E ficacia de la cepa nativa de Bacillus subtilis como agen-

te supresor del nematodo del nudo Meloidogyne spp. en

cultivo de Capsicum annuum (ají pimiento piquillo)
Effectiveness of the native strain of Bacillus subtilis as a
suppressant agent of the nematode Meloidogyne spp knot
in cultures of Capsicum annuum “piquillo pepper chili”

1
Nancy Mercedes Soto Deza, 2Segundo Eloy López Medina y 3César Augusto Murguía Reyes
1
Bióloga; especialista en derecho ambiental; máster en biotecnología y bioingeniería; doctora en ciencias ambienta-
les. Universidad Nacional de Trujillo, Perú. 2Biólogo; maestro en administración de flora y fauna silvestre; doctor en
medio ambiente. Instituto de Papa y Cultivos Andinos-Universidad Nacional de Trujillo. La Libertad, Perú. 3Área de
Protección Vegetal, Universidad Nacional de Piura. Perú.
1
[email protected], [email protected], [email protected]

Resumen Abstract
En campos de cultivo infestados con Nematodos se uti- In croping fields infested with nematodes, the RCBD com-
lizó el diseño bloques completos al azar - DBCA. Se in- plete blocks design was applied. 85% pure chicken manu-
corporó gallinaza al 85 % de pureza, 15 t/ha y 30 t/ha. re was also incorporated, 15 t / ha and 30 t /. Spores of B.
Se inocularon esporas de B. subtilis, 1 × 106 esp/ mL y 2 subtilis, 1 X106 eng / mL and 2 x 106 sperm / mL Capsi-
× 106 esp/mL a semillas de Capsicum annuum en siem- cum annuum seeds in direct seeding were inoculated (ex-
bra directa (ensayo I), y trasplante (ensayo II). A los 45 periment I) and transplantation (experiment II). At 45 and
y a los 90 días se determinaron análisis de poblaciones 90 days analysis of nematode populations were determi-
de Nematodos, índice de nodulación, altura de la planta ned, nodulation index, plant height and fruit number. The
y número de frutos. Los datos se sometieron a análisis data was subjected to analysis of variance using the Stat-
de varianza utilizando el software Statgraphics Plus 5.0. graphics Plus 5.0 software. To estimate the significant di-
Para estimar las diferencias significativas entre tratamien- fferences between treatments, the Tukey test was applied.
tos se aplicó prueba Tukey. Al inicio el ensayo I evidenció Initially, the study showed highly infested knot nematode
alta infestación del nematodo del nudo Meloidogyne spp., Meloidogyne spp., 275 to 27720 soil nematodes/100 cm3,
275-27720 Nematodos/100 cm3 de suelo. En el ensayo II and in Trial II it was between 9 and 1 nematodes/100 cm3
la evidencia fue entre 9 - 1 nemátodos/100 cm3 de suelo, of soil, with significant difference (P ≤ 0.05). The final po-
con diferencia significativa (P≤0,05). La población final re- pulation recorded after the application of Bacillus subtilis,
gistrada tras la aplicación de Bacillus subtilis fue de 13 y 0 was 13 and 0 nematodes/100 cm3 of soil, the nematode
nemátodos/100 cm3 de suelo; los niveles de población de population levels, decreased significantly, showing signi-
Nematodos disminuyeron considerablemente: presenta- ficant difference (P ≤ 0.05). Efficacy of B. subtilis on Me-
ron diferencia significativa (P≤0,05). La eficacia de B. sub- loidogyne spp., it was clear, reduced initial populations of
tilis sobre poblaciones de Meloidogyne spp. fue evidente, the nematode, reaching a reproduction rate less than 1,
pues redujo las poblaciones iniciales del nematodo, que non-galling index reached grade 3. The interaction of B.
alcanzaron una tasa de reproducción menor que 1; el índi- subtilis with poultry manure amendment favored the pro-
ce de agallamiento no alcanzó el grado 3. La interacción duction achieved in the cultivation of Capsicum annuum.
de B. subtilis con la enmienda estiércol de gallinaza favo-
Key words: Bacillus subtilis, poultry manure, Meloi-
reció la producción alcanzada en el cultivo de Capsicum
dogyne spp., Capsicum annuum, biological control.
annuum.
Palabras clave: Bacillus subtilis, estiércol de gallinaza, Introducción
Meloidogyne spp., Capsicum annuum, control biológico.
El departamento de Piura se encuentra ubicado en la par-
te noroccidental del Perú. Limita por el norte con Tumbes y
la República del Ecuador; por el este, con Cajamarca y la

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 Revista de Investigación Agraria y Ambiental – Volumen 3 Número 1 – enero - junio 2012 – ISSN 2145-6097

República del Ecuador; por el sur, con Lambayeque; por el por tiesto causaron amarillamiento, defoliación y hasta la
oeste, con el Océano. muerte de la planta de kenaf (H. cannabinus) (malvácea
utilizada en la producción de papel y alimento de ganado).
El cultivo de ají pimiento del piquillo en la zona de Cha-
Perera González (2007) reporta que en el control de Ne-
pairá-Piura, viene presentando problemas, en el mes de
matodos de la Platanera, las poblaciones máximas de Ne-
marzo del año 2010 se inició la siembra de Capsicum an-
matodos a partir de las cuales se recomienda tratamientos
nuum, una semana después del trasplante se observaron
de control es de 1.000 Meloidogyne/100 gr de raíz. Aun
nodulaciones en las raíces, clorosis en las hojas de Cap-
así, para decidir realizar un tratamiento químico debe
sicum annuum, se realizaron análisis con la finalidad de
efectuarse un examen del conjunto de la plantación y del
determinar la fuente de infección; determinándose en la
desarrollo radicular, ya que una correcta nutrición y riego y
Universidad Nacional de Piura, presencia de Meloidogyne
raíces bien desarrolladas soportan niveles superiores sin
spp. y otros Saprófitos, tanto en raíces como en el suelo.
provocar daños en la producción. Asimismo aportes de
Durante el cultivo disminuyó la calidad y producción de la
materia orgánica al suelo manteniendo niveles superiores
cosecha, incrementándose la aplicación de nematicidas,
al 3% estimulan el desarrollo radicular y ejercen un efecto
estas sustancias químicas por su uso elevado han provo-
de control natural sobre los Nematodos.
cado un incremento de 40% en los costos y alteración al
ambiente. El desarrollo y aplicación de agentes de control biológico
de plagas adquiere una importancia relevante como una
Para el control de estos organismos se recomendó el em-
alternativa en el desarrollo de una agricultura sostenible
pleo de Bromuro de metilo e híbridos resistentes (Casano-
que preserve los recursos naturales y el ambiente para
va et al., 2003), pero el uso de Bromuro de metilo ha sido
las futuras generaciones. La aplicación controlada en agro
considerado como supresor de la capa de Ozono.
ecosistemas de organismos vivos o sus metabolitos para
En la segunda Convención Internacional en Sistemas de el control de plagas y enfermedades, implica el mejora-
Producción y Fitosanidad de Hortalizas (García, 2008), en miento de los cultivos, al proteger las plantas del deterioro
la investigación “Manejo de Enfermedades en Hortalizas producido por agentes fitopatógenos (Gómez et al, 2002).
con Productos Biorracionales” se reportó que los plaguici- Los agentes biocontroladores como los organismos que
das químicos provocan persistencia ambiental a residuos interactúan con los Nematodos fitoparásitos en el suelo
tóxicos, generación de organismos resistentes, contami- deben tener algunas características básicas: No deben
nación de recursos hídricos con degradación de la flora y ser patógenos de plantas, hombres o animales, capaz de
fauna y crean ambientes inhabitables en el suelo para otro reducir o suprimir eficientemente las poblaciones de Ne-
tipo de microorganismos que actúan de manera benéfica. matodos por debajo del nivel crítico, capacidad de adap-
tación a diferentes ambientes del suelo (textura, grado de
Los Nematodos Meloidogyne spp., son gusanos filifor-
humedad, composición química y materia orgánica), bue-
mes del grupo de los nematelmintos, con el cuerpo sin
na habilidad competitiva, alto potencial de reproducción
segmentar, revestidos de una piel dura (cutícula) y con
para obtener una población alta, capacidad de sobrevivir
simetría bilateral, de entre 1 y 3 mm de longitud. Pene-
en épocas difíciles (Piedra, 2008).
tran en las células vegetales perforando la membrana y
se alimentan de su contenido. Gusanos microscópicos Las bacterias son un grupo abundante de microorganis-
que suelen producir bultos en las raíces de las plantas, mos del suelo sobre los cuales se ha realizado pocos es-
los llamados “rosarios” o “porrillas”; producen deformacio- fuerzos para determinar su posibilidad de uso; las bacte-
nes, necrosis y podredumbre en los órganos vegetales es- rias son menos conspicuas que los hongos, los efectos de
pecialmente del sistema radical y, en el caso de ataques los hongos en muchos casos son espectaculares y fáciles
graves, la progresiva reducción de los rendimientos, cuyo de observar, mientras que el efecto de las bacterias es más
efecto generalmente es aducido a cansancio o fatiga del sutil y las bacterias son más difíciles de aislar y propagar
suelo y a una mala nutrición de la planta. Estos daños que los hongos. Las bacterias que presenta un potencial
impiden la absorción por las raíces, traduciéndose en un como biocontrolador mayor que los hongos es la Pasteuria
menor desarrollo de la planta y la aparición de síntomas penetrans (Rojas, 1996), Bacillus cereus y Bacillus sub-
de marchitez en verde en las horas de más calor, clorosis tilis (Gallegos, et al. 2009). El género Bacillus incluye
y enanismo. Sólo especies del género Meloidogyne ata- una importante variedad de especies Gram-positivas, no
can al pimiento, produciendo marchitez y enanismo en las patogénicas, con propiedades antagonistas. Son buenas
plantas (Incagro, 2009). La especie Meloidogyne incogni- secretoras de proteínas y metabolitos, fáciles de cultivar
ta, se conoce como agallador de los nódulos o de las raí- y altamente eficientes para el control de plagas y enfer-
ces por el tipo de lesiones que produce. Para vivir prefiere medades. Los mecanismos de acción de Bacillus spp.,
suelos sueltos y arenosos y puede completar su ciclo vital incluyen competencia por espacio y nutrientes, antibiosis
en menos de 30 días (Acosta García, 2010). e inducción de resistencia. Además, tienen comprobado
efecto en la promoción de crecimiento de las plantas. La
En investigaciones realizadas por Pérez Pérez (2007) en
capacidad de Bacillus spp., de formar esporas que sobre-
Puerto Rico, se determinó que densidades poblacionales
viven y permanecen metabolitamente activas bajo condi-
de Meloidogyne incognita mayores a 12,000 huevos/J2,
ciones adversas, las hace apropiadas para la formulación

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 Eficacia de la cepa nativa de Bacillus subtilis como agente supresor del nematodo del nudo Meloidogyne spp. en cultivo de Capsicum annuum (ají pimiento piquillo)

de productos viables y estables para el control biológico - Suelo agrícola para el cultivo de Capsicum annuum, o
(Chaves Méndez, 2007). Para considerar que la bacteria ají pimiento del piquillo.
sea un biocontrolador del nematodo, su ciclo de vida debe
Diseño de investigación
desarrollarse en sincronía con el del nematodo. Bacillus
subtilis, microorganismo cuyo hábitat natural es el suelo, se Se aplicó un diseño DBCA: bloques completos al azar, con
encuentra ampliamente distribuido en la naturaleza. Entre 9 tratamientos, 3 repeticiones y 27 unidades muestrales por
sus principales características se encuentra su capacidad tratamiento, para los ensayos I y II.
para formar esporas en diversas condiciones de estrés, cre-
cer en un intervalo amplio de temperaturas (desde 15 hasta
Métodos
55 ºC), presentar motilidad, aerotaxis y velocidades de cre- Preparación del terreno
cimiento altas, sobrevivir en concentraciones salinas (hasta
Según BPA (sistema EUROGAP). En cada parcela de tierra
el 7% de NaCl), producir una amplia variedad de antibióti-
se realizó movimiento de tierra y exposición al sol (solariza-
cos y enzimas hidrolíticas extracelulares (Nakamura et al.,
ción natural).
1999). Por otra parte el extracto no celular de B. subtilis,
se reporta que también tiene un alto grado de propiedades Ensayo I: Se trabajó en un área de 80 m2 por parcela (con-
larvicidas sobre nudos y quistes Nematodos. Fernando de formada por 2 camas de 20 m lineales), para un área total
Araujo y col (2009), reportaron que las endotoxinas produ- de 0,270 ha, dividida en 3 bloques.
cidas por B. subtilis, intervienen con el ciclo reproductivo
Ensayo II: Se trabajó en un área de 104 m2 por parcela (con-
de Nematodos, en el estadío de ovulación y eclosión de
formada por 2 camas de 29 m lineales), para un área total
juveniles, considerando a B. subtilis, como supresor del ne-
de 0.350 ha, dividida en 3 bloques. Luego se incorporó, de
matodo formador de agallas en cultivo de tomate.
manera uniforme, la enmienda orgánica de estiércol de ga-
En nuestro país, no se han encontrado investigaciones es- llinaza (85% de pureza), en la dosis de 15 t/ha y 30 t/ha,
pecíficas de control de Nematodos por bacterias en sola- según croquis de distribución; inmediatamente se aplicó un
náceas, según investigaciones de Alcozer et al (2006), el riego hasta conseguir la humedad de capacidad de campo.
nematodo del nudo de las raíces, Meloidogyne spp., está
Aislamiento del inóculo
muy diseminado en los suelos agrícolas de los valles de
Piura, siendo el uso de nematicidas químicos la principal Se aislaron, se identificaron y se cultivaron esporas de B.
medida de control. subtilis en el laboratorio de microbiología de Universidad
Nacional de Trujillo (Perú).
En este contexto, fue necesario buscar alternativas como la
utilización de productos naturales y biológicos para mejorar La identificación molecular de la bacteria se realizó en el
la productividad del ají pimiento del piquillo, minimizar el Centro de Bioinnovación de Antofagasta, de la Universidad
uso de productos químicos, reducir los costos y la altera- de Antofagasta (Chile).
ción al ambiente, por lo que en el presente trabajo se evaluó
Estandarización del inóculo
la eficacia de B. subtilis como agente supresor del nema-
todo del nudo Meloidogyne sp, en el cultivo de Capsicum Se obtuvo una suspensión densa de B. subtilis con agua
annuum, “ají pimiento del piquillo”. destilada estéril, a partir de un desarrollo de la bacteria
en una placa de Petri que contenía Agar Soya Tripticasa
Métodos (TSA). De esta solución se hicieron diluciones hasta obte-
Localización ner, aproximadamente, una concentración de 1 × 106 esp/
mL, y 2 × 106 esp/mL.
La investigación se realizó en los campos de cultivo de la
empresa Agroindustrial ECOACUICOLA SAC., ubicada en Formulación de las dosis
la zona de Santa Ángela, Caserío de Chapairá, distrito de
1000000 y 2000000 de esporas/mL.
Castilla, Provincia de Piura, Departamento de Piura, , zona
privilegiada por su estupendo clima cálido y sus tierras férti- Tratamiento
les, idóneas para el cultivo Capsicum annuum, o ají pimien-
Ensayo I: A la semilla de Capsicum annuum, o ají pimiento
to del piquillo durante los 365 días del año.
del piquillo, se le inocularon esporas de B. subtilis median-
El trabajo se llevó a cabo en campos provenientes de siem- te inmersión, teniendo en cuenta el tratamiento planificado;
bras de Capsicum annuum, o ají pimiento del piquillo con luego se realizó la siembra directa en cada bloque según el
infestación de Nematodos. croquis establecido y el monitoreo correspondiente.
Material de estudio Ensayo II: Los plantines de 30 días fueron trasplantados
- Esporas de cepa nativa B. subtilis. a condiciones de campo; se les inocularon esporas de B.
subtilis mediante inmersión, teniendo en cuenta el trata-
- Semillas de Capsicum annuum, o ají pimiento del pi-
miento planificado y el monitoreo correspondiente.
quillo, del Fundo Ecoacuícola SAC.
- Materia orgánica (85% de pureza).

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 Revista de Investigación Agraria y Ambiental – Volumen 3 Número 1 – enero - junio 2012 – ISSN 2145-6097

Parámetros de medición de varianza (ANVA), para un diseño de bloques completos

al azar, utilizando el software Statgraphics Plus 5.0. Para
Análisis de poblaciones del nematodo: En cada tra-
estimar las diferencias significativas entre los tratamien-
tamiento se realizó análisis de suelo para determinar las
tos de cada experimento se realizaron análisis estadístico
poblaciones iniciales del nematodo antes de la aplicación
mediante la prueba Duncan.
de la bacteria B. subtilis; también, análisis de dinámica de
poblaciones del nematodo a los 45 y a los 90 días de la Resultados
siembra.
En el Ensayo I (siembra directa) la poblaciones iniciales
Las muestras de suelo se colectaron por cada bloque ex- de Meloidogyne spp., antes de la aplicación de los trata-
perimental, con un barreno de 2,5 cm de diámetro × 20 cm mientos variaron entre 275 y 27720 Nematodos / 100 cm3
de profundidad. Luego se las mezcló con el fin de obtener de suelo, confirmando que los suelos presentaron altos
la muestra final de 100 cm3 para extracción de Nematodos; niveles de infestación del nematodo. Después de la apli-
se siguió con el método de tamizado de Cobb; la solución cación de la bacteria Bacillus subtilis, la población final
se filtró con el método del embudo de Baermann. Para la registró valores de 13 y 0 Nematodos/100 cm3 de suelo;
cuantificación de poblaciones del nematodo se utilizó un los niveles de población de Nematodos disminuyó consi-
microscopio estereoscópico. derablemente, con TR de 0.0037 a 0 (Tabla 1).
Índice de nodulación: Durante la cosecha se seleccio- El agallamiento alcanzó valores de 8 a 23 %, con un índice
naron al azar 20 plantas por unidad experimental. Para de agallamiento entre el grado 0 y 2, presentándose dife-
determinar el índice de agallamiento sobre las raíces se rencias significativas (P≤0,05) entre los tratamientos (figu-
utilizó la escala de Barker: ras 1 y 2). La altura de planta registró entre 20 y 32 cm.,
la interacción respecto a la concentración de B. subtilis y
Análisis de la producción: Antes de la cosecha se deter-
la dosis de enmienda estiércol de gallinaza se observa
minó la altura de planta y el número total de frutos.
en las figuras 3 y 4. El tamaño de fruto alcanzó entre 9
Análisis microbiológico: Presencia de la bacteria B. a 19.5 cm., la interacción respecto a la concentración de
subtilis en la raíz de Capsicum annuum. B. subtilis y la dosis de enmienda estiércol de gallinaza
(figuras 5 y 6).
Análisis de datos
Los resultados del análisis de varianza (P≤0,05) para las
Los datos poblacionales obtenidos en las mediciones pos-
poblaciones iniciales y finales de Meloidogyne spp., así
teriores a la aplicación de los productos (Pf) se compararon
como para la tasa de reproducción, muestran diferencia
con los obtenidos de muestras previas (Pi). Se obtuvo la
significativa los tratamientos aplicados (Tabla 2), corrobo-
tasa de reproducción (TR), que relaciona las poblaciones
ra la existencia de diferencias significativas la prueba Du-
finales con las iniciales (Pf/Pi). Los datos de las poblacio-
can (P≤0,05) (Tabla 3).
nes del nematodo, los índices de agallamiento, la altura de
la planta y el número de frutos se sometieron a un análisis

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 Eficacia de la cepa nativa de Bacillus subtilis como agente supresor del nematodo del nudo Meloidogyne spp. en cultivo de Capsicum annuum (ají pimiento piquillo)

Tabla 1: Tasa de Reproducción de Meloidogyne spp y promedios del Índice de agallamiento, altura de planta y ta-
maño de fruto en cultivo de Capsicum annuum “ají pimiento del piquillo” con diferentes tratamientos – Ensayo I.

Tasa de Reproducción de
Bacteria Estiércol Agallamien- Altura plan- tamaño fruto
Bloque Meloidogyne spp/100 cm3
(esporas/mL) (Tn/Ha) to (%) ta (cm) (cm)
de suelo (TR)

0 0 1 0.0031 23 20 10
0 0 2 0.0031 21 22 9
0 0 3 0.0031 21 28 12
0 15 1 0.0037 14 25 15
0 15 2 0 14 26 16.5
0 15 3 0.0006 20 25 19
0 30 1 0.0011 21 25 16
0 30 2 0.0006 19 30 17.5
0 30 3 0 20 29 19
1000000 0 1 0.0037ª 14ª 25ª 15
1000000 0 2 0a 14ª 26ª 16.5
1000000 0 3 0.0006ª 20ª 25ª 19
1000000 15 1 0.0005ª 13ª 27ª 16.5
1000000 15 2 0.0001ª 8ª 27ª 14
1000000 15 3 0.0008ª 17ª 27ª 19.5
1000000 30 1 0.0009ª 11ª 27ª 17
1000000 30 2 0a 12ª 25 17
1000000 30 3 0a 13ª 27 17.5
2000000 0 1 0.0011ª 21ª 25 16
2000000 0 2 0.0006ª 19ª 30 17.5
2000000 0 3 0a 20ª 29 19
2000000 15 1 0.0013ª 17ª 29 15.5
2000000 15 2 0.0002ª 9ª 29 15.5
2000000 15 3 0.0327ª 13ª 31 17.5
2000000 30 1 0.0006ª 16ª 27 16
2000000 30 2 0.0001ª 14ª 32 16.5
2000000 30 3 0.0007a 11ª 30 18

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 Revista de Investigación Agraria y Ambiental – Volumen 3 Número 1 – enero - junio 2012 – ISSN 2145-6097

Figura 1: Interacción entre agallamiento de la raíz de Capsicum annuum “ají pimiento del piquillo”, dosis de es-
tiércol y concentración de la bacteria B. subtilis – Ensayo I

Figura 2: Interacción entre agallamiento de la raíz de Capsicum annuum “ají pimiento”, concentración de
la bacteria B. subtilis y la dosis de estiércol – Ensayo I

Figura 3: Interacción entre la altura de planta de Capsicum annuum “ají pimiento del piquillo”, concentración de
la bacteria B. subtilis y la dosis de estiércol – Ensayo I

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 Eficacia de la cepa nativa de Bacillus subtilis como agente supresor del nematodo del nudo Meloidogyne spp. en cultivo de Capsicum annuum (ají pimiento piquillo)

Figura 4: Interacción entre la altura de planta de Capsicum annuum “ají pimiento del piquillo”, dosis de estiércol
y concentración de la bacteria B. subtilis – Ensayo I.

Figura 5: Interacción entre tamaño de fruto de Capsicum annuum “ají pimiento del piquillo”, dosis de estiércol
y concentración de la bacteria B. subtilis – Ensayo I.

Figura 6: Interacción entre tamaño de fruto de Capsicum annuum “ají pimiento del piquillo”, concentración de la
bacteria B. subtilis y dosis de estiércol – Ensayo I.

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 Revista de Investigación Agraria y Ambiental – Volumen 3 Número 1 – enero - junio 2012 – ISSN 2145-6097

Tabla 2: Análisis ANVA del efecto de B. subtilis, y dosis de estiércol sobre poblaciones del nematodo
Meloidogyne spp en cultivo de Capsicum annuum “ají pimiento del piquillo” – Ensayo I.

Tabla 3: Prueba Duncan de la Población de Meloidogyne /100 cm3 de suelo, Según la Concentración de
la bacteria B. subtilis – Ensayo I

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 Eficacia de la cepa nativa de Bacillus subtilis como agente supresor del nematodo del nudo Meloidogyne spp. en cultivo de Capsicum annuum (ají pimiento piquillo)

En el Ensayo II (trasplante de plantines) la poblaciones ini- El agallamiento alcanzó valores de 0 a 7 %, con un índice
ciales de Meloidogyne spp., antes de la aplicación de los de agallamiento entre el grado 0 y 2. La altura de planta
tratamientos variaron entre 9 y 1 Nematodos / 100 cm3 de registró entre 54 y 72 cm., la interacción respecto a la con-
suelo, confirmando presencia del nematodo en el suelo. centración de B. subtilis y la dosis de enmienda estiércol
de gallinaza se observa en las figuras 7 y 8.
Después de la aplicación de la bacteria Bacillus subtilis,
la población final registró valores de 5 y 0 Nematodos/100 El tamaño de fruto alcanzó entre 16.5 a 28 cm., la interac-
cm3 de suelo; los niveles de población de Nematodos dis- ción respecto a la concentración de B. subtilis y la dosis de
minuyó, con TR de 5 a 0 (Tabla 4). enmienda estiércol de gallinaza (figuras 9 y 10).

Los resultados del análisis de varianza (P≤0,05) para las poblaciones iniciales y finales de Meloidogyne spp., así como
para la tasa de reproducción, muestran diferencia significativa los tratamientos aplicados (Tabla 5), corrobora la existen-
cia de diferencias significativas la prueba Ducan (P≤0,05) (Tabla 6).

Tabla 4: Tasa de Reproducción de Meloidogyne spp y promedios del Índice de agallamiento, altura de planta y
tamaño de fruto en cultivo de Capsicum annuum “ají pimiento del piquillo” diferentes tratamientos – Ensayo II.

Tasa de Reproducción de
Bacteria (espo- Estiércol Agallamien- Altura plan- tamaño fruto
Bloque Meloidogyne spp/100 cm3
ras/mL) (Tn/Ha) to (%) ta (cm) (cm)
de suelo (TR)

0 0 1 0 7 56 20
0 0 2 0 0 54 22
0 0 3 0 5 64 16.5
0 15 1 0 2 58 20
0 15 2 0 0 54 21
0 15 3 0 2 54 23
0 30 1 0 4 54 19.5
0 30 2 0 0 60 22.5
0 30 3 0 2 65 21
1000000 0 1 0.0000a 3a 60a 20.00a
1000000 0 2 0.0000a 2a 68a 23.00a
1000000 0 3 0.0000a 2a 54a 23.00a
1000000 15 1 1 6a 62a 23.00a
1000000 15 2 0 0 55a 23.50a
1000000 15 3 0 0 68a 28.00a
1000000 30 1 5 9 68a 24.00a
1000000 30 2 0 0 52a 28.00a
1000000 30 3 0 0 72a 25.00a
2000000 0 1 0 0 60a 24.00a
2000000 0 2 0.0000a 0 64a 23.00a
2000000 0 3 0.0000a 0 68a 24.00a
2000000 15 1 0.0000a 4a 56a 23.50a
2000000 15 2 0 0 60a 28.00a
2000000 15 3 0.0000a 7a 65a 25.00a
2000000 30 1 0.0000a 0 68a 23.00a
2000000 30 2 0.0000a 1a 70a 23.00a
2000000 30 3 0 0 72 28

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 Revista de Investigación Agraria y Ambiental – Volumen 3 Número 1 – enero - junio 2012 – ISSN 2145-6097

Figura 7: Interacción entre la altura de planta de Capsicum annuum “ají pimiento del piquillo”, concentración de
la bacteria B. subtilis y la dosis de estiércol – Ensayo II

Figura 8: Interacción entre la altura de planta de Capsicum annuum “ají pimiento del piquillo”, dosis de
estiércol y concentración de la bacteria B. subtilis – Ensayo II.

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 Eficacia de la cepa nativa de Bacillus subtilis como agente supresor del nematodo del nudo Meloidogyne spp. en cultivo de Capsicum annuum (ají pimiento piquillo)

Figura 9: Interacción entre tamaño de fruto de Capsicum annuum “ají pimiento del piquillo”, concentración de la
bacteria B. subtilis y dosis de estiércol – Ensayo II.

Figura 10: Interacción entre tamaño de fruto de Capsicum annuum “ají pimiento del piquillo”, dosis de estiércol
y concentración de la bacteria B. subtilis – Ensayo II.

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 Revista de Investigación Agraria y Ambiental – Volumen 3 Número 1 – enero - junio 2012 – ISSN 2145-6097

Tabla 5: Análisis ANVA del efecto de B. subtilis, y dosis de estiércol sobre poblaciones del nematodo
Meloidogyne spp en cultivo de Capsicum annuum “ají pimiento del piquillo” – Ensayo II.Tabla 6: Prueba Duncan
de la Población de Meloidogyne /100 cm3 de suelo, Según la Concentración de la bacteria B. subtilis – Ensayo II.

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 Eficacia de la cepa nativa de Bacillus subtilis como agente supresor del nematodo del nudo Meloidogyne spp. en cultivo de Capsicum annuum (ají pimiento piquillo)

Figura 11. Observación de esporas de B. subtilis en una raíz de Capsicum annum a 1000X (coloración Gram).
Ensayo I

Figura 12. Observación de esporas de Bacillus adheridas a la cutícula de Meloidogyne spp. J2 a 3000X. Ensayo II

Discusión y conclusiones natural, de esta forma las endosporas específicas para

una determinada población de Meloidogyne presente en
En el cultivo de Capsicum annuum, anterior a la ejecución un área dada, se multiplicaran en su progenie.
de la investigación, se evidenció presencia de clorosis y
nodulaciones en las raíces; una de las causas que pro- Los resultados de ésta investigación muestran que el efec-
voca ésta manifestación, es por infestación del nematodo to que ejerce la bacteria B. subtilis sobre la población del
Meloidogyne spp., el cual es responsable de la formación nematodo del nudo Meloidogyne spp., está relacionada
de nódulos en la raíz e interfiere en la absorción de agua con la cantidad de esporas inyectadas; así mismo tiene
y nutrientes. Después de aplicar la cepa nativa de B. sub- interacción con la materia orgánica (estiércol de gallina-
tilis, en el ensayo I y II, se observó ausencia de clorosis, za); esto se hace evidente en el ensayo I, al aplicar el tra-
evidenciando acción supresora en Meloidogyne spp. Se- tamiento con 1x106 esporas/mL de B. subtilis sobre suelos
gún Pérez Pérez, (2007), las plantas enfermas presentan con materia orgánica de 30 Tn/ha, siendo la efectividad
síntomas típicos tales como: cese del crecimiento de la aproximado 99%; comportamiento similar se registró en
planta, proliferación del desarrollo de nódulos en raíces, el ensayo II con tratamiento de 1x106 y 2x106 esporas/mL.
amarillamiento en las hojas, defoliación, culminando con Según Rojas M. T. et al. (1999), Afirman que, la eficacia
la muerte en plantas, etc. La aplicación de la esporas de de la bacteria depende en gran medida de la cantidad de
B.subtilis, en la semilla para la siembra directa y en los esporas existentes en el suelo y de la posibilidad de que
plantines para el trasplante, se hizo por inoculación, ésta éstas se puedan adherir a la cutícula de los Nematodos
estrategia es una de las más sugeridas para obtener efec- para poder parasitar generaciones futuras; las esporas se
tividad en la disminución de poblaciones de Meloidogy- pueden almacenar en el suelo y raíz seca por periodos
ne spp., de forma directa; según Gómez L. et al. (2010), largos sin mostrar pérdida aparente de viabilidad.
indican que éste tipo de estrategia es más eficiente en
el control de diversas poblaciones de Meloidogyne spp., A los 90 días de aplicación de los tratamientos, se estimó
pero requiere de más tiempo para que ocurra la selección la tasa de reproducción en los ensayos I y II, encontrán-

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dose comportamientos similares en los registros de pobla- minuyen la cantidad de residuos, son efectivos en peque-
ción final del nematodo Meloidogyne spp, con una tasa de ñas cantidades, frecuentemente se descomponen rápido
reproducción menor que 1, lo cual indica el control ejercido y por lo general afectan solo a la plaga objetivo.
por la bacteria B. subtilis; evidencia que se confirma en la
menor formación de agallamiento (48% raíces agalladas) Los resultados observados en el presente estudio de-
en el Ensayo II. Así mismo de las plantas de Capsicum muestran que el control por B. subtilis representa una
annum evaluadas, se encontró en la altura de planta ma- alternativa dentro de un sistema de manejo integrado de
yor diferencia en el ensayo II del ensayo I, logrando mayor fitoNematodos parásitos de plantas, coincidiendo con la
altura con el tratamiento de 2x106 (esporas/mL). Guillén investigación de Siddiqui Z. y col (2001) donde se reporta,
Cruz R., et al (2006), infiere que algunas bacterias de Ba- que; plantas tratadas con B. subtilis redujeron el agalla-
cillus, inducen diferentes mecanismos relacionados con miento y multiplicación del nematodo M. incógnita, dando
la promoción de crecimiento en las plantas, ya sea que como resultado crecimiento vegetal mejorado.
proporcionen directamente nutrientes, participen en la fija-
ción de nitrógeno, fósforo y potasio, o bien que las plantas Se concluye que; B. subtilis tienen efecto supresor sobre
sean capaces de producir hormonas vegetales y sustan- poblaciones de Meloidogyne spp en cultivo de Capsicum
cias promotoras del crecimiento como el ácido indolacéti- annuum efectivo; reduce el agallamiento y multiplicación
co o por la producción de antibióticos para la supresión de del nematodo a una tasa de reproducción menor que 1. La
daños. La acción de la bacteria también interactúa con al- interacción de estiércol de gallinaza con la cepa nativa de
gunos factores como tipo de suelo, temperatura, fertilidad B. subtilis, probablemente mejoró la eficiencia supresora
del suelo, edad de la planta, humedad, etc., es decir que sobre Meloidogyne spp. La acción supresora B. subtilis en
la severidad de los síntomas y el desarrollo de la enferme- Meloidogyne spp, aportó a un incremento la producción
dad causada por las especies de Meloidogyne dependen de Capsicum annuum. La aplicación de la cepa nativa de
de la respuesta de la planta a la infección, tipo de suelo y B. subtilis, en cultivos de Capsicum annuum, es una efi-
condiciones del medio ambiente. caz alternativa, que se puede utilizar como parte de un
programa de control biológico del nematodo del nudo Me-
La enmienda orgánica de estiércol de gallinaza utilizada loidogyne spp.
en 30 Tn/ha, ha tenido un efecto positivo al interactuar con
la bacteria B. subtilis, esto se evidenció en los niveles de Agradecimientos
poblaciones de Meloidogyne spp en el suelo, los cuales
disminuyeron significativamente a los 90 días. Se conoce Expreso mi especial agradecimiento a: Doctores Segundo
que la actividad de las enmiendas orgánicas incorporadas Eloy López Medina y César A. Murguía Reyes, por sus
al suelo contra Nematodos parásitos de plantas puede sabios consejos y orientaciones en el desarrollo del pre-
variar con la especie del nematodo, tipo de enmienda y sente trabajo. A Guillermo León Arámbulo y Mario Mustafá
subproductos, de la época de la aplicación de la enmien- Aguinaga, gerentes de ECOSAC, por su apoyo incondi-
da y de las propiedades físicas, químicas y biológicas del cional en la ejecución del presente trabajo. A doctora Milly
suelo; así el amonio liberado durante la descomposición Otiniano García, por su orientación en el trabajo de la-
del estiércol, tiene acción tóxica contra Nematodos pa- boratorio. A doctor Mario Esparza Mantilla, por su apoyo
rásitos. Según (Rodriguez-Kabana, 1986; Kaplan y Noe, en la identificación molecular de microrganismos. A Luis
1993; Esnard et al., 1998), estiércoles de animal (sólidos Bustamante, gerente agrícola de la empresa ECOSAC, y
o líquidos) y mezclas compostadas de materia animal y al equipo técnico que hizo posible la ejecución del plan de
vegetal aplicadas en grandes cantidades antes del trans- trabajo para el cultivo de ají pimiento del piquillo: ingenie-
plante incrementan las poblaciones de microorganismos ro Jorge Espinoza Huancas, jefe de cultivos de pimientos;
antagonistas supresores de Nematodos. La eficacia del ingeniero Luis Bobadilla, supervisor del área en estudio;
tratamiento y la aplicación de enmienda estiércol de ga- Bach.Jessica K. Valdivieso Calle, del Área de Investiga-
llinaza han interactuado para favorecer el cultivo de Cap- ción y Desarrollo; ingeniero William Saavedra, coordinador
sicum annuum, alcanzando una producción final de 37 tn/ de Fertirriego Capsicums. A las Instituciones públicas y
ha. según el manual de buenas prácticas en el manejo privadas que, de una u otra manera, han colaborado en la
orgánico del cultivo de Sacha inchik (Incagro, 2009), se presente investigación: la empresa ECOACUÍCOLA SAC
afirma que la agricultura orgánica es importante porque (Piura); la Universidad Nacional de Trujillo-Facultad CCBB
contribuye a reducir al mínimo la contaminación del am- (Trujillo); la Universidad Nacional de Piura-Laboratorio de
biente, evitando los fertilizantes y plaguicidas sintéticos lo Nematología, Piura (Perú); la Universidad de Antofagasta-
que propicia un ecosistema sostenible, alimentos seguros, Laboratorio de Biominería; el Centro de Bioinnovación y el
buena nutrición, bienestar animal y desarrollo rural. Departamento de Acuicultura (Chile).
Doctora. Nancy Mercede Soto Deza
García (2008), afirma que la aplicación de un control natu-
ral contra las plagas, tiene ventajas como: son menos tóxi-
cos que los químicos, por lo general son inocuos, pueden
ayudar a disminuir notablemente el uso de químicos, dis-

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 Eficacia de la cepa nativa de Bacillus subtilis como agente supresor del nematodo del nudo Meloidogyne spp. en cultivo de Capsicum annuum (ají pimiento piquillo)

Literatura citada Rodolfo Velásquez Valle, Ernesto González Gaona y Juan

Manuel SánchezYánez. 2009. Microorganismos Benéficos
1. Acosta García, I. 2010.Protocolo de Prácticas. Departa-
Asociados a Meloidogyne incognita (Kofoid y White) Chit-
mento de Sanidad Animal, sección de Parasitología. Argen-
wood en Guayabo (Psidium guajava L.) de Calvillo, Aguas-
tina.
calientes, México. Rev. mex. fitopatol vol.27 N°.2 
2. Alcoser. H, J. Murguía-Córdova, C. Murguía. 2006. Efec-
13. García Estrada, R. 2008. Manejo de Enfermedades en
tos de solarización y enmiendas orgánicas contra el nemá-
Hortalizas con Productos Biorracionales. 2da. Megaconven-
todo del nudo Meloidogyne incognita bajo condiciones de
ción Internacional en Sistemas de Producción y Fitosanidad
vivero.Facultad de Agronomía, Universidad Nacional de
de Hortalizas. Centro de Investigación en Alimentación y
Piura. Piura
Desarrollo A.C. Unidad Culiacán. México.
3. Banco Central de Reserva del Perú. 2009. Síntesis Eco-
14. Gómez L., H. Gandarilla y M. G. Rodríguez. 2010. Pas-
nómica de Piura. Piura - Perú.
teuria penetrans como agente de control biológico de Me-
4. Barker, K.R. (1985). Nematode extraction and bioassays. loidogyne spp.Rev. Protección Veg. Vol. 25 No. 3 (2010): 137-
En: K.R. Barker, C.C. Carter y J.N. Sasser (ed.). An Advan- 149. Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria (CENSA).
ced Treatise on Meloidogyne II, pp. 27-31. International Me- Cuidad de La Habana, Cuba
loidogyne Project. North Carolina State University, Raleigh,
15. Gómez, E.; Rosa M. Alvarez, A. N. San Juan1, María de
C.N.
los A. Zayas, Joel Hernández, Teresita Lemes, Grisel Cro-
5. Casanova, A., O. Gómez, F. R. Pupo, M. Hernández, M. che y Xiomara Cruz. 2002. Nematicida a partir del hongo
Chailloux, T. Depestre y F.R. Pupo. 2003. Manual para la Verticillium lecanii Rev. Terralia No. 24
producción Protegida de Hortalizas. MINAG-Viceministerio
16. Guillén Cruz R., F. D. Hernández Castillo, G. Gallegos
de Cultivos Varios-IIHLD, La Habana, Cuba. p.112.
Morales, R. Rodríguez Herrera, C. N. Aguilar Gonzáles, E.
6. Chaves Méndez, Nancy P. 2007. Utilización de bacterias Padrón Corral y M. H. Reyes Valdéz. 2006. Bacillus spp.
y hongos endofíticos para el control biológico del nemátodo Como biocontrol en el suelo infestado con Fusarium spp.,
barrenador Radopholus similis (Cobb) thorn. Programa de Rhizoctonia solani Kühn y Phytophthora capsici Leonian y
Educación para el Desarrollo y la Conservación. Escuela su efecto en el desarrollo y rendimiento del cultivo de Chile
de Posgrado Univrsidad de Turrialba, Costa Rica. 98 pp. (Capsicum annuum L.). Universidad Autónoma del Estado
de México. Red de Revistas Científicas de América Latina
7. Cuervo Lozada, Jeanny P. 2010. Aislamiento y Carac-
y el Caribe, España y Portugal. México. 11p.
terización de Bacillus spp como fijadores biológicos de ni-
trógeno y solubilizadores de fosfatos en dos muestras de 17. INCAGRO. 2009. Manual de Buenas Prácticas Agrícolas
biofertilizantes comerciales. Pontificia Universidad Javeria- en el Manejo Agrícola de Sacha InchiK. Lima - Perú: Edicio-
na Facultad de Ciencias Básicas. Microbiologia Agricola y nes Shanantina SAC.
Veterinaria. Bogota. Colombia.
18. Jiménez, M.A., D. Ulacio, W. Perdomo y E. Briceño.
8. Dávila, M., N. Acosta, C. Betancourt y J. Negrón. 1999. 2009. Miobiota y Nemátodos Asociados con la Rizósfera y
Capacidad quitinolítica de hongos aislados de suelos agrí- Raíz en el cultivo de ajo (Allium sativum L.). Bioagro 21(3):
colas infestados con el nemátodo nodulador (Meloidogyne 2009-216. Venezuela.
spp.) en Puerto Rico. J. Agric. Universidad de Puerto Rico
19. Kaplan, D. T., y Keen, N. T. 1993.Mechanisms conferring
83(3-4): 189-199.
plant incompatibility to nematodes. Rev. Nematol. 3: 123-
9. Di Rienzo, Julio Alejandro; Casanoves, Fernando; Gon- 134.
zález, Laura Alicia; Tablada, Elena Margot; Díaz, María del
20. Khan, H. U., R. Ahmand, W. Ahmed, S. M. Khan y M. A.
Pilar; Robledo, Carlos Walter;Balzarini, Mónica Graciela.
Khan. 2001. Evaluation of the combined effect of Paecilomy-
2005. Estadística para las Ciencias Agropecuarias. Sexta
ces lilacinus and Trichoderma harzianum against root-knot
edición. Edición electrónica.
disease of tomato. Journal of Biological Sciences 1(3):139-
10. Esnard, J., Marban-Mendoza, N., and Zuckerman, B. M. 142.
1998. Effects of three microbial broth cultures and an orga-
21. López Pérez JA; Robertson L; Bello A1; Escuer M; Díez-
nic amendment on growth and populations of free-living and
Rojo MA; Piedra Buena A; Ros C; Martínez C. 2004. Resis-
plant-parasitic nematodes on banana. European Journal of
tencia en Pimiento a Nemátodos formadores de Nódulos
Plant Pathology 104:457–463.
del género Meloidogyne GÖLDI, 1892. Dpto Agroecología,
11. Fernando de Araujo, F. y Gabriel Victor Poletto Marchesi. Centro de Ciencias Medioambientales, C. Murcia - España.
2009. Uso de Bacillus subtilis no controle da meloidoginose
22. Nakamura LK, MS Roberts, FM Cohan. 1999. Rela-
e na promoção do crescimento do tomateiro. Cienc. Ru-
tionship of Bacillus subtilis clades associated with strains
ral vol.39 N°.5.
168 and W23: a proposal for Bacillus subtilis subsp. subti-
12. Gallegos Morales, Gabriel; Melchor Cepeda Siller, Fran- lis subsp. Nov. and Bacillus subtilis subsp. spizizenii subsp.
cisco D. Hernández Castillo, Ana María Acosta Zamarripa, nov. Int. J. Syst. Bacteriol. 49: 1211-1215.

39
 Revista de Investigación Agraria y Ambiental – Volumen 3 Número 1 – enero - junio 2012 – ISSN 2145-6097

23. Nicho S. P. 2005. Cultivo de Ají Páprika (Capsicum an- agallas en Sistemas de Cultivos Protegidos: Diagnostico y
nuum L). Instituto Nacional de Investigación y Extensión Manejo. MINAG. 171pp. Cuba.
Agraria (INIA), Donoso-Huaral. Perú.
29. Rodriguez-Kabana R. 1986. Organic and inorganic ni-
24. Perera González, S. 2007. Los Nemátodos de la Pla- trogen amendments to soil as nematode suppressants. J.
tanera. Medidas para Su Control. AgroCabildo. Tenerife. Nematol. 18:129-135.
Área de Agricultura, Ganadería, Pesca y Aguas. España.
30. Rojas M. T. y N. M. Mendoza. 1999. Pasteuria penetrans:
http://www.agrocabildo.org/publica/Publicaciones Acceso
Adherencia y parasitismo en Meloidogyne incognita y Me-
06.08.2010
loidogyne arabicida. Universidad Autónoma Chapingo. Mé-
25. Pérez Pérez, W.M. 2007. Meloidogyne incognita y Hon- xico.
gos Patógenos del Suelo en el Cultivo del Kenaf (Hibiscus
31. Rojas T. 1996. Consideraciones sobre Control Biológico
cannabinus).Tesis de Maestro en Ciencias en Protección
de Nemátodos Fitoparasitos. X Congreso Nacional Agronó-
de Cultivos. Universidad de Puerto Rico. Puerto Rico.
mico. III Congreso de Fitopatología.
26. Piedra Naranjo, R. 2008. Manejo biológico de nemá-
32. Rosimar, M. M. 2006. Manejo de nemátodos fitoparasí-
todos fitoparásitos con hongos y bacterias. Tecnología en
ticos utilizando productos naturales y biológicos. Tesis de
Marcha, Vol. 21-1, P. 123-132.
Maestría en Ciencias en Protección de Cultivos. Universi-
27. Puedmag Ruano, Jaime Fernando y Manuel Arnulfo dad de Puerto Rico . Puerto Rico.
Hernández Rosero. 2007. Eficiencia d Nematicidas Bio-
33. Siddiqui, Z.A. et al. 2001. Effects of Pseudomonas fluo-
lógicos en el Control de Meloidogyne incognita en tomate
rescens and fertlizers on the reproduction of Meloidogyne
de mesa (Lycopersicon esculentum mill.) bajo invernadero
incognita and growth of tomato. Applied Soil Ecology, v.16,
en Socapamba Imbabura. Universidad Técnica Del Norte.
p.179-185
Ecuador.
34. http://www.uco.es/dptos/zoologia/zoolobiolo_archivos/
28. Rodríguez, M., L. Gómez, R. Cuadra, L. Díaz-Viruliche,
practicas/practica_4 Con acceso el 06.08.2010
E. Fernández, A. Casanova, E. González, L. Sánchez, F.
González, L. Hidalgo, O. Gómez, J.C. Hernández, T. De- Recibido: 1 de marzo de 2012.
pestre, M. A. Hernández, X. Cruz, Ll. Miranda, M. Piñón Aceptado: 20 de abril de 2012.
Gómez y A. Hernández. 2006. Nemátodos formadores de

40