Microbiología

Bioquimica - LCTA
2020

Crecimiento microbiano

Bibliografía:
• Brock. Biología de los Microorganismos. Madigan – Martinko – Dunlap - Clark
(12a. ed, 2009 y posteriores) Editorial Pearson
• The Physiology and Biochemistry of Prokaryotes by David White, James
Drummond and Clay Fuqua (4a. Ed, 2011). Cap. 4
 INTRODUCCIÓN AL CRECIMIENTO MICROBIANO

Incremento ordenado de todos los componentes celulares, que

conduce a un aumento de masa y finalmente a un aumento del
número de células

Para que el crecimiento bacteriano tenga lugar es necesario un aporte

adecuado de nutrientes. Todos los microorganismos necesitan carbono,
nitrógeno, hidrógeno, oxígeno, azufre, fósforo y diversos minerales para
crecer. Muchos necesitan también nutrientes especiales. Los
microorganismos captan estos nutrientes mediante diversos mecanismos de
transporte a través de las membrana.

En Microbiología el crecimiento
se relaciona con el aumento del
número de individuos

2
 INTRODUCCIÓN AL CRECIMIENTO MICROBIANO

Puntos de vista de estudio:

I. Crecimiento individual o ciclo celular

Replicación y segregación de cromosomas
Síntesis de nuevos materiales de las envueltas
Coordinación de la replicación y la división celular

II. Crecimiento poblacional

Cinética del crecimiento
Factores que afectan al tiempo de generación (g)
Factores ambientales que afectan al crecimiento
- Físicos
- Químicos

3
 I. CRECIMIENTO INDIVIDUAL: CICLO CELULAR

Secuencia de acontecimientos identificables que ocurren desde que surge una

nueva célula hasta que ésta se divide en dos hijas
En el ciclo existen diferentes
períodos:
• Replicación del ADN
cromosómico
• Formación del septo y
división celular

Fisión binaria
La célula duplica su tamaño y luego
se produce la division celular

Tiempo de generación: el tiempo

requerido para que las células
microbianas dupliquen su número

4
 FORMACIÓN DEL SEPTUM

Para que la división celular tenga lugar se debe formar un tabique o septo que
separe la célula original en dos células hijas (fisión binaria). Cada una de ellas recibe
un cromosoma completo y la porción correspondiente de citoplasma.

Microscopía de contraste de fases

Tinción del material genético

Tinción específica de FtsZ

Superposición

FtsZ

5
 FORMACIÓN DEL SEPTUM

En la formación del septo intervienen las proteinas Fts (Filamentous temperature

sensitive), que forman el aparato de división de la célula o divisoma.

FtsZ: similar a la tubulina de eucariotas, con

actividad GTPasa. Forma un anillo y recluta las
otras proteínas del divisoma. Citoplasmática.
ZipA: ancla que conecta el anillo de FtsZ a la
membrana citoplasmática.
FtsI: PBP (proteína de union a penicilina)
FtsA: ayuda a conectar el anillo de FtsZ a la
membrana y recluta otras proteínas del
divisoma
FtsK: media la separación de los cromosomas a
las células hijas

El divisoma dirige el crecimiento de la membrana plasmática y de la pared en el centro

de la célula y luego ocurre una constricción para formar dos células hijas 6
 Por qué el divisoma se forma en el centro de la célula?

Sistema MinCDE (E. coli)

MinC: interacciona con FtsZ e
impide la formación de anillos
estables.

Se forma una hélice formada por

proteínas MinCD, desde un polo
hacia el centro de la célula.

Al interaccionar con un anillo de

MinE la hélice se desensambla y
comienza a formarse en el polo
opuesto de la célula.

Debido a la rápida oscilación, se

genera una zona de inhibición de
la división cerca de ambos polos
de la célula

7
 Por qué el divisoma se forma en el centro de la célula?

La duplicación del cromosoma tiene lugar

antes de la formación del anillo FtsZ
Las proteínas Min forman una estructura
espiral localizada en la superficie de la
membrana plasmática, que oscila
moviéndose de un polo a otro.
MinC y MinD inhiben la formación del
anillo FtsZ.
MinE también oscila de polo a polo,
empujando a MinCD.
El anillo FtsZ aparece entre los nucleoides
duplicados.
FtsK y otras proteínas ayudan a que los
nucleoides se separen a medida que se va
produciendo la elongación celular.
Cuando se produce la constricción el
anillo FtsZ se despolimeriza y se forma el
tabique.
8
En la esporulación se forma un septum asimétrico
La división celular asimétrica ocurre tras la
formación transiente de espirales de FtsZ, que
distribuyen estas moléculas a ambos polos de
la célula.
Se forma un anilllo de FtsZ en cada polo.
Sólo uno de estos anillos forma un septum.

La asimetría se refuerza por una vía de

señalización que controla la expresión de
genes específica de cada compartimento.
La concentración de SpoIIE es mayor en la espora
luego de la septación. Activa un factor sigma (σF)
que dirige la expresión de genes específicos de la
espora.

9
 SÍNTESIS DE PEPTIDOGLICANO Y DIVISIÓN CELULAR
El peptidoglicano preexistente debe ser cortado para permitir la inserción del recién
sintetizado. Actúan autolisinas.
Peptidoglycan Transglycosylase Growing point
activity of cell wall

Cytoplasmic Autolysin
membrane activity
Out

In

Pentapeptide

Bactoprenol
 SÍNTESIS DE PEPTIDOGLICANO Y DIVISIÓN CELULAR

Patrón de crecimiento en cocos

La síntesis de nuevo peptidoglicano ocurre en
direcciones opuestas hacia afuera del anillo
FtsZ. Se forman bandas de pared (unión entre
peptidoglicano nuevo y el antiguo)

Patrón de crecimiento en bacilos

En bacilos el crecimiento ocurre en distintos puntos a lo largo de la célula

11
 DETERMINACIÓN DE LA FORMA CELULAR: PROTEÍNA MreB
FtsZ Cell wall
Cytoplasmic
MreB determina la forma en membrane
procariotas formando un
citoesqueleto que recluta otras
proteínas que dirigen el
crecimiento de la pared en
patrones específicos.
MreB
MreB forma un espiral por debajo de la
membrana plasmática, contactando con ella
en varios puntos. En esos sitios ocurre la Sites of cell wall synthesis
síntesis de nuevo peptidoglicano.
Se rellenan agujeros dejados por acción de
autolisinas, que rompen enlaces glicosídicos
y amida (por ej.: D-D carboxipeptidasas, D-D
endopeptidasas, amidasas, transglicosilasas
líticas)
MreB no está presente en cocos. La inactivación
del gen que codifica para MreB en bacilos
convierte esas células en cocos

La mayoría de los genomas de arqueas contienen proteínas FtsZ y MreB-like

12
El complejo proteico del divisoma (en verde) se forma El elongasoma (en azul) se forma en las bandas
en el centro de la célula y facilita la septación laterales, favoreciendo su expansión

Dick et al. 2018

13
Modelo “romper antes
de hacer” de la síntesis
de peptidoglicano
Las endopeptidasas
asociadas a Rod/SEDS/MreB
rompen localmente los
enlaces interpeptídicos en el
PG maduro.
RodA genera un molde de
PG, el cual es unido al sáculo
por las bPBPs.
Las aPBPs luego generan
hebras adicionales, que son
croslinkeadas con el PG
naciente de un lado y PG
maduro del otro, asegurando
la integridad estructural.

Zhao et al. Mol Microbiol (2017) 14

 II. CRECIMIENTO DE POBLACIONES BACTERIANAS

El crecimiento de una población bacteriana está definido por el aumento de

la masa bacteriana o del número de individuos

VELOCIDAD DE CRECIMIENTO. Cambio en la masa celular o en el número de

células experimentado por unidad de tiempo

TIEMPO DE GENERACIÓN (g). Tiempo requerido para que la población se

duplique. Durante cada generación se duplican la masa y el número de células.
Es un parámetro variable para los diferentes microorganismos

Si el tiempo de generación es constante, el número de células de la población

bacteriana se duplica en un período fijo. Se conoce como crecimiento
balanceado, crecimiento logarítmico o crecimiento exponencial.

Para que esto ocurra el cultivo bacteriano debe crecer en un medio adecuado, sin
limitación de nutrientes y sin productos tóxicos de desecho.

15
ASPECTOS CUANTITATIVOS DEL CRECIMIENTO BACTERIANO

El aumento del número de células es

N° células =
una progresión geométrica de base dos
n = número de generaciones
16
 CRECIMIENTO EXPONENCIAL

La representación de este crecimiento en

escala aritmética es una curva cuya pendiente
aumenta constantemente.
g = 30 min Si se representa en escala semilogarítmica se
obtiene una recta.
17
CRECIMIENTO EXPONENCIAL

Mediante la representación semilogarítmica

podemos obtener el valor de una serie de
parámetros de crecimiento, como por ej. el
tiempo de generación (g)

g=t/n

n = número de generaciones que ocurren en

un tiempo t

18
 EXPRESIÓN MATEMÁTICA DEL CRECIMIENTO BACTERIANO

En una población de bacterias que se encuentre en crecimiento

equilibrado (medio adecuado, parámetros nutricionales y ambientales
constantes) todos los constituyentes aumentan de manera proporcional
en la unidad de tiempo
constante de
proporcionalidad

Velocidad de aumento de células = µ . N° o masa de células

µ : velocidad específica de crecimiento

En términos matemáticos la velocidad de crecimiento de cualquier

componente en un tiempo corto puede expresarse

dZ = µ . Z
dt

19
 EXPRESIÓN MATEMÁTICA DEL CRECIMIENTO BACTERIANO
Considerando el número de células N
dN = µ . N
dt

Agrupando dN = µ . dt
N

Integrando
∫ dNN = ∫ µ . dt
ln N = µ . (t – t0)
N0
ln N – ln N0 = µ . (t – t0)

ln N = ln N0 + µ . (t – t0) log N = log N0 + µ . (t – t0)

2.303
Forma exponencial
µ . (t – t0)
N = N0 eµ . (t – t0) N = N0 10 2.303

20
 EXPRESIÓN MATEMÁTICA DEL CRECIMIENTO BACTERIANO

CÁLCULO DEL TIEMPO DE GENERACIÓN

Tiempo de generación o de duplicación (g): tiempo requerido para que los

componentes del cultivo se incrementen en un factor de dos

Si la velocidad específica de crecimiento es constante

ln N = µ . (t – t0) y N = 2 N0
N0

ln 2N0 = µ . (t – t0) = µ . g
N0

ln 2 = µ . g

g = ln 2 µ = ln 2
µ g

21
MÉTODOS DE DETERMINACIÓN DEL
CRECIMIENTO BACTERIANO

22
 MEDIDA DEL CRECIMIENTO DE UNA POBLACIÓN

El crecimiento de una población microbiana se puede medir estimando el

incremento de masa celular o el aumento del número de células. En ambos
casos se pueden emplear métodos directos o indirectos.
Los más utilizados son:

Métodos de medida de la MASA CELULAR

• Determinación del peso seco (directo)
• Métodos turbidimétricos (indirectos)

Métodos de medida del NÚMERO DE CÉLULAS (directos)

• Recuento en cámara de Petroff-Hausser (células totales: vivas y muertas)
• Recuento con contador de Coulter (células totales)
• Recuento en placa (células viables)
• Recuento sobre filtros de membrana (células viables)

23
 MEDIDA DEL CRECIMIENTO DE UNA POBLACIÓN

MÉTODOS DE MEDIDA DE LA MASA CELULAR

Determinación del peso seco: las células de un cultivo se recogen por

centrifugación de un volumen determinado, se lavan, se secan y se pesan.
Laborioso y poco sensible.
También puede hacerse determinación del peso húmedo o de algún
componente celular: ADN, proteínas, etc.

Métodos turbidimétricos: se basan en la capacidad de las células para

dispersar la luz que incide sobre ellas.
El grado de dispersión es proporcional
a la biomasa presente

24
 MÉTODOS DE MEDIDA DE LA MASA CELULAR

Turbidez: disminución de la luz transmitida a través del tubo (Transmitancia), lo

que equivale a mayor cantidad de luz absorbida (Absorbancia)
En un espectrofotómetro las lecturas se expresan en unidades de densidad óptica
(DO)
También se puede medir turbidez por comparación con escalas prefabricadas
(escala de Mac Farland)

25
 MÉTODOS DE MEDIDA DEL NÚMERO DE CÉLULAS

RECUENTO EN CÁMARA DE PETROFF-HAUSSER

Son portaobjetos excavados modificados sobre cuya superficie está marcada una
rejilla con pequeños cuadros de área conocida.
En esta cámara la excavación mide 0.02 mm de profundidad (1/50 mm) y está dividida en
25 cuadros grandes, subdivididos a su vez en 16 pequeños (400 celdillas en 1 mm2)

26
 MÉTODOS DE MEDIDA DEL NÚMERO DE CÉLULAS
RECUENTO EN CONTADOR COULTER

Permite la automatización del recuento de células.

Una solución electrolítica fluye a través de una delgada pipeta arrastrando las
células en suspensión que, al tratarse de partículas muy poco conductoras,
producen un aumento en la resistencia del líquido al atravesar el microcanal.
Como consecuencia, la corriente eléctrica
que atraviesa el canal disminuye por un
breve período. El contador detecta estos
cambios en la corriente eléctrica.
Al llevar un registro de los pulsos que
ocurren en la corriente eléctrica, se
puede contar el número de partículas
presentes en un determinado volumen de
fluido.
La amplitud del cambio en la corriente que
atraviesa el microcanal se encuentra
directamente relacionado al volumen de la
partícula, permitiendo medir también la
distribución del tamaño de las partículas
contadas.
27
 MÉTODOS DE MEDIDA DEL NÚMERO DE CÉLULAS

RECUENTO EN PLACA
Se cuentan las células de una muestra
que son capaces de formar colonias
cuando se inoculan en un medio de
cultivo sólido adecuado.
Antes de realizar la siembra usualmente se
realizan diluciones seriadas

El resultado se expresa en UFC / ml

UFC/ml = colonias contadas x factor de

dilución x volumen de inóculo

28
29
 MÉTODOS DE MEDIDA DEL NÚMERO DE CÉLULAS

RECUENTO EN PLACA: métodos de siembra

Permite inocular volúmenes mayores de muestra

30
 MÉTODOS DE MEDIDA DEL NÚMERO DE CÉLULAS

RECUENTO SOBRE FILTROS DE MEMBRANA

31
 CRECIMIENTO EN SISTEMAS CERRADOS

• Es el más habitual en laboratorio (cultivo de

microorganismos en medio líquido en
erlenmeyers, tubos, frascos u otros recipientes)
• Ocurre en un volumen fijo de medio de cultivo, el
que es modificado por los microorganismos
• No hay aporte nuevo de nutrientes ni es posible
eliminar productos de desecho del cultivo
• Se observa una curva de crecimiento típica que se
divide en varias fases
• Fase de latencia
• Fase exponencial
• Fase estacionaria
• Fase de muerte

32
 CURVA DE CRECIMIENTO
dN = µ . N
dt

Growth phases

Lag Exponential Stationary Death

Turbidity
(optical density)

Viable count

µ=0 µ = µ max µ=0 α = veloc. específica de muerte

dN = 0 dN = µ max . N dN = 0 dN = α . N
dt dt dt dt
 CURVA DE CRECIMIENTO

Es la representación gráfica del logaritmo del número de células en función del

tiempo

La curva teórica sería una recta si los microorganismos estuvieran creciendo

constantemente, pero en la práctica la curva presenta distintas fases:
Fase de latencia (lag): Período de adaptación a las nuevas condiciones ambientales
en un nuevo medio de cultivo
Fase de aceleración: Período donde las células mejor adaptadas comienzan a
dividirse, por lo tanto lo hacen gradualmente
Fase exponencial o logarítmica (log): La población se incrementa de modo regular,
duplicándose a intervalos regulares de tiempo. Se considera que son
fisiológicamente iguales y el tiempo de generación es constante. La población
aumenta en proporción a los componentes celulares
Fase estacionaria: Hay una merma en el crecimiento poblacional, esencialmente por
agotamiento de nutrientes y acumulación de productos tóxicos.
Fase de declinación o de muerte: pérdida de viabilidad, lisis celular. Se debe a
agotamiento de reservas de energía

34
 CRECIMIENTO EN SISTEMAS CERRADOS: CRECIMIENTO DIÁUXICO

Este tipo de crecimiento tiene lugar cuando una bacteria crece en un medio con dos
fuentes de carbono, una de las cuales se usa con preferencia sobre la otra. Es
consecuencia de la represión catabólica (mecanismo de regulación de la expresión
génica)
Da lugar a una curva de crecimiento con dos fases exponenciales separadas por una
fase estacionaria corta.

En un medio con glucosa y lactosa la

glucosa es la fuente de carbono
preferente y su presencia reprime la
síntesis de la beta-galactosidasa,
enzima necesaria para degradar
lactosa.
Cuando se agota la glucosa la enzima
se sintetiza y se reanuda el
crecimiento.

35
 CRECIMIENTO EN CULTIVO CONTINUO
Quimostato: sistema abierto con volumen constante, al que continuamente se
añade medio fresco de un reservorio y del que se retira medio usado que
contiene microorganismos y sustancias de desecho a una velocidad constante.
El medio se renueva y su composición no cambia a lo largo del tiempo, lo que
permite mantener el crecimiento de la población de forma indefinida (una vez
alcanzado el estado de equilibrio)
Se controlan dos parámetros
simultáneamente y de manera
independiente:
• La densidad de la población, variando la
concentración de un nutriente limitante
• La velocidad de crecimiento, ajustando la
velocidad de flujo o salida (velocidad de
dilución)

En cultivos cerrados las condiciones de crecimiento

cambian constantemente, es imposible controlar
ambos parámetros independientemente 36
Los cultivos continuos son sensibles a la velocidad de dilución y la
concentración del nutriente limitante:
• A velocidades muy altas de dilución, los microorganismos son lavados
• A velocidades de dilución muy bajas las células pueden morir por hambreado
• El aumento de concentración de un nutriente limitante produce más biomasa
pero la misma velocidad de crecimiento
 BIOFILMS
Agrupamientos de bacterias adheridas a una
superficie y encerradas en una matriz adhesiva
excretada por las células

Células
del
biofilm

Superficie

38
 BIOFILMS Attachment Colonization Development Active Dispersal
(adhesion of (intercellular (more growth and (triggered by
La matriz es una mezcla de a few motile communication,
growth, and
polysaccharide) environmental
cells to a factors such as
polisacáridos que atrapan suitable polysaccharide nutrient availability)
nutrientes para el crecimiento solid surface) formation)

microbiano y ayudan a evitar

Water
que las células superficiales se channels
Cell
desprendan.

Ej: Pseudomonas aeruginosa Polysaccharide

Surface
Produce polisacáridos que
aumentan la patogenicidad y la
resistencia a antibióticos
Su formación depende de la
expresión de genes específicos
activados por quorum sensing.
https://www.youtube.com/watc
h?v=Aa8WE2LOOcQ
Quorum Sensing
Mecanismo por el cual las bacterias miden la densidad de población
Los procariotas pueden responder a la presencia de otras células de la misma especie

Asegura que hay un número suficiente de

células antes de iniciar una respuesta que,
para ser efectiva, requiere una cierta
densidad celular (ej., producción de toxinas
en una bacteria patógena)

El primer sistema de quorum sensing

descubierto fue la regulación de la
producción de luz en bacterias: inducción
del operon lux en Aliivibrio fischeri
https://www.youtube.com/watch?v=mQ43f
uJJW7M

Cada especie bacteriana produce un auntoinductor específico

Autoinductor
Difunde libremente a través de la envoltura celular
Alcanza altas concentraciones dentro de la célula solo si hay muchas células en las
cercanías
Se une a activadores transcripcionales dentro de la célula o a histidín quinasas de
sistemas de dos componentes y desencadena
la transcripción de genes específicos

Gram negativas:
• acilhomoserina lactonas (AHL)
• AI-2 (furanona)

Gram positivas:
• oligopéptidos
• gamma butirolactonas

41
EFECTO DE LOS FACTORES AMBIENTALES
SOBRE EL CRECIMIENTO BACTERIANO

42
 EFECTO DE LOS FACTORES AMBIENTALES SOBRE EL
CRECIMIENTO BACTERIANO

El crecimiento de los microorganismos está influenciado por los factores

ambientales, los cuales determinan la distribución de los microorganismos en la
naturaleza y a su vez permiten controlar sus actividades

Los principales factores que afectan al crecimiento bacteriano son:

• Temperatura
• pH
• Disponibilidad de agua y presión osmótica
• Oxígeno

Otros factores:
• Presión hidrostática
• Radiaciones

43
 EFECTO DE LA TEMPERATURA

Temperatura mínima: por

debajo de la cual no hay
crecimiento

Temperatura máxima: por

encima de la cual no existe
crecimiento

Temperatura óptima: a la
que se da el mayor
crecimiento.

44
 CLASES DE MICROORGANISMOS EN RELACIÓN A LA
TEMPERATURA ÓPTIMA

Hábitat: océnos, aguas Hábitat: zonas volcánicas sometidas a

congeladas, alimentos insolación, materiales fermentados,
refrigerados fuentes hidrotermales

Hábitat: animales de sangre

caliente, ambientes
terrestres y acuáticos de
zonas templadas y tropicales
45
 VIDA MICROBIANA A BAJAS TEMPERATURAS
Extremófilos
Organismos que crecen en condiciones de mucho frío o mucho calor
• Psicrófilos
Organismos con bajas temperaturas
óptimas de crecimiento.
Habitan permanentemente ambientes
fríos
• Psicrotolerantes
Organismos que pueden crecer a 0°C
Pero tienen temperaturas óptimas
De crecimiento entre 20°C y 40°C
Están más ampliamente distribuidos
en la naturaleza que los psicrófilos
 VIDA MICROBIANA A BAJAS TEMPERATURAS
Adaptaciones moleculares que permiten el crecimiento a
bajas temperaturas

– Producción de enzimas que funcionan óptimamente en frío;

características que puede proporcionar más flexibilidad
• Más α-helices que láminas plegadas β
• Más aminoácidos polares y menos hidrofóbicos
• Menor cantidad de uniones débiles
• Menos interacciones entre dominios proteicos

– Modificación de membranas citoplasmáticas

 Efecto del frío sobre las membranas

Se ven afectadas las

actividades de las
proteínas integrales de
membrana:
- transporte activo y
pasivo
- sensado del ambiente
- movimiento celular
- catálisis enzimática
- generación de
energía

Las propiedades biofísicas de las membranas están definidas en gran parte por las
estructuras de los ácidos grasos que son incorporados a los fosfolípidos.
Los microorganismos se adaptan modificando la estructura y composición de los
lípidos de la membrana (menor Tm)
 Cambios en la composición de lípidos de membrana
causada por disminución de la temperatura de crecimiento
Cambio rápido que involucra el
Reordenamiento de las especies moleculares intercambio de las cadenas de acilo del
esqueleto de glicerol
Modificación in situ de lípidos,
Aumento en el grado de insaturación relativamente rápido. Mediado por
desaturasas
Acortamiento de cadenas Basada en la menor temperatura de
melting de los ác.grasos de cadena corta
Algunos microorganismos alteran la
Alteración del tipo de ácido graso relación y la cantidad de los ác. grasos
ramificados
Cambios en la clase de lípidos, cuando la
Alteración de la clase de lípido intercorversión entre PL sea factible por
ejemplo PE por PC que tiene menor Tm
Cambio en la relación lípido a proteína La relación aumenta significativamente a
baja T debido al aumento neto de síntesis
de lípidos.
 VIDA MICROBIANA A ALTAS TEMPERATURAS
• Termófilos: organismos con temperatura óptima de crecimiento entre
45°C y 80°C
• Hipertermófilos: organismos con temperatura
óptima mayor a 80°C
Habitan ambientes calientes, incluyendo
fuentes termales hirvientes y fumarolas
hidrotermales del fondo marino, que pueden
presentar temperaturas por encima de los 100°C

Estudios de ambientes termales revelaron que:

• Los procariotas son capaces de crecer a mayores
temperaturas que los eucariotas. Por encima de
~65°C solo existen formas de vida procariota
• Los organismos con las más altas temperaturas
óptimas pertenecen a Archaea
• Los organismos no fotótrofos pueden crecer a
mayores temperaturas que los fotótrofos Arroyo de agua hirviendo
Parque Nac. Yellowstone
 VIDA MICROBIANA A ALTAS TEMPERATURAS

Adaptaciones moleculares que permiten el crecimiento a altas

temperaturas

– Producción de enzimas y proteínas que funcionan óptimamente a altas

temperaturas; características que proporcionan estabilidad térmica
• Sustitución de aminoácidos críticos en unos pocos lugares
generan plegamientos más tolerantes a la desnaturalización por
calor
• Número aumentado de enlaces iónicos entre aminoácidos
básicos y ácidos
• Producción de solutos (ej., di-inositol fosfato, diglicerol fosfato)
que ayudan a estabilizar a las proteínas

– Modificaciones en las membranas citoplasmáticas para asegurar

estabilidad térmica
 VIDA MICROBIANA A ALTAS TEMPERATURAS
- Modificaciones en las membranas citoplasmáticas para asegurar estabilidad
térmica
• Bacteria tienen lípidos enriquecidos en ácidos grasos saturados
• Archaea tienen monocapas lipídicas
en lugar de monocapas

Los hipertermófilos producen enzimas ampliamente usadas en microbiología industrial.

Ej: Taq polimerasa, enzima de Thermus aquaticus, usada para automatizar los pasos
repetitivos en la reacción en cadena de la polimerasa (PCR)
 EFECTO DEL pH
Alteraciones por variaciones del pH
del medio: hongos
• Inestabilidad de la membrana Thiobacillus
plasmática
• Intercambio de hidrogeniones
• Modificación de la concentración
interna de [H+]
• Cambia la ionización de las moléculas
• Desnaturalización de proteínas:
inhibición de actividad enzimática y Staphylococcus
aureus
transporte
Mecanismos de adaptación
• Sistemas antiporte potasio/protones
o sodio/protones Bacillus
• Síntesis de ATPasas traslocadoras de
protones que expulsan protones al
medio
• Síntesis de chaperonas para corregir
proteínas desplegadas

54
Buffers

55
 DISPONIBILIDAD DE AGUA Y PRESIÓN OSMÓTICA
El agua libre se mide por la actividad de agua aw cuyos valores oscilan entre 0 y 1
aw = Ps/Pw
Ps = presión parcial de vapor de agua en la
solución problema
Pw = presión parcial de vapor de agua destilada

aw puede disminuir por interacciones

con moléculas de soluto (efecto
osmótico).
El agua difunde de regiones de alta
concentración de agua a las de baja
concentración. Hay ambientes
hipertónicos (aw baja) o hipotónicos
(aw alta).
A menor valor de aw más dificultad
tienen las bacterias para sobrevivir.

56
57
DISPONIBILIDAD DE AGUA Y PRESIÓN OSMÓTICA
CLASES DE MICROORGANISMOS

aw = 0.9

58
 DISPONIBILIDAD DE AGUA Y PRESIÓN OSMÓTICA
Adaptaciones al aumento de la presión osmótica externa
Osmotolerantes:
Mantienen elevada su concentración interna
de solutos
• Bombeo de iones desde el exterior
• Síntesis y/o concentración de solutos
compatibles: sacarosa, trehalosa,
polialcoholes (glicerol, manitol),
aminoácidos (colina, betaína, prolina, etc)

Halófilos extremos:
Concentran además ión K+ (hasta 4-7 mM)
que es necesario para:
• Estabilidad de las proteínas
transportadoras, enzimas y ribosomas
• Mantenimiento estable de pared celular y
membrana plasmática

59
 EFECTO DEL OXÍGENO SOBRE EL CRECIMIENTO BACTERIANO

• El oxígeno comprende alrededor de 20% de los gases

atmosféricos
• Es un importante aceptor final de electrones en la respiración
• Es un poderoso oxidante, que genera diversas especies tóxicas

Los microbios se pueden separar en tres categorías:

• Los que usan el oxígeno y lo pueden detoxificar

• Los que no lo usan ni lo pueden detoxificar
• Los que no lo usan pero lo pueden detoxificar
 OXÍGENO Y CRECIMIENTO BACTERIANO

El oxígeno es un potente oxidante y es el mejor aceptor de electrones para la

respiración, pero puede ser letal para las bacterias ya que durante el proceso
de reducción hasta agua se generan formas tóxicas (radical superóxido y
peróxido de hidrógeno).
Las flavoproteínas, quinonas y hierro-sulfoproteínas, pueden también catalizar
la reducción de oxígeno a superóxido, aunque no haya respiración aeróbica.
Estos productos oxidan los compuestos orgánicos celulares, incluyendo las
macromoléculas

61
 OXÍGENO Y CRECIMIENTO BACTERIANO
Enzimas detoxificantes: destruyen especies tóxicas del oxígeno

62
63
EFECTO DEL OXÍGENO SOBRE EL CRECIMIENTO BACTERIANO

Aerobios: requieren oxígeno para vivir

• Aerobios estrictos
• Microaerófilos: pueden usar el oxígeno solo si está
presente en niveles menores que en el aire

Anaerobios: no requieren oxígeno para vivir

• Anaerobios estrictos: mueren si son expuestos al oxígeno
• Anaerobios aerotolerantes: pueden tolerar el oxígeno y
crecer en su presencia aunque no puedan usarlo

Microoganismos facultativos: pueden vivir con o sin oxígeno

 EFECTO DEL OXÍGENO SOBRE EL CRECIMIENTO BACTERIANO

21% O2
2-10 % O2
Crecimiento en Agar tioglicolato,
el oxígeno penetra sólo en la parte
superior del tubo.
Indicador redox: resarzurina
65
OXÍGENO Y CRECIMIENTO BACTERIANO

66