UNIVERSIDAD TÉCNICA DE AMBATO

FACULTAD DE CIENCIA E INGENIERÍA EN ALIMENTOS Y BIOTECNOLOGÍA

TRABAJO AUTÓNOMO INDIVIDUAL
DATOS INFORMATIVOS

NOMBRE: Luis Guevara. DOCENTE: Dr. Mario García.

CARRERA: Ingeniería Bioquímica SEMESTRE: Octavo
ASIGNATURA: Bioingeniería. PARALELO: “A”
CICLO ACADÉMICO: Abril – Septiembre 2021
FECHA: 08/Junio/2021
TEMA: Plásmido Ri.

La bacteria de infección, Agrobacterium rhizogenes tiene un efecto de sobreexpresión de raíces

peludas debido al plásmido Ri “Root inductor” o “Hairy Root Inductor” que, a diferencia del
plásmido Ti, propio de Agobacterium tumefaciens que contribuye a la formación de tumores, el
Ri se ha clasificado en 3 tipos (de acuerdo con el metabolismo de las opinas): agropine,
mannopine y cucumopine (Petersen, et. al., 1989). En comparación con el plásmido Ti que
contiene una sola región de TDNA (segmento de DNA que se transfiere desde el microorganismo
hacia la planta), el Ri para el metabolismo (síntesis) de agropine presenta 2 regiones de TDNA
(TL y TR región: L-Left y R-Right). Sin embargo, los plásmidos Ri del mannopine y cucumopine
presentan sólo 1 región y que es homólogo a la región TL del plásmido agropine (PA-Ri). En
cuanto al efecto de sobre enraizamiento, se ha observado que ambas regiones, de manera
independiente, del PA-Ri tienen dicha capacidad, pero a través de diferentes mecanismos, por
ejemplo, la región TL del PA-Ri puede generar el típico fenotipo de raíces peludas (Suzuki, et.
al., 2008), cuya inducción puede ser autónoma e independiente con respecto al otro fragmento de
TDNA en donde su inducción no parece tener un efecto fenotípico considerable ya que su efecto
es muy similar a las raíces comunes. No obstante, las 2 regiones en conjunto provocan la
sobreproducción de raíces peludas.
Mecanismo de formación de raíces peludas
La inducción de las raíces, por A. rhizogenes está categorizado en 4 pasos consecutivos (Ozygit,
et. al. 2013):
1. Quimiotactismo de la bacteria: Movimiento impulsado de A. rhizogenes hacia el tejido
vegetal.
2. Unión del microorganismo a los componentes de la superficie de la pared celular vegetal.
3. Transferencia e integración del DNA de la bacteria al genoma de la planta.
4. Inducción, formación y crecimiento de las raíces.
La vía de infección que presenta el plásmido Ri (paso 1 al 3), demuestra un alto grado homólogo
con respecto a la infección con el plásmido Ti, por lo que el mecanismo de infección no será
detallado en su totalidad, puesto que los operones Vir tienen una estructura muy similar en los
plásmidos Ti y Ri con la única diferencia en que los plásmidos Ri de A. rhizobium no contienen
genes VirE1 (chaperona de VirE2) y VirE2 (cubre al TDNA del ataque de nucleasa y dirige la
importación nuclear hacia las células vegetales). De acuerdo con estudios, el responsable del
efecto infeccioso en A. rhizogenes sería llevado a cabo por el gen GALLS cuya proteína difiere
con VirE2 con respecto a la unión de ATP y helicasas, sin embargo, ambos genes presentan
secuencias para localización nuclear y de señalización de secreción C-terminal tipo IV. Sin
embargo, la ruta de infección completa inducida por GALLS aún es desconocida (Petersen, et.
al., 1989).
Genes del plásmido Ri TDNA
Como se ha mencionado con anterioridad, existen diferentes plásmidos Ri que están clasificados
de acuerdo con el tipo de opina al que son afines, sin embargo, de acuerdo con Ozygit, et. Al.
(2013) indica que hay 2 grupos: agropine y agrocinopine, aunque la mayoría de A. rhizobium
producen las agrocinopine, las cepas más comunes y estudiadas producen agropine, mannopine,
agropinoato y mannopinoato (agropyne-type).

Figura 1. Representación esquemática del plásmido Ri tipo Agropine.

Elaborado por: Ozygit, et. al. 2013

Detallando el hecho de que agropine posee 2 regiones TDNA, el TLDNA contiene

aproximadamente 15-20 kb, mientras que TRDNA tiene 8-20kb cuya transformación
independiente es realizada por la cepa Agropine pRi. El esquema gráfico del plásmido Ri
Agropine se observa en la figura 1, mientras que el esquema de Ri Mannopine se observa en la
figura 2.
El plásmido Ri tipo Agropine tiene regiones designadas de genes en el TLDNA denominados
genes rol, que individualmente están clasificadas como gen: rolA, rolB, rolC y rolD. Sin embargo,
toda la región L está separada de su región D mediante la región C (CDNA) de aproximadamente
15kb. Se ha mencionado sobre las propiedades fenotípicas de que la región TL es la responsable
de la formación de pelos en la raíz mientras que su lado opuesto está encargado de la inducción
de raíces comunes, sin embargo, el TLDNA tiene una capacidad de integración más alta que el
TRDNA.
TRDNA
Se ha observado que la región R contiene genes homólogos al TDNA presentes en A. tumefaciens
(genes tms1 y tms2 encargados de la biosíntesis de auxinas). Adicionalmente, los genes aux1,
aux2, rolBTR, mas1, mas2y ags son los encargados de la biosíntesis de agropinas y auxinas que
provocan la diferencia morfológica de las raíces que no han sido infectadas, además de un
aumento a la sensibilidad de auxinas.
TLDNA
 En muchas de las especies, la longitud de la TLDNA no parece diferir significativamente, además
de que no parece tener relación loci con los plásmidos Ti. Un compuesto es el encargado de
estimular la diferenciación de la raíz peluda bajo la influencia de la auxina endógena sintetizada
por los genes en TLDNA. En la figura 1, los genes rol en el lado izquierdo producen los loci
oncogénicos esenciales para la construcción de raíces peludas y se cree que el TLDNA del tipo
agropine Ri consiste en al menos 18 marcos de lectura abiertos (ORF 10, 11, 12 y 15).
A continuación, en la tabla 1, se presenta un resumen acerca de la función de los genes rol y sus
proteínas:
Tabla 1. Propiedades de los genes rol.
Tamaño
Gen Proteína Función Fenotipo
(bp)
• Inhibe la elongación por factor difusible. Crecimiento atrofiado,
hojas verdes oscuro-
Secuencia de proteínas • Reduce la concentración hormonal
alteradas en proporción
rolA 279 – 423 común de unión al DNA • Incrementa la sensibilidad a la auxina
dimensional, brotes de flor
factor de transcripción • Fisiología de la hormona moduladora de GA reducido, inflorescencia
• Interfiere en el metabolismo de poliaminas retardada.
• Altera en la recepción/transducción de la señal
Rápido crecimiento,
Localiza la membrana de auxinas
rolB 765 – 840 neoformación de
plasmática • Estimula la formación de nuevos meristemos
meristemos de raíces.
• Induce al metabolismo secundario
• Reduce el tamaño celular
Específico del floema • Reduce los niveles de ABA, poliaminas y Mayor ramificación, plantas
con alta expresión en etilenos. enanas con entrenudos
rolC 573 – 543 raíz, expresión atenuada • Regula el metabolismo y transporte de cortos, reducción de tamaño
en hoja y sin expresión azúcares celular del epidermis, hojas
en los brotes • Estimula la sobreproducción de metabolitos y producción de polen.
secundarios
Incremento de flores,
Enraizamiento reducido,
Expresión exclusiva en • Formación de raíces con asistencia
elongamiento y expansión
rolD 1032 agropine-types. Es una • Brinda respuesta defensiva en condiciones de de los tejidos y órganos sin
proteína del citosol estrés ambiental.
considerar el meristemo
apical.
 Figura 2. Representación esquemática del plásmido Ri tipo Mannopine.
Elaborado por: Ozygit, et. al. 2013

BIBLIOGRAFÍA
Ozyvit, I., Tarhan, E. & Dogan, I. (2013). Agrobacterium rhizogenes – mediated transformation
and its biological applications in Crops. Research Gate. Recuperado de:
https://www.researchgate.net/publication/259571427_Agrobacterium_rhizogenes-
Mediated_Transformation_and_Its_Biotechnological_Applications_in_Crops
Petersen, S., Stumman, B., Olesen, P. & Henningsen, W. (1989). Structure and function of root-
inducing (Ri) plasmids and their relation to tumor-inducing (Ti) plasmids.
https://doi.org/10.1111/j.1399-3054.1989.tb05664.x

Suzuki, K., Tanaka, K., Yamamoto, S., Kiyokawa, K., Moriguchi, K. & Yoshida, K. (2011). Ti
and Ri plasmids. Recuperado de: https://link.springer.com/chapter/10.1007/978-3-540-85467-
8_6
Yucatán, M. (2017). Agrobacterium tumefaciens vs. rhizogenes. CONACYT. Recuperado de:
https://www.cicy.mx/sitios/seminarios/ubbmp/documentos/10_Gregorio_Presentacion.pdf