Extracción de ADN

Edwin Alberto Gaitan Oyola 1, Paula Andrea Betancourt Murcia 1

Resumen
La práctica se fundamentó en la extracción de ADN de una muestra vegetal, para ello se
llevó a cabo la preparación de la solución extractora la cual constaba de la disolución de
jabón líquido y cloruro de sodio en agua destilada, de igual forma se efectúo la extracción
de ADN de dos frutas (fresa y naranja), la extracción consistió en la maceración manual de
cada fruta al interior de una bolsa ziploc en presencia de la solución extractora,
posteriormente se filtró y adiciono el extracto de cada una de las frutas en dos tubos de
ensayo, por último se adiciono etanol e isopropanol a cada tubo de ensayo respetivamente.
Con los resultados obtenidos se puede afirmar que la fresa es mejor material vegetal para
extracción de ADN debido a que presenta enzimas como pectinasas y celulasas, las cuales
contribuyen al rompimiento de las paredes celulares.

Abstract
The practice was based on the extraction of DNA from a plant sample, for this purpose the
preparation of the extraction solution was carried out which consisted of the dissolution of
liquid soap and sodium chloride in distilled water, in the same way the extraction was
carried out DNA of two fruits (strawberry and orange), the extraction consisted of the
manual maceration of each fruit inside a ziploc bag in the presence of the extracting
solution, then the extract of each of the fruits in two tubes was filtered and added In the test,
finally ethanol and isopropanol were added to each test tube respectively. With the results
obtained, it can be affirmed that the strawberry is a better plant material for DNA extraction
because it has enzymes such as pectinases and cellulases, which contribute to the
breakdown of cell walls.
Palabras clave: ADN, enzimas, pared celular.
Introducción
El ADN, o ácido desoxirribonucleico, es la molécula que contiene la información genética
de todos los seres vivos, incluso algunos virus. La molécula de ADN consiste en dos
cadenas que se enrollan entre ellas para formar una estructura de doble hélice. Cada cadena
tiene una parte central formada por azúcares (desoxirribosa) y grupos fosfato. Enlazando a
cada azúcar hay una de las siguientes 4 bases: adenina (A), citosina (C), guanina (G), y
timina (T). Las dos cadenas se mantienen unidas por enlaces entre las bases; la adenina se
enlaza con la timina, y la citosina con la guanina. La secuencia de estas bases a lo largo de
la cadena es lo que codifica las instrucciones para formar proteínas y moléculas de ARN.
[1]
Los trabajos que se realizan para entender el ADN y su aplicación, son muy complejos y
especializados, sin embargo, en nuestra vida diaria escuchamos hablar todo el tiempo del
ADN, por ejemplo, en las noticias o en las películas. Existe un experimento sencillo que
permite aislar el ADN de diferentes organismos, de los cuales, en este caso se escogieron
las fresas y la naranja por la gran cantidad de ADN que contienen.
Los métodos tradicionales, desarrollados en los años 50, utilizan solventes orgánicos para
separar a las proteínas del ADN y, una vez suspendido en la fase acuosa, aislarlo por
precipitación con etanol. Estos métodos requieren preparar soluciones y la extracción puede
tomar desde unas horas hasta varios días por los numerosos pasos que deben realizarse. En
general, los protocolos tradicionales consisten de cinco etapas principales:
homogeneización del tejido, lisis celular, separación de proteínas y lípidos, precipitación y
redisolución del ADN. [2]
Para poder estudiar la molécula del ADN con gran detalle se requiere aislarla de la célula y
para esto es necesario una variedad de instrumentos de laboratorio y materiales tal vez
costosos, en esta práctica de laboratorio se quiere comparar la efectividad en una sencilla
técnica de extracción de ADN en fresas y naranjas, teniendo en cuenta que existe una gran
variedad de protocolos para obtener calidad y cantidad de ADN adecuados.
Metodología
Solución Extractora
Se midió 20mL de jabón líquido para lavar loza (LozaCrem Blancox), se pesó 6,0032g de
Cloruro de Sodio, se mezclaron en un vaso de precipitados, se adicionó 180mL de agua
destilada y por último se homogenizó teniendo en cuenta que la agitación fuese lenta para
no producir burbujas.
Extracción de ADN
Se pesaron 102,9374g de Fresas y se introdujeron en una bolsa ziploc, se agregó 90mL
aproximadamente de la solución extractora a las fresas. Posteriormente con precaución se
maceró con los dedos evitando romper la bolsa, se hace esto por 15 minutos. Se filtró el
extracto obtenido para separar los sólidos resultantes y se adicionó en dos tubos de ensayo
10mL en cada uno. Finalmente se adicionó gota a gota 10mL de Alcohol Etílico al primer
tubo y 10mL de Alcohol Isopropílico al segundo tubo. IMPORTANTE: En la adición de
los alcoholes sobre el extracto NO se mezcló.
Nota: Se realizó el mismo procedimiento con 100,4978g de Naranja.

Resultados y discusión
TUBO SOLVENTE OBSERVACIONES
1 Alcohol Etílico Se observa el desplazamiento del ADN en
(F1) gran concentración en forma de nubes
alargadas suspendidas sobre la fase superior
que contiene el Alcohol Etílico.
 2 Alcohol Isopropílico Se observa el desplazamiento del ADN en
(F2) forma de pequeños hilos o hebras suspendidos
sobre la fase superior que contiene el Alcohol
Isopropílico.
Tabla 1. Resultados para la extracción de ADN con fresas.
TUBO SOLVENTE OBSERVACIONES
1 Alcohol Etílico Se observa el desplazamiento del ADN en
(N1) forma de una nube que quedó en la superficie
del Alcohol Etílico.
2 Alcohol Isopropílico No se observa el desplazamiento del ADN.
(N1)
Tabla 2. Resultados para la extracción de ADN con naranja.

El proceso de extracción llevado a cabo durante la práctica es muy sencillo, aun así, durante
la extracción se generan diversos procesos. Por ejemplo, durante la maceración manual se
rompen las uniones entre la célula y la pared celular, esta homogenización contribuye a
liberación del material genético, cabe recalcar que no se debe licuar el extracto debido a
que se corre el riesgo de romper las cadenas de ADN, por lo cual no sería posible el obtener
un buen resultado final. [3] De igual forma la solución extractora se compone de jabón
líquido y cloruro de sodio, esto se debe a que el jabón liquido ayuda a romper la pared
celular y la membrana plasmática, además contribuye a romper la membrana nuclear y
llegar al núcleo donde se encuentra el material genético. Por otro lado, el cloruro de sodio
permite separar algunas de las proteínas que están unidas al ADN. También mantiene las
proteínas disueltas en la capa acuosa de forma que impide que estas precipiten junto con el
alcohol. Adicionalmente, los cationes sodio (Na+) contrarrestan las cargas negativas de los
fosfatos del ADN. [3]
También el filtrado cumple un papel importante, puesto que separa componentes no
solubles como lípidos o proteínas del ADN, por último, la adición del alcohol disminuye la
constante dieléctrica de la solución. Así mismo provoca la separación del ADN del agua y
ocasiona que este precipite. Cuando el ADN se separa de la solución acuosa, tiende
agruparse, lo que hace que sea visible.
Se observó una mayor cantidad de ADN presente en el extracto de la fresa que en el
extracto de la naranja, esto se debe a que la fresa presenta enzimas, llamadas pectinasas y
celulasas, que ayudan a romper las paredes celulares, además de que es octaploide es decir
que presenta ocho copias de cada cromosoma, por lo cual proporciona más ADN que la
naranja que es diploide es decir presenta solo dos copias de cada cromosoma y por ende
una menor cantidad de ADN. [4]
De igual forma se evidencio mayor producto de material genético tras la adición de etanol
que con el isopropanol, lo anterior es debido a que el isopropanol es ligeramente menso
polar que el etanol por lo cual posee una menor constante dieléctrica, igualmente presenta
una menor solubilidad por lo que al usar este solvente precipitará antes y a una menor
concentración el material genético. Por el contrario, si realizamos una precipitación de
ADN con etanol, al ser mucho más soluble en este medio, precipitara una mayor cantidad
de ADN. [5]

Conclusiones
Se evidencio que la fresa es un mejor material vegetal para la extracción de ADN que la
naranja debido a que contienen enzimas, llamadas pectinasas y celulasas, que ayudan a
romper las paredes celulares, además de que presenta ocho copias de cada cromosoma, por
lo cual proporciona más ADN que la naranja. De igual forma se evidenciaron mejores
resultados tras usar etanol debido a que este es mejor precipitante que el isopropanol debido
a factores como la polaridad y solubilidad del alcohol.

Referencias
[1] https://www.genome.gov/es/genetics-glossary/ADN-acido-Desoxirribonucleico.
National Human Genoma Research Institute (NIH)
[2] http://expociencias.com.mx/ver-16/project/separacion-del-adn-de-las-fresas
[3] https://www.todamateria.com/extraccion-adn-experimento
[4] http://labvirtual.iciq.es/es/expcas/ladn-de-les-maduixes
[5] http://www.abyntek.com/precipitacion-de-dna-con-etanol-vs-isopropanol/