguientes transportadores de electrones NO interviene en la cadena respiratoria
mitocondrial:
a. Citocromo c
b. Ubiquinona
c. Acido Lipoico
d. FMN
e. Centros ferrosulfurados (Fe-‐S)

35
A continuación se muestra la reacción catalizada por el complejo enzimático Piruvato deshidrogenasa

(PDH).

o
13. Teniendo el valor de ΔG’ se puede concluir que:
a) En condiciones estándar la reacción no es espontánea
b) En condiciones de estado estacionario la reacción es espontánea
c) La Keq a 25ºC es mayor a 1
d) La Keq a 25ºC es menor a 1
e) La Keq a 25ºC es igual a 1

14. La reacción catalizada por el complejo de la PDH es una reacción redox en la cual:
a) El piruvato se reduce
b) El acetil-‐coA se reduce
c) El NAD+ se oxida
d) El piruvato se oxida
e) El NADH se oxida

15. Marque la opción correcta referida a la reacción catalizada por el complejo de la Piruvato
Deshidrogenasa:

a) Ocurre en el citosol de la célula.
b) Ocurre en sentido inverso cuando la celula necesita piruvato para sintetizar glucosa.
c) Se inhibe si aumenta la concentración de NADH en la matriz mitocondrial
d) Se inhibe si aumenta el piruvato en la matriz mitocondrial
e) Se inhibe si aumenta el ADP en la matriz mitocondrial.

16-‐ ¿Cuál de los siguientes componentes de la cadena respiratoria presenta el mayor potencial de reducción
estándar (E°)?
a) Ubiquinona
b) NAD+
c) O2
d) FMN
e) FAD

17-‐ ¿Cuál es la consecuencia de la inhibición en el flujo de electrones de la cadena respiratoria mitocondrial
a nivel del complejo IV o citocromo oxidasa?
36
a) Un aumento en la oxidación de NADH

b) Un aumento en la oxidación del FADH2
c) Un aumento en la reducción del O2 a H2O
d) Una disminución en síntesis de ATP
e) Una disminución de la producción de NADPH
18-‐ ¿Cuál sería una forma correcta de expresar una ecuación de la actividad del complejo I (NADH
deshidrogenasa) de la cadena respiratoria?
a) L-‐Malato + Q ↔ Oxalacetato + QH2.
b) Succinato + Q ↔ Fumarato + QH2.
c) QH2 + citocromo c (Fe3+) ↔ Q + citocromo c (Fe2+).
d) NADH+H+ + 4H+matriz + Q ↔ NAD+ + 4H+ espacio intermembrana + QH2.
e) FMNH2 + Q ↔ FMN + QH2.

19-‐ ¿Cómo pueden llegar los electrones del NADH formado en el citosol celular a la cadena respiratoria
mitocondrial?
a) El NADH difunde hacia la matriz mitocondrial
b) El NADH ingresa a la matriz por un transportador específico
c) El NADH se oxida en el citosol para formar piruvato que ingresa a la mitocondria
d) El NADH se oxida en el citosol para formar lactato que ingresa a la mitocondria
e) El NADH se oxida en el citosol para dar malato que ingresa a la mitocondria

37
V. Ruta de las pentosas fosfato. Gluconeogénesis


Ruta de las pentosas fosfato: Etapa oxidativa y no oxidativa, regulación y balance de la ruta de las pentosas
fosfato. Utilización del NADPH y de la ribosa 5 fosfato por la célula.

Gluconeogénesis. Reacciones de la gluconeogénesis. Relación con la glucólisis. Balance y regulación

1. Explicar el destino metabólico de la glucosa 6-‐fosfato bajo cada una de las siguientes condiciones:
a) las necesidades de NADPH son mayores que las de ribosa 5-‐fosfato
b) las necesidades de ribosa 5-‐fosfato son mayores que las de NADPH
c) las necesidades de ribosa 5-‐fosfato y de NADPH son del mismo orden.

2. Se realizó un estudio sobre los niveles de actividad de enzimas del metabolismo de la glucosa en los
eritrocitos. Se estudio una población de 100 individuos sanos de características comparables (edad,
peso). En 3 de ellos se detectó una actividad de la enzima glucosa –6-‐fosfato deshidrogenasa 10 veces
menor a la del resto de los individuos.

a) ¿Cómo serán los niveles de ATP, NADH y NADPH de estos individuos comparados con el resto?
b) ¿Cómo puede afectar esto al eritrocito y su función?
c) En otros tejidos ¿qué vías metabólicas podrían estar afectadas por la baja actividad de la glucosa-‐6-‐ P
deshidrogenasa?

3. Por cada glucosa 6-‐P que es completamente oxidada a CO2 por la ruta de las pentosas, ¿cuál es el
rendimiento en NADPH? ¿En qué tejidos espera encontrar un mayor consumo de glucosa por esta ruta?

4. El músculo esquelético libera grandes cantidades de alanina (Ala) y lactato en distintas condiciones
metabólicas. A nivel hepático éstos son captados y utilizados para formar glucosa, la que es entonces
liberada desde el hígado al torrente sanguíneo.
a) ¿Qué reacciones sufren la Ala y el lactato para superar las etapas fuertemente exergónicas de la
glucólisis y formar glucosa?
b) ¿En qué compartimentos se produce este proceso?
c) Señale en que etapas se podrían producir ciclos fútiles. ¿Cuál sería el efecto a nivel celular de tales ciclos
y cómo se evitan?

5. A partir de hígado de rata se obtuvieron, por centrifugación diferencial fracciones subcelulares
enriquecidas en: núcleo, mitocondrias, fragmentos de membrana (retículo y membrana plasmática) y
citosol. Se determinó la actividad de las enzimas de la gluconeogénesis en las distintas fracciones
a) ¿Qué actividades se encontrarán en las distintas fracciones?
b) Si agregamos oxalacetato y ATP marcado con fósforo radioactivo a la fracción citosólica ¿Qué
metabolitos marcados con fósforo se acumularán?
c) Si agregamos oxalacetato y ATP marcado a la fracción mitocondrial ¿Qué metabolitos marcados se
acumularán?
38
d) Si realizamos el mismo proceso de obtención de fracciones subcelulares a partir de músculo esquelético
¿obtendremos las mismas actividades enzimáticas en las mismas fracciones?

6. Un paciente presenta una infección bacteriana que produce una endotoxina que inhibe a la
fosfoenolpiruvato carboxiquinasa. Analice que ocurrirá con la síntesis de glucosa a partir de los
siguientes precursores: alanina, glicerol, fosfoenolpiruvato y galactosa.

39
VI. Síntesis y degradación de los ácidos grasos.


Síntesis de ácidos grasos. Etapas de la síntesis de ácidos grasos (acetil-‐CoA carboxilasa y complejo ácido
graso sintasa). Localización subcelular, regulación y balance. Reacciones de elongación e insaturación de
ácidos grasos. Almacenamiento de ácidos grasos como triacilglicéridos.

Oxidación de ácidos grasos: Localización subcelular. Órganos que obtienen su energía predominantemente
por esta ruta. Etapas: Activación de ácidos grasos, transporte a través de la membrana mitocondrial interna,
b-‐oxidación propiamente dicha: ruta de los carbonos y de los electrones. Balance global y regulación.

1. A una fracción soluble de hígado se le agrega [14C]acetil-‐CoA (marcada radiactivamente en todos los
carbonos) resultando en la formación de ácido palmítico con todos los carbonos marcados. Sin embargo
si al mismo preparado de hígado se le agregan pequeñas cantidades de [14C]acetil-‐CoA y un exceso de
malonil-‐CoA sin marcar, obtenemos ácido palmítico marcado solamente en los carbonos 15 y 16.
Utilizando sus conocimientos sobre las síntesis de ácidos grasos explique estas observaciones.

2. Plantee la ecuación de la síntesis de ácido palmítico en el hígado de la rata a partir de acetil CoA
mitocondrial, NADPH citosólico, ATP y CO2.

3. ¿Cuál sería el efecto sobre la síntesis de ácidos grasos de un aumento de la concentración
intramitocondrial de oxalacetato?

4. Franz Knoop en 1904 propuso el nombre de β-‐oxidación para el proceso biológico de oxidación de
ácidos grasos, mucho antes que se conociera la CoA y las enzimas involucradas (descubrimiento que
ocurre por 1950). Knoop alimentó perros con ácidos grasos modificados en el último carbono, llamado
carbono ω, con un anillo de benceno. Utilizó dos tipos de ácidos grasos: con número par de carbonos y
con número impar. Aisló de la orina
COOH
COOH de los perros los productos que
ácido fenilacético poseían un grupo fenilo. Los perros
alimentados con ácidos grasos de
COOH COOH
número impar originaron ácido
ácido benzoico benzoico. Los perros alimentados
con ácidos grasos de número par
produjeron en su orina ácido fenilacético:

a) ¿Por qué ambos grupos de perros no originaron el mismo producto final, ácido benzoico o fenilacético?
b) ¿Por qué Knoop utilizó el nombre de β-‐oxidación?
c) ¿Cómo son la mayoría de los ácidos grasos de la dieta, de número par o impar de átomos de carbono?
¿Cuáles son los productos finales de oxidación para ambos casos?

40
5. Explique el rol de la carnitina acil transferasa en la compartimentalización de la β-‐oxidación de los

ácidos grasos. Complete el esquema.

6. Los ácidos grasos son convertidos a sus ésteres de coenzima A por una reacción reversible catalizada
por la acil:coenzima A sintetasa:

R-‐COO-‐ + ATP + CoA R-‐CO-‐ CoA + AMP + PPi

Si bien esta reacción posee una constante de equilibrio cercana a 1, la célula posee un mecanismo que
favorece la formación de acil-‐CoA. Explique.

1. Indique la opción correcta respecto a la ruta de las pentosas-‐fosfato:

a. Cuando las necesidades de ATP son elevadas, la glucosa 6-‐fosfato es catabolizada por esta vía.
b. La ribosa-‐5-‐fosfato producida por esta vía participa como intermediario en la glucólisis.
c. Es una ruta muy activa en el músculo esquelético durante la contracción intensa.
d. Es una ruta muy activa en los tejidos con alta actividad biosintética (por ejemplo: glándula mamaria
y corteza adrenal)
e. Se encuentra regulada únicamente por la disponibilidad de sustratos
2. ¿Cuál de las siguientes moléculas participa en la degradación del glucógeno?
a. La UDP-‐glucosa
b. El UTP
c. El ATP
d. La glicogenina
e. La glucógeno fosforilasa
3. ¿Cuál de las siguientes moléculas NO puede ser utilizada como precursora de glucosa en la
gluconeogénesis?
a. Piruvato
b. Palmitato
c. Glicerol
d. Oxalacetato
41
e. Alanina
4. La mayoría de las enzimas que catalizan las reacciones de la gluoneogénesis también catalizan
reacciones de la glucolisis. Indique la enzima que cataliza una reacción de la gluconeogénesis pero no
de la glucólisis.
a. Piruvato carboxilasa
b. Piruvato quinasa
c. Aldolasa
d. Gliceraldehído 3-‐P deshidrogenasa
e. Lactato deshidrogenasa
5. Otro camino posible para la glucosa en la célula es la ruta de las pentosas fosfato, con respecto a esta
vía indique lo correcto:
a. es una ruta esencial para mantener la concentración de NADH en el citosol
b. es una ruta esencial para mantener la concentración de NADH en la mitocondria
c. es una ruta esencial para la gluconeogénesis
d. es una ruta esencial para mantener las defensas antioxidantes de la célula
e. es una ruta esencial para mantener la concentración de ATP en la célula.

6. El proceso de síntesis de glucosa de novo se denomina gluconeogénesis, indique la opción correcta
respecto a esta vía.
a. Las reacciones de la vía gluconeogénica son endergónicas
b. El piruvato que proviene del acetil-‐CoA mitocondrial, es el principal sustrato gluconeogénico.
c. Cuando el sustrato de la gluconeogénesis es la alanina no participan enzimas mitocondriales
d. Cuando el sustrato de la gluconeogénesis es el lactato no participan enzimas mitocondriales
e. Cuando el sustrato de la gluconeogénesis es el glicerol-‐P no participan enzimas mitocondriales

7. La glucólisis y la gluconeogénesis son rutas inversas. Indique lo correcto respecto a estas vías
centrales en el metabolismo de los carbohidratos.

a. Un aumento en la concentración citosólica de ATP inhibe la gluconeogénesis y acelera la glucólisis
b. El AMP es un modulador positivo de la gluconeogénesis.
c. La activación de fructosa-‐1,6-‐bisfosfatasa disminuye la gluconeogénesis
d. La Fructosa-‐2,6-‐bisfosfato activa la glucólisis e inhibe la gluconeogénesis en el hepatocito.
e. Un aumento de la concentración de citrato en el citosol aumenta la velocidad de la glucólisis.

8. Los animales sintetizan glucosa a partir de varios precursores, sin embargo no es posible sintetizarla a
partir de algunas biomoléculas. Indique cual de estas moléculas no es precursor en la síntesis de
glucosa en el hepatocito:
a. Glicerol
b. Alanina
c. Ácido palmítico
d. Oxalacetato
e. Lactato

9. En la fase no oxidativa de la ruta de las pentosas fosfato 3 moléculas de ribulosa-‐5-‐P se transforman
¿Cuáles son los productos de esta fase para que estas tres pentosas puedan ser incorporadas por
ejemplo en la glucólisis?
a) 2 Glucosa-‐6-‐P + 1 Gliceraldehído-‐3-‐P.
b) 1 Glucosa-‐6-‐P + 2 Gliceraldehído-‐3-‐P.
42
c) 2 Fructosa-‐6-‐P + 2 Dihiroxiacetona-‐3-‐P.
d) 3 Fructosa-‐6-‐P
e) 2 dihidroxiacetona-‐P + 1 Gliceraldehído-‐3-‐P.

10. La fase oxidativa de la ruta de las pentosas fosfato se activa cuando se necesita:
a) NAD+
b) NADH
c) NADP+
d) NADPH
e) ATP

11. En la gluconeogénesis la reacción general de formación de fosfoenolpiruvato a partir de piruvato es la
siguiente:

a) piruvato + HCO3-‐ + ATP à oxalacetato + ADP + Pi
oxalacetato + GTP à fosfoenolpiruvato + GDP + CO2
b) piruvato + ATP à oxalacetato + ADP + HCO3-‐
oxalacetato + GTP à fosfoenolpiruvato + GDP
c) piruvato + HCO3-‐ à oxalacetato
oxalacetato + ATP à fosfoenolpiruvato + ADP + CO2
d) piruvato + HCO3-‐ + ATP à oxalacetato + ADP
oxalacetato à fosfoenolpiruvato + Pi

12. La regulación de la glucólisis y la gluconeogénesis se encuentran coordinadas. Eso lo podemos observar
en la regulación de la fosfofructoquinasa 1 (PFK-‐1) y la fructosa-‐1,6 – bifosfatasa (FBPasa-‐1). Indique
cuál de las siguientes afirmaciones referidas a la regulación de estas enzimas es correcta:

a) el citrato activa la PFK-‐1 e inhibe la FBPasa-‐1
b) una elevada relación AMP/ATP activa la PFK-‐1 e inhibe la FBPasa-‐1
c) una elevada relación AMP/ATP inhibe ambas enzimas
d) una baja relación AMP/ATP inhibe ambas enzimas
e) un aumento de la fructosa-‐2,6-‐bifosfato activa ambas enzimas

13. Indique cuál de las siguientes enzimas cataliza la hidrólisis de los enlaces alfa 1-‐4 glucosídicos en la
glucógenolisis:

a) glucogenina
b) glucógeno fosforilasa
c) enzima desramificante
d) glucano transferasa
e) glucógeno sintasa
Para ingresar a la β-‐oxidación los ácidos grasos deben ser activados. A continuación se representa la
reacción de activación de los ácidos grasos catalizada por la Acil-‐CoA sintetasa.

43

14. Indique cuáles son los compuestos Y + Z.

a. ADP + Pi
b. AMP + PPi
c. NAD+ + H+
d. NADP+ + H+
e. CO2 + H2O

15. Indique la respuesta correcta referida a la oxidación de ácidos grasos:

a. Los ácidos grasos se oxidan por una serie de reacciones no-‐enzimáticas
b. Ocurre en el citosol de las células eucariotas
c. El rendimiento de ATP de la oxidación completa de una molécula de ácido graso de 12 carbonos
es igual al de una molécula de glucosa
d. El ingreso de los ácidos grasos de cadena larga a la mitocondria implica la unión a carnitina.
e. Los ácidos grasos ingresan a la mitocondria para su oxidación mediante difusión simple a través
de la membrana.

16. La síntesis de ácidos grasos es un proceso llevado a cabo por el complejo Ácido graso sintasa. Indique
la afirmación correcta
a. la carnitina acil transferasa permite el transporte del acetil-‐CoA para sintetizar ácidos grasos
b. el principal producto de la ácido graso sintasa es el ácido oleico (18:1)
c. la síntesis de ácidos grasos usa NADPH como poder reductor.
d. el aumento de malonil-‐CoA en el citosol inhibe la ácido graso sintasa
e. la enzima ácido graso sintasa está asociada a la membrana mitocondrial interna.

17. Indique lo correcto respecto al proceso de ß oxidación de los ácidos grasos:
a. El mayor producto de la ruta es el CO2
b. No utiliza Coenzima A
c. Sólo ocurre en hepatocitos
d. la ruta se activa cuando la glicemia es elevada.
e. Se produce NADH y FADH2 que ceden los electrones en la cadena respiratoria

18. Sobre la síntesis de ácidos grasos y la regulación del metabolismo lipídico, marque la afirmación
correcta:
a. El Malonil-‐CoA inhibe a la carnitina acil transferasa I.
b. La carnitina se adiciona a los grupos acetilo a nivel mitocondrial para su transporte al citosol
c. La síntesis de ácidos grasos se activa en los períodos de ayuno prolongado
d. El NADH aporta los electrones para la síntesis de ácidos grasos

19. Indique cuál de los siguientes cofactores derivados de vitaminas es necesario para llevar adelante la
síntesis de ácidos grasos:
a. Pirofosfato de Tiamina
b. Acido Lipoico
44
c. Piridoxal fosfato
d. Biotina
e. Acido ascórbico

20. A continuación se presente una reacción central de la vía de degradación de los ácidos grasos:
Indique en qué compartimento subcelular tiene lugar esta reacción:
a. Citosol
b. Retículo endoplásmico
c. Membrana plasmática
A Acil-CoA
grasocil- Carnitina d. Membrana mitocondrial externa
CoA

CoenzimaA 21. La avidina es un potente inhibidor de todas las
Acil-Carnitina
enzimas que utilizan biotina como coenzima para carboxilar a
expensas de HCO3-‐. ¿Cuál de las siguientes reacciones del metabolismo de los ácidos grasos se vería
afectada en presencia de avidina?

a. Acetil-‐CoA à Malonil-‐CoA
b. Ácido graso à Acil graso-‐CoA
c. Acil graso-‐CoA à Acetil-‐CoA
d. Acetil-‐CoA à Acetoacetil-‐CoA

22. ¿Cuál es el punto de regulación principal de la velocidad de la β -‐oxidación?
a. La escisión de cada Acetil-‐CoA.
b. La síntesis de cada Malonil-‐CoA.
c. La oxidación de los dobles enlaces.
d. El transporte de los ácidos grasos desde el citosol a la mitocondria.
e. El transporte de los ácidos grasos desde la mitocondria al citosol.

23. Indique cual es la opción correcta con respecto a la regulación del metabolismo de los ácidos grasos:
a) La β oxidación es activada por el aumento de citrato en el citosol
b) El aumento de malonil CoA activa la carnitina acil transferasa I
c) El punto de regulación principal de la β oxidación es el ingreso de los ácidos grasos activados
hacia la matriz mitocondrial
d) El aumento de AMP lleva a la activación de la sínteses de ácidos grasos
e) El ATP es modulador positivo de la enzima activadora del ácido graso, la acil-‐CoA sintetasa.

24. Indique cuál de las siguientes afirmaciones corresponde a uno de los productos de la β-‐oxidación
del ácido esteárico, ácido graso de 18 carbonos.
a) 18 CO2
b) 18 NADPH
c) 1 propionil-‐CoA
d) 9 acetil-‐ CoA
e) 36 ATP

45
25. Se estudia la síntesis de ácido palmítico (16C) a partir de moléculas de malonil-‐CoA marcadas en el
carbono 2 (forma 1) o en el carbono 3 (forma 2) con el isótopo 13C. Estos experimentos permiten
determinar si cada uno de esos C forma parte del ácido graso sintetizado:
1)
H O
13 ¿A partir de sus conocimientos con respecto a la síntesis de ácidos grasos
OOC C C S CoA defina cuántos carbonos 13C se encontrarán en el producto final ácido
H palmítico cuando se sintetiza a partir del Malonil-‐CoA forma (1) o forma (2)?
a) Incubados con (1) se marcarán los 16 carbonos.
b) Incubados con (1) se marcarán 8 de los 16 carbonos.
2) H O
13 c) Incubados con (2) no se marcará ninguno de los 16 carbonos.
OOC C C S CoA
d) Incubados con (2) se marcarán 8 de los 16 carbonos.
H e) Incubados con (2) se marcarán los 16 carbonos.

46
VII. Integración del metabolismo.

Metabolismo intermediario e integración del metabolismo. Naturaleza convergente del catabolismo y
divergente del anabolismo. Glucosa-‐6-‐fosfato, piruvato y acetil-‐CoA como encrucijadas metabólicas. Roles
del ATP, NADH Y NADPH. Acción coordinada de las rutas metabólicas en distintas situaciones celulares.
Roles de la compartimentalización y la regulación coordinada de las vías de producción y almacenamiento
de energía. Especialización metabólica de los distintos órganos

1. Durante el ayuno se hidrolizan triglicéridos presentes en el tejido adiposo. Los ácidos grasos viajan por
la sangre a los tejidos donde son oxidados en la mitocondria, produciendo grandes cantidades de acetil
CoA
a) ¿Qué ocurre en estas condiciones con la velocidad del flujo de metabolitos por el Ciclo del Ácido Cítrico?
b) ¿Qué enzimas son responsables de esta variación en el flujo?
c) ¿Cuáles son los mecanismos de regulación de estas enzimas?

2. Es bien conocido que las dietas ricas en carbohidratos se asocian con aumento de peso debido
principalmente a un aumento del tejido adiposo.
a) Explique esquemáticamente el mecanismo por el cual la glucosa se transforma en ácidos grasos.
b) ¿En qué órgano se produce principalmente dicha reacción?
c) ¿Es posible sustituir totalmente los carbohidratos de una dieta por lípidos?

3. El consumo de glucosa por el músculo cardíaco puede ser medido haciendo circular artificialmente
sangre a través de un corazón intacto aislado y midiendo la concentración de glucosa antes y después
de que la sangre pase por el corazón. Si la sangre es desoxigenada, el músculo cardíaco consume
glucosa a un nivel estacionario. Cuando se adiciona oxígeno a la sangre, la velocidad de consumo de
glucosa cae dramáticamente y luego continúa a una velocidad menor. ¿Por qué?

4. Analice las similitudes y diferencias, estructurales y funcionales, del NADH y NADPH.

5. Plantee cuáles pueden ser los diferentes destinos metabólicos de la glucosa 6-‐fosfato, el piruvato y la
acetil CoA en un hepatocito, en condiciones de ayuno y después de una comida abundante.

6. Análisis de las bases moleculares de la intoxicación alcohólica

Las células animales (principalmente los hepatocitos) contienen la enzima citosólica alcohol deshidrogenasa
(ADH) que cataliza la oxidación del etanol a acetaldehído. El acetaldehído entra a la mitocondria donde es
oxidado a acetato por la enzima acetaldehído deshidrogenasa (AcDH).

CH3 – CH2 – OH + NAD+ -‐> CH3 – HCO + NADH ADH
CH3 – HCO + NAD+ -‐> CH3 – COOH + NADH AcDH

Los efectos metabólicos de la intoxicación con alcohol surgen de las acciones de estas dos enzimas que
llevan a un desbalance de la relación NADH/NAD+ en la célula. A continuación presentamos algunos datos
47
de la historia clínica de un paciente alcohólico, Alberto Martini, a fin de que sean analizados desde una
perspectiva molecular.

Alberto Martini es alcoholista, llegó a la emergencia del hospital confuso y tembloroso. Su vecina le dijo al
médico que había estado tomando mucho durante la última semana. En este tiempo su apetito había
disminuido y casi no había comido en los últimos tres días. Su nivel de glucosa en sangre era de 28 mg/dl
(niveles normales luego del ayuno nocturno 80-‐100 mg/dl), y el de alcohol en sangre de 295 mg/dl (niveles
de intoxicación 150-‐300 mg/dl). Los exámenes de laboratorio revelaron que tenía una acidemia,
acompañada de niveles altos del cuerpo cetónico ß-‐ hidroxibutirato (40 veces mayores a los normales) y de
ácidos grasos en sangre. El análisis de acetona en orina dio negativo.

a. ¿A que se deben los niveles bajos de glucosa en sangre del Sr Martini? ¿Cómo se encontrarán los
depósitos de glucógeno hepático de Alberto Martini?¿Porqué?
b. ¿Qué ocurrirá con la gluconeogénesis a partir de lactato, a partir de glicerol y a partir de oxalacetato?
¿Cuál es la diferencia entre el ayuno con consumo de alcohol y sin consumo de alcohol para estas vías?
c. ¿Qué vías metabólicas utilizará Alberto Martini para la síntesis de ATP en cerebro y músculo?¿Qué
ocurrirá en el hígado?
d. Indique cuáles son los cuerpos cetónicos, su síntesis y metabolismo.¿Cómo explica que el test de acetona
en la orina diera negativo y que el cuerpo cetónico predominante sea el ß-‐hidroxibutirato?
e. ¿Qué vías metabólicas hepáticas serán inhibidas por este aumento de la relación NADH/NAD+? ¿Cuáles
son los puntos claves (enzimas) de estas vías que serán responsables de la inhibición?

7. Análisis del metabolismo intermediario de una célula cancerígena.
Existen puntos clave de varias de las vías de señalización cuyas mutaciones convergen en la adaptación del
metabolismo de las células tumorales al objetivo de apoyar su crecimiento y supervivencia, siendo,
aparentemente, algunas de estas alteraciones metabólicas necesarias para la malignidad.
Las células con alta tasa de división (ya sean tumorales o no) presentan tres necesidades básicas:
(1) la generación rápida de ATP para mantener el estado energético
(2) el aumento de la biosíntesis de macromoléculas
(3) mantenimiento del estado redox (mantener poder reductor).
En función de estas características analice la siguiente figura.
48

1-‐ Indique como cuál o cuáles de las vías de la figura están implicadas en resolver las tres necesidades
básicas planteadas.

El efecto Warburg implica un alto consumo de glucosa por parte de la célula, siendo solo una pequeña
fracción de esa glucosa oxidada completamente a CO2 y H2O. Este efecto fue caracterizado en células
cancerígenas, aunque es el mismo fenotipo que se observa en otras células con alta proliferación-‐

2-‐ ¿Como explica el vínculo entre este efecto y
las tres características de las células
cancerígenas o proliferativas planteadas
anteriormente?

Extraído de Science 2009:Vol. 324, Issue 5930, pp. 1029-‐1033

La dependencia de la glucólisis en el metabolismo de la célula cancerígena ha determinado el desarrollo de
métodos para el diagnóstico de cáncer como la Tomografia por Emision de Positrones (PET) tras la
administración de un análogo de glucosa, la 18(F)fluoro-‐2-‐desoxiglucosa, que presenta gran captación por
parte de las células, se metaboliza parcialmente y se puede detectar.
49

1. La molécula representada es la glucosa-‐6-‐P, una de las encrucijadas metabólicas más importantes del
metabolismo. Indique la opción correcta:

a. Si no es usada sale de la célula por un transportador específico.
b. En la glucólisis es completamente oxidada a CO2 y H2O.
c. La hidrólisis del grupo fosfato por la glucosa fosfatasa libera ATP
d. Es precursora de la ribosa 5-‐P necesaria para la síntesis de
nucleótidos .
e. Es una molécula hidrofóbica que se asocia a las membranas
biológicas

2. Indique cuál es la vía metabólica que genera poder reductor en forma de NADPH:

a. Oxidación de ácidos grasos
b. Ruta de las pentosas-‐fosfato
c. Ciclo de Krebs
d. Glucólisis
e. Síntesis de ácidos grasos.

El metabolismo energético celular se encuentra regulado a distintos niveles y en respuesta a diferentes
necesidades energéticas. Las siguientes gráficas muestran la concentración sanguínea (plasmática) de
glucosa, cuerpos cetónicos y ácidos grasos durante el ayuno (Preguntas 17, 18, 19, 20).

6" 6" Cuerpos cetónicos
" "
sanguínea (mM)
sanguínea (mM)
Concentración
Concentración

4" 4"
" Glucosa "
2" 2" Ácidos grasos

" "

0" 0"
0""""""2"""""""4""""""""6"""""""8" 0""""""2"""""""4""""""""6"""""""8"

Días"de"Ayuno" Días"de"Ayuno"
3. De acuerdo a los conocimientos adquiridos sobre el metabolismo celular durante los periodos de
ayuno, indique lo correcto:

a. Las reservas de glucógeno hepático mantienen la concentración de glucosa sanguínea constante en
los primeros 5 días del ayuno.
b. El hepatocito acelera la glucólisis durante el ayuno para poder realizar síntesis de glucosa.
c. La síntesis de cuerpos cetónicos provee de energía a tejidos dependientes de glucosa.
d. Los ácidos grasos no son usados para la obtención de energía celular durante el ayuno.
e. Las células musculares liberan la glucosa sintetizada a la sangre para mantener la glicemia.

50
4. Indique cual es la afirmación correcta sobre la regulación de las vías metabólicas durante el ayuno :

a. La glucoquinasa y la hexoquinasa se activan por un aumento en la concentración de glucosa-‐6-‐
fosfato.
b. La piruvato deshidrogenasa se activa por fosforilación, debido al aumento de ATP.
c. El ciclo de Krebs se inhibe en células musculares para promover la síntesis de cuerpos cetónicos.
d. El aumento de los ácidos grasos se debe a que se inhibe la oxidación de ácidos grasos.
e. En el hepatocito, la disminución de la Fructosa-‐2,6-‐bifosfato activa la gluconeogénesis.

5. Indique la afirmación correcta referida al metabolismo de los cuerpos cetónicos durante el ayuno:

a. Comienzan a producirse luego de 6 días de ayuno
b. Son el sustrato energético del eritrocito.
c. Son el sustrato energético de la neurona.
d. Son producidos por hígado y músculo.
e. Son producidos por el cerebro.

6. El metabolismo celular actúa en forma coordinada. Indique cual de las siguientes afirmaciones es
correcta:
a. En el estado estacionario, la velocidad de los procesos catabólicos es mayor que la de los procesos
anabólicos
b. La vía metabólica más activa en el tejido adiposo es la beta-‐oxidación.
c. El corazón necesita glucosa como fuente de energía para mantener su actividad.
d. El músculo cardíaco puede utilizar glucosa y ácidos grasos como fuente de energía
e. El hígado utiliza cuerpos cetónicos como fuente de energía.

7. Indique cuál de las siguientes enzimas NO se expresa en el músculo cardíaco:

a. Malato deshidrogenasa
b. Acil CoA sintetasa
c. Lactato deshidrogenasa
d. Glucosa-‐6-‐fosfatasa
e. Piruvato deshidrogenasa

8. En cuanto a los efectos sobre el metabolismo celular de la intoxicación con CN-‐, indique cual es la
opción correcta
a. En esta situación, el ciclo de Krebs funciona normalmente
b. En esta situación, la glucólisis se encuentra inhibida.
c. En esta situación, hay un aumento en la producción de ácido láctico por la glucólisis
d. A pesar de la inhibición de la cadena respiratoria, el gradiente de protones en la membrana
mitocondrial interna se mantiene.
e. En los glóbulos rojos se observa una importante disminución de los niveles de ATP.

9. Indique bajo forma de qué compuesto se transportan los grupos acetilo desde la mitocondria al
citosol para la síntesis de ácidos grasos.
a. Acetil-‐carnitina
b. Acetil-‐fosfato
c. Acetil-‐CoA
d. Citrato
e. Malato

51
10. En el caso de un cultivo de levaduras realizado en condiciones de anaerobiosis, indique lo correcto

a. el piruvato es transformado en acetil-‐CoA por el complejo enzimático piruvato deshidrogenasa
b. el piruvato es transformado en etanol y CO2
c. el piruvato es transformado en lactato, recuperando el NAD+ necesario para la glucólisis.
d. el piruvato es transformado en lactato, recuperando el NADH necesario para la glucólisis.
e. el piruvato se transforma en cuerpos cetónicos para poder aportar energía a estas células

11. En el caso de una célula de mamífero en condiciones aeróbicas, indique la opción correcta:

a. el piruvato es transformado en acetil-‐CoA por el complejo enzimático piruvato deshidrogenasa
b. el piruvato es transformado en etanol y CO2
c. el piruvato es transformado en lactato, recuperando el NAD+ necesario para la glucólisis.
d. el piruvato es transformado en lactato, recuperando el NADH necesario para la glucólisis.
e. el piruvato se transforma en cuerpos cetónicos para poder aportar energía a estas células

12. Indique cual de las siguientes enzimas que participan en el metabolismo de los ácidos grasos se
encuentra inhibida durante el ayuno:
a. acil-‐CoA sintetasa
b. acetil-‐CoA carboxilasa
c. carnitina-‐acil transferasa I
d. acil-‐CoA deshidrogenasa
e. propionil-‐CoA carboxilasa

13. Indique cual de las siguientes enzimas del metabolismo de los carbohidratos se activa en el
hepatocito durante el ayuno:
a. Fosfofructoquinasa 1
b. Fosfofructoquinasa 2
c. Piruvato deshidrogenasa
d. Glucosa-‐6-‐fosfatasa
e. Glucosa-‐6-‐fosfato deshidrogenasa

14. De acuerdo al metabolismo de los ácidos grasos durante el ayuno es correcto afirmar que:
a. constituyen el sustrato energético para los glóbulos rojos
b. constituyen el sustrato energético para el cerebro
c. son utilizados a nivel hepático para la síntesis de cuerpos cetónicos
d. son utilizados a nivel hepático para la síntesis de glucosa

15. Durante el ayuno prolongado la gluconeogénesis es central para mantener los niveles de glucosa en
sangre. De acuerdo a sus conocimientos sobre la síntesis de nueva glucosa es correcto afirmar que
durante el ayuno:
a. la glucosa es sintetizada en el hepatocito a partir del Acetil-‐CoA producto de la beta oxidación de
ácidos grasos
b. la glucosa es sintetizada en el músculo a partir de los aminoácidos producidos en la degradación
proteica
c. la glucosa es sintetizada en el cerebro a partir de los cuerpos cetónicos.
d. la glucosa es sintetizada en el hepatocito a partir del lactato producido en glóbulos rojos.
e. la glucosa es sintetizada en la célula muscular y liberada a la sangre.

52
16. ¿Cuál de las siguientes moléculas es precursora en la síntesis de cuerpos cetónicos?

a) glucosa
b) oxalacetato
c) citrato
d) acetil-‐CoA
e) ácido palmítico

17. Cuántas moléculas de ATP y GTP se producirán luego de la oxidación completa de una molécula de
Acetil-‐CoA hasta CO2 y H2O?
1 NADH se acopla a la síntesis de 2.5 ATP y 1 FADH2 se acopla a la síntesis de 1.5 ATP

a) 1 ATP y 1 GTP
b) 9 ATP y 1 GTP
c) 18 ATP y 2 GTP
d) 30 ATP y 2 GTP
e) 28 ATP y 2 GTP

18. El CO2 es uno de los productos de las rutas catabólicas, indique en cuál de las siguientes rutas del
catabolismo NO se produce CO2

a) glucólisis
b) piruvato deshidrogenasa
c) ciclo de Krebs
d) ruta de las pentosas fosfato
53

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Bioquímica-­‐BCM-­‐

Unidad Curricular: Biología Celular y Molecular

a. ¿Cómo se mide la actividad de las enzimas? ¿Qué se mide en

3. Cinética de Michaelis-­‐Menten.

Ecuación de Michaelis-­‐Menten.

saturada, no puede actuar a mayor velocidad, Etotal = ES.

Vo (nmol P/min) a. Determinar Km y Vmax en las

Recordemos que el equilibrio está dado por la igualdad de las velocidades

5. Si analizamos la energía libre de la reacción de isomerización de la glucosa 6 fosfato (G-­‐6-­‐P) en fructosa

6. Bioenergética de la reacción catalizada por enzima.

Preguntas de Parciales y Exámenes.

F-­‐6-­‐P + ATP ó F-­‐1,6-­‐biP + ADP ∆G0' = -­‐14.2 kJ/mol.

a. [3-­‐fosfoglicerato] = 10 mM y [2-­‐fosfoglicerato] = 10 mM.

III. Introducción al metabolismo intermediario y Glucólisis

c) ¿Cómo se explica la diferencia de energía en condiciones estándar y fisiológicas, de la reacción

2"ATP" 2"ATP" 2"ATP"

Las siguientes dos preguntas refieren a la figura en que se representa la actividad de la

4. Indique la opción correcta referida a la

d. la adición de citrato desplaza la curva hacia izquierda

d. El compuesto marcado como A corresponde a Pi

a) Sustancia a inflado amarillo

b) Sustancia b inflado rojo

c) Sustancia c No inflado amarillo

d) Sustancia d No inflado rojo

IV. Ciclo de Krebs. Cadena Respiratoria. Fosforilación Oxidativa

d. Si las concentraciones intracelulares en

Transporte de electrones,

NADH-­‐CoQ reductasa (complejo I) 3.36 2.34*

Succinato-­‐ cit c reductasa (desde

Se estudia al consumo de oxígeno en preparados de

A continuación se muestra la reacción catalizada por el complejo enzimático Piruvato deshidrogenasa

a) Un aumento en la oxidación de NADH

V. Ruta de las pentosas fosfato. Gluconeogénesis

VI. Síntesis y degradación de los ácidos grasos.

5. Explique el rol de la carnitina acil transferasa en la compartimentalización de la β-­‐oxidación de los

VII. Integración del metabolismo.

Preguntas de Parciales y Exámenes.

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a. [3-‐fosfoglicerato] = 10 mM y [2-‐fosfoglicerato] = 10 mM.

NADH-‐CoQ reductasa (complejo I) 3.36 2.34*

Succinato-‐ cit c reductasa (desde

5. Explique el rol de la carnitina acil transferasa en la compartimentalización de la β-‐oxidación de los