Guias de Bioquimica Regencia

Descargar como pdf o txt
Descargar como pdf o txt
Está en la página 1de 17

GUIAS DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA

PROGRAMA DE TECNOLOGIA EN REGENCIA DE FARMACIA – UNIVERSIDAD DE SUCRE


RINA MARTINEZ CARDEÑO

Practica Nº 1

MANUAL DE GUIAS DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA

Docente:
RINA MARTINEZ CARDEÑO

UNIVERSIDAD DE SUCRE
FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD
PROGRAMA DE TECNOLOGIA EN REGENCIA DE FARMACIA
GUIAS DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA
PROGRAMA DE TECNOLOGIA EN REGENCIA DE FARMACIA – UNIVERSIDAD DE SUCRE
RINA MARTINEZ CARDEÑO

INTRODUCCIÓN

La asignatura Bioquímica en el programa de Tecnología en Regencia de


Farmacia trata las temáticas de bioquímica estructura y de bioquímica metabólica
aspectos de suma importancia para el regente de farmacia, por lo tanto, se
presenta un manual de guías para las prácticas de laboratorio que busca facilitar
la participación activa del estudiante, aspecto que se logra porque las guías
están diseñadas en un lenguaje claro, de tal manera que facilita el seguimiento
del procedimiento para la realización de la misma.
Al final de cada guía hay un cuestionario que hace parte del informe final que el
estudiante debe presentar, esto permite que el estudiante investigue y
complemente sus conocimientos.
GUIAS DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA
PROGRAMA DE TECNOLOGIA EN REGENCIA DE FARMACIA – UNIVERSIDAD DE SUCRE
RINA MARTINEZ CARDEÑO

CONTENIDO

PRACTICA N° 1: NORMAS GENERALES DE TRABAJO EN EL


LABORATORIO

PRACTICA Nº 2: IDENTIFICACIÓN DE CARBOHIDRATOS

PRACTICA N° 3: QUÍMICA DE LÍPIDOS

PRACTICA Nº 4: DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS

PRACTICA Nº 5: ENZIMAS
GUIAS DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA
PROGRAMA DE TECNOLOGIA EN REGENCIA DE FARMACIA – UNIVERSIDAD DE SUCRE
RINA MARTINEZ CARDEÑO

PRACTICA N° 1
NORMAS GENERALES DE TRABAJO EN EL LABORATORIO

Objetivos:

 Conocer las reglas básicas de higiene y de seguridad que se deben observar


en un laboratorio.

 Definir las normas para presentación de informes de laboratorio

 Conocer el material básico del laboratorio, su manejo y las precauciones que


se deben tener al utilizado.

 Identificar algunas de las sustancias químicas empleadas comúnmente, sus


usos y precauciones.

Teoría Relacionada

Esta primera práctica, pretende desarrollar en los estudiantes la conciencia de


que el laboratorio es un sitio de trabajo donde se requiere de mucha disciplina y
tener un conocimiento apropiado de lo que se va a realizar, y los riesgos a que se
puede enfrentar si no se tienen los cuidados necesarios.

Por lo anterior, en imprescindible que el estudiante conozca las normas para el


trabajo en el laboratorio y los cuidados que nos aseguren un resultado esperado y
sin riesgos de accidentes lamentables.

Procedimiento
Normas del laboratorio

El laboratorio de Bioquímica es el lugar donde se comprueba la validez de los


principios de la bioquímica. Es fundamental para ello contar con el material
adecuado y realizar los análisis con el cuidado suficiente, a fin de lograr que los
resultados sean confiables. Este último aspecto implica, conocer adecuadamente
el procedimiento que se va a realizar así como las características de los
reactivos y materiales utilizados en el experimento.

Es necesario recordar, que un laboratorio no es un sitio peligroso, si el


experimentador es prudente y sigue todas las instrucciones con el mayor cuidado
posible, por lo tanto, es importante que el estudiante acate las normas que a
continuación se señalan:

 Es obligatorio la asistencia a las sesiones de práctica de laboratorio.


 El estudiante debe llegar puntualmente a la hora señalada para el inicio de
la sesión de trabajo.
GUIAS DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA
PROGRAMA DE TECNOLOGIA EN REGENCIA DE FARMACIA – UNIVERSIDAD DE SUCRE
RINA MARTINEZ CARDEÑO

 Es obligatorio el uso de bata siempre que se trabaje en el laboratorio, por


más sencilla e inofensiva que parezca la práctica.
 El estudiante debe ir adecuadamente vestido, para lo cual debe usar
pantalones largos y zapatos cerrados.
 Debido a la alta peligrosidad de los reactivos que allí se manipulan, Está
estrictamente prohibido ingerir alimentos.
 No tratar de realizar experimentos por si solos, sin tener la aprobación del
instructor.
 La mayor parte de las sustancias químicas con las que se trabaja en el
laboratorio son tóxicas, debido a ello, nunca deberá probar alguna de ellas,
a menos que el profesor aconseje hacerlo.
 En ocasiones, es necesario reconocer una sustancia por su olor. La manera
adecuada de hacerlo consiste en ventilar, con la mano, hacia la nariz un
poco del vapor de la sustancia y aspirar indirectamente (nunca Inhalar
directamente del recipiente).
 Muchas sustancias producen vapores nocivos para la salud o son
explosivas. Esta Información se puede conocer a partir de la etiqueta que
acompaña al recipiente que contiene a la sustancia. Es por ello fundamental
leer la etiqueta antes de utilizar el reactivo.
 En caso de heridas, quemaduras con llama o salpicaduras de sustancias
cáusticas, se debe acudir inmediatamente con el profesor y, si el caso lo
amerita, se debe consultar al médico.
 Se debe tener cuidado con los bordes agudos del material de vidrio, si se
detectan algunos, se deberán redondear con la flama del mechero o con una
lima.
 Cuando la sesión de trabajo experimental haya finalizado, el grupo de trabajo
debe limpiar su lugar de trabajo, se debe cerciorar de que las llaves del gas
y del agua queden cerradas, y debe entregar al auxiliar del laboratorio todo el
material en perfecto estado. Material que se rompa o sufra averías por
descuido del estudiante, debe ser repuesto en la siguiente práctica por el
estudiante o el grupo de trabajo.
 Debe lavarse las manos antes de salir del laboratorio.
 Normas para la presentación de informes
 El estudiante debe llevar útiles necesarios para la toma de apuntes, para lo
cual debe tener siempre disponible un cuaderno destinado para tal fin. Este
cuaderno es de uso personal, todos los integrantes del grupo de trabajo debe
llevar de manera individual su cuaderno. En este cuaderno consignará todos
los datos que considere de relevancia para la realización del informe.
 Cada práctica de laboratorio debe dejar evidencia del trabajo (individual y
grupal) que realiza el estudiante antes y después de realizada la práctica.
individual, por lo tanto, es indispensable que el estudiante lea la guía
previamente al desarrollo práctico de la misma y elabore un preinforme, el
cual debe contener: Título de la práctica, objetivos, introducción teórica,
un diagrama de flujo del procedimiento, los posibles resultados. Ocho días
después de realizada la práctica, el estudiante debe entregar un informe de
laboratorio, en el cual además de lo anterior, anota en forma organizada los
resultados obtenidos, el análisis de resultados (confrontación de los
resultados obtenidos con los esperados), cuestionario (si la guía lo tiene, en
caso contrario el profesor podrá colocar algunas preguntas si así lo estima
conveniente), conclusiones y bibliografía utilizada.
GUIAS DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA
PROGRAMA DE TECNOLOGIA EN REGENCIA DE FARMACIA – UNIVERSIDAD DE SUCRE
RINA MARTINEZ CARDEÑO

 Reconocimiento del material de trabajo en el laboratorio


 El material disponible para el trabajo en el laboratorio de química se
distribuirá equitativamente por grupos de trabajo. En cada grupo se hará el
reconocimiento del material, identificarán su uso y las precauciones que se
deben tener en cada caso. Posteriormente, cada grupo de trabajo por turnos
socializará cada uno de los aspectos. Finalmente, el profesor hará las
observaciones pertinentes.

Identificación de reactivos

SÍMBOLOS DE RIESGO O PELIGROSIDAD

Para la correcta manipulación de los productos peligrosos es imprescindible que


el usuario sepa identificar los distintos riesgos intrínsecos a su naturaleza, a
través de la señalización con los símbolos de peligrosidad respectivos.

Los símbolos de riesgo o peligrosidad son pictogramas o representaciones


impresas en fondo anaranjado, utilizados en rótulos o informaciones de productos
químicos. Éstos sirven para advertir sobre la peligrosidad o riesgo de un producto.
La etiqueta es, en general, la primera información que recibe el usuario y es la
que permite identificar el producto en el momento de su utilización. Todo
recipiente que contenga un producto químico peligroso debe llevar,
obligatoriamente, una etiqueta bien visible en su envase que, redactada en el
idioma oficial del Estado, contenga:
a. Nombre de la sustancia o del preparado. Incluido, en el caso de los
preparados y en función de la peligrosidad y de la concentración de los
distintos componentes, el nombre de alguno(s) de ellos
b. Nombre, dirección y teléfono del fabricante o importador. Es decir del
responsable de su comercialización.

En el mesón donde se ubican los reactivos, el estudiante encontrará algunos


reactivos de uso común en el laboratorio. Por grupos de trabajo deben acercarse
al sitio señalado, hacer una revisión de la etiqueta para verificar la información
que esta provee e identificar las características de las sustancias allí contenidas.
Posteriormente, debe documentarse acerca de los usos y cuidados que deben
tener al utilizar cada uno de los reactivos.

Cuestionario

1. Elabore un cuadro como el que a continuación se señala para que


suministre la información necesaria para cada uno de los materiales y
equipos que existen en el laboratorio.

Nombre del Dibujo Usos Precauciones o


elemento y/o Cuidados
equipo
GUIAS DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA
PROGRAMA DE TECNOLOGIA EN REGENCIA DE FARMACIA – UNIVERSIDAD DE SUCRE
RINA MARTINEZ CARDEÑO

2. Indique el nombre del material de laboratorio que podría emplearse para: a)


Medir volúmenes. b) Mezclar reactivos en fase líquida o en solución.
c) Efectuar reacciones de neutralización.

3. Investigue las características del vidrio pyrex que normalmente se utiliza en


la fabricación del material de vidrio en el laboratorio.

4. Mencione algunas otras medidas de seguridad, diferentes a las indicadas


por el profesor y que, desde su punto de vista, son también importantes en el
trabajo de laboratorio.

5. Indique en qué tipo de recipientes se deben almacenar soluciones:

a. Muy básicas.
b. Inestables a la luz.
c. Elija un reactivo específico de los utilizados en la sesión de trabajo y
anote la información que contiene la etiqueta que acompaña al
recipiente.

6. Construya un pictograma con los símbolos de riesgo o peligrosidad de las


sustancias químicas que se usan en el laboratorio

Teniendo en cuenta las siguientes definiciones, clasifique los materiales de


laboratorio.

Utensilios de sostén. Son utensilios que permiten sujetar algunas otras piezas de
laboratorio.

Utensilios de uso específico. Son utensilios que permiten realizar algunas


operaciones específicas y sólo puede utilizarse para ello

Utensilios volumétricos. Son utensilios que permiten medir volúmenes de


sustancias líquidas.

Utensilios usados como recipientes. Son utensilios que permiten contener


sustancias en este

Aparatos. Son instrumentos que permiten realizar algunas operaciones


específicas y sólo puede utilizarse para ello.

BIBLIOGRAFIA

http://www.monografias.com/trabajos13/manubio.shtml
http://capra.iespana.es/capra/bioseguradad/bioseguridad.html
http://www.qb.fcen.uba.ar/microinumo/higieneyseguridad.htm
Koneman, E. Diagnostico microbiológico, Editorial médico panamericana, 110 - 11.
www.who.int/entity/csr/resources/publications/biosafety/CDS_CSR_LYO_2004_11
SP.pdf
GUIAS DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA
PROGRAMA DE TECNOLOGIA EN REGENCIA DE FARMACIA – UNIVERSIDAD DE SUCRE
RINA MARTINEZ CARDEÑO

PRACTICA Nº 2
IDENTIFICACIÓN DE CARBOHIDRATOS

OBJETIVO:
 Identificar carbohidratos en muestras orgánicas utilizando reactivos
específicos

TEORÍA RELACIONADA

Los carbohidratos son compuestos que contienen además de carbono, hidrógeno


y oxígeno en proporción de 2 a 1. Este nombre también se usa para algunos de
sus derivados en los que la definición dada no se cumple estrictamente. Los
carbohidratos más simples contienen solo C, H, O pero muchas de las que
existen en la naturaleza contienen también elementos como P, S y/o N.

Los carbohidratos y sus derivados se encuentran en casi todas las partes de la


célula, desempeñando papeles tanto estructurales como funcionales.

Estos compuestos son de importancia fundamental en la biosfera y se elaboran


durante la fotosíntesis. Muchas plantas almacenan grandes cantidades de
hidratos de carbono, que en algunos casos, son consumidos por el hombre y los
animales para su alimento.

En el hombre más del 60% de los requerimientos totales de energía proviene de


la oxidación de los hidratos de carbono, por lo tanto en la dieta este tipo de
biomoléculas ocupan un lugar importante.

Al ingerir los carbohidratos complejos, la molécula sufre un proceso de digestión


donde es hidrolizada a moléculas más pequeñas como la glucosa, luego esta es
absorbida, parte de ella se almacena temporalmente como glicógeno y otra parte
es oxidada a CO2 y H2O.

En la naturaleza también se encuentran moléculas derivadas de monosacáridos


resultado de sufrir reacciones de oxidorreducción y cumplen funciones muy
GUIAS DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA
PROGRAMA DE TECNOLOGIA EN REGENCIA DE FARMACIA – UNIVERSIDAD DE SUCRE
RINA MARTINEZ CARDEÑO

importantes en el campo biológico, como es la D – 2 - desoxiribosa, manitol,


ácido ascórbico, ácido glucorónico, N-acetilglucosamina.

Los carbohidratos también tienen muchos usos a nivel industrial y farmacéutico.

MATERIALES Y REACTIVOS

Tubos de ensayo, espátula, Beacker, Baño de María, plancha de calentamiento


pinzas para tubo de ensayo, gradilla, Agua, Reactivo de Molish, H 2SO4
concentrado, HCl concentrado, Solución al 10% de HCl, solución al 10% de
NaOH, reactivo de Fehling, reactivo de Tollens, reactivo de Seliwanoff, solución
de lugol, soluciones al 5% de glucosa, fructosa, sacarosa, solución al 1% de
almidón

PROCEDIMIENTO

Reacción de Molish:
En un tubo de ensayo tome 2 ml de la solución problema, agregue 2 gotas de
solución de alfa naftol, luego añada cuidadosamente por las paredes del tubo
aproximadamente 1 ml de H2SO4 concentrado hasta que se formen dos capas,
observe cuidadosamente cualquier cambio de color en la interfase.
Repita la prueba con soluciones de otros azúcares

Determinación de azúcares reductores:


Reacción de Fehling:
En un tubo de ensayo mezcle 1 ml de solución A de Fehling y 1 ml de solución B,
agregue 2 ml de la solución problema. Caliente el tubo de ensayo con el
contenido en un baño de maría por espacio de 5 minutos. Observe la aparición
de un precipitado de color rojo ladrillo en aquellos tubos en que la prueba es
positiva.

Repita el procedimiento anterior utilizando otras soluciones como sacarosa,


fructosa, lactosa.
GUIAS DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA
PROGRAMA DE TECNOLOGIA EN REGENCIA DE FARMACIA – UNIVERSIDAD DE SUCRE
RINA MARTINEZ CARDEÑO

Reacción de Tollens:
Coloque en un tubo de ensayo 1 ml de Reactivo de Tollens, añada 2 ml de la
solución problema, caliente en baño María durante 10 o 15 minutos. Observe si
hay formación de un espejo de plata en las paredes del tubo de ensayo.

Reacción de Seliwanoff:
En un tubo de ensayo mezcle 1 ml de solución problema y 1 ml del reactivo.
Caliente a ebullición la mezcla, el desarrollo de un color rojo en 2 minutos, es
indicativo de que la prueba es positiva para la presencia de cetosas.

Hidrólisis de la Sacarosa
Tome tres tubos de ensayo y coloque en cada uno 2 ml de solución de sacarosa,
y agregue igual volumen de cada uno de las siguientes sustancias así: agua al
primero, HCl al 10% al segundo y NaOH al 10% al tercero. Caliente todos los
tubos en baño de María y agregue a cada tubo 1 ml de reactivo de Fehling,
caliente nuevamente y observe en cada caso el grado de hidrólisis que hubo.

Prueba para polisacáridos


 Tome 1 ml de solución al 1% de almidón y agregue 3 gotas de reactivo de
lugol. Observe el desarrollo de un color azul

 Tome un pedazo de papel filtro y adicione 3 gotas de reactivo de lugol. observe


el resultado y compare con el obtenido anteriormente.

CUESTIONARIO

1. Escriba el fundamento y una ecuación para cada una de las pruebas


realizadas
2. Para cada reactivo consulte su composición
3. Establezca diferencias entre la glucosa líquida y sólida
4. Qué trastornos se producen por excesos y deficiencia de glucosa en sangre
5. Mencione ejemplos específicos del uso de carbohidratos en la industria
farmacéutica como medicamentos.
GUIAS DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA
PROGRAMA DE TECNOLOGIA EN REGENCIA DE FARMACIA – UNIVERSIDAD DE SUCRE
RINA MARTINEZ CARDEÑO

PRACTICA N° 3
QUÍMICA DE LÍPIDOS

OBJETIVO:
 Identificar propiedades físicas y químicas de lípidos mediante pruebas
sencillas de laboratorio

TEORÍA RELACIONADA
Los lípidos son un grupo grande y heterogéneo de biomoléculas orgánicas,
presentes en las células, solubles en solventes orgánicos no polares como
benceno, cloroformo, éter, tetracloruro de carbono y son insolubles en agua.

Podemos encontrar que se establecen varias formas de clasificar los lípidos, pero
en una forma de clasificarlos es en complejos y simples, o saponificables e
insaponificables, según que por hidrólisis generan o no sales de ácidos grasos o
jabones.

Los lípidos cumplen funciones importantes en el organismo tales como suministro


de la energía necesaria para la realización de trabajo, síntesis de membrana
celular, síntesis de colesterol y hormonal de tipo esteroide.

MATERIALES y REACTIVOS: Tubos de ensayo, espátula, Beacker, Baño de


María, plancha de calentamiento pinzas para tubo de ensayo, gradilla
Agua, éter etílico, alcohol absoluto, cloroformo, reactivo de HUBL, KOH 0,1 N,
KOH etanólico al 20%, fenolftaleína, CaCl2 y HNO3 concentrado.

Solubilidad: Tome 4 tubos de ensayo y prepárelos de acuerdo con el siguiente


esquema:
TUBO Nº 1 2 3 3
ml agua dest. 2 - - -
ml cloroformo - 2 - -
ml éter - - 2 -
ml alcohol - - - 2
Gotas de aceite 5 5 5 5
GUIAS DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA
PROGRAMA DE TECNOLOGIA EN REGENCIA DE FARMACIA – UNIVERSIDAD DE SUCRE
RINA MARTINEZ CARDEÑO

Agite los tubos y observe los resultados

Emulsión de lípidos
Prepare 2 tubos de ensayo de acuerdo con el siguiente esquema.

TUBOS Nº 1 2

Ml de agua destilada 7 5

Ml de sales biliares - 2

Gotas de aceite 3 3

Agitar los tubos y observar el resultado

Determinación de la acidez:
Pese cuidadosamente 2 gr de grasa o mida 2 ml de aceite y suspéndala en 10 ml
de un solvente adecuado. Agregue 1 ml de solución de fenolftaleína, mezclar
cuidadosamente y titular con KOH 0,1 M hasta que el color rosado pálido
permanezca por más de 20 a 30 segundos. Anotar el volumen de álcali gastado y
calcular el valor de acidez de la grasa de acuerdo con la siguiente relación.
Saponificación de las grasas
Preparación de la solución saponificada: En un tubo de ensayo grande, tome
aproximadamente 2 g de grasa y 6 ml de KOH etanólico al 20%, colóquelo por 30
minutos en un baño de María, agregue luego 6 ml de agua destilada.
Con la solución saponificada prepare 3 tubos de ensayo de acuerdo con el
siguiente esquema:

TUBO Nº 1 2 3

ml solución saponificada 2 2 2

ml solución de CaCl2 10% - 1 -

ml HNO3 [ ] gota a gota - - 1

Agitar los tubos y observar los resultados.


GUIAS DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA
PROGRAMA DE TECNOLOGIA EN REGENCIA DE FARMACIA – UNIVERSIDAD DE SUCRE
RINA MARTINEZ CARDEÑO

Pruebas de instauración

Prepare 4 tubos de ensayo según el siguiente esquema:

TUBO Nº 1 2 3 4

ml cloroformo 5 5 5 5

Gotas de ácido Esteárico - 2 - -

Gotas de ácido oléico - - 2 -

Gotas de aceite de oliva - - - 2

A cada tubo añada solución de HUBL, gota a gota, con agitación, hasta reproducir
el color desarrollado en el tubo Nº 1

CUESTIONARIO:

 Elabore un cuadro de clasificación de los lípidos


 Escriba el fundamento y una ecuación para cada reacción realizada
 Describa cuales son los trastornos más comunes del uso inadecuado de
lípidos en la dieta
 Elabore un esquema en el que refiera cuales son los lípidos más
adecuados para el consumo humano y la proporción en que se deben
consumir.
GUIAS DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA
PROGRAMA DE TECNOLOGIA EN REGENCIA DE FARMACIA – UNIVERSIDAD DE SUCRE
RINA MARTINEZ CARDEÑO

PRACTICA Nº 4
DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS

OBJETIVO:
 Caracterizar proteínas en la solución de albúmina mediante ensayos
químicos con reactivos específicos

TEORÍA RELACIONADA:

Proteína, cualquiera de los numerosos compuestos orgánicos constituidos por


aminoácidos unidos por enlaces peptídicos que intervienen en diversas funciones
vitales esenciales, como el metabolismo, la contracción muscular o la respuesta
inmunológica.

Las moléculas proteicas van desde las largas fibras insolubles que forman el
tejido conectivo y el pelo, hasta los glóbulos compactos solubles, capaces de
atravesar la membrana celular y desencadenar reacciones metabólicas. Tienen
un peso molecular elevado y son específicas de cada especie y de cada uno de
sus órganos. Se estima que el ser humano tiene unas 30.000 proteínas distintas,
de las que sólo un 2% se ha descrito con detalle. Las proteínas sirven sobre todo
para construir y mantener las células, aunque su descomposición química
también proporciona energía, con un rendimiento de 4 kilocalorías por gramo,
similar al de los hidratos de carbono

MATERIALES Y REACTIVOS:

Tubos de ensayo, espátula, Beacker, Baño de María, plancha de calentamiento,


pinzas para tubo de ensayo, gradilla, Agua, Reactivo de Biureth, HNO 3
concentrado, alcohol absoluto, Solución de NaOH al 10%,

PROCEDIMIENTO
Preparación de la muestra

En un beacker de 100 ml coloque la clara de un huevo y adicione agua hasta


completar un volumen aproximado de unos 80 ml, mezcle la clara con el agua con
GUIAS DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA
PROGRAMA DE TECNOLOGIA EN REGENCIA DE FARMACIA – UNIVERSIDAD DE SUCRE
RINA MARTINEZ CARDEÑO

ayuda de un agitador y utilice esta solución para la realización de los diferentes


ensayos

Reacción Xantoproteica: En un tubo de ensayo adicione 2 ml de la solución de


ovoalbúmina y enseguida 5 gotas de HNO3 [ ], observar y explicar los cambios
observados por la adición del ácido a la proteína.

Reacción de Biuret: En un tubo de ensayo adicione 2 ml de la solución de


ovoalbúmina y 1 ml del reactivo de Biuret. Anote las observaciones.

Solubilidad en etanol: En un tubo de ensayo adicione 2 ml de la solución de


ovoalbúmina y 3 ml de etanol. Observe lo ocurrido.

Desnaturalización: Tome tres tubos de ensayo, agregue 1 ml de solución de


ovoalbúmina y luego rotúlelos y proceda de acuerdo con el siguiente esquema

TUBO Nº Condición
A Calentamiento hasta coagulación
B 1 gota de HCL [ ]
C 1 gota de NaOH

Anote sus observaciones

CUESTIONARIO
 Define que es punto isoeléctrico de una proteína y que utilidad tiene este
 Describa el fundamento de la electroforesis y la cromatografía como
método de estudio de las proteínas y su utilidad en el campo de la
medicina.
 Consulte de que manera se hace la determinación de proteínas en el
laboratorio clínico. Qué utilidad tiene esto como prueba diagnostica y cual
es el fundamento del método.
GUIAS DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA
PROGRAMA DE TECNOLOGIA EN REGENCIA DE FARMACIA – UNIVERSIDAD DE SUCRE
RINA MARTINEZ CARDEÑO

PRACTICA Nº 5
ENZIMAS

OBJETIVO:

 Comprobar la acción de la amilasa salival sobre la molécula de almidón


 Analizar los factores que afectan la velocidad de reacciones catalizadas
por la enzima

TEORÍA RELACIONADA

Todas las enzimas son proteínas globulares que se combinan con otras
sustancias, llamadas cofactores o grupos prostéticos, lo que las convierte en
proteínas conjugadas, para catalizar las numerosas reacciones químicas del
organismo.

Las enzimas poseen un sitio activo en forma de hendidura donde posee los
grupos químicos específicos que reaccionan con el sustrato para generar un
producto. Estas moléculas, son las principales responsables del metabolismo y de
su regulación, tienen puntos catalíticos a los cuales se acopla el sustrato igual que
una mano a un guante para iniciar y controlar el metabolismo en todo el cuerpo.

MATERIALES Y REACTIVOS
Tubos de ensayo, gradilla, Beacker, Baño de María, plancha de calentamiento,
pinzas para tubo de ensayo, gradilla, Agua, Reactivo de Fehling, solución de HCl,
Lugol, solución de almidón al 2%

PROCEDIMIENTO
Preparación de la muestra:

- Calentar agua a 40ºC en un beacker, y tomar un poco en la boca


- Enjuagar la boca
- Recoger el enjuagado, y repetir el proceso dos veces
- Filtrar si es necesario
GUIAS DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA
PROGRAMA DE TECNOLOGIA EN REGENCIA DE FARMACIA – UNIVERSIDAD DE SUCRE
RINA MARTINEZ CARDEÑO

El pH y la Actividad enzimática
Tome tres tubos de ensayo, agregue en cada uno solución de saliva y márquelos
como ABC.
TUBO A. 2 ml de Solución de NaOH 1M
TUBO B: No se le adiciona nada
TUBO C: 2 ml de HCL 1 M

Mezclar bien el contenido de todos los tubos, adicionara cada tubo 5 ml de


almidón al 2%. Colocar los tubos a 40º y agitar cada 5 minutos. Realizar pruebas
de Fehling y lugol hasta observar cambio. Anote sus observaciones
NOTA: Realizar la prueba de lugol en vidrio de reloj.

Influencia de la temperatura en la actividad de la amilasa

Tome 4 tubos de ensayo y distribúyalos así:


TUBO 1. Mezcla de agua y hielo
TUBO 2: Temperatura ambiente
TUBO 3: Baño de maría a 38ºC
TUBO 4: Calentamiento a ebullición por 5 minutos.
A cada tubo adicione 1 ml de solución de almidón. Mezcle el contenido del tubo y
a cada 5 minutos pruebe con 2 gotas de yodo y note la velocidad de digestión en
cada tubo. Cuando no haya color se da por terminada la reacción.

CUESTIONARIO:
1. Cual es el pH óptimo para la actividad de la tialina
2. Cómo explica la acción incontinua de la Tialina en el estómago
3. Muestre con ejemplos la aplicación clínica de las enzimas
4. Consulte acerca de las aplicaciones clínicas de las enzimas
5. ¿Que utilidad diagnóstica tiene el uso de las enzimas?

También podría gustarte