Texto Guía de Microscopia 2021

Texto Guía De Microscopia 2021
MICROSCOPÍA
Índice
1. NOCIONES BÁSICAS DE ÓPTICA
1.1 ÓPTICA.
1.2 LA LUZ.
1.3 LONGITUD DE ONDA
2. LENTES, TIPOS Y PROPIEDADES.
2.1 REFRACCIÓN
2.2 REFLEXIÓN
3. IMAGEN REAL E IMAGEN VIRTUAL
3.1 LIMITACIONES PARA EL ESTUDIO DE LAS CÉLULAS Y TEJIDOS
3.2 UNIDADES DE MEDIDA EMPLEADAS EN MICROSCOPÍA
3.3 DIMENSIONES DE LAS CÉLULAS Y SUS CONSTITUYENTES
4. LA IMAGEN. SISTEMAS ÓPTICOS.

4.1 AUMENTO Y RESOLUCIÓN
4.2 AUMENTO
4.3 AUMENTO TOTAL
4.4 RESOLUCIÓN
4.5 FACTORES QUE DETERMINAN EL PODER DE RESOLUCIÓN
5. EL MICROSCOPIO COMPUESTO.
5.1 BREVE RESEÑA HISTÓRICA
5.2 COMPONENTES DEL MICROSCOPIO FOTÓNICO.
5.3 SISTEMA MECÁNICO DEL MICROSCOPIO
5.4 MECANISMO DE ENFOQUE
5.5 SISTEMA ÓPTICO DEL MICROSCOPIO
5.6 SISTEMA DE ILUMINACIÓN
6. TIPOS DE MICROSCOPIOS
7. SEMEJANZAS Y DIFERENCIAS ENTRE LA MICROSCOPÍA

ELECTRÓNICA Y LA MICROSCOPIA DE LUZ
7.1 SEMEJANZAS
7.2 DIFERENCIAS
Auxiliar Titular De Docencia: Sdenka Vivian Quispe Vilacahua

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MICROSCOPÍA
NOCIONES BÁSICAS DE ÓPTICA
ÓPTICA.
La óptica es la rama de la física que estudia la naturaleza de la luz, sus
características y sus manifestaciones. Comprende el estudio del comportamiento
de la luz, la interacción de la luz con la materia y la formación de las imágenes.
Para que los objetos puedan ser visualizados es necesario contar con dos
elementos fundamentales; uno de ellos es la luz, que permite destacar las
características propias del objeto, su forma, color y movimiento. El otro elemento
indispensable es el ojo o instrumento óptico que posee fotorreceptores capaces de
captar las características de los objetos mencionadas anteriormente. La visión es
uno de los sentidos más importantes para relacionarnos con el medio ambiente.
El humano está dotado de dos globos oculares con sus respectivos anexos y su
uso permite la visión binocular, que consiste en la capacidad de integrar en una
sola imagen las imágenes procedentes de cada ojo y de esta manera, se
reconocen y se localizan en el espacio los objetos del mundo exterior; del mismo
modo que se desarrolla la propiocepción visual, que permite obtener información
acerca de la posición del cuerpo y sus movimientos con respecto a dichos objetos.
LA LUZ.
la luz es el agente físico que hace visible los objetos. Actualmente, la naturaleza
de la luz se define como una dualidad onda-
partícula,
La luz de acuerdo al enfoque actual, más que una
onda, es considerada de manera más exacta una
oscilación electromagnética que se propaga en el
vacío o en un medio transparente y que es capaz
de ser percibida por nuestro sentido de la vista. Es
una parte insignificante del espectro
electromagnético. Se considera como una forma

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de energía que viaja a una alta velocidad, alrededor de 300.000 km/s (por
definición es una constante universal de valor 299.792.458 m/s en el vacío).
Se consideran las siguientes afirmaciones:
• La luz es una forma de energía electromagnética.
• La energía luminosa se transmite a través de partículas: Los “fotones”.
• La energía luminosa se transmite a través de ondas.
• La mecánica cuántica concilia los dos puntos de vista a través de la confirmación
de la “dualidad partícula-onda”.
• Muchos aspectos sobre la naturaleza de la luz aún se desconocen.
LONGITUD DE ONDA
La mayor parte de la radiación electromagnética se genera en la naturaleza a
partir de objetos calientes y cuanto más calientes sean, tanto más su energía se
irradia en longitudes de onda más cortas. El rango del espectro de las radiaciones
solares corresponde al intervalo de longitudes de onda que ve el ojo. Las fuentes
de luz hechas por el hombre tales como la bombilla eléctrica incandescente,
irradian y tienen un espectro de emisión amplio; otras fuentes emiten únicamente
una luz de determinada longitud de onda.
Al considerar la luz como una onda que se transmite de forma sinusoidal y
periódica, que describe ciclos repetitivos, la
longitud de una onda es la distancia entre dos
crestas consecutivas
La longitud de onda es la distancia entre puntos

idénticos o crestas de ondas sucesivas. La
amplitud es la distancia vertical de la línea media
de la onda a la cresta o el valle.
Newton descubrió que la luz natural al pasar a través de un prisma es separada en

una gama de colores que van desde el rojo al azul y concluye que la luz blanca o
natural está
compuesta
por todos los

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colores del arcoíris.
El color es de alguna manera la medición de la cantidad de una luz determinada.

Los objetos reflejan una parte de la luz que incide sobre ellos. Un objeto se
percibirá como amarillo si refleja las longitudes de onda entre el verde y el rojo y
absorbe las azules. Si el objeto absorbe todo el espectro se percibirá como negro
y si lo refleja por completo se percibirá blanco.
LENTES, TIPOS Y PROPIEDADES.
El término lente es el nombre asignado a una pieza de vidrio, plástico u otro

material transparente, generalmente de diámetro circular, que posee dos
superficies pulidas y diseñadas de una manera específica para producir la
convergencia o divergencia de los rayos luminosos que la atraviesan. La acción de
una lente depende de los principios de refracción y reflexión, los cuales pueden
entenderse mediante unas sencillas reglas de geometría que rigen el paso y
trayecto de la luz a través de la lente. Estos conceptos son materia de estudio de
la Óptica Geométrica y permiten comprender el proceso de magnificación, las
propiedades de las imágenes real y virtual, así como también los defectos
(aberraciones) de las lentes.
La palabra lente proviene del latín "lentis" que significa "lenteja" por lo que a las
lentes ópticas se les llama así por su semejanza con la forma de la legumbre.
Las lentes son instrumentos ópticos que concentran o dispersan los rayos de luz.
Sus dos superficies pueden ser curvas (biconvexas, bicóncavas o cóncavo-
convexas) o una de ellas puede ser plana (plano-convexas, plano-cóncavas).

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Las lentes de superficies convexas se denominan positivas, convergentes,

recolectoras o de aumento. Las lentes de superficies cóncavas son conocidas
como negativas, divergentes, de dispersión y producen una imagen reducida.
La luz se propaga con una trayectoria rectilínea y con una velocidad constante en
cada medio. Cuando incide en un objeto, el rayo luminoso se comporta de
diversas maneras, produciéndose: Refracción, Reflexión, Difracción, Absorción-
Transmisión, Interferencia y Polarización. Describiremos someramente la
refracción y la reflexión por su utilidad en la formación de las imágenes
aumentadas por las lentes.
Refracción:
Las propiedades de las lentes se deben gracias a los fenómenos de refracción que
experimentan los rayos luminosos que las atraviesan. Cuando una radiación
electromagnética en la forma de rayo luminoso, denominado incidente, viaja de un
medio o una superficie y atraviesa otro medio, las ondas luminosas sufren el
fenómeno conocido como refracción, el cual se manifiesta mediante una
desviación en la dirección de la luz. Si el rayo incidente llega de manera
perpendicular a la superficie de una lámina de vidrio, de superficies paralelas, no
es desviado de su trayecto rectilíneo, pasando del aire al vidrio y
de este último al aire nuevamente. Por el contrario, si el rayo
incide de manera oblicua sobre la superficie de la lámina de
vidrio, es desviado de su dirección rectilínea, en principio al
entrar al vidrio, pues pasa de un medio menos denso (aire) a
otro medio de mayor densidad (vidrio) y es desviado nuevamente al salir del vidrio
hacia el aire.
Refracción a través de una lámina de vidrio de superficies paralelas. La flecha

representa el rayo de luz que es desviado al pasar del aire al vidrio y nuevamente
al aire.

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Cuando la luz pasa de un medio a otro, la velocidad de la onda disminuye. La

nueva dirección que toma el rayo refractado depende de la densidad del medio
que atraviesa. Los efectos de la refracción son responsables de algunos
fenómenos que nos son familiares, por ejemplo, la aparente deformidad de un
objeto parcialmente sumergido en un vaso de agua. La refracción de la luz visible
en las lentes es de vital importancia, pues les permite concentrar un haz de rayos
luminosos en un punto específico.
Refracción de los rayos luminosos en la interfase aire-agua.
Si dividimos la velocidad de la luz en el vacío entre la que

tiene en un medio transparente, obtenemos un valor que
llamamos índice de refracción de ese medio y es el cociente
entre velocidad de la luz en el vacío y la velocidad de la luz en el medio que se
estudia:
Reflexión:
Cuando la luz (u otro tipo de radiación electromagnética) incide sobre la superficie
de un medio (gas, líquido o sólido) algunos rayos no son absorbidos, por el
contrario son rebotados y se dispersan lejos de la superficie del medio en
cuestión. El rayo que llega es denominado incidente y el que se desvía es
denominado reflejado. La dirección en que sale reflejada la luz será determinada
por el tipo de superficie. Si es una superficie brillante o pulida (espejo) se produce
la reflexión regular en la que toda la luz sale en una única dirección
denominándose reflexión regular o especular. Si la superficie es mate la luz sale
esparcida en todas direcciones y se llama reflexión difusa. Sin embargo también
puede ser reflexión mixta, en la que predomina una dirección sobre las demás
(papel brillante, superficies metálicas sin pulir).

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Diferentes tipos de reflexión de los rayos luminosos. La línea azul gruesa continua
representa la superficie sobre la cual el rayo incidente (flechas rojas) se reflecta y
los rayos reflejados (líneas negras). La línea azul discontinua representa la normal
(línea imaginaria perpendicular a la superficie, en el punto 0, donde incide el rayo
luminoso). En la reflexión especular el ángulo de incidencia es igual al angulo de
reflexión; lo que no ocurre en la reflexión difusa, debido en parte a las
irregularidades de la superficie.
Refracción en las lentes:

En las lentes convexas la refracción se produce de acuerdo a las mismas leyes. El
estudio resumido de esos fenómenos es indispensable para comprender las
propiedades de las lentes y la formación de las imágenes.
Se tomará primero como ejemplo una lente plano-convexa. Obsérvense tres rayos
a, b, y c, cuya incidencia es normal (perpendicular) en relación a la cara plana de
la lente. Al inicio, estos rayos no serán refractados; atravesarán la lente, llegaran a
la cara convexa en donde si se refractan y su destino será diferente.
Refracción en una lente plano-convexa.

a, b, c rayos incidentes paralelos. a’ y c’
rayos refractados. f foco de la lente.
El rayo bn coincide con el eje de la lente

y no se refracta: se comporta como si al
salir lo hiciera de una cara paralela a la cara de entrada. Los rayos a y c son por el
contrario, oblicuos en relación a la cara curva de la lente. Ellos serán refractados
porque pasan del vidrio al aire y se aproximan al eje de la lente, cortando el rayo

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bn en el punto f. Dos leyes resultan de estas consideraciones:
1. Todo rayo que pasa por el centro de la lente NO es refractado.

2. Todo rayo que no pasa por el centro de la lente ES refractado. Mientras más
lejos del centro, la desviación será mayor. Los rayos refractados convergen todos
en un punto que es el foco o punto focal de la lente.
El punto focal es el punto en donde confluyen los rayos luminosos refractados,

después de atravesar la lente. Se puede apreciar, por ejemplo, cuando al recibir
los rayos solares sobre una lupa planoconvexa o biconvexa, se forma un punto
muy luminoso y muy caliente. Los rayos caloríferos siguen el mismo trayecto que
los luminosos. La distancia focal es la distancia que separa el punto focal del
centro óptico de la lente.
la refracción en las lentes biconvexas. Los fenómenos de refracción que se

acaban de estudiar permitirán explicar cómo las lentes pueden formar las
imágenes.
Refracción en una lente biconvexa. a,

b, c rayos incidentes paralelos. a’ y c’
primera refracción. e’ y e’’ segunda refracción. f foco de la lente.
Tómese la lente biconvexa y un objeto. La imagen de este objeto va a variar

dependiendo de si esta cerca o lejos de la lente. Se pueden presentar tres casos:
1. El objeto está muy alejado de la lente, a una distancia más grande que el doble
de la distancia focal. La imagen que se formará será real e invertida y cada vez
más pequeña cuanto más alejado este el objeto. Es el caso de los objetivos de las
cámaras fotográficas.

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2. El objeto está colocado un poco más allá del foco. La imagen será real e
invertida y cada vez más grande cuanto más cerca este el objeto del foco. Es el
caso de los objetivos del microscopio.
3. El objeto se encuentra entre la lente y el foco. La imagen será virtual y derecha

y cada vez más pequeña cuanto más cercano este el objeto a la lente. Es el caso
de las lupas y de los oculares del microscopio.
Al realizar combinaciones de lentes, las cuales se colocan centradas y alineadas,

se aplicarán estas mismas leyes.
IMAGEN REAL E IMAGEN VIRTUAL
La imagen real se forma por rayos convergentes que pueden ser recogidos sobre
una pantalla o una placa fotográfica.
El término virtual, según el diccionario de la Real Academia Española significa:

adj. Fís. Que tiene existencia aparente y no real. La imagen virtual se forma por
rayos divergentes. Son imágenes meramente subjetivas que no podrán ser
recogidas o proyectadas sobre una pantalla o película fotográfica. Son percibidas
gracias a la posibilidad que tiene el globo ocular de “seguir” por detrás del objeto
observado, la proyección de esos rayos divergentes y los hace confluir para
constituir la imagen virtual. Estas imágenes juegan un rol crucial en los
instrumentos ópticos. Es el caso de la imagen formada por un espejo plano o los
espejismos sobre una superficie caliente como el desierto o una carretera
asfaltada. La lupa simple consiste en una lente convergente que se coloca entre el
objeto y el ojo. Variando su posición y situando el objeto sobre el foco se puede
conseguir que se forme una imagen virtual.
La “virtualidad” de la imagen virtual consiste en que

no está allí donde se percibe, se forma tan sólo sobre
la retina y no por fuera del ojo en el sitio donde se ve.

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La percepción visual de ambos, del objeto real y de la imagen virtual, es idéntica.

La imagen retiniana no entra en el proceso de clasificación de realidad o
virtualidad de la imagen. El ojo está diseñado para recoger haces divergentes de
luz y hacerlos converger sobre la retina.
Formación de la imagen virtual al observar un objeto en un espejo plano. La

imagen virtual del objeto se representa “por detrás” del espejo, pero realmente no
está allí. Cuando se percibe la imagen virtual los rayos luminosos proceden del
espejo. Es el ojo el que permite que el cerebro la imagine, a partir de la figura que
se forma en la retina.
Formación de la imagen virtual al observar

un objeto con una lupa. La imagen virtual se
presenta aumentada, derecha y por detrás
con respecto al objeto.
Unidades de medida empleadas en microscopía:
Una unidad de medida es una cantidad estandarizada de una determinada

magnitud física. Para determinarla se emplea el Sistema Internacional de
Unidades (SI) también conocido como sistema métrico, que es el más
ampliamente usado. Este sistema se originó a partir del antiguo sistema métrico
decimal mks (metro-kilogramo-segundo), el cual fue mejorado.
La longitud es una magnitud creada para medir la distancia entre dos puntos y su
unidad es el metro.Se representa con la letra m.
Submúltiplos del metro:

-decímetro (dm): 10-1 metros.
-centímetro (cm): 10-2 metros.

10
-milímetro (mm): 10-3 metros.

-micrómetro (µm): 10-6 metros.
-nanómetro (nm): 10-9 metros.
-angstrom (Å): 10-10 metros.
-picómetro (pm): 10-12 metros.
-femtómetro o fermi (fm): 10-15 metros.
-attómetro (am): 10-18 metros.
-zeptómetro (zm): 10-21 metros.
-yoctómetro (ym): 10-24 metros.
Conocer las unidades de medida de longitud es relevante para el estudiante de

medicina, porque entre otras cosas, algunas de ellas se emplean en la
microscopía:
• El micrómetro (µm) es la unidad de longitud equivalente a una millonésima
parte de un metro, abreviado µ (plural latino: micra). También conocido como
micrón.
• El nanómetro (nm) es la unidad de longitud que equivale a una milmillonésima
parte de un metro. Utilizada además para medir las longitudes de onda de las
radiaciones electromagnéticas, la luz entre ellas. Esta unidad se ha hecho
importante en campo de la Nanotecnología, disciplina que estudia materiales
cuyas dimensiones son en el orden de escasos nanómetros.
• El ångström (Å) es la unidad de longitud empleada principalmente para expresar
longitudes de onda, distancias moleculares y atómicas. Su nombre viene dado por
el físico sueco Anders Jonas Ångström. Actualmente su uso en microscopía es
restringido, en cierto modo ha sido sustituido por el nanómetro.
Equivalencias:
Relaciones entre las diferentes unidades de medida empleadas en microscopía:
1 mm = 1000 µm
1 µm = 1000 nm
1 nm = 10 Å
1 Å = 0.1 nm
1 Å = 0.0001µm

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LA IMAGEN. SISTEMAS ÓPTICOS.
Aumento y resolución
Los términos aumento y resolución deben ser bien conocidos por todo usuario del
microscopio. El mecanismo mediante el cual se produce este fenómeno ha sido
estudiado por siglos y se explica mediante leyes de la física. Considerar
únicamente el aumento no es suficiente para sacar el mejor partido del
microscopio, pues otro factor, la resolución, determina lo que se verá.
Aumento
El poder de aumento de una lente está determinado por el grado de curvatura de

su superficie y la distancia focal. En las lentes convexas mientras mayor sea la
curvatura, menor será la distancia focal y mayor será el aumento. Se ha enunciado
anteriormente que el microscopio compuesto aumenta en dos etapas y puesto que
una sola lente no es suficiente se deben colocar varias lentes una detrás de la
otra, potenciando de esta manera el poder de aumento. El primer juego de lentes,
cercano al objeto en estudio, se denomina objetivo y el segundo juego, cercano al
ojo del observador se denomina ocular (11). Cada sistema de lentes es capaz de
producir una imagen aumentada cuyo valor se enuncia con la letra x, así que 10x
significa que la imagen está aumentada 10 veces.
Para conocer en el microscopio compuesto el aumento definitivo de una imagen

se aplica la siguiente fórmula:
AUMENTO TOTAL: Aumento del objetivo x Aumento del ocular
Aunque esta fórmula básica permite obtener el aumento total de una imagen, con
las técnicas de fotografía clásica o fotografía digital y el uso de software de
procesamiento de imágenes es posible lograr un aumento suplementario. Para
obtener el aumento definitivo habría que considerar los factores de ampliación que

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se realizan en la pantalla del computador (para luego imprimirla) o al copiar la foto

a papel mediante la técnica de fotografía clásica.
El poder de aumento de un sistema óptico tiene sus límites y el aumentar las

imágenes acarrea pérdida de información o detalles del objeto estudiado. Esto
puede ser resuelto mediante otro principio: La resolución.
Con el microscopio compuesto clásico es posible alcanzar un aumento máximo de

1000x. Esta limitación ha sido resuelta empleando un haz de electrones en lugar
de un rayo de luz visible, y se abrió así una nueva era con la microscopía
electrónica aplicada al estudio morfológico.
Resolución
Es la capacidad que tiene un sistema óptico de aislar dos puntos que se

encuentran muy próximos entre sí, de manera que se puedan ver individualizados
uno del otro. La riqueza de detalles que puede ser observada al microscopio
depende de la habilidad de este para hacer que los puntos del objeto que están
muy cercanos aparezcan en la imagen como puntos separados. Mientras más
corta sea la distancia entre esos puntos del objeto, más finos serán los detalles. La
distancia entre esos dos puntos se conoce como Límite de Resolución, el cual es
también referido como el Poder de Resolución y puede ser utilizada como un
indicador del rendimiento del microscopio. Esto se puede comparar vagamente
con algunos aspectos de la informática, el tamaño del pixel por ejemplo; mientras
más pequeño sea el tamaño, mayor será la cantidad de detalles de la imagen
digital.
Límites de Resolución aproximados de algunos sistemas ópticos:

• Ojo humano: 0,2 mm.
• Microscopio Fotónico: 0,2 µm.
• Microscopio electrónico: 0,2 nm.
Factores que determinan el poder de resolución

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Al observar pequeños objetos al microscopio, la luz incidente proveniente de ellos

es desviada de su trayectoria inicial y mientras más pequeños sean, mayor será la
desviación. Las lentes del objetivo deben recolectar como sea posible la mayor
cantidad de rayos desviados para formar una imagen nítida; a más rayos
capturados, mayor resolución.
Esquema que muestra un objeto que es atravesado por un haz de rayos

luminosos los cuales son captados por el objetivo (3). Al formarse el cono de luz
proveniente del objeto se determina un ángulo, también llamado de apertura,
donde a representa la mitad del mismo. Tomado de Kapitza H G. Microscopy from
the very begining.
A partir de las observaciones precedentes, nace la definición de apertura numérica

(AN), cifra a considerar para determinar el rendimiento de una lente objetivo (13):
AN = n x sen a
Donde a = la mitad del ángulo de apertura del objetivo.
n = el índice de refracción del medio que se encuentra entre el objeto y el objetivo.
(Para el aire n = 1 y para el vidrio o aceite n = 1.51)
Otra manera de incrementar la resolución es creando, del lado de la fuente

luminosa, un cono amplio con un ángulo mayor. Para ello se emplea otro juego de
lentes denominado condensador el cual posee la misma apertura numérica que el
objetivo

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Para aumentar aún más la resolución, además de agregar un condensador, otra

posibilidad es colocar algún líquido entre la lámina cubreobjeto y el objetivo. Se ha
obtenido buenos resultados con ciertos aceites (aceite de cedro) cuyo índice de
refracción es igual al del vidrio cubreobjeto, eliminando
toda reflexión de los rayos luminosos.
. A la izquierda el espacio entre el cubreobjeto (5) y el

objetivo (3) es ocupado por el aire; a la derecha el
espacio es ocupado por un líquido de inmersión (6).
Apréciese que el cono de luz y el ángulo a son mayores con inmersión.
El poder de resolución de un microscopio compuesto de campo claro puede ser

calculado de manera razonable mediante la fórmula
Entonces el poder de resolución de un sistema óptico, en términos generales

depende principalmente de:
• Apertura numérica del objetivo y condensador: La relación apertura/resolución es

directamente proporcional; a mayor apertura, mayor resolución.
• Longitud de onda de la radiación electromagnética utilizada: La relación longitud

de onda/resolución es inversamente proporcional; a menor longitud de onda,
mayor resolución.

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EL MICROSCOPIO COMPUESTO.
Breve reseña histórica
Los orígenes del microscopio son inciertos; probablemente en Holanda, en la

ciudad de Middelburg entre 1590 y 1610, algunas personas relacionadas con el
mundo del espectáculo inventaron tanto el microscopio compuesto como el
telescopio. Hans Janssen y su hijo Zacharias, fabricantes de anteojos, se
mencionan como posibles inventores. Sin embargo, algunos atribuyen a Galileo
Galilei su invención en la primera mitad del siglo XVII, gracias a que él difundió el
microscopio y su uso. El microscopio compuesto original consistía en dos o más
lentes colocadas en un tubo rígido.
Los primeros usuarios bien conocidos fueron M. Malpighi, de Italia, A. van

Leeuwenhoek, de Holanda; Hooke y N. Grew, de Inglaterra. Leeuwenhoek fabricó
un microscopio simple y Hooke utilizó un microscopio compuesto. Los
instrumentos empleados por Leeuwenhoek eran superiores a aquellos utilizados
por Hooke, en parte debido a que se desconocía el efecto de las aberraciones de
las lentes y como corregirlas. El microscopio compuesto de Hooke sumaba los
defectos de los dos juegos de lentes (objetivo y ocular), dificultando la
observación, de manera que en la historia de la microscopía fue Leeuwenhoek
quien realizó la mayor cantidad de descubrimientos con su microscopio simple.
Sin embargo, el microscopio compuesto sería el instrumento con más futuro. El

instrumento de Hooke del año 1665 tenía las partes básicas, dos lentes (una que
aumentaba la imagen de la otra), una estructura mecánica, mecanismos de
enfoque y un frasco esférico para concentrar la luz. Mejoras considerables se han
realizado desde entonces.

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Microscopio de Leeuwenhoek. La lente está instalada entre dos placas de bronce.

Lo que se quiere observar se coloca en la punta de un tornillo, de manera que se
puede regular en forma precisa la distancia entre el objeto y la lente; el observador
tiene que acercar el ojo al instrumento y mirar a través de la lente.
Microscopio utilizado por Hooke.
COMPONENTES DEL MICROSCOPIO COMPUESTO. El microscopio fotónico

compuesto esta integrado por tres tipos de componentes:
El microscopio compuesto de uso común también se conoce con el nombre

microscopio óptico en base a que sus propiedades derivan del empleo de lentes
ópticas. Está constituido por tres tipos de componentes o sistemas articulados de
tal manera que garantizan un funcionamiento óptimo y ergonómico.

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• Sistema mecánico: Conjunto de piezas que sirven de soporte a las lentes y

demás elementos (pie o base, columna, mecanismo de enfoque, platina, revolver,
tubo).
• Sistema óptico: Conjunto de lentes responsables del poder de aumento y
resolución (objetivos y ocular)
• Sistema de Iluminación: Elementos que producen las radiaciones (luz visible o
no) y transmiten, reflejan y regulan tanto la intensidad como la cantidad de rayos
que van a incidir sobre el espécimen (lámpara o fuente de iluminación, espejo,
condensador y diafragma).
Sistema mecánico del microscopio
La parte mecánica del microscopio también se denomina montura y es de forma y

dimensiones muy variables, dependiendo del fabricante.
De manera general se describen modelos grandes, medianos y pequeños o

portátiles. Los modelos grandes poseen todos los aditamentos que garantizan un
trabajo profesional y permiten el intercambio de piezas y accesorios para realizar
los trabajos más variados y su costo es el más elevado. Los modelos medianos no

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convienen a todo tipo de investigación pero son más prácticos puesto que su
precio es menor gracias a su construcción más simple.
Toda montura, por complicada que sea posee los siguientes elementos: pie o
base, mecanismo de enfoque, la platina, el revólver y el tubo del ocular.
Base o pié.
• Es un soporte metálico, amplio y sólido en donde se apoyan y sostienen

los otros componentes del microscopio. Generalmente en herradura o en
Y, aunque también puede ser rectangular, con un peso considerable que
garantiza la estabilidad del instrumento. La base aloja la fuente de
iluminación y puede contener un mecanismo para regular la intensidad
luminosa.
• Sirve de soporte a una columna o brazo sobre el cual reposa el resto del
aparato. La columna puede ser inclinada; en su parte más inferior se
dispone el condensador y la parte superior posee una cremallera que
permite desplazar en sentido vertical el condensador, la platina o el revólver
y el tubo. Las ventajas que procura el microscopio inclinado son múltiples y
la posición es más confortable para el observador (actividad que es muy
incómoda cuando el tubo del microscopio es vertical).
Platina.
• Superficie plana de posición horizontal que posee una perforación circular

central. En ella se apoya la preparación (lámina portaobjetos que contiene a
la muestra que se va a examinar) que se sujeta a la platina mediante
pinzas o con un carrito o charriot que, mediante mandos especiales
facilitan el movimiento de la preparación de derecha a izquierda y de
adelante hacia atrás.
• Es el soporte horizontal donde se colocan las preparaciones histológicas.
Presenta en el centro un orificio circular por donde pasa el rayo de luz
producido por la fuente luminosa y proveniente del condensador.

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Generalmente es de forma cuadrada y posee un sistema de fijación e

inmovilización de la lámina porta-objeto compuesto por pinzas o una pieza
articulada que esta fija a otro dispositivo, el carro. Este dispositivo permite
el examen metódico y completo de la preparación al proporcionar un
desplazamiento hacia adelante o hacia atrás y de derecha a izquierda y
viceversa.
Revólver
• Considerado como un accesorio del tubo. Es un implemento muy

importante que permite el intercambio rápido de objetivos mediante un
movimiento de rotación. El revólver está constituido por una semi-esfera
que posee una serie de anillos en los cuales van atornillados los objetivos.
Esta pieza gira alrededor de un eje que está colocado en la parte inferior
del tubo. Puede ser de diversas formas y de igual manera, alojar un número
variable de objetivos (dos, tres, cuatro o más).
• o portaobjetivos , es un componente que gira alrededor de un eje con la
finalidad que los objetivos que sostiene coincidan de manera perpendicular
con la perforación central de la platina. En su superficie inferior posee
varios agujeros donde se atornillan los objetivos.
Tubo óptico.
• Consiste en un cilindro metálico que suele medir 160mm o 170 mm de

longitud (dependiendo del fabricante del microscopio) el cual en un
extremo, está conectado al revolver o portaobjetivos y en el otro se
relaciona con el (los) ocular(es).
• Soporta la porción óptica del microscopio. Es un cilindro hueco de longitud
variable, cuyo interior está pintado de negro mate y posee un diafragma
para impedir la formación de reflejos y facilitar la observación. El tubo
puede ser doble y alojar dos lentes oculares (microscopio binocular). En los
modelos de microscopios grandes destinados a la microfotografía, hay un

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tercer tubo accesorio, generalmente más largo y vertical que sirve para
conectar una cámara fotográfica sin necesidad de lente ocular.
Brazo, estativo o columna.
• Permite la sujeción y traslado del microscopio. Soporta al tubo óptico, a la

platina y el revolver.
Tornillos macrométrico y micrométrico.
Generalmente están situados en la parte inferior del brazo o columna. Pueden

estar separados (en los microscopios antiguos) o el tornillo micrométrico está
incorporado en la circunferencia del tornillo macrométrico (microscopios
actuales). Ambos tornillos permiten el desplazamiento de la platina hacia
arriba y hacia abajo con la finalidad de acercar o alejar la preparación hacia
los objetivos y así conseguir un enfoque óptimo de la imagen. El macrométrico
produce desplazamientos evidentes y rápidos de la platina, en cambio el
tornillo micrométrico produce movimientos imperceptibles de la platina y sirve
para efectuar el enfoque fino y definitivo de la imagen.
En la actualidad los microscopios tienen incorporados a los mecanismos de

desplazamiento de los tornillos macro y micrométricos, topes de seguridad que
impiden que éstos continúen descendiendo indefinidamente y así se evita
roturas y daños a la laminilla y a las lentes de los objetivos.
MECANISMO DE ENFOQUE
Se logra desplazando en sentido vertical ya sea la platina donde se coloca el

espécimen o ya sea el revólver donde están colocados los objetivos, de modo que
se pueda centrar el punto focal del objetivo que se está utilizando es ese
momento. Se logra mediante dos mecanismos, primero uno rápido del tornillo
macrométrico y segundo, otro lento del tornillo micrométrico.

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La cremallera que permite el movimiento rápido del tornillo macrométrico posee

dientes que se engranan y producen un movimiento tosco para lograr un enfoque
aproximado. Se utiliza para enfocar con los objetivos de poco aumento y para
subirlos rápidamente con la finalidad de colocar o retirar de la platina el preparado
histológico.
El tornillo micrométrico por el contrario posee una graduación tal que cada división
de la rosca permite un movimiento vertical imperceptible en el orden de 0,001 mm.
Esta disposición permite evaluar de manera aproximada el espesor de los objetos,
considerando el número de vueltas que realiza el tornillo al enfocar su parte más
superficial y luego la más profunda.
El movimiento del tornillo micrométrico tiene una extensión de 5mm

aproximadamente y está limitado. Permite un enfoque fino y se utiliza con los
objetivos de mayor aumento.
SISTEMA ÓPTICO DEL MICROSCOPIO
Los microscopios modernos están diseñados para proporcionar imágenes

aumentadas y nítidas de los especímenes que se observan. Los componentes
ópticos están colocados en una base estable que permite un intercambio rápido y
un alineamiento preciso. El sistema óptico está constituido por dos juegos de
lentes: El objetivo y el ocular.
Los objetivos
Representan el componente óptico más importante del microscopio. Su principal

función consiste en colectar la luz proveniente del espécimen y proyectar una
imagen nítida, real, invertida y aumentada hacia el cuerpo del microscopio.
Constituyen un sistema óptico formado por una o varias lentes, las cuales deben
estar centradas y los ejes ópticos de cada una deben coincidir exactamente para
formar el eje óptico del sistema.

22
Estructura de los objetivos:

Generalmente es un tubo cilíndrico que contiene en su interior un revestimiento
anti-reflejos y las diversas lentes colocadas en serie y alineadas. En la parte
externa posee grabadas las especificaciones y características.
Tipos de objetivos. (a) Objetivo

acromático que contiene una
lente frontal y dos pares
internos, (b) objetivo semi-
apocromático o fluorita, con
cuatro pares de lentes y (c)
objetivo apocromático que
contiene un triplete, dos pares, un menisco y una lente esférica frontal.
Nomenclatura del objetivo

23
OCULAR.
Es otro componente óptico del microscopio, debe su nombre porque la imagen

final se observa a través de él acercando el ojo a la lente “ocular” del componente.
Es el encargado de formar una segunda imagen a partir de la imagen primaria que
forma el objetivo. La imagen del ocular es de mayor tamaño, virtual y derecho.
Esta imagen únicamente amplía un número determinado de veces 10 X a la
imagen formada por el objetivo. No añade, por más aumentos propios que posea,
ningún detalle a los generados por el objetivo.
En la generalidad de los casos, los oculares están construidos por dos lentes
convergentes (planos convexos). La primera lente se denomina “de campo o
frontal”, está situada en la parte anterior del ocular (fig. micros.8) y, es la
encargada de recoger y ampliar la imagen generada por el sistema de lentes del
objetivo. La lente posterior, en contacto estrecho con el ojo del observador, se
denomina lente “ocular” y es la responsable de aumentar nuevamente la imagen y
orientarla hacia el ojo del observador.
El ocular sirve para observar la imagen real e invertida que produce el objetivo,
ejerciendo dos funciones:
• Aumenta la imagen y la transforma en una imagen virtual, derecha con respecto

a la imagen del objetivo, pero aun invertida, con respecto al objeto. Posteriormente
el ojo endereza la imagen.
• Aplana y aclara el campo óptico o plano circular en el que aparece el objeto.
La lente superior se denomina lente ocular y es la que produce el aumento de la

imagen real del objetivo; la lente inferior también se denomina colectora y es la
que aplana y aclara el campo.

24
SISTEMA DE ILUMINACIÓN
Se consideran dentro de este grupo a los instrumentos que proporcionan energía

luminosa al microscopio. Las fuentes de energía luminosa son de dos tipos
natural y artificial.
La luz natural, emitida por el sol, se obtiene de manera indirecta mediante un

espejo que posee una superficie plana y otra cóncava. El espejo está situado en
la superficie superior de la base o pie. Un mecanismo especial permite orientarlo
hacia un lugar iluminado indirectamente por el sol (una ventana, por ejemplo) y
luego dirigir el haz luminoso hacia la lente del condensador.
La luz artificial se genera a través de una lámpara de bajo voltaje

(generalmente de 6 voltios) que, mediante un reostato regula la emisión y la
intensidad de luz. Al igual que el espejo, este sistema de iluminación se inserta en
la base o pie del microscopio.
En los microscopios que poseen un espejo, por carecer de una fuente de luz
incorporada, también se puede emplear la luz artificial emitida por una lámpara
que proyecta el haz luminoso de la misma manera como se orienta la superficie
reflectante del espejo cuando se ilumina el microscopio con luz natural.
Si se emplea luz visible (fotones) es usual que al microscopio se le denomine

fotónico. En sus inicios, la microscopía se practicaba con iluminación por reflexión;
se utilizaba un espejo que se orientaba para recoger la luz solar o en su defecto,
luz artificial (la luz de una vela, mechero a gas, lámparas de aceite o petróleo) y la
desviaba hacia la preparación. Este método se mantuvo durante mucho tiempo, en
parte debido al lento perfeccionamiento de las bombillas incandescentes, que
consisten en un globo de cristal en el que se ha hecho el vacío y dentro del cual va
colocado un hilo de metal (platino, carbón, tungsteno, entre otros) que al paso de
una corriente eléctrica se pone incandescente y sirve para alumbrar (50).

25
Con el uso de la bombilla eléctrica se suprime este espejo y los microscopios

pueden utilizarse en cualquier lugar. Sin embargo, algunos modelos de
microscopios actuales, desde los más sencillos y económicos hasta los más
sofisticados, aún poseen un espejo que sirve para desviar la luz producida por la
bombilla, en el caso que ésta no se encuentre alineada con la platina.
Condensador
Es un dispositivo que tiene por finalidad formar conos luminosos grandes, con
aperturas mayores, necesarios para ver con los objetivos de mayor aumento. El
término condensador puede considerarse inadecuado, ya que no produce una
condensación de los rayos luminosos, por el contrario, produce un aumento de la
sección del cono luminoso que a su vez forma una imagen más clara.
El condensador está conformado por una o varias lentes situadas debajo de la

platina del microscopio, colocadas entre la fuente de luz y el espécimen. El primer
condensador que se fabricó en 1838 (por Dujardin) poseía tres lentes acromáticas.
Al igual que en los objetivos, las lentes del condensador poseen poder de aumento
y también producen aberraciones, sin embargo, éstas también pueden corregirse.
Diafragma o iris
Es un dispositivo que se coloca inmediatamente debajo de la platina. Debe permitir

cambios en la apertura y con diámetros variables cuya finalidad es la de obtener
conos luminosos cada vez más estrechos y eliminar los rayos de luz sobrantes.
Los primeros diafragmas consistían en un disco de metal con agujeros de diferente
diámetro, el cual se rotaba según la necesidad. Estos discos fueron substituidos
por el iris, otro dispositivo más elaborado y con un diseño que le permite cambiar
de diámetro. La apertura del diafragma se regula en relación con el tipo de objetivo
que se esté utilizando. El diafragma o iris está pintado de negro con la finalidad de
eliminar los rayos de luz reflejada que pueden interferir con la iluminación del
objeto.

26
MICROSCOPIO ELECTRÓNICO DE TRANSMISIÓN.

Fue diseñado y construido basándose en los mismos principios de un
microscopio fotónico; con la diferencia que en vez de usar energía luminosa
emplea haces de electrones y reemplaza las lentes ópticas (de vidrio) por “lentes”
construidas mediante campos electromagnéticos.
Los principales componentes del M.E. de transmisión, los cuales son:
 Un cátodo, constituido por un filamento de alambre de tungsteno que se

calienta e irradia un chorro de electrones cuya velocidad y longitud de onda
están relacionadas con el voltaje de la energía eléctrica que se le aplica.
 Un ánodo, encargado de orientar los haces de electrones, reagruparlos y

acelerar su recorrido.
“Lente” condensadora (primer campo electromagnético). Los haces de
electrones provenientes del ánodo son concentrados por este primer campo
electromagnético y dirigidos hacia el
 Soporte de la muestra, en este lugar, dependiendo de la densidad que posean
los componentes del espécimen los haces de electrones los atraviesan, son
absorbidos, reflejados o son desviados en su recorrido. Las muestras deben
ser secciones sumamente delgadas para permitir el paso de los electrones.
Generalmente se utilizan secciones de tejidos del orden de 20 a 100
nanómetros. El escaso grosor del espécimen dificulta la formación de la
imagen por lo que es necesario “teñir” o contrastar las secciones con
soluciones de sales de metales pesados (plomo, uranio, plata o vanadio), los
cuales tienen cierta afinidad por determinados componentes celulares.
 “Lente” objetivo (segundo campo electromagnético).
Los electrones que atraviesan la muestra o los desviados por los

componentes de la misma, llegan a esta zona donde son enfocados para

27
formar una imagen ampliada. Esta imagen es recogida por la Pantalla

fluorescente o placa fotográfica
“Lente ocular” o de proyección (tercer campo electromagnético) que
vuelve a enfocar la imagen y la proyecta, ampliada también numerosas veces,
hacia la pantalla fluorescente. Ésta es una superficie plana constituida por un
soporte de colodión donde se distribuyen partículas muy finas de sales de zinc
o de fósforo verde, las cuales emiten energía luminosa (ondas de mayor
longitud, visibles al ojo humano) cuando son estimuladas por el choque de los
electrones. Para obtener un registro permanente de la imagen observada se
reemplaza la pantalla fluorescente con una placa fotográfica, cuyos
componentes son estimulados por los electrones de la misma manera que
actúan los fotones.
El M.E. de transmisión se emplea para obtener imágenes con un gran poder de

resolución que alcanza desde 0.5 a 1.0 nanómetro.
Semejanzas y diferencias entre la microscopía electrónica y la microscopia

de luz
Semejanzas:
• Diseño y funciones de sus elementos.
• En relación al sistema de iluminación: La radiación empleada incide directamente

sobre la muestra en estudio. Está conformado por una fuente emisora de la
radiación y un condensador que enfoca el rayo sobre el preparado histológico.
• El espécimen se coloca entre el sistema de iluminación y los objetivos o sistemas

de formación de la imagen.
• En relación al sistema óptico: Las lentes acopladas producen una imagen

aumentada del espécimen en estudio. Conformado por una lente objetivo que
forma una imagen intermedia y la lente proyectora (ocular, en el caso del

28
microscopio fotónico) que a su vez aumenta la imagen intermedia para formar la

imagen aumentada final.
• Pueden convertir la radiación empleada en una imagen permanente

(microfotografía).
Diferencias:
Elemento Microscopio fotónico Microscopio electrónico
Magnéticas, a partir de
metales magnéticos, alambre
De cristal o vidrio, con de cobre enrollado, cuya
LENTES
distancias focales fijas distancia focal varía en
relación con la corriente que
pasa por la bobina de cobre
El aumento del objetivo es fijo

Se consigue
(distancia focal) mientras que
cambiando los
AUMENTO la distancia focal de la lente
objetivos, rotando el
proyectora varía para lograr
revólver
los aumentos
Pequeña, por lo que

Mayor, por lo que se puede
se pueden ver
PROFUNDIDAD ver enfocado todo el espesor
diferentes planos de
DE CAMPO del corte ultrafino del
enfoque al mover el
espécimen
tornillo micrométrico
Haz de luz: fotones.

Haz de electrones.
Generalmente situada
FUENTE DE LA Ubicada siempre en lo alto del
por debajo del
RADIACIÓN instrumento, por encima del
espécimen (aunque
espécimen
hay excepciones)

29
Imprescindible, para facilitar el

ALTO VACÍO No es necesario desplazamiento de los
electrones
RESOLUCIÓN 0,2 µm 0,2nm
Comparación de tres tipos de microscopios y sus características más resaltantes.

30

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4. LA IMAGEN. SISTEMAS ÓPTICOS.

7. SEMEJANZAS Y DIFERENCIAS ENTRE LA MICROSCOPÍA

Auxiliar Titular De Docencia: Sdenka Vivian Quispe Vilacahua

Auxiliar Titular De Docencia: Sdenka Vivian Quispe Vilacahua

La longitud de onda es la distancia entre puntos

Newton descubrió que la luz natural al pasar a través de un prisma es separada en

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colores del arcoíris.

El color es de alguna manera la medición de la cantidad de una luz determinada.

LENTES, TIPOS Y PROPIEDADES.

El término lente es el nombre asignado a una pieza de vidrio, plástico u otro

Auxiliar Titular De Docencia: Sdenka Vivian Quispe Vilacahua

Las lentes de superficies convexas se denominan positivas, convergentes,

Refracción a través de una lámina de vidrio de superficies paralelas. La flecha

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Cuando la luz pasa de un medio a otro, la velocidad de la onda disminuye. La

Refracción de los rayos luminosos en la interfase aire-agua.

Si dividimos la velocidad de la luz en el vacío entre la que

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Refracción en las lentes:

Refracción en una lente plano-convexa.

El rayo bn coincide con el eje de la lente

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bn en el punto f. Dos leyes resultan de estas consideraciones:

1. Todo rayo que pasa por el centro de la lente NO es refractado.

El punto focal es el punto en donde confluyen los rayos luminosos refractados,

la refracción en las lentes biconvexas. Los fenómenos de refracción que se

Refracción en una lente biconvexa. a,

Tómese la lente biconvexa y un objeto. La imagen de este objeto va a variar

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3. El objeto se encuentra entre la lente y el foco. La imagen será virtual y derecha

Al realizar combinaciones de lentes, las cuales se colocan centradas y alineadas,

IMAGEN REAL E IMAGEN VIRTUAL

El término virtual, según el diccionario de la Real Academia Española significa:

La “virtualidad” de la imagen virtual consiste en que

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La percepción visual de ambos, del objeto real y de la imagen virtual, es idéntica.

Formación de la imagen virtual al observar un objeto en un espejo plano. La

Formación de la imagen virtual al observar

Unidades de medida empleadas en microscopía:

Una unidad de medida es una cantidad estandarizada de una determinada

Submúltiplos del metro:

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-milímetro (mm): 10-3 metros.

Conocer las unidades de medida de longitud es relevante para el estudiante de

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LA IMAGEN. SISTEMAS ÓPTICOS.

El poder de aumento de una lente está determinado por el grado de curvatura de

Para conocer en el microscopio compuesto el aumento definitivo de una imagen

AUMENTO TOTAL: Aumento del objetivo x Aumento del ocular

Auxiliar Titular De Docencia: Sdenka Vivian Quispe Vilacahua

se realizan en la pantalla del computador (para luego imprimirla) o al copiar la foto

El poder de aumento de un sistema óptico tiene sus límites y el aumentar las

Con el microscopio compuesto clásico es posible alcanzar un aumento máximo de

Es la capacidad que tiene un sistema óptico de aislar dos puntos que se

Límites de Resolución aproximados de algunos sistemas ópticos:

Factores que determinan el poder de resolución

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