Carrera: Ingeniería en Tecnología Ambiental

Materia: Química Analítica

Unidad 4 Métodos espectrofotométricos.

Actividad 1.
Seminario de procedimiento y aplicaciones de técnicas
espectrofotométricas.

Profesora: Mónica Arellano Córdova

Alumna: Venecia Muciño Nanclares

Matrícula: ES1921014135

Grupo: TA-TQAN-2001-B2-002

Mayo 27, 2020

1ª. Parte.
INVESTIGAR previamente, define y elabora: Haz uso de tu creatividad y comparte lo
solicitado.

DEFINE los siguientes conceptos.

- Espectrofotometría.

La espectrofotometría UV-visible es una técnica analítica que permite determinar la concentración

de un compuesto en solución. Se basa en que las moléculas absorben las radiaciones
electromagnéticas y a su vez que la cantidad de luz absorbida depende de forma lineal de la
concentración. Para hacer este tipo de medidas se emplea un espectrofotómetro, en el que se
puede seleccionar la longitud de onda de la luz que pasa por una solución y medir la cantidad de
luz absorbida por la misma.
El fundamento de la espectroscopía se debe a la capacidad de las moléculas para absorber
radiaciones, entre ellas las radiaciones dentro del espectro UVvisible. Las longitudes de onda de
las radiaciones que una molécula puede absorber y la eficiencia con la que se absorben dependen
de la estructura atómica y de las condiciones del medio (pH, temperatura, fuerza iónica, constante
dieléctrica), por lo que dicha técnica constituye un valioso instrumento para la determinación y
caracterización de biomoléculas. Las moléculas pueden absorber energía luminosa y almacenarla
en forma de energía interna. Esto permite poner en funcionamiento ciclos vitales como la
fotosíntesis en plantas y bacterias. Cuando la luz (considerada como energía) es absorbida por una
molécula se origina un salto desde un estado energético basal o fundamental, E 1, a un estado de
mayor energía (estado excitado), E2. Y sólo se absorberá la energía que permita el salto al estado
excitado. Cada molécula tiene una serie de estados excitados (o bandas) que la distingue del resto
de moléculas. Como consecuencia, la absorción que a distintas longitudes de onda presenta una
molécula -esto es, su espectro de absorciónconstituye una seña de identidad de la misma. Por
último, la molécula en forma excitada libera la energía absorbida hasta el estado energético
fundamental.

La absorción de energía luminosa hace que la molécula pase

desde un estado fundamental (E1) a otro excitado (E2).
Posteriormente la molécula relaja su energía mediante
distintos mecanismos (vibración, rotación, etc.)

En espectroscopía el término luz no sólo se

aplica a la forma visible de radiación
electromagnética, sino también a las
formas UV e IR, que son invisibles. En
espectofotometría de absorbancia se
utilizan las regiones del ultravioleta (UV
cercano, de 195-400 nm) y el visible (400-
780 nm).

(Díaz, 2006)
- Espectrofotómetro.
Se trata de un aparato óptico que permite hacer atravesar una muestra traslúcida por un haz de
luz monocromática, la que luego es detectada y cuantificada por un sensor y una electrónica
adecuada, la frecuencia de la luz puede ser variada ya que dispone de una red de difracción. Esto
permite conocer los espectros de absorción de líquidos coloreados y además se puede medir
concentración de distintos metabolitos.

Los modernos espectrofotómetros están diseñados para proporcionar automáticamente los

valores y las coordenadas de color de un estímulo dado sin usar el ojo humano. Estos
instrumentos se pueden adquirir comercialmente en una gran variedad de marcas, grados de
sofisticación, y especialización para acomodarse a las aplicaciones colorimétricas específicas. Los
equipos comerciales pueden medir entre 380-780nm que son los 190-1100nm (UV/visible)

Los espectrofotómetros miden la radiación que puede ser reflejada, absorbida o transmitida por la
materia al interactuar con la radiación electromagnética.

Se pueden clasificar de acuerdo a su forma de operar de la siguiente forma:

Absorción.- En este tipo, la luz procedente de una fuente, se convierte en luz monocromática, cuya
longitud de onda es ajustable y conocida siempre que atraviesa la muestra. En la muestra ocurrirá
una absorción y los correspondientes cambios de luz son sensados por el fotodetector. De esta
forma queda establecido el espectro de absorción al hacer una gráfica de la intensidad luminosa
incidente en el fotodetector contra la longitud de onda. Las características espectrales de la fuente
de luz, fotodetector y todos los elementos ópticos internos deben ser conocidas y consideradas en
la lectura final.
Emisión.- La diferencia principal con el de absorción es que no tiene una fuente luminosa y la
ubicación de la muestra es diferente. La luz policromática de la muestra (calentada) se dirige al
monocromador, que barre sobre la región espectral especificada proporcionando luz
monocromática al fotodetector, a longitudes de onda conocidas e intensidades indicativas del
espectro de emisión.
(Jazmin, 2015)

- Tipos de espectrofotometría.

La espectrometría de absorción es una técnica en la cual la energía de un haz de luz se mide antes
y después de la interacción con una muestra. Cuando se realiza con láser de diodo ajustable, se la
conoce como espectroscopia de absorción con láser de diodo ajustable. También se combina a
menudo con una técnica de modulación, como la espectrometría de modulación de longitud de
onda, y de vez en cuando con la espectrometría de modulación de frecuencia a fin de reducir el
ruido en el sistema.

La espectrometría de fluorescencia usa fotones de energía más elevada para excitar una muestra,
que emitirá entonces fotones de inferior energía.
Esta técnica se ha hecho popular en aplicaciones bioquímicas y médicas, y puede ser usada con
microscopía confocal, transferencia de energía entre partículas fluorescentes, y visualización de la
vida media de fluorescencia.

ESPECTROMETRÍA DE RAYOS X
Cuando los rayos X con suficiente frecuencia (energía) interaccionan con una sustancia, los
electrones de las capas interiores del átomo se excitan a orbitales vacíos externos, o bien son
eliminados completamente, ionizándose el átomo. El "agujero" de la capa interior se llena
entonces con electrones de los orbitales externos. La energía disponible en este proceso de
excitación se emite como radiación (fluorescencia) o quitará otros electrones menos enlazados del
átomo (efecto Auger). La absorción o frecuencias de emisión (energías) son características de cada
átomo específico. Además, para un átomo específico se producen pequeñas variaciones de
frecuencia (energía) que son características del enlace químico. Con un aparato apropiado pueden
medirse estas frecuencias de rayos X características o energías de electrones Auger. La absorción
de rayos X y la espectroscopia de emisión se usan en química y ciencias de los materiales para
determinar la composición elemental y el enlace químico.
La cristalografía de rayos X es un proceso de dispersión. Los materiales cristalinos dispersan rayos
X en ángulos bien definidos. Si la longitud de onda de los rayos X incidentes es conocida, se
pueden calcular las distancias entre planos de átomos dentro del cristal. Las intensidades de los
rayos X dispersados dan información sobre las posiciones atómicas y permiten calcular la
organización de los átomos dentro de la estructura cristalina.

ESPECTROMETRÍA DE LLAMA
Las muestras de solución líquidas son aspiradas en un quemador o una combinación de
nebulizador/quemador, desolvatadas, atomizadas, y a veces excitadas a un estado electrónico de
energía más alta. El uso de una llama durante el análisis requiere combustible y oxidante,
típicamente en forma de gases. Los gases combustibles comunes que se usan son el acetileno
(etino) o el hidrógeno. Los gases de oxidante suelen ser el oxígeno, el aire, o el óxido nitroso. Estos
métodos son a menudo capaces de analizar elementos metálicos en partes por millón, billones, o
posiblemente rangos más bajos de concentración. Son necesarios detectores de luz para detectar
la luz con información que viene de la llama.

Espectrometría de emisión atómica. Este método usa la excitación de la llama; los átomos son
excitados por el calor de la llama para emitir luz. Este método suele usar un quemador de
consumo total con una salida de incineración redonda. Se utiliza una llama de temperatura más
alta que la usada en la espectrometría de absorción atómica para producir la excitación de átomos
de analito. Ya que los átomos de analito están excitados por el calor de la llama, no es necesaria
ninguna lámpara elemental especial. Puede usarse un policromador de alta resolución para
producir una intensidad de emisión contra el espectro de longitud de onda por encima de un
rango de longitudes de onda que muestran líneas de excitación de elementos múltiples. O bien
puede usarse un monocromador en una longitud de onda determinada para concentrarse en el
análisis de un solo elemento en una cierta línea de emisión. La espectrometría de emisión de
plasma es una versión más moderna de este método.

Espectrometría de absorción atómica (a menudo llamada AA). Este método usa un nebulizador
pre-quemador (o cámara de nebulización) para crear una niebla de la muestra, y un quemador en
forma de ranura que da una llama de longitud de ruta más larga. La temperatura de la llama es lo
bastante baja como para no excitar los átomos de la muestra de su estado basal. El nebulizador y
la llama se usan para desolvatar y atomizar la muestra, pero la excitación de los átomos de analito
se realiza mediante lámparas que brillan a través de la llama en varias longitudes de onda para
cada tipo de analito. En la absorción atómica, la cantidad de luz absorbida después de pasar por la
llama determina la cantidad de analito en la muestra. Suele usarse un horno de grafito para
calentar, desolvatar y atomizar la muestra con el fin de obtener una mayor sensibilidad. El método
del horno de grafito también puede analizar algún sólido o muestras mezcladas. A causa de su
buena sensibilidad y selectividad, es un método que todavía se usa para el análisis de ciertos
microelementos en muestras acuosas (y otros líquidos).

Espectrometría de fluorescencia atómica. Este método usa un quemador con una salida de
incineración redonda. La llama se usa para solvatar y atomizar la muestra, y una lámpara emite luz
a una longitud de onda específica en la llama para excitar los átomos de analito. Los átomos de
ciertos elementos pueden entonces fluorescer, emitiendo luz en diferentes direcciones. La
intensidad de esta luz fluorescente sirve para cuantificar la cantidad del elemento analizado en la
muestra. También puede usarse un horno de grafito para la espectrometría de fluorescencia
atómica. Este método no es tan común como el de absorción atómica o el de emisión de plasma.

ESPECTROMETRÍA DE EMISIÓN DE PLASMA

Es similar a la emisión atómica por llama, y la ha sustituido en gran parte.

Espectrometría de plasma de corriente contínua (DCP). Un plasma de corriente contínua se crea

por una descarga eléctrica entre dos electrodos. Es necesario un gas de apoyo al plasma, y el más
común es el argón. Las muestras pueden ser depositadas en uno de los electrodos.

Espectrometría de emisión óptica por descarga luminiscente (GD-OES)

Espectrometría de emisión plasma-atómica acoplada inductivamente (ICP-AES)

Espectrometría de ruptura inducida por láser (LIBS), también llamada espectrometría de plasma
inducida por láser (LABIOS)

Espectrometría de plasma inducida por microondas(MIP)

ESPECTROMETRÍA DE CHISPA O ARCO

Se usa para el análisis de elementos metálicos en muestras sólidas. Para materiales no

conductores, se usa polvo de grafito para hacer conductora la muestra. En los métodos de
espectroscopia de arco tradicionales se usa una muestra sólida que es destruida durante el
análisis. Un arco eléctrico o chispa se pasan por la muestra, calentándola a alta temperatura para
excitar los átomos. Los átomos de analito excitado emiten luz en varias longitudes de onda que
pueden ser detectadas mediante métodos espectroscópicos comunes. Ya que las condiciones que
producen la emisión por arco no son controladas cuantitativamente, el análisis de los elementos
es cualitativo. Hoy día, las fuentes de chispa con descargas controladas bajo una atmósfera de
argón permiten que este método pueda ser considerado eminentemente cuantitativo, y su uso
está muy extendido en los laboratorios de control de producción de fundiciones y acerías.

ESPECTROMETRÍA VISIBLE

Muchos átomos emiten o absorben la luz visible. A fin de obtener un espectro lineal fino, los
átomos deben estar en fase gaseosa. Esto significa que la sustancia tiene que ser vaporizada. El
espectro se estudia en absorción o emisión. La espectroscopia de absorción visible a menudo se
combina con la de absorción ultravioleta (espectroscopia UV/Vis). Aunque esta forma pueda ser
poco común al ser el ojo humano un indicador similar, todavía se muestra útil para distinguir
colores.

ESPECTROMETRÍA ULTRAVIOLETA

Todos los átomos absorben en la región ultravioleta (UV) ya que estos fotones son bastante
energéticos para excitar a los electrones externos. Si la frecuencia es lo bastante alta, se produce
la fotoionización. La espectrometría UV también se usa para la cuantificación de proteínas y
concentración de ADN, así como para la proporción de proteínas y ADN en una solución. En las
proteínas se encuentran generalmente varios aminoácidos, como el triptófano, que absorben la
luz en el rango de 280nm. El ADN absorbe la luz en el rango de 260nm. Por esta razón, la
proporción de absorbancia 260/280nm es un buen indicador general de la pureza relativa de una
solución en términos de estas dos macromoléculas. También pueden hacerse estimaciones
razonables de la concentración de ADN o proteínas aplicando la ley de Beer.

ESPECTROMETRÍA INFRARROJA

La espectrometría infrarroja ofrece la posibilidad de medir tipos diferentes de vibraciones en los

enlaces atómicos a frecuencias diferentes. En química orgánica, el análisis de los espectros de
absorción infrarroja indica qué tipo de enlaces están presentes en la muestra.
ESPECTROMETRÍA RAMAN

La espectrometría Raman usa la dispersión inelástica de la luz para analizar modos vibracionales y
rotatorios de las moléculas. Las "huellas digitales" que resultan son una ayuda para el análisis.

ESPECTROMETRÍA DE RESONANCIA MAGNÉTICA NUCLEAR (RMN)

La espectrometría de resonancia magnética nuclear analiza las propiedades magnéticas de ciertos

núcleos atómicos para determinar diferentes ambientes locales electrónicos del hidrógeno,
carbono, u otros átomos en un compuesto orgánico u otro compuesto. Se usa para determinar la
estructura del compuesto.

ESPECTROMETRÍA DE FOTOEMISIÓN

La fotoemisión puede referirse a:

Emisión de electrones a partir de la materia después de la absorción de fotones energéticos
(efecto fotoeléctrico).
Emisión de fotones a partir de los semiconductores y metales cuando los electrones que fluyen en
el material pierden energía mediante deceleración o recombinación.

ESPECTROMETRÍA MÖSSBAUER

La espectrometría de transmisión o conversión electrónica (CEMS) de Mössbauer prueba las

propiedades de los núcleos de isótopos específicos en ambientes atómicos diferentes, analizando
la absorción resonante de rayos gamma de energía característica, lo que se conoce como efecto
de Mössbauer.

OTROS TIPOS DE ESPECTROMETRÍA


Fotoacústica. Mide las ondas sonoras producidas por la absorción de radiación.
 Fototermal. Mide el calor desarrollado por la absorción de radiación.
 De dicroismo circular.
 De actividad óptica Raman. Usa los efectos de la actividad óptica y la dispersión para
revelar información detallada sobre los centros quirales de las moléculas.
 De terahertzios. Usa longitudes de onda por encima de la espectrometría infrarroja y por
debajo de las microondas o medidas de onda milimétricas.
 De dispersión inelástica de neutrones, como la espectroscopia Raman pero con neutrones
en vez de fotones.
 De túnel de electrones inelásticos. Usa los cambios de corriente debidos a la interacción
de vibraciones electrónicas inelásticas a energías específicas que también pueden medir
transiciones ópticamente prohibidas.
 Auger. Se usa para estudiar superficies de materiales a microescala. A menudo se usa en
relación con la microscopía de electrones.
 De cavidad en anillo.
 De transformación de Fourier. La transformación Fourier es un método eficiente para
tratar datos de espectros obtenidos usando interferómetros. Casi toda la espectrometría
infrarroja (FTIR) y la resonancia magnética nuclear (RMN) se realizan con la transformación
de Fourier.
  De tiempo resuelto. Se usa en situaciones donde las propiedades cambian con el tiempo.
 Mecánica. Implica interacciones con vibraciones macroscópicas, como los fotones. Un
ejemplo es la espectrometría acústica, que implica ondas sonoras.
 De fuerza. Usa una técnica analítica basada en AFM.
 Dieléctrica.
 Infrarroja termal. Mide la radiación termal emitida por materiales y superficies, y se usa
para determinar el tipo de enlaces presentes en una muestra, así como su ambiente
reticular. Estas técnicas son muy usadas por los químicos orgánicos, mineralogistas y
geólogos.
(Pérez, 2019)