2 Mercaptoetanol

2 MERCAPTO-ETANOL I.D.
Agente de diagnóstico para la prueba de aglutinación en tubo para la 1.Realizar una dilución 1:10 del antígeno con solución salina, calculan-
detección de aglutininas IgG específicas contra Brucella abortus. do el antígeno necesario para el numero de pruebas que se requiera.
La prueba 2-mercapto-etanol I.D. Es una prueba serológica recomenda- 2. Marcar una serie de tubos de ensaye de 13 x 100 mm limpios del
da y usada ampliamente para el diagnóstico de Brucelosis, ya que la fase 1 al 6, y uno como testigo (T) y colocar en el primero 0.9 ml. De so-
bacterémica de esta, induce en general niveles importantes de anticuer- lución salina con 2-ME al (0.71/100), y 0.5 ml. En el resto de los
pos en el suero de los individuos infectados. tubos. El tubo testigo tendrá solo solución salina.
Dado que la proporción de aislamiento de Brucella es bajo, el diag- 3. Al primer tubo agregar 0.1 ml. Del suero problema y mezclar perfec
nóstico de laboratorio se apoya principalmente en la demostración de tamente, de este se toman 0.5 ml. y se transfieren al segundo tubo,
anticuerpos específicos. se mezcla bien y de este se pasan 0.5 ml. Al tercer tubo y así, suce-
La prueba 2-mercapto-etanol I.D. emplea como antígeno una suspen- sivamente hasta el último tubo. De este ultimo se desecha 0.5 ml.
sión bacteriana de Brucella abortus (cepa 99 S) muerta pero antigénica- 4. A todos los tubos se le agregan 0.5 ml. Del antígeno diluido previa-
mente activa. La prueba 2-mercapto-etanol es una prueba de aglutinación mente (1:10) con solución salina isotónica. Las diluciones finales de
en tubo, que emplea un agente reductor para disociar la macroglobulina los tubos son: tubo1:1:20, tubo 2:1:40, tubo 3:1:80, tubo 4:1:160,
IgM (que es un pentámero), con lo que se inactiva su actividad de anti- tubo 5:1:320, etc.
cuerpo, no así las globulinas IgG e igA que después de utilizar el agente 5. Tapar y agitar la serie de tubos e incubar 48 horas a 37ºC.
reductor conservan sus características de anticuerpos aglutinantes.
Se ha señalado que la positividad de esta prueba se relaciona con ac- LECTURA DE LOS RESULTADOS
tividad clínica o infección activa, y se considera de utilidad para evaluar Después de la incubación, examinar los tubos, sin agitar, utilizando la
individuos con brucelosis crónica así como para controlar la eficacia de fuente luminosa para la leer la aglutinación. El grado de aglutinación se
la quimioterapia, ya que en forma paralela a la mejora clínica se deben mide por el grado de clarificación de los tubos y de la formación de la
alcanzar valores negativos de IgG. aglutinación en el fondo del tubo.
El tubo testigo no debe mostrar aglutinación aparente y sobrenadante turbio.
PRESENTACIÓN Aglutinación
Equipo de 2-mercapto-etanol 100% (4+) Sedimentación completa y sobrenadante claro.
Equipo para 100 determinaciones 75% (3+) Grumos sedimentados casi totalmente y sobrenadante claro.
-Antígeno de Brucella abortus cepa 99 S………….. 5.0 ml. 50% (2+) Sedimentación marcada y sobrenadante ligeramente claro.
-Reactivo de 2-mercapto-etanol al 98%….………... 1.0 ml. 25% (1+) Sedimentación ligera y sobrenadante con turbidez regular.
-Sol. Salina Isotónica al 0.85%…………………….. 100.0 ml. NEG. ( - ) No hay evidencia de aglutinación, sobrenadante igual a tubo control.
TOMA DE MUESTRAS INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS

-Colecte la muestra de sangre en un tubo limpio sin anticoagulante. -El titulo del suero esta dado por la máxima dilución que muestra una
- Dejar reposar la muestra de 10 a 15 minutos a temperatura ambien- aglutinación de 2(+).
te, hasta la formación del coágulo. -El resultado puede considerarse positivo con cualquier reacción posi-
-Separar el coágulo de la pared del tubo y centrifugar a 3,000 R.P.M. tiva en cualquier dilución.
durante 5 minutos. -Todo titulo positivo debe interpretarse como indicativo de infección o
-Obtener el suero limpio y mantenerlo en refrigeración hasta ser examinado. sospecha de esta, dado que esta prueba se relaciona con actividad
clínica, resulta de gran efectividad para evaluar caso de Brucelosis cró
MÉTODO CUANTITATIVO nica, debido a que la presencia de IgG se asocia por lo general con la
Aglutinación en tubo en presencia de 2-ME existencia de infección activa.
Esta prueba pone de manifiesto anticuerpos de la clase IgG principal- -Los títulos elevados deberán descender de acuerdo a la mejora clínica
mente, ya que los anticuerpos clase IgM son inactivados con la presencia de acuerdo al tratamiento, hasta alcanzar valores negativos ( - ).
de 2-ME.
Antes de realizar la prueba debe dejarse que los reactivos y las muestras BIBLIOGRAFÍA
adquieran la temperatura ambiente. Se recomienda usar sueros perfec- 1. Rose J.E. Roepke M.H. and ver. Res 18.550-SSS
tamente claros. 2. Alton G.J. Et al. Techniques for the brucellosis laboratory.
Agitar ligeramente el antígeno para homogenizar la suspensión. 3. López Merino A. Brucelosis: avances y perspectivas. Publicación
técnica del IDNRE No.6 México SSA 1991
La prueba se realiza haciendo diluciones de la muestra problema en 4. Hernández Monroy Y. Brucelosis: manual de procedimientos de la
solución salina con 2-Mercapto-etanol, añadiendo después un volumen boratorio. Publicación técnica del INDRE/SAGAR No.19
igual de antígeno diluido con solución salina isotónica NO FENOLADA. SSA/SAGAR 1996.
Calle Nicolás Bravo Mz.22 Lt.17 Col. Ampliación Las Peñas Del. Iztapalapa C.P. 09750 México DF.
Tel/Fax: 5693 4995,5691 8998, 5642 9216

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