Informe #1 - Espectrofotometría UV-VIS

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Análisis Instrumental I

Informe de laboratorio
Práctica N°1:
Espectrofotometría UV-VISIBLE
Resumen
Durante la práctica experimental llevada a cabo la fecha 07 de mayo del 2021 se
estuvo realizando la técnica de la espectrofotometría uv-visible. Esta técnica es utilizada
para medir la cantidad de luz que absorbe una sustancia química, midiendo la intensidad de
la luz cuando un haz luminoso pasa a través de la solución muestra. Con ella se puede
obtener información acerca de la concentración, también ayuda en la determinación de
estructuras moleculares, entre otras más.
Los tres grupos que se presentaron en la práctica de la fecha estuvieron trabajando
con el analito cafeína en solución. Para eso, el primer grupo preparó una solución madre de
cafeína de 50 ppm. Luego, el segundo grupo disolvió la solución madre convirtiéndolo en
dos alícuotas, una de 20 ppm y otra de 25 ppm. Y, por último, el tercer grupo disolvió
nuevamente estas dos últimas muestras, convirtiéndolas en otras alícuotas de 30 ppm y 35
ppm.
Todas estas muestras fueron llevadas al espectrofotómetro uv-vis Shimadzu UV-
1800 para que posteriormente sean evaluadas, donde aproximadamente 3 mL de cada
muestra se traspasó con la ayuda de los goteros a unas cubetas de cuarzo para la
determinación de las absorbancias, las concentraciones, las longitudes de ondas, entre otras
cosas más.

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Objetivos
Objetivo General
 Conocer el uso y funcionamiento del espectrofotómetro uv-visible Shimadzu
UV-1800 en la cátedra de Análisis Instrumental I.

Objetivos específicos
 Realizar de manera correcta los cálculos para la posterior preparación de las
soluciones de cafeína correspondientes.
 Comprender el funcionamiento y uso correcto del espectrofotómetro uv- visible
Shimadzu UV-1800 con la ayuda de la explicación del profesor.
 Utilizar de manera correcta el espectrofotómetro uv-visible Shimadzu UV- 1800
evaluando las muestras preparadas.
Marco Teórico
La espectrofotometría UV-visible es una técnica analítica que permite determinar la
concentración de un compuesto en solución. Se basa en que las moléculas absorben las
radiaciones electromagnéticas y a su vez que la cantidad de luz absorbida depende de forma
lineal de la concentración. Para hacer este tipo de medidas se emplea un espectrofotómetro,
en el que se puede seleccionar la longitud de onda de la luz que pasa por una solución y
medir la cantidad de luz absorbida por la misma. [2]
La ley Fundamental en que se basa los métodos espectrofotométricos es la ley de
Lambert – Beer en el cual establece que existe una relación lineal entre la absorbancia y la
concentración y el camino óptico. La cual se puede expresar en la siguiente formula:
A = εlCEc
Donde:
 A: absorbancia.
 l: camino óptico
 ε: Coeficiente de absortividad molar.
 C: concentración.
Esta ley es de mucha utilidad para la cuantificación de determinado analito en una
muestra. En el grafico se puede observar la relación lineal de la absorbancia y de la
concentración a un camino óptico constante. [1]
Generalidades del espectrofotómetro.
Los espectrofotómetros UV-VIS son instrumentos de laboratorio utilizados para
análisis cualitativos y cuantitativos de compuestos químicos, estas técnicas de análisis
tienen gran importancia para los diferentes sectores de la industria, estas industrias son:
química, petroquímica, farmacéutica, entre muchas otras. Una de las principales utilidades
del espectrofotómetro es que tiene la capacidad de proyectar un haz de luz monocromática
(de una longitud de onda particular) a través de una muestra y medir la cantidad de luz que
es absorbida por dicha muestra. Como también la relación de la intensidad del color en una
muestra y su relación a la cantidad de soluto dentro de la misma. [1]
Componentes de un espectrofotómetro. [1]
Los componentes principales de un espectrómetro son:
 Fuente de radiación (Fuente de luz)
 Selector de longitud de onda (Monocromador)
 Recipiente de la muestra (Cubeta de muestra)
 Detector (Foto multiplicador)
 Amplificador de la señal
 Dispositivo de lectura (Ordenador)
Espectrofotómetro marca Shimadzu UV-1800 [3]

Fue diseñado de acuerdo con los requerimientos actuales de las farmacopeas


japonesa, europea y estadounidense. Se caracteriza por poseer un ancho de banda
nominal efectivo de 1 nm, la más alta resolución de su categoría, en un diseño
compacto. El UV-1800 puede utilizarse tanto en forma autónoma como
controlado por una PC, ofreciendo una altísima variedad de prestaciones fáciles de
manejar. Además, es uno de los instrumentos más compactos en su especie, lo que
permite su instalación en espacios reducidos. Versatilidad, funcionalidad y alto desempeño
se combinan en un diseño armónico, compacto y de alto rendimiento.
Marco Metodológico
Materiales y muestra utilizados.
 Balanza analítica  Pizetas con agua destilada
 Matraces de 50 ml  Varillas de vidrio
 Matraces de 25 ml  Pipetas volumétricas de 10 ml y 5
 Matraces de 100 ml ml
 Vidrio reloj  Goteros
 Vasos de precipitado  Cafeína
 Probetas
Procedimiento de la práctica.
Solución madre de cafeína de 50 ppm en espectrofotometría UV visible.
Para el análisis de estas soluciones de cafeína, se realizaron los cálculos previos.
Posteriormente, se pesaron 50,25 mg de la cafeína en la balanza analítica, dentro de un vaso
de precipitado para evitar pérdidas de la muestra utilizada. Luego, se diluyó la muestra y se
pasó al baño de ultrasonido durante 3 min, esta se pasa a un matraz de 50 ml, pero sin
aforar, se vuelve a introducir en el baño de ultrasonido por 3 min y se afora el matraz de 50
ml de la muestra diluida, esta solución posee una concentración de 1000 ppm. A partir de
esta última se extraen 5ml para aforarlo en un matraz de 100ml y así obtener una
concentración de 50 ppm. Esta solución de 50 ppm corresponde a la solución madre.
Soluciones de cafeína de 20 ppm, 25 ppm, 30 ppm y 35 ppm.
De la solución madre (50 ppm) se extraen 5 ml para aforarlo en un matraz de 100ml
y así obtener una concentración de 50 ppm.
Para la solución de 20 ppm, se utilizó 10 ml de la solución madre y esta se aforó en
un matraz de 25 ml; para la de 25 ppm utilizó 15 ml de la solución madre y se aforo en un
matraz de 25 ml. De esta manera se obtuvieron unas alícuotas de 20 ppm y 25ppm.
Y para la alícuota de 30 ppm, se utilizaron 15 ml de la solución madre para aforarse
en un matraz de 25 ml. Por último, para la alícuota de 35 ppm, se utilizaron 35 ml para
aforarse en un matraz de 50 ml.
Análisis de las muestras en el espectrofotómetro uv-visible Shimadzu UV-1800.

Al tener todas las soluciones preparadas, se realizaron los análisis en el


espectrofotómetro uv-visible Shimadzu UV-1800. Primeramente, se realizó el calibraje del
equipo colocando agua destilada en la cubeta de cuarzo, dejando así el espectrofotómetro
con la absorbancia en 0. Posteriormente a eso, se traspasaron aproximadamente 3 ml de
cada muestra a las cubetas de cuarzo utilizando los goteros. Y así, cada muestra fue
evaluada.
Resultados
Tabla 1. Absorbancia de la cafeína en ppm en el espectrofotómetro UV
visible.
Concentración (ppm) Absorbancia (272,5 nm)
35 ppm (tercer grupo) No realizada por error
30 ppm (tercer grupo) 1,475 Abs
25 ppm (segundo grupo) 1,258 Abs
20 ppm (segundo grupo) 1,010 Abs
15 ppm 0,760 Abs
10 ppm 0,509 Abs
Fuente: datos obtenidos en el laboratorio.

Gráfico 1. Concentración vs Absorbancia de la cafeína.


Discusión de Resultados
Para análisis de la cafeína se prepararon distintas alícuotas, pero previo al análisis de
las muestras en el espectrofotómetro UV visible, se añadió agua destilada como blanco en
la cubeta de cuarzo y esta se introdujo al espectrofotómetro para ajustar en cero la
absorbancia, esto ayuda a obtener mejores resultados de absorbancia. Luego, cada una de
las muestras fueron introducidas al espectrofotómetro y así se realizaron los análisis
correspondientes.
En la tabla 1 se encuentran los valores de absorbancia de las muestras con su
alícuota correspondiente, estas se obtuvieron con la ayuda del espectrofotómetro. Se puede
decir que los valores fueron muy buenos ya que las diluciones fueron preparadas de la
manera correcta y solo en la última alícuota de 35 ppm hubo un error.
En gráfico 1 de dispersión se puede corroborar como se da perfectamente una recta
lineal con un R2=1, es decir, que la línea de tendencia esta exactamente encima de los datos
que se obtuvo
Conclusiones
La técnica de espectrofotometría uv-vis nos permitió determinar la concentración de
la cafeína en solución, como así también determinar las absorbancias, y las longitudes de
onda de cada muestra. Todo esto con la ayuda del espectrofotómetro. Aunque varían en el
diseño, todos los espectrofotómetros consisten en una fuente de luz, un selector de longitud
de onda, un contenedor transparente en el cual se deposita la muestra, un detector de luz y
el medidor.
La técnica de espectrofotometría fue interpretada y realizada de manera correcta,
donde fueron analizadas todas las soluciones de cafeína en espectrofotómetro uv-visible
Shimadzu UV-1800 que estaba disponible en el laboratorio de la universidad.
Todas las soluciones fueron preparadas de manera correcta, excepto la de 35 ppm,
que fue lastimosamente mal preparada, y debido a eso obtuvo un error en su absorbancia.
Bibliografía
1. Martínez. F, Pérez. I. Calibración de un Espectrofotómetro UV-Visible y
Evaluación de la Incertidumbre. Nicaragua; 2009 [Acceso el 21 de febrero de 2021].
Disponible en: Microsoft Word - TESIS AHORASI TERMINADA (unanleon.edu.ni)
2. Diaz. N, Bárcena. F, Fernández. E, Galván. A, Jorrin. J, Peinado. J, Toribio. F,
Túnez. I. Espectrofometría: Espectros de absorción y cuantificación colorimétrica
de biomoléculas. Córdoba. [Acceso el 21 de febrero de 2021]. Disponible en:
https://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-
mol/pdfs/08_ESPECTROFOTOMETRIA.pdf
3. Detalles del espectrofotómetro Shimadzu UV-1800. Disponible en:
https://www.notijenck.com.ar/novedades/uv-1800-poder-y-precision-en-un- diseno-
compacto
Apéndice
Muestra de cálculo
 Solución madre de cafeína (50 ppm)
𝒙 𝟓𝟎, 𝟐𝟓 𝒎𝒈 𝟓 𝒎𝑳 𝟐𝟓 𝒎𝑳
= × × × 𝟎, 𝟗𝟗𝟓𝟎
𝟓𝟎, 𝟓𝟎 𝒎𝑳 𝟏𝟎𝟎 𝒎𝑳 𝟓𝟎 𝒎𝑳
𝟐𝟓
𝟓𝟎, 𝟐𝟓
× 𝟎, 𝟗𝟗𝟓𝟎 = 𝟏𝒎𝒈
𝟓𝟎 𝒎𝑳
 Solución de cafeína (30 ppm)
𝒄𝟏. 𝒗𝟏 = 𝒄𝟐. 𝒗𝟐
(𝟓𝟎𝒑𝒑𝒎). (𝒗𝟏) = (𝟑𝟎𝒑𝒑𝒎). (𝟐𝟓𝒎𝑳)
𝟑𝟎 × 𝟐𝟓
𝒗𝟏 =
𝟓𝟎
𝒗𝟏 = 𝟏𝟓 𝒎𝑳

 Solución de cafeína (35 ppm)


𝒄𝟏. 𝒗𝟏 = 𝒄𝟐. 𝒗𝟐
(𝟓𝟎𝒑𝒑𝒎). (𝒗𝟏) = (𝟑𝟓𝒑𝒑𝒎). (𝟏𝟓𝒎𝑳)
𝟑𝟎 × 𝟓𝟎
𝒗𝟏 =
𝟓𝟎
𝒗𝟏 = 𝟑𝟓 𝒎𝑳
Datos originales

Cafeína 30 ppm
Alícuota
correspondiente
a mi grupo

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