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    Practica 3 Ing Agro

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    Franco Sanchez
    Este documento describe un experimento para demostrar el efecto de inhibidores en la cadena de transporte de electrones. Se utilizan homogenizados de hígado de rata y dos sistemas: uno que estudia la porción inicial usando succinato como sustrato y 2,6-diclorofenolindofenol como aceptor, y otro que estudia la porción terminal usando p-fenilendiamina como sustrato. Se prueban inhibidores de diferentes sitios como la rotenona, el barbitúrico y el cianuro para observar los cambios de color

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    Este documento describe un experimento para demostrar el efecto de inhibidores en la cadena de transporte de electrones. Se utilizan homogenizados de hígado de rata y dos sistemas: uno que estudia la porción inicial usando succinato como sustrato y 2,6-diclorofenolindofenol como aceptor, y otro que estudia la porción terminal usando p-fenilendiamina como sustrato. Se prueban inhibidores de diferentes sitios como la rotenona, el barbitúrico y el cianuro para observar los cambios de color

    Título original

    PRACTICA-3-ING-AGRO

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    Este documento describe un experimento para demostrar el efecto de inhibidores en la cadena de transporte de electrones. Se utilizan homogenizados de hígado de rata y dos sistemas: uno que estudia la porción inicial usando succinato como sustrato y 2,6-diclorofenolindofenol como aceptor, y otro que estudia la porción terminal usando p-fenilendiamina como sustrato. Se prueban inhibidores de diferentes sitios como la rotenona, el barbitúrico y el cianuro para observar los cambios de color

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    Este documento describe un experimento para demostrar el efecto de inhibidores en la cadena de transporte de electrones. Se utilizan homogenizados de hígado de rata y dos sistemas: uno que estudia la porción inicial usando succinato como sustrato y 2,6-diclorofenolindofenol como aceptor, y otro que estudia la porción terminal usando p-fenilendiamina como sustrato. Se prueban inhibidores de diferentes sitios como la rotenona, el barbitúrico y el cianuro para observar los cambios de color

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    EFECTO DE 2.2.

    Método
    PRÁCTICA
    INHIBIDORES SOBRE 1. Sistema del 2,6- Diclorofenol Indofenol:

    3
    LA CADENA DE Estudia la porción inicial de la cadena
    respiratoria, se utiliza succinato como
    OXIDO - REDUCCION sustrato, donador de electrones y el último
    BIOLOGICAS aceptor es el 2,6-DCFIF
    Dr. Salomón Alva Bazán COMPONENTES 1 2 3 4 5 6
    /TUBOS
    I. INTRODUCCIÓN Buffer Fosfato 1.5 1.5 1.0 0.5 0.5 0.5
    0.1 M pH 7.4
    La Cadena respiratoria es un conjunto ordenado 2,6-DCFIF 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
    de enzimas transportadoras responsable del Succinato 0.1M 0.5 --- 0.5 0.5 0.5 0.5
    transporte de los equivalentes reductores desde Rotenona 0.1 M -- -- 0.5 -- -- --
    los sustratos hasta el O2, inervienen en Barbiturato0.1M -- -- -- 0.5 -- --
    reacciones redox que va desde los sistemas Cianuro Na 0.1M -- -- -- -- 0.5 --
    Deshidrogenasa unido al NAD o por el FAD. Homogenizado -- 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
    total
    Existen sustancias que inhiben la cadena Mezclar cada tubo
    respiratoria y con ello el transporte de electrones
    y la respiración celular que muchas veces Dejar en reposo a temperatura ambiental.
    conduce a muerte celular. Observar constantemente los cambios de color
    del indicador.
    Entre ellos tenemos inhibidores de sitio I (NADH
    Interpretación de los resultados:
    DH FMN → CoQ), que son: el antibiótico La reacción es positiva cuando el 2,6-DCFIF siendo un
    Piericidina A y la Rotenona; inhibidores de sitio II aceptor de color azul, en estado oxidado, pasa a
    (cit b-C1→ C) son: barbitúricos, el dimercaprol y incoloro de estado reducido.
    la antimicina A; e inhibidores de sitio III (Cit a- (Azul) Aceptor --→ Incoloro (aceptor)
    a3→O) son los venenos clásicos: CO, Cianuro, S oxidado → SH2 reducido
    Azida de sodio, H2S que inhiben a la Citocromo
    oxidasa. 2. Sistema usando p - fenilendiamina: Estudia
    la porción terminal de la cadena respiratoria, se
    El estudio de estos inhibidores es importante
    utiliza p-fenil endiamina como sustrato artificial,
    porque permite comprender la causa de la
    donador de electrones y el último aceptor es un
    toxicidad de estos compuestos y también porque
    componente de la cadena respiratoria.
    contribuye a la realización de trabajos de
    Investigación relacionados con la estructura y COMPONENTES 1 2 3 4 5
    función de la cadena respiratoria. /TUBOS
    Buffer Fosfato de 1.5 1.5 1.0 0.5 0.5
    El objetivo es demostrar el efecto de algunos sodio 0.1 M pH 7.4
    inhibidores de la CR, empleando como fuente p-FEDA 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
    enzimática el homogeneizado celular de hígado Rotenona 0.1 M -- 0.5 -- -- --
    de rata. Barbiturato0.1M -- -- 0.5 -- --
    Cianuro Na 0.1M -- -- -- 0.5 --
    II. MATERIAL Y MÉTODO Homogenizado -- 0.5 0.5 0.5 0.5
    total
    2.1 Material Reactivos: Mezclar cada tubo
    Buffer fosfato de sodio 0.1 M pH 7.4
    2,6-diclorofenolindofenol 0.02 % Dejar en reposo a temperatura ambiental.
    Succinato 0.1 M, p - fenilendiamina 1 % Observar constantemente los cambios de color
    Malonato 0.1 M - Cianuro de sodio del indicador.
    Barbiturato de sodio 0.1 M Interpretar los resultados:
    Homogenizado total de hígado de rata en El p-FEDA es un dador de electrones que en
    sucrosa 0.25 M estado oxidado es de color marrón claro, que
    cuando dona sus equivalentes reductores se
    oxida a marrón oscuro a estado oxidado.
    Marrón claro (donadorde e-) →marrón oscuro
    SH2 reducido → S oxidado
    III. RESULTADOS

    1. SISTEMA USANDO 2,6-


    DICLOROFENOLINDOFENOL

    Tubo Color Color al Interpretación


    s inicial final de la
    reacción
    1 Azul
    2 Azul
    3 Azul
    4 Azul
    5 Azul
    6 Azul

    IV. DISCUSIÓN

    2. SISTEMA USANDO P-
    FENILENDIAMINA

    Tub Color Color al Interpretación


    os inicial final

    1 Marrón
    claro
    2 Marrón
    claro
    3 Marrón
    claro
    4 Marrón
    claro
    5 Marrón
    claro

    2
    V. CONCLUSIONES

    VI. BIBLIOGRAFÍA
    CAMPBELL MARY K. &, FARRELL SH. (2016).
    Bioquímica. 8va Ed. Editorial Artgraph
    Cengage Learning. México. Volumen 1 y
    Volumen 2.
    KOOLMAN JAN & RÖHM KLAUS-HEINRICH
    (2012): Bioquímica Humana: Textos y Atlas. 4ta
    Ed. Editorial Médica Panamericana S.A.
    España.
    LAGUNA J., PIÑA-GARZA E., MARTINEZ-
    MONTES F., PARDO-VASQUEZ J. (2013).
    Bioquímica de Laguna. 7ma Edición. Editorial
    Manual Moderno. México.
    Nelson DL; Cox MM (Apr de 2005). Lehninger
    Principles of Biochemistry (4th ed edición). W.
    H. Freeman. ISBN 978-0716743392.

    3
    ACTIVIDADES EXTRA-AULA:
    Componentes de la cadena respiratoria
    Funciones de las enzimas Complejo I

    Complejo III

    Complejo IV

    Complejo V
    Nombrar los constituyentes de un sistema
    enzimático:
    1)
    2)
    3)
    4)
    5)

    Si el sustrato es: Almidón

    La enzima que hidroliza es:

    Nombre los requerimientos de la enzima: Describe las vías metabólicas que intervenen
    Cofactor: en la respiración celular
    pH

    Reacción enzimática:
    Sustrato + enzima → Producto

    Inhibidores de la cadena respiratoria


    Sitio 1

    Sitio 2

    Sitio 3

    CADENA RESPIRATORIA.
    Indicadores redox usados en la práctica
    ▪ Aceptores de electrones:

    Dadores de electrones

    BIBLIOGRAFÍA DE LA ACTIVIDAD

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