IDENTIFICACIÓN DE UN ESPECTROFOTÓMETRO UV-VIS Y LEY DE BEER

Carlos candencia, María codina, Yeisson cera José Pérez Navarro.

Profesor: Jayson fals
Facultad de Química y Farmacia, Universidad del Atlántico, carrera 30 Número 8-49
Puerto Colombia.

Resumen: en este practica se identificó un espectrofotómetro, su funcionamiento y sus

partes; software, hardware, Un espectrofotómetro es un instrumento que tiene la capacidad
de manejar un haz de Radiación Electromagnética (REM), comúnmente denominado Luz,
separándolo en facilitar la identificación, calificación y cuantificación de su energía. Su
eficiencia, resolución, sensibilidad y rango espectral, dependerán de las variables de diseño
y de la selección de los componentes ópticos que lo conforman. Se empleó la
espectroscopia ultravioleta-visible, con un espectrómetro modelo UV-VIS 1900 Shimadzu
se utiliza para Obtener el espectro de absorción del Cl 2Co * 6 H2O basándose en el
principio que cada compuesto químico absorbe o emite energía lumínica de diferente
longitud de onda. Esta longitud puede estar en el espectro de luz visible, o en otra parte del
espectro electromagnético, Como consecuencia, el espectro de absorción, es decir, la luz
absorbida en función de la longitud de onda, constituye una verdadera seña de identidad de
cada sustancia o molécula. Para determinar la absorbancia y concentración de una
disolución de Cl2Co * 6 H2O se utiliza una solución de Cl2Co * 6 H2O como disolución
madre y a partir de esta se preparan 2 disoluciones a diferentes concentraciones, luego se
procedió a tomar su longitud de onda de las dos disoluciones y de la muestra problema,
logrando conocer por medio de la ley de Beer, la concentración de la muestra problema.
Palabras claves: espectroscopia UV-VIS, espectros, espectrofotómetro, concentración,
absorbancia, radiación electromagnética, disoluciones.
Abstract: In this practice, a spectrophotometer, its operation and its parts were identified;
software, hardware, A spectrophotometer is an instrument that has the ability to handle an
Electromagnetic Radiation (REM) beam, commonly called Light, separating it in
facilitating the identification, qualification and quantification of its energy. Its efficiency,
resolution, sensitivity and spectral range will depend on the design variables and the
selection of the optical components that make it up. Ultraviolet-visible spectroscopy was
used, with a model UV-VIS 1900 spectrometer Shimadzu is used to Obtain the absorption
spectrum of Cl2Co * 6 H2O based on the principle that each chemical compound absorbs or
emits light energy of different wavelengths. This length can be in the visible light spectrum,
or in another part of the electromagnetic spectrum. As a consequence, the absorption
spectrum, that is, the light absorbed as a function of the wavelength, constitutes a true
hallmark of each substance or molecule. To determine the absorbance and concentration of
a Cl2Co * 6 H2O solution, a Cl2Co * 6 H2O solution is used as the stock solution and from
this 2 solutions are prepared at different concentrations, then the wavelength of the two is
taken solutions and the sample sample, knowing by means of Beer's law, the concentration
of the sample sample.
Key words: UV-VIS spectroscopy, spectra, spectrophotometer, concentration, absorbance,
electromagnetic radiation, solutions.
1. INTRODUCCIÓN. para encontrar ese rango donde se cumple
la ley de beer-Lambert. La ley de beer-
La espectroscopía UV-Vis (o
Lambert establece que la absorbancia de
espectrofotometría) es una técnica
una disolución es directamente
cuantitativa utilizada para medir cuánto
proporcional a la concentración de las
absorbe una sustancia química la luz. Esto
especies absorbentes en la solución y la
se realiza midiendo la intensidad de la luz
longitud del camino. Por lo tanto, para
que pasa a través de una muestra con
una longitud de trayectoria fija, la
respecto a la intensidad de la luz a través
espectroscopia UV/Vis puede usarse para
de una muestra de referencia o blanco.
determinar la concentración del
Esta técnica se puede utilizar para
absorbente en una solución. Es necesario
múltiples tipos de muestras, incluidos
saber que tan rápido cambia la
líquidos, sólidos, películas delgadas y
absorbancia con la concentración, se
vidrio. Usando un espectrofotómetro y
puede determinar a partir de una curva de
realizando mediciones de absorción /
calibración. La absorbancia está
transmisión, podemos determinar la
relacionada con la concentración de la
cantidad (o concentración) de una
sustancia, c, por la ley de Lambert-Beer,
sustancia química conocida simplemente
que se resume con la ecuación:
estudiando el número de fotones
(intensidad de luz) que llegan al detector. A=ε b c. (ec.1)
Cuanto más absorbe la luz un material a
Donde:
una longitud de onda específica, mayor es
la concentración de la sustancia conocida.  c se expresa en mol/L,
En cuanto a la practica se pudo  b es la longitud del camino óptico
determinar la concentración de la muestra (anchura de la célula que contiene la
problema, usando un espectrofotómetro, disolución de la sustancia) y se
cada molécula de la sustancia que absorbe expresa en cm.
tiene igual oportunidad de interceptar y  ε es la absortividad molar, propiedad
absorber un cuanto de luz, cualquiera que característica de cada sustancia
sea su situación dentro de la molécula. correspondiente a la cantidad de
Esto implica que la solución es suficiente radiación que absorbe a una longitud
diluida para que ninguna molécula quede de onda determinada por unidad de
oculta en la sombra de otra, por eso en la concentración, siendo sus unidades L
practica se hacen múltiples disoluciones
 mol-1 cm-1 (téngase en cuenta que la absorbancia no tiene unidades)

2. MARCO TEÓRICO. concentración molar de las especies que

absorben y el grosor de la muestra por la
Técnicamente, la espectrometría de
que la luz pasa. Esto se conoce como ley
absorción se basa en la absorción de
de Beer-Lambert. El gráfico de la
fotones por una o más sustancias
cantidad de radiación absorbida respecto
presentes en una muestra (que puede ser
a la longitud de onda para un compuesto
un sólido, líquido, o gas), y la promoción
particular se conoce como espectro de
subsiguiente del electrón (o electrones)
absorción. El espectro de absorción
desde un nivel de energía a otro en esa
normalizado es característico para cada
sustancia. La muestra puede ser una
compuesto particular, no cambia con la
sustancia pura, homogénea o una mezcla
concentración y es como la "huella
compleja. La longitud de onda en la cual
digital" química del compuesto. En las
el fotón incidente se absorbe es
longitudes de onda correspondientes a los
determinada por la diferencia en los
niveles de energía resonantes de la
niveles de energía disponibles de las
muestra, se absorben algunos de los
diferentes sustancias presentes en la
fotones incidentes, lo que provoca una
muestra. Esta es la selectividad de la
caída en la intensidad de transmisión
espectrometría de absorbancia, la
medida y una pendiente en el espectro. El
capacidad de generar fuentes de fotones
espectro de absorción puede medirse
(luz) que son absorbidas sólo por algunos
usando un espectrómetro. Conociendo la
componentes en una muestra.
forma del espectro, la longitud de ruta
Típicamente, los rayos X se usan para
óptica y la cantidad de radiación
revelar la composición química, mientras
absorbida, se puede determinar la
que las longitudes de onda cercanas al
estructura y la concentración del
ultravioleta y el infrarrojo se usa para
compuesto. Los espectros de absorción de
distinguir las configuraciones de diversos
luz visible pueden tomarse en cualquier
isómeros detalladamente. En la
material que sea visiblemente claro. El
espectroscopia de absorción, los fotones
poliestireno, el cuarzo, y las células de
absorbidos no son emitidos de nuevo
borosilicato (Pyrex), son los materiales
(como en la fluorescencia) sino que la
más usados. La luz ultravioleta es
energía que se transfiere al compuesto
absorbida por la mayor parte de cristales
químico en la absorbancia de un fotón se
y plásticos, por lo que se usan células de
pierde por medios no radiantes, como la
cuarzo. El Si-O presente en el cristal y el
transferencia de energía por calor a otras
cuarzo, y el C-C en el plástico absorben la
moléculas. Aunque la intensidad relativa
luz infrarroja. Los espectros de absorción
de las líneas de absorción no varía con la
infrarrojos se realizan generalmente con
concentración, a cualquier longitud de
una delgada película de la muestra
onda dada la absorbancia medida
sostenida entre platos de cloruro de sodio.
I
−log ( )
I0
es proporcional a la Otros métodos implican suspender el
compuesto en una sustancia que no
absorba en la región de estudio. Las Lambert (1728-1777), publicó su “Ley de
emulsiones de aceite mineral (Nujol) y la absorción”. En 1776, el físico italiano
los cristales de bromuro de potasio suelen Alessandro Volta (1745-1827), usó su
ser los más comunes. El NaCl y KBr, al “Electroforus perpetual”, un dispositivo
ser iónicos, no absorben el infrarrojo de para producir cargas eléctricas estáticas a
forma significativa, y el Nujol tiene un nivel de chispas, en diferentes materiales.
espectro infrarrojo relativamente sencillo. Con ello, pudo identificar diferentes gases
en función del color que

La historia de la espectroscopia.
emitían cuando se les descargaba una
La aparición del espectrofotómetro
chispa eléctrica. En 1802, el científico
creado por Arnold Beckman en 1941
inglés William Hyde (1766-1828)
revolucionó el mundo de la biociencia. La
observó por primera vez las líneas
cotidianidad actual de este instrumento ha
obscuras del espectro del Sol. Aunque
conducido al desconocimiento de los
muchos desarrollos intelectuales nacieron
alcances de su tecnología El primer
como producto de la curiosidad por
registro documentado sobre una serie de
comprender a la naturaleza, otros son el
luces de colores que se observaron en el
resultado de la búsqueda de respuestas
suelo, y que provenían de la luz del Sol,
para explicar algún problema social,
que cruzaba en su camino a un vaso con
militar, filosófico o científico. En este
agua puesto en la orilla de una ventana,
sentido, el desarrollo de la espectroscopia
fue descrito por Leonardo da Vinci en
y el de sus diferentes aplicaciones, son el
1497. Una observación más minuciosa y
producto de ambos mundos: la curiosidad
con el interés propio de explicar el
de explicar y comprender fenómenos de
fenómeno, fue dada por Isaac Newton en
la materia, y la utilidad en la aplicación
1666. En ese año, acuñó la palabra
de dichos fenómenos, para desarrollar
“spectro” al describir la luz del Sol,
tecnología que más fenómenos, muy
mientras esta era dispersada en sus
específicos en ramas muy diversas. El
diferentes colores al atravesar un prisma.
estudio de métodos y técnicas para
Desarrolló el primer espectroscopio, al
conocer las propiedades de los materiales
utilizar un aparato con una abertura para
y sustancias simples o complejas, que
permitir el paso de la luz sobre una lente,
absorben y emiten radiación (la cual
un prisma y una pantalla. Los avances, en
puede ser caracterizada a partir de sus
este sentido, no sucedieron de manera
espectros), está siendo utilizado en
continua. Fueron, por decirlo de alguna
campos tan diversos como: la astronomía,
manera, saltos cuánticos en su desarrollo.
lasn comunicaciones, la biología y la
En 1729, el científico y matemático
salud; por sólo mencionar algunos de los
francés Pierre Bouger (1698-1758)
derroteros que ha seguido esta tecnología,
observó que, la cantidad de luz que pasa a
a lo largo de su desarrollo. El término
través de una muestra de líquido,
espectroscopia hace referencia a la
disminuía con el aumento del espesor de
observación y al estudio del espectro, y se
la muestra. En 1760, el matemático y
basa en la interacción de la energía
científico alemán Johann Heinrich
radiante con la materia. Esta
interacción es tan específica que nos
Métodos espectroscópicos.
permite identificar el tipo y la cantidad
de materia que interactuó. La Los métodos espectroscópicos son un
espectroscopia sirve para identificar y amplio grupo de métodos analíticos que
medir constituyentes (elementales, se basan en las interacciones de la
orgánicos e inorgánicos) en diversas y radiación electromagnética con la
variadas muestras, desde aquellas en fase materia. La radiación electromagnética es
estática; como contaminantes en agua o la un tipo de energía que toma varias
composición formas, de las cuales las más fácilmente
reconocibles son la luz y el calor radiante.
Sus manifestaciones más difícilmente
de diversas aleaciones, hasta aquellas en reconocibles incluyen los rayos gamma y
fase dinámica como velocidades de los rayos X, así como la radiación
difusión de fármacos o actividad ultravioleta, de microondas y de
metabólica en el cuerpo, por ejemplo. La radiofrecuencia. Actualmente el uso de
espectroscopia es la herramienta más métodos espectroscópicos está
utilizada en investigación, análisis, generalizado, debido a su rapidez, a la
control y diagnóstico en muchos ámbitos gran gama de instrumentación disponible
relacionados con la física, la química, las y sus grandes posibilidades de
ciencias biológicas y las ciencias automatización. En muchos casos es
médicas. Nuevas tecnologías surgen posible la resolución de un problema
constantemente gracias a los avances en analítico sin necesidad de recurrir a
el diseño de fuentes de radiación y métodos de otro tipo.
detectores, así como dispositivos y
propiedades de la radiación
sistemas electrónicos cada vez más
electromagnética
compactos, rápidos y eficiente.
Muchas de las propiedades de la
Espectroscopía de absorción UV-
radiación electromagnética se explican
visible.
adecuadamente con un modelo clásico de
La espectroscopía visible ultravioleta onda sinusoidal, que utiliza parámetros
(UV) es un tipo como longitud de onda, la frecuencia, la
de espectroscopía de absorción en la velocidad y la amplitud. A diferencia de
que es visible la radiación UV. La luz es otros fenómenos ondulatorios, como el
absorbida por la molécula. La absorción sonido, la radiación electromagnética, no
de las radiaciones UV-visibles resulta en necesita un medio de apoyo para
la excitación de los electrones de niveles transmitirse y, por tanto, se propaga
de energía más bajos a más altos. En las fácilmente a través del vacío.
moléculas orgánicas, solo ciertos grupos
Métodos de absorción: Se basan en la
funcionales (cromóforos) que contienen
disminución de la potencia de un haz de
electrones de valencia de baja energía de
radiación electromagnética al
excitación pueden absorber la radiación
interaccionar con una sustancia.
ultravioleta y visible.
 Métodos de emisión: Se basan en la resulta de la concentración respecto a la
radiación que emite una sustancia cuando absorbancia se hace a mano o usando un
es excitada previamente por medio de software de ajuste de curvas apropiado,
otro tipo de energía (térmica, eléctrica…). que usa una fórmula matemática para
determinar la concentración en la
Métodos de fluorescencia: Se basan en
muestra. La repetición de este proceso
la radiación que emite la sustancia cuando
para cada compuesto en una muestra da
es excitada previamente por un haz de
un modelo de varios espectros de
radiación electromagnética.
absorción que en conjunto reproducen la
Otras clasificaciones de los métodos absorción observada. De esta manera es
espectroscópicos se establecen en función posible, por ejemplo, medir la
de la región del espectro electromagnético composición química de los cometas sin
tener muestras de ellos en la Tierra.

que interviene en la técnica. Así, pueden

utilizarse regiones como rayos X, Un ejemplo simple: un cianuro estándar a
ultravioleta, visible, infrarrojo, 200 partes por millón da una absorbancia
microondas, etc. En la Figura 1 pueden con un valor arbitrario de 1540. Una
verse las regiones del espectro muestra desconocida da un valor de 834.
electromagnético, en función de los Ya que esta es una relación lineal y pasa
valores de la longitud de onda (λ) de cada por el origen, el valor desconocido se
radiación calcula fácilmente como 108 partes por
millón. Con este método de proporción no
es necesario conocer los valores de los
coeficientes gobernantes, o cromóforos, o
la longitud de célula experimental. En la
práctica, el uso de una curva de
calibración, más que un solo punto de
comparación, reduce la incertidumbre en
Figura 1 la medida final por exclusión de la
interferencia aleatoria (ruido) en la
Espectrometría como instrumento preparación de los estándares.
analítico
Espectrofotómetro.
A menudo es de interés conocer no sólo
la composición química de una muestra El espectrofotómetro es un instrumento
dada, sino también las concentraciones que permite proyectar un haz de luz a
relativas de varios compuestos de una través de una muestra y medir la
mezcla. Para hacer esto debe construirse absorbancia (la cantidad de luz absorbida
una escala, o curva de calibración, usando por la muestra) o la transmitancia (la
varias concentraciones conocidas para cantidad de luz que pasa a través de la
cada compuesto de interés. El gráfico que muestra, es decir, el recíproco matemático
de la absorbancia). La cantidad de luz
absorbida o transmitida a una compañía General Electric presentaba el
determinada longitud de onda es primer espectrofotómetro registrado
proporcional a la concentración del comercialmente basado en su trabajo11.
material. Si el material no absorbe luz por Si bien los espectrofotómetros fueron
sí mismo, se puede mezclar con otros bien recibidos, su uso y aplicación
reactivos para obtener, mediante una todavía eran limitados. En 1940, Arnold
reacción química específica, una solución O. Beckman y sus colegas del Nacional
que si absorba luz. Los Technologies Laboratories Company,
espectrofotómetros actuales pueden medir utilizando un amplificador de un medidor
sobre prácticamente cualquier material de pH, un prisma de vidrio y una
(líquidos, plásticos, papel, metal, telas, fotocélula de tubo de vacío, fabricaron su
etc.), de allí su versatilidad y uso en primer espectrofotómetro. El rendimiento
diferentes disciplinas. Las principales de este primer modelo no fue
aplicaciones de los espectrómetros son satisfactorio, por lo que se lo modificó en
determinación de la cantidad en una un modelo B. La sustitución del prisma
solución de un compuesto en específico de vidrio por uno de cuarzo generó una
(p.e., concentración de hierro en la sorprendente mejora en la capacidad para
sangre, de cobre en un tejido, etc.), trabajar en longitudes de onda ultravioleta
identificación de unidades estructurales (UV). En un modelo C se mejoró la
específicas, (ya que estas tienen distintos resolución en longitudes de onda UV.
tipos de absorbancia), detección de Finalmente, se desarrolló un modelo D,
niveles de contaminación en aire y agua, conocido como el modelo DU, que
determi nación de impurezas en alimentos incorporó la parte electrónica dentro de la
y reactivos, determinación de constantes caja del instrumento e incluyó una nueva
de disociación de indicadores ácido base, lámpara de hidrógeno. Este modelo
y estandarización de colores de diversos poseía una mayor resolución y una menor
materiales (p.e., plásticos y pinturas)8-10. pérdida de luz, lo que aumentó el
Historia de su invención El primer rendimiento y la precisión de las
registro de un proto-espectrofotómetro mediciones de un 25% a un 99%,
data de 1859, cuando un científico que estableciendo un nuevo estándar de
estudiaba las características de los gases calidad en los análisis químicos. Este
construyó un equipo para medir las espectrofotómetro se vendió a un precio
energías absorbentes del dióxido de inicial de US$723 y se mantuvo con el
carbono, ozono, hidrocarburos y vapor de mismo diseño desde 1941 hasta que fue
agua. Para su sorpresa, los gases descontinuado en 1976. A lo largo de sus
completamente incoloros absorbían luz en 35 años de vida comercial, se vendieron
algunas longitudes de onda mientras que más de 30.000 unidades a distintos
otras longitudes no eran absorbidas. laboratorios químicos, bioquímicos,
Luego de varios años de desarrollo, el 8 clínicos e industriales13. A partir del
de enero de 1935, el profesor Arthur C. espectrofotómetro DU se desarrollaron
Hardy del Instituto Tecnológico de miles de aplicaciones, siendo las más
Massachusetts obtuvo una patente para el importantes la medición de vitamina A en
espectrofotómetro. Meses más tarde, la cuestión de minutos (anteriormente se
demoraba 21 días), la detección de este instrumento. En la actualidad, se
contaminantes orgánicos en aguas continúa con el perfeccionamiento de los
subterráneas, el estudio de ensayos espectrofotómetros, sobre todo en el área
enzimáticos y el primer análisis químico de la tecnología informática. Los
completo del ácido desoxirribonucleico espectrofotómetros modernos son capaces
(ADN). El estallido de la Segunda Guerra de detectar la estructura y determinar
Mundial generó que el espectrofotómetro cuantitativamente la mayoría de los
se utilizará en investigación con fines elementos químicos, por lo que sus
bélicos. Por ejemplo, se estudió el tolueno campos de aplicación son amplios:
para la producción del explosivo análisis de aguas, de suelos, bioquímica,
trinitrotolueno (TNT), y se utilizó el toxicología, medicina, ciencias forenses,
benceno y los butadienos para la industria petrolera, farmacéutica y
producción de caucho sintético, necesario alimenticia, entre muchos otros.
en la fabricación de neumáticos para
¿Cómo funciona un
jeeps, aviones y tanques de guerra. Para
espectrofotómetro?
este fin, Beckman Instruments y Shell
Development se unieron en 1942 para Un espectrofotómetro en general consta
crear el primer espectrofotómetro de los siguientes componentes: una fuente
infrarrojo (IR), que permitió subsanar la de luz, un dispositivo de enfoque, un
demanda de caucho natural. El filtro de luz, una celda o cubeta de
espectrofotómetro también fue una absorción, un fotodetector y un
herramienta importante para los dispositivo de visualización (ver figura
científicos que estudiaron y produjeron la 2).
penicilina de uso médico que se utilizó

durante la misma guerra. Luego de la

revolución generada por el
espectrofotómetro de Beckman, otras
compañías empezaron a comercializar
distintos modelos de este instrumento. El
espectrofotómetro Spectronic
desarrollado por Bausch & Lomb en 1953 Imagen 1
se convirtió en un instrumento estándar
de la industria y probablemente el
espectrofotómetro más utilizado en el
mundo debido a su bajo costo y alta
precisión. A principios de los años
ochenta, aparecieron los
espectrofotómetros controlados por
microprocesadores, automatizando y
reduciendo el tiempo de análisis, lo que
aumentó nuevamente el rendimiento de
 muestra que se está analizando. Las
cubetas son redondas o rectangulares y
están construidas de vidrio, cuarzo, sílice
fundida o plástico. Es importante que el
material de la cubeta no absorba luz en
las longitudes de onda en las que se está
midiendo. Debido a que el vidrio óptico
absorbe luz por debajo de los 350 nm, se
utilizan cubetas de cuarzo para trabajar en
el rango UV. Cuando la luz pasa a través
imagen 2 de la muestra, parte del espectro es
absorbido por la misma. La capacidad de
absorción de la radiación depende de la
estructura de las moléculas, siendo
definida por su grupo funciona. La luz no
absorbida por la muestra sale de la cubeta
y llega un fotodetector, que registra la
transmitancia. La transmitancia óptica (T)
es la relación entre la cantidad de luz
transmitida por la muestra y la cantidad
Esquema del espectrómetro. de luz incidente, y generalmente se
expresa en forma de porcentaje. Si una
La fuente de luz debe proporcionar muestra posee una transmitancia del 50%,
longitudes de onda de luz correctas e significa que transmite la mitad de la luz
intensidad constante. Típicamente, se que recibe. Una magnitud derivada de la
utiliza una bombilla de filamento de transmitancia es la absorbancia (A),
tungsteno, que proporciona luz en la definida como el logaritmo negativo de la
longitud de onda de 380 a 800 transmitancia: A = – logT La utilidad de
nanómetros (nm), cubriendo la región la absorbancia radica en que sus valores
visible, y lámparas de hidrógeno o son directamente proporcionales a la
deuterio para la región UV, ya que concentración de la sustancia absorbente,
producen longitudes de onda entre los a través de la llamada ley de Lambert-
190 y los 380 nm17. Mediante una lente Beer:
(el dispositivo de enfoque), la luz es
concentrada en un solo haz. A = ε l c donde l es la longitud del
camino óptico (el largo de la cubeta que
El funcionamiento del contiene a la muestra) y ε es el coeficiente
espectrofotómetro consiste en hacer de absorción molar (propia de cada
pasar este rayo de luz a través de un sustancia). Teniendo la absorbancia de la
monocromador, un dispositivo óptico de muestra, el largo de la cubeta y la
múltiples piezas, que selecciona sólo una constante, podemos despejar la
porción estrecha del espectro de luz10. concentración de nuestra muestra. Los
Luego, la luz seleccionada pasa a través espectrofotómetros nos permiten medir el
de la cubeta de absorción, que contiene la espectro de absorción completo de una
sustancia. El espectro de una muestra es Transmitancia (T): Es la razón entre la
una representación gráfica de la cantidad luz monocromática transmitida (P) por
de luz que se absorben en función de la una muestra y la energía o luz incidente
longitud de onda. En este sentido, (Po) sobre ella. Tanto la energía radiante
diferentes longitudes de onda aportan incidente como la transmitida deben ser
distinta información sobre la composición medidas a la misma longitud de onda.
y concentración de un compuesto en
P
particular. T= =10abc
Po
Ley de Beer-Lambert.
p
en %T =100 Se acostumbra a
Esta ley establece que cuando pasa luz po
monocromática por un medio considerar la transmitida como la razón
homogéneo, la disminución de la de la luz transmitida por la muestra y la
intensidad del haz de luz incidente es luz transmitida por un estándar arbitrario.
proporcional al espesor del medio, lo que Este estándar puede ser el líquido
equivale a decir que la intensidad de la (solvente) en que esta disuelta la muestra,
luz transmitida disminuye aire, blanco analítico (solución que
exponencialmente al aumentar contiene todos los componentes de la
aritméticamente el espesor del medio solución problema menos la sustancia
absorbente. problema) u otra sustancia elegida
arbitrariamente. Debido a que la
Ley de Lambert La siguiente relación
transmitancia de este estándar no es
P kb
matemática da cuenta de esta ley: =e necesariamente 100%, es necesario
PO
especificar el estándar con el cual la
: Po: Intensidad de la luz incidente muestra es comparada.
P: Intensidad de la luz transmitida Absorbancia(A): Se define como la
b: Espesor del medio absorbente cantidad de energía radiante absorbida
por una sustancia pura o en solución.
k: Constante, cuyo valor depende de la Matemáticamente, corresponde al
naturaleza del soluto, de la longitud de logaritmo negativo de la transmitancia,
onda de la luz incidente, del espesor del transmitancia expresada como fracción

medio absorbente y de la naturaleza del decimal %T, transmitancia expresada

medio. Ley de Beer: La intensidad de un como porcentaje.
haz de luz monocromática disminuye
exponencialmente al aumentar A = - log T = 2 – log %T (ec.2)
aritméticamente la concentración de la (ec.3)
T =P/ P 0=10−abc
sustancia absorbente, cuando este haz
pasa a través de un medio homogéneo. Luego
absorbancia y transmitancia
A=−log ( PoP )=−log 10−abc
(ec.3)
 A=a b c Esta ecuación indica que la espectro de absorción es que aquel objeto
absorbancia es una función lineal de la que lo haga con los colores azul, verde y
concentración, donde a es una constante amarillo aparecerá de color rojo cuando
de proporcionalidad llamada absortividad. incida sobre la luz blanca. Cuando incide
La magnitud de a depende de las unidades una luz a un metal al superar su energía
de b y c. Si la concentración c está umbral saca un electrón, si la energía es
expresada en moles por litro y la longitud superior la energía que sobra se convierte
de la cubeta b en centímetros, la constante en energía cinética.
a recibe el nombre de absortividad molar
3. OBJETIVOS.
(ξ).
 Identificar las partes de un
espectrofotómetro UV-VIS y los
Luego A = ξ b c
diferentes tipos de
Mediciones de transmitancia y cubetas porta muestra.
absorbancia. Las mediciones de  Obtener el espectro de absorción del
absorbancia o transmitancia se hacen por Cl₂Co * 6 H₂O y determinar, a
comparación entre la muestra problema y partir del
un estándar arbitrario o referencia. Como espectro el coeficiente de
la referencia debe poseer un porcentaje de absortividad molar y la
transmitancia de 100%, esta es llamada concentración de una muestra
referencia de 100%., o una absorbancia problema.
de cero  Determinar el efecto de la
concentración con la absorbancia
Espectros de absorción.
empleando la ley de
El espectro de absorción de una materia Beer.
muestra la fracción de la radiación
electromagnética incidente que un 4. MATERIALES, REACTIVOS Y
material absorbe dentro de un rango de EQUIPOS.
frecuencias. Es, en cierto sentido, el  Baso de precipitados 50 ml.
opuesto de un espectro de emisión. Cada  Matraz aforado 25 ml.
elemento químico posee líneas de  Pipeta aforada de 10 ml
absorción en algunas longitudes de onda,  Ayuda de pipeteo
hecho que está asociado a las diferencias  Disolución de Cl₂Co * 6 H₂O
de energía de sus distintos orbitales
 Agua destilada.
 Espectrofotómetro UV-VIS 1900
Shimadzu Cubetas para UV
atómicos. De hecho, se emplea el
espectro de absorción para identificar los
elementos componentes de algunas
muestras, como líquidos y gases; más
allá, se puede emplear para determinar la
estructura de compuestos orgánicos.1 Un
ejemplo de las implicaciones de un
 5. PROCEDIMIENTO.
 Hallar la concentración de las
disoluciones 2 y 3.
Vamos a realizar un set de disoluciones a
partir de la disolución problema con la
ecuación de disolución se calcula la
concentración de las disoluciones.
C 1 xV 1=C 2 xV 2

 Concentración de la disolución 2 y
espectro de absorción.
Tomar 10 mL de la disolución de Cl₂Co
* 6 H₂O, trasvasarlo a un matraz aforado
de 25 mL y llevar hasta el aforo con
agua destilada (Muestra 2). Medir el
espectro de absorción del Cl₂Co * 6
H₂O de esta nueva disolución
200 mMx 10 mL
C dsln= =80 mM
25 mL
 Transmitancia=26.60%
 Absorbancia=0.58
 λMax 552 nm
 Concentración 80 Mm.

6. CÁLCULOS Y ANÁLISIS DE  Concentración de la disolución 3 y

RESULTADO. espectro de absorción.
 Disolución problema de Cl₂Co * 6 De la muestra 2, tomar 10 mL de la
H₂O disolución de Cl₂Co * 6 H₂O,
Se llevo al programa de simulación y se trasvasarlo a un matraz aforado de 25
obtuvieron los siguientes resultados. mL y llevar hasta el aforo con agua
destilada (Muestra 3). Medir el espectro
 Concentración 220mM de absorción del Cl₂Co * 6 H₂O de esta
 Longitud de la onda máxima λMax nueva disolución.
548 nm
80 mMx 10 mL
 Absorbancia =1.45 C dsln= =32mM
25 mL
 Transmitancia=3.58%
 Transmitancia=59.12%
 Absorbancia=0.23
 λMax 554
 Concentración 32 mM
 Determinar el coeficiente de  Representar la absorbancia a
absortividad molar del Cl₂Co * 6 longitud de onda máxima de las
H₂O a la longitud de onda disoluciones 1,2 y 3 frente a la
máxima, usando la absorbancia de concentración y ajustar los 3 puntos
la muestra 1 a la misma longitud de a una recta por el método de
onda. mínimos cuadrados. A partir de la
regresión lineal obtenida,
Lambert-Beer, que se resume con la
determinar la concentración de la
ecuación: A=ε b c.
muestra problema.
Donde:
 c se expresa en mol/L, Absorbancia vs concentracion
 b es la longitud del camino óptico 0.7
(anchura de la célula que contiene la 0.6
disolución de la sustancia) y se f(x) = 0.01 x − 0
0.5 R² = 1
expresa en cm.
Absorbancia
0.4
 ε es la absortividad molar, propiedad
característica de cada sustancia 0.3
correspondiente a la cantidad de 0.2
radiación que absorbe a una longitud
0.1
de onda determinada por unidad de
concentración, siendo sus unidades L 0
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90
mol-1 cm-1 (téngase en cuenta que la Concentracion
absorbancia no tiene unidades).
Despejamos el coeficiente de absortividad Grafica 1.
molar de la ecuación.
Una vez obtenida la gráfica, y ajustado
A los puntos de la recta a mínimos
£= ecuación para hallar el
bxC cuadrados, podemos determinar la
coeficiente de absortividad molar. concentración final atreves de la regresión
1.45 7.25 x 10−3 L lineal. Con la ecuación de la recta.
−1
£= = . cm
1.0 cmx 200 mM mol y = 0.0073x - 0.0045
 Coeficiente de absortividad= Longitud de onda de máxima
−3
7.25 x 10 L −1 absorbancia.
. cm
mol
 Absorbancia= 1.45
 λMax548 nm
y +0.0045
x=
0.0073
 1.45+0.0045 absorbancia y a mayores concentraciones
x= =199.24 ≈ 200 mM
0.0073 mayor la absorbancia.

 Error relativo porcentual. 7. CONCLUSIÓN

valor real−valor experimental
Err % x 100  El conocer el uso adecuado del
valor real
simulador permitió obtener
resultados con alta calidad
analítica en las mediciones que
200−194.24
Err %= x 100=0.02% son emitidas por este.
200
 Se identificó que el simulador
presenta una gran exactitud y
precisión determinando que las
 Discusión del efecto de la mediciones pueden ser confiables.
concentración en la absorbancia
 Se determinó la longitud de onda
según la ley de Beer.
optima las tres disoluciones
La relación entre la absorbancia de la luz teniendo como resultado la
por una solución diluida y la primera disolución 548nm la
concentración viene dada por la ley de segunda 552nm y la tercera
beer. Para deducir esto se postula que 554nm, concluyendo que los datos
cada molécula de la sustancia que absorbe obtenidos experimentales se
tiene igual oportunidad interceptar y encuentran dentro de los datos
absorber un cuanto de luz, cualquiera que teóricos.
sea su situación dentro de la cubeta esto
implica que la solución tiene que ser 8. BIBLIOGRAFÍA
suficiente diluida para garantizar que
todas las moléculas absorban. Por otra
parte al tener que para cada sustancia una
determinada longitud de onda donde
CUESTIONARIO
ocurre la máxima absorción, se procede a
construir la curva de calibración que fue 1. ¿Cuál es la relación entre
lo que se logro con las muestras de las absorbancia y transmitancia?
disoluciones que se hicieron a partir de la
muestra problema. A volúmenes fijos ya
que para obtener los espectros de La relación directa se denomina
absorción en el ultravioleta con fines transmitancia (T), mientras que se
cualitativos se suele emplear disoluciones denomina absorbancia al logaritmo con
diluidas y así se determina el valor de la signo cambiado de la transmitancia. La
absorbancia de cada disolución y absorbancia es un término actualmente
sustentando la ley de beer que establece mucho más utilizado que la transmitancia.
que a bajas concentraciones es menor la
Las mediciones de absorbancia o ds; la relación del área de captura al área
transmitancia se hacen por comparación total es ds/S.
entre la muestra problema y un estándar
En un promedio estadístico, esta relación
arbitrario o referencia. Como la referencia
representa la probabilidad para la captura
debe poseer un porcentaje de
de fotones dentro de la sección.
transmitancia de 100%, esta es llamada
referencia de 100%., o una absorbancia La intensidad del haz que entra en la
de cero. sección, Ix es proporcional al número de
fotones por cm2 y por segundo, y dIx
2. Explique la ley de Beer e identifique
representa la cantidad removida por
los factores que causan que la
segundo dentro de la sección, la fracción
relación de dicha ley no sea lineal.
absorbida es entonces -dIx/Ix y esta
relación también es la probabilidad
promedio por captura. El término tiene
La ley de beer establece que La
signo negativo para indicar que la
intensidad de un haz de luz
intensidad del haz disminuye.
monocromática disminuye
exponencialmente al aumentar Recordemos que ds es la suma de las
aritméticamente la concentración de la áreas de captura para cada partícula
sustancia absorbente, cuando este haz dentro de la sección; puede ser por eso
pasa a través de un medio homogéneo proporcional al número de partículas ds =
α dn; siendo dn el número de partículas
Consideremos un bloque de materia
dentro de la sección y α una constante de
absorbente (sólido, líquido o gas). Un haz
proporcionalidad, que se puede llamar
de radiación monocromática paralelo con
sección transversal de captura.
intensidad I0 llega al bloque
perpendicular a la superficie; luego pasa a La ley de Lambert-Beer permite la
través de la longitud b del material, que determinación de concentraciones de
contiene n partículas absorbentes disoluciones problema, a partir de una
(átomos, iones o moléculas), la intensidad recta de calibrado obtenida midiendo las
del haz disminuye a I como resultado de absorbancias de disoluciones patrón de
la absorción. Consideremos ahora una concentraciones conocidas. Para hacer las
sección transversal del bloque que tiene determinaciones cuantitativas se elige, en
un área S (X x Y) y un espesor general, la longitud de onda
infinitesimal dx. correspondiente a un máximo, pues el
error de medición es mínimo y la
Dentro de esta sección hay dn partículas
sensibilidad máxima. Si es válida la ley
absorbentes; asociada a cada partícula
de Beer para esa sustancia a esas
podemos imaginar una superficie en que
concentraciones, la relación debe ser una
ocurrirá la captura del fotón. Esto es, si
recta que pase por el origen de los ejes
un fotón alcanza una de esas áreas por
cartesianos. A menudo se observan
casualidad, ocurrirá inmediatamente la
desviaciones debidas a diversos factores.
absorción. El área total de esas superficies
de captura dentro de la sección se designa 3. Exprese las siguientes absorbancias
en términos de % de transmitancia.
 a. 0.0356 c. 3.98%
3.98
= 0.0398 A= -log0.0398 = 1.400A
T= 10-0.0356 = 0.9212 100
T= 92.12%
d. 0.093
b. 0.895 A=-log0.093 = 1.031 A

T=10-0.895 = 0.1273 5. Dibuje un esquema de un

espectrofotómetro para UV-VIS de
T= 12.73%
doble haz y explique brevemente
cada una de sus partes
c. 0.379

T=10-0.379 = 0.4178
T= 41.78%

d. 0.753

T=10-0.753 = 0.1766
T= 17.66% Fuente de luz
La fuente de luz que ilumina la muestra
debe cumplir con las siguientes
4. Convierta los siguientes datos de
condiciones: estabilidad,
transmitancia en absorbancias
direccionabilidad, distribución de energía
a. 27.2% espectral continua y larga vida. Las
fuentes empleadas son: lámpara de
27.2
=0.272 A= -log0.272= 0.5654 A wolframio (también llamado tungsteno),
100
lámpara de arco de xenón, lámpara de
deuterio y lámpara LED que se utilizan en
los laboratorios.
b. 0.579
A= -log0.579 = 0.2373 A
Monocromador
El monocromador aísla las radiaciones de medida, y minimiza las partes móviles del
longitud de onda deseada que inciden o se equipo.
reflejan desde el conjunto, se usa para
Celdas
obtener luz monocromática.
Celdas de espectofotometría. En un
Está constituido por las rendijas de
primer plano, dos de cuarzo aptas para el
entrada y salida, colimadores y el
trabajo con luz ultravioleta; en segundo
elemento de dispersión. El colimador se
plano, de plástico, para colorimetría (es
ubica entre la rendija de entrada y salida.
decir, empleando luz visible).
Es un lente que lleva el haz de luz que
entra con una determinada longitud de Son los recipientes donde se depositan las
onda hacia un prisma el cual separa todas muestras líquidas a analizar. El material
las longitudes de onda de ese haz y la del cual están hechas varía de acuerdo a
longitud deseada se dirige hacia otra lente la región que se esté trabajando; son de
que direcciona ese haz hacia la rendija de vidrio o plástico si se trabaja en la región
salida. visible, de cuarzo si se trabaja en la
ultravioleta y de NaCl si se trabaja la
Compartimento de Muestra
región de infrarrojo. Se caracterizan por
Es donde tiene lugar la interacción con la tener dos paredes correspondientes a los
materia (debe producirse donde no haya lados ópticos por donde cruza el haz de
absorción ni dispersión de las longitudes luz.
de onda). Es importante destacar, que
6. ¿Para qué sirve el monocromador
durante este proceso, se aplica la ley de
en un equipo de UV?
Lambert-Beer en su máxima expresión,
con base en sus leyes de absorción, en lo En muchos métodos espectroscópicos e
que concierne al paso de la molécula de requiere variar en forma continua la
fundamental-excitado. longitud de onda de la radiación en un
intervalo amplio. Este proceso se llama
Detector
barrido del espectro; los monocromadores
El detector es el encargado de captar la están diseñados para realizar esto. Todos
radiación y, a su vez, dejarla en evidencia los monocromadores para radiación
para su estudio posterior. Existen dos ultravioleta, visible e infrarroja son
tipos: similares en cuanto a su construcción
mecánica porque usan ranuras, lentes,
a) los que responden a fotones;
espejos, ventanas y redes o prismas.
b) los que responden al calor.
El monocromador aísla las radiaciones de
Fotodetectores longitud de onda deseada, logrando tener
luz monocromática.
En los instrumentos modernos se
encuentra una serie de 16 fotodetectores Está constituido por las rendijas de
para percibir la señal en forma simultánea entrada y salida, colimadores y el
en 16 longitudes de onda, cubriendo el elemento de dispersión. Existen dos
espectro visible. Esto reduce el tiempo de tipos ,los de red y los de prisma.
 es de rango UV-VIS aparecen las
novedades, porque tradicionalmente la
lámpara habitual era de Deuterio (D2),
7. ¿Qué tipo de muestras se pueden pero tira con fuerza la lámpara de Xenón
analizar por espectrofotometría de (Xe), que además emite luz tanto en
luz UV-Vis? visible como en Ultravioleta. Lámpara de
Xenón frente a Tungsteno + Deuterio no
es mejor ni peor. Tiene ventajas e
La espectroscopía UV-Vis está basada en
inconvenientes. Solo precaución; no
el proceso de absorción de la radiación
adquiera un espectrofotómetro con
ultravioleta-visible (radiación con
lámpara de Xenón que no sea un doble
longitud de onda comprendida entre los
haz
160 y 780 nm) por una molécula. La
absorción de esta radiación causa la 9. Si se perturba una molécula con
promoción de un electrón a un estado radiación dentro del rango de la
excitado. Los electrones que se excitan al región ultravioleta, ¿qué le
absorber radiación de esta frecuencia son sucede a la molécula? Explica
los electrones de enlace de las moléculas, esto mediante un diagrama
por lo que los picos de absorción se
Si se perturba una molécula con radiación
pueden correlacionar con los distintos
dentro del rango de la región ultravioleta,
tipos de enlace presentes en el compuesto.
lo que le sucede a la molécula es que pasa
Debido a ello, la espectroscopía UV-Vis
de un estado basal a un estado excitado.
se utiliza para la identificación de los
grupos funcionales presentes en una
molécula. Las bandas que aparecen en un
espectro UV-Vis son anchas debido a la
superposición de transiciones
vibracionales y electrónicas.
UV-Vis se utiliza en muchos análisis
químicos. Se utiliza para cuantificar la
cantidad de proteína en una solución.
también se utiliza como una técnica
10. Al decir que hay una región de
estándar para cuantificar la cantidad de
energía en el ultravioleta, ¿a qué
ADN en una muestra, como todas las
nos referimos exactamente en
bases absorben fuertemente a 260 nm.
cuanto a las longitudes de onda,
8. Los equipos de espectroscopia que hay en la región?
UV-Vis emplean lámparas, ¿de
Se define como rango de longitudes de
qué características?, ¿estas
onda de 195 a 400 nm. Es una región de
tienen una vida útil?
energía muy alta. Los compuestos con
Si el equipo es solo de rango visible dobles enlaces aislados, triples enlaces,
llevará una lámpara de Tungsteno, enlaces peptídicos, sistemas aromáticos,
nombrada en folletos como “W”. Cuando etc, tiene su máxima absorción en la
región UV, por la que es muy importante C= 0.1 ppm
para la determinación cualitativa y E= 41700 L. mol.cm
cuantitativa de compuestos orgánicos. Abs = 0.40
Diversos factores (como el pH, B=?
concentración de sal y el disolvente) que
alteran la carga de las moléculas, A= E.B.C
provocan desplazamiento de los espectros
B= A/ E.C
UV.

0.1mg/L*1g/1000mg*1molcr/52g =
11. Menciona algunas aplicaciones 1.923x10-6 mol/L
industriales para la
espectrofotometría de luz B= 0.40/ 41700L/mol.cm*
UV/Vis. 1,923x10-6 mol/L

 Determinación de la estabilidad B= 0.40/0,08cm = 5cm

térmica de aceites vegetales. 2. Una disolución acuosa de
 Medida de la luz de sustancias permanganato de potasio (c=1,28
coloreadas e incoloras. x10-4 mol/L) presenta una
transmitancia de 0,5 a 525 nm, si se
 Determinación de ácidos utiliza una cubeta de 10 mm de
nucleicos como ADN y ARN. trayecto óptico. a. Calcular el
coeficiente de absortividad molar
 industria farmacéutica.
del permanganato para esta
 Producción de nanoparticulas de longitud de onda.
ZnS utilizando cepas de hongos b. Si se duplica la concentración,
(BIORREDIACION). calcular la absorbancia y la
transmitancia de la nueva
disolución.
EJERCICIOS
C= 1,28x10-4 mol/L
T= 0.5
1. Una agua contaminada contiene
cromo (M= 52 g/mol) en una B=10mm
concentración másica aproximada E=?
de 0,1 ppm. Se elige, para su
determinación, el complejo de CrVI A= E.B.C
con la difenilcarbazida (lmax= 540 E= A/ B.C
nm, emax= 41700 L•mol-1 •cm-1 ).
Proponer un valor de trayecto 2.A)
optico de la cubeta para que la Abs= –log t = –log 0.5= 0.30
absorbancia sea del orden de 0,40.
B = 10mm = 1cm
E= 0.30/1cm-1.1,28x10-4 L/mol-1 =
2343.75L/mol-1. Cm-1
2.B)

1.28X10-4 L/mol-1 X2 = 2.56X10-4

mol/L

A= 2343.75L/mol-1. Cm-1*
2.56x10-4mol/L* 1cm
A= 0,6
T=10-abs = 10-0.6 t= 0.25