BACTERIOLOGÍA Y LABORATORIO CLÍNICO

FORMATO GUIA DE LABORATORIO Fecha: 13/08/2019

BLC-GLB-015-UDES
Versión: 01

Curso: Inmunología II Cód. Curso: 172702

Nombre del profesor: Juanita Trejos Suárez Guía No: 4
Horas totales (desarrollo de la 3 Breiner Galeano
práctica): Jirehl Picón

1. Introducción
La detección de autoanticuerpos en muestras de suero constituye un papel fundamental en el diagnóstico inmunológico e
incluso pronóstico y seguimiento de enfermedades autoinmunes 1, patologías que se caracterizan por la producción de
inmunoglobulinas que van dirigidos frente a ácidos nucleicos, organelos, membranas, células, proteínas propias, o diversos
tejidos, dando origen a las manifestaciones clínicas o patogénesis de cada enfermedad 2. Existen muchas pruebas basadas en
técnicas como la aglutinación en látex, la inmunofluorescencia indirecta, el ensayo inmuno-enzimático, la quimioluminiscencia
o métodos moleculares para tipificar los Antígenos Leucocitarios Humanos, que facilitan la determinación de anticuerpos
antinucleares u otros que permiten el diagnóstico de estas patologías 3. Sin embargo, la aplicación de una prueba u otra depende
de la tecnología disponible en cada laboratorio.

2. Objetivo de la práctica
Analizar la importancia de la detección de autoanticuerpos en el diagnóstico, pronóstico y seguimiento de enfermedades
autoinmunes órgano-específicas.
3. Metodología
3.1 Lista de materiales y equipos

3.1.1 Pruebas por Inmunoensayo Enzimático

* Kit TSH
* Kit T4 Libre
* Kit Anti dsDNA IgG
* Kit Anti Phospholipid Screen
* Kit Anti TG
* Kit Anti TPO
* Kit ANA ELISA
* Kit C1q ELISA
* Micropipetas y puntas de 0.5 a 10 uL
* Micropipetas y puntas de 10 a 100 uL
* Micropipetas y puntas de 100 a 1000 uL
* Sueros Problema
* Probetas de varios volúmenes
* Lector de microplacas

3.1.2 Pruebas por Aglutinación

* Kit ASO Látex
* Kit CRP Látex
* Kit RA test Látex
* Micropipetas y puntas de 10 a 100 uL
* Sueros Problema

3.2 Métodos
3.2.1 Analice el Caso Clínico según las pruebas de laboratorio asignadas, siguiendo las recomendaciones del fabricante, de
acuerdo con los insertos entregados por la Coordinación de los Laboratorios de Docencia que fueron subidos a la plataforma
Moodle.
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CASO CLÍNICO

Paciente de 19 años de sexo femenino, que acude a consulta externa por presentar un cuadro de 2 meses de evolución que
consiste en aumento de peso, temblor en miembros superiores, cansancio al mínimo esfuerzo, mareos, cambios de humor,
inflamación intestinal, estreñimiento, gastritis, caída de cabello, sensación de taquicardia y palpitaciones, inflamación en las
articulaciones, edema en dedos y muñeca y sensación térmica de bajas temperatura, además de notar disminución en el
volumen de su orina. Refiere que durante 15 años presentó amigdalitis a repetición, a los 16 años presentó un aborto
espontáneo, a los 17 años tuvo dos abortos y a los 18 años tuvo otro aborto. Ante la sospecha de Enfermedad Autoinmune se
le solicita realizar:

* ASO – (todos los grupos)

* CRP – (todos los grupos)
* RA test – (todos los grupos)
* TSH – (todos los grupos)
* T4L – (todos los grupos)
* ANAs – (Grupo 1)
* Anti dsDNA – (Grupo 2)
* Anti TG – (Grupo 3)
* Anti TPO – (Grupo 4)
* Anti Fosfolipidos (Screen) – (Grupo 5)
* C1q – (Grupo 6)

1. Esquematice en la página https://biorender.com/ cada uno de los procedimientos que les permitieron hacer el diagnóstico
de Laboratorio de esta paciente.
2. Recolecte la información de todas las pruebas del laboratorio realizadas a la paciente y analice el caso clínico. Explicando
la fisiopatología y posible diagnóstico de acuerdo con los resultados dados.
3. Reporte los resultados de las pruebas.
4. Indique los fundamentos de las técnicas usadas.

4. Resultados y Discusión
1. Esquematice en la página https://biorender.com/ cada uno de los procedimientos que les permitieron hacer el diagnóstico
de Laboratorio de esta paciente.
Imagen 1: Esquema de la prueba para determinación de factores reumatoideos
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Imagen 2: Esquema de la prueba para determinación de proteína C Reactiva

Imagen 3: Esquema de la prueba para determinación de Tiroxina Libre

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Imagen 4: Esquema de la prueba para determinación de anti-estreptolisina O

Imagen 5: Esquema de la prueba para determinación de TSH

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2. Recolecte la información de todas las pruebas del laboratorio realizadas a la paciente y analice el caso clínico.
Explicando la fisiopatología y posible diagnóstico de acuerdo con los resultados dados.

Como primer factor a tener en cuenta se puede tomar a la T4 libre, la cual puede incrementar su valor sérico por
el embarazo, los anticonceptivos orales y la terapia con estrógenos debido al incremento en la tiroxina total
asociada que, en el caso de la paciente, había tenido varios embarazos que terminaron en abortos durante los
últimos años. Se ha reportado, que, en ocasiones, donde el periodo de gestación no es estable y el cuerpo induce
un aborto, se deba a una desregulación en secreción hormonal inducida por una mala o deficiente señalización
celular lo que induce que se alteren constantemente los valores séricos hormonales en estas pacientes.

Al observar la ASO, se denota una alta concentración en los anticuerpos contra esta estreptolisina que podría
estar asociado a la amigdalitis recurrente que ha venido presentando desde los 15 años por lo que un desbalance
inmunológico o una supresión inmunitaria temporal por algún factor externo u endógeno pudo estar provocando
la re incidencia en la infección por un Streptococcus spp. Así también, gracias a la proteína C reactiva la cual es una
proteína de fase aguda presente en suero que va a mostrar incrementos en su nivel sérico asociándose a una
infecciones bacteriana o viral o a un producto de inflamación tisular, podemos afirmar la posición de una
infección recurrente por Streptococcus spp.

La inflamación en las articulaciones junto con el edema en dedos puede ser indicativo de un proceso inflamatorio
autoinmune lo cual se puede confirmar con la prueba para factor reumatoideo. Sin embargo, en este caso, se
apreció un resultado negativo para este examen, por lo cual se pueden concluir dos cosas: Que la paciente ha
entrado en una etapa temprana de la enfermedad artrítica y por esta razón la cantidad de anticuerpos presentes
no es suficiente para observarse aglutinación con las partículas de látex; o bien, el diagnosticó no está asociado
a esto por lo que se debe esperar algún tiempo según recomendación medica para volver a realizar esta prueba.

3. Reporte los resultados de las pruebas.

Okazaki Lab Fecha y hora de ingreso: 03/03/2021/04:07 a. m.
Un laboratorio clínico
a tu servicio

Datos del paciente:

1er Nombre: Yuliana 2do Nombre: No aplica Dirección: Circunvalar #34
1er Apellido: Pérez 2do Apellido: Dulcey Barrio: Cumbre alta
Fecha de nac: 23/05/2002_ Género: Femenino Repr. legal: No aplica
Edad (años): 19 Tipo de sangre: O - Parentesco: No aplica
T. Documento: Cédula Estado civil: Soltera C.C.: No aplica
N. Documento: 77834651 Tel/Cel: 3013330457

Exámenes realizados:
INMUNOLOGÍA

INMUNOLOGÍA UNIDADES RESULTADO VALORES REFERENCIA

ASO UI/mL 3200 <200
CRP mg/L 384 <10
FR/RA UI/mL Negativo <15
Rango Bajo (0.28 - 0.53)
TSH μLU/mL 7.8
Rango Alto (5.60 - 6.82)
fT4 ng/dL 2.6 0.80 - 2.00
anti-TPO AU/mL 0.7 <20

N° de orden: 009 Bacteriólogo(a) responsable:

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4. Indique los fundamentos de las técnicas usadas

• ASO: Es una técnica rápida de aglutinación en la cual están presentes partículas de látex recubiertas por
estreptolisina que al interaccionar frente a un suero problema, se evidencia la presencia o ausencia de ASLO
en las muestras ensayadas al observar presencia o ausencia de aglutinación visible.
• CRP: El aumento del nivel de PCR en el suero por encima del límite superior del intervalo de referencia se
evidencia por la presencia de aglutinación visible en la suspensión de partículas de látex recubiertas con
anticuerpos anti-PCR humana de un suero problema.
• RA test: La determinación para factores reumatoideos se efectúa por medio de la presencia o ausencia de
aglutinación visible en una suspensión de partículas de látex recubiertas con gamma globulina humana que
interactúan con el suero problema indicando presencia o ausencia de FR en la muestra ensayada.
• TSH: La determinación de la Hormona Estimulante de la Tiroides se lleva a cabo por medio de la incubación
de los conjugados HRP-anti-TSH junto con el suero problema reaccionando lo cual permite la reacción de
estos conjugados con el anticuerpo anti-β TSH que recubre la superficie del micropozo formando así
inmunocomplejos de anticuerpos tipo sándwich. Los conjugados que no reaccionan por competitividad, son
removidos por medio de un lavado y la presencia del complejo unido a los Ac se observa por el desarrollo
de un color azul después de incubar con el sustrato. Posterior a esto, la reacción es detenida con la adición
de Solución de Parada y la absorbancia es determinada utilizando un espectrofotómetro a 450/620-690 nm.
• T4L: Los reactivos esenciales requeridos para un inmunoensayo enzimático en fase sólida incluyen el
anticuerpo inmovilizado, el conjugado enzima- antígeno y el antígeno nativo. Después de mezclar el
anticuerpo inmovilizado, el conjugado enzima – antígeno y un suero que contiene el antígeno nativo libre,
una reacción de competencia resulta entre el antígeno libre nativo y el conjugado enzima – antígeno para
un número limitado de sitios de unión insolubles y la actividad de la enzima en la fracción unida al anticuerpo
es inversamente proporcional a la concentración nativa del antígeno.
• Anti TPO: El ensayo se basa en el principio inmunoenzimático del sándwich. La muestra que se va a
comprobar se incuba en la microplaca recubierta con el antígeno. Los anticuerpos contenidos en la muestra
se unen a los antígenos presentes en la superficie de la microplaca. El material no unido se retira mediante
un procedimiento de lavado. Un segundo anticuerpo anti-IgG humana conjugado con peroxidasa se deja
incubar en los pocillos. Tras el lavado posterior, se determina y se cuantifica la actividad enzimática
remanente unida a la superficie de los pocillos mediante la adición del sustrato cromógeno y de la solución
de parada, y mediante la lectura a 450 nm. La densidad óptica en los pocillos es directamente proporcional
a la cantidad de anticuerpos específicos presentes en la muestra.

5. Conclusiones
Debido a la diversa complejidad de los mecanismos reguladores inmunitarios, no es posible hablar un único
modelo que explique el proceso fisiopatología presente en las enfermedades órgano específicas. Por tal
razón, los exámenes de laboratorio realizados para la determinación de ciertas “claves” del diagnostico de
una de estas patologías es muy importante en conjunto con la revisión de historia clínica del paciente y el
acompañamiento continuo a este ya que esto proporciona factores no revelados en este tipo de exámenes
de laboratorio tales como predisposición genética, factores ambientales desencadenantes de la
autoinmunidad, entre otros.

6. Bibliografía (Norma Vancouver)

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1. Mendez-Rayo T, Ochoa-Zárate L, Posso-Osorio I, Ortiz E, Naranjo-Escobar J, Tobón GJ. Interpretación de los autoanticuerpos en
enfermedades reumatológicas. Rev Colomb Reumatol. 1 de abril de 2018;25(2):112-25.

2. Elsevier. Enfermedades causadas por anticuerpos y por complejos antígeno-anticuerpo [Internet]. Elsevier Connect. [citado 14 de marzo
de 2020]. Disponible en: https://www.elsevier.com/es-es/connect/medicina/enfermedades-causadas-por-anticuerpos-y-antigeno-
inmunologia

3. Munive Lima M del R, González Solís R, Domínguez S, Botello Suárez ME. Comparación entre quimioluminiscencia e inmunofluorescencia
indirecta en la determinación de anticuerpos antinucleares. 2010;57:5.