Tecnica de Estudio Celular

Titulo.
Técnicas de estudio celular

Hecho por.
Johan José Sierra Acuña
Materia.
Biología celular.
Profesor.
Maria paulina del Carmen aycardi
Carrera.
Biología
Ciudad.
Montería
Unicordoba
Técnicas de estudio celular.
MICROSCOPIA
 Técnica que permite producir imágenes de objetos y detalles demasiados pequeños para ser
percibidos por la vista.
 Permite conocer como es la forma, tamaño y estructura de la célula.
Tipos de microscopios.
 Microscopio óptico de campo brillante
 Microscopio óptico de contraste de fase.
 Microscopio de campo oscuro.
 Microscopio de luz ultravioleta y fluorescencia.
 Microscopio confocal.
 Microscopio multifotonico
 Microscopio de fuerza atómica.
 Microscopio electrónico de transmisión.
 Microscopio electrónico de barrido.
COLORACIONES CITOLOGICAS
 Tinción hematoxilina / eosina es la tinción de rutina más común,
utiliza colorante básico (hematoxilina) y un colorante ácido (eosina). Las
sustancias de naturaleza ácida (como los ácidos nucleicos) tienen

afinidad por los colorantes básicos como la hematoxilina. Por el
contrario, las sustancias de naturaleza básica (la mayor parte del
citoplasma) tienen afinidad por la eosina.
 Tinción con la técnica de PAS (Ácido peryódico schiff) : para
demostración de glúcidos. Por ejemplo para observar glicocálix y
mucina.
 Método de Feulgen: para demostración de DNA.
 Técnica del rojo grasa Sudan : para demostrar lípidos en células.
CITOMETRÍA DE FLUJO:
 Esta técnica permite la medida simultánea de
múltiples características físicas de una célula.
Estas medidas son realizadas mientras las células
pasan en fila a una velocidad de 4 000 – 5 000
células / seg. a través del aparato de medida en
una corriente de fluido.
 Ventajas su alta sensibilidad y análisis
independiente a cada célula.
 Desventajas no se puede visualizar a las células
que se analizan, no proporciona información de la
localización celular en tejido.

DIFRACCION DE RAYOS X
 Consiste en hacer atravesar un haz fino de rayos X sobre
el material que se analiza y colocar detrás una placa
fotográfica que recoge el espectrograma
 Se basa en que las radiaciones se difractan al encontrar
pequeños obstáculos .
 Ventajas:
• proporciona mayor resolución que las técnicas mas
perfeccionadas de microscopia electrónica.
• Usa muestras gruesas y sin tratar por el elevado poder de
penetración de los rayos X.
 Desventajas:
• Solo se utiliza cuando el material observado posee estructuras
periódicas (cadenas de ADN)
• Estructuras cristalizadas
AUTORRADIOGRAFIA
 Esta técnica se basa en la sensibilidad de las emulsiones
fotográficas a las radiaciones ionizantes
 Aplicaciones: estudio del ciclo celular
 Si, por ejemplo, se quiere saber qué células de un tejido están
sintetizando DNA como un paso previo a la división celular, se

suministra timidina tritiada (3H) al tejido durante algún tiempo.
Durante ese período, en todo el DNA sintetizado por las células de
ese tejido se incorporará la timidina marcada radiactivamente.
 Al tomar muestras del tejido (p. ej., cortes histológicos), si la
lámina que contiene el corte se recubre de una emulsión
fotográfica, en ésta quedará una impresión producida por las
radiaciones emitidas por la timidina tritiada, que activan los
cristales de bromuro de plata de la emulsión. Al revelar
fotográficamente esta emulsión, aparecerán gránulos negros de
plata sobre los núcleos que han que han sintetizado DNA durante
el período de administración de la timidina radioactiva
Marcaje radiactivo con timidina tritiada de un cultivo de
células . Las células que se encontraban replicando el DNA
durante la administración de la timidina radiactiva aparecen
marcadas con gránulos negros.

CITOMETRÍA DE FLUJO:
 Esta técnica permite la medida simultánea de
múltiples características físicas de una célula.
Estas medidas son realizadas mientras las células
pasan en fila a una velocidad de 4 000 – 5 000
células / seg. a través del clitómetro en una
corriente de fluido.
 Ventajas su alta sensibilidad y análisis
independiente a cada célula.
 Desventajas no se puede visualizar a las células
que se analizan, no proporciona información de la
localización celular en tejido.
FRACCIONAMIENTO SUB CELULAR:
Conjunto de métodos y técnicas que tiene como
objetivo obtener fracciones puras o enriquecidas
de un determinado componente celular.
Implica una:
 Homogeneización de células o
tejido
 Centrifugación del homogenato
Homogeneización de la muestra:
Se trata de la RUPTURA CONTROLADA de tejidos y
células.
Se debe asegurar no provocar cambios irreversibles en
los componentes celulares.
• Medio isotónico o levemente hipotónico Sacarosa
0.25M
• pH 7.4
• No usar soluciones salinas con alto poder iónico
• Siempre trabajar en frío
Técnicas de preparación de las muestras para observarlas al microscopio.
 la fijación
 liquido de Bouin
 karnoy
 mezcla con formaldehidos
 glutaraldehido – tetroxido de osmio
 la inclusión
 el corte
 la coloración

Tecnica de Estudio Celular

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

Tecnica de Estudio Celular

Cargado por

Información del documento

Descripción original:

Título original

Derechos de autor

Formatos disponibles

Compartir este documento

Compartir o incrustar documentos

Opciones para compartir

¿Le pareció útil este documento?

¿Este contenido es inapropiado?

Copyright:

Formatos disponibles

Tecnica de Estudio Celular

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

Titulo.

Técnicas de estudio celular

percibidos por la vista.

 Permite conocer como es la forma, tamaño y estructura de la célula.

 Microscopio óptico de campo brillante

 Microscopio óptico de contraste de fase.

 Microscopio de campo oscuro.

 Microscopio de luz ultravioleta y fluorescencia.

 Microscopio de fuerza atómica.

 Microscopio electrónico de transmisión.

 Microscopio electrónico de barrido.

 Tinción hematoxilina / eosina es la tinción de rutina más común,

utiliza colorante básico (hematoxilina) y un colorante ácido (eosina). Las

sustancias de naturaleza ácida (como los ácidos nucleicos) tienen

contrario, las sustancias de naturaleza básica (la mayor parte del

citoplasma) tienen afinidad por la eosina.

 Tinción con la técnica de PAS (Ácido peryódico schiff) : para

demostración de glúcidos. Por ejemplo para observar glicocálix y

 Método de Feulgen: para demostración de DNA.

 Técnica del rojo grasa Sudan : para demostrar lípidos en células.

 Esta técnica permite la medida simultánea de

múltiples características físicas de una célula.

Estas medidas son realizadas mientras las células

pasan en fila a una velocidad de 4 000 – 5 000

células / seg. a través del aparato de medida en

una corriente de fluido.

 Ventajas su alta sensibilidad y análisis

independiente a cada célula.

 Desventajas no se puede visualizar a las células

que se analizan, no proporciona información de la

localización celular en tejido.

 Consiste en hacer atravesar un haz fino de rayos X sobre

el material que se analiza y colocar detrás una placa

fotográfica que recoge el espectrograma

 Se basa en que las radiaciones se difractan al encontrar

• proporciona mayor resolución que las técnicas mas

perfeccionadas de microscopia electrónica.

• Usa muestras gruesas y sin tratar por el elevado poder de

penetración de los rayos X.

• Solo se utiliza cuando el material observado posee estructuras

periódicas (cadenas de ADN)

 Esta técnica se basa en la sensibilidad de las emulsiones

fotográficas a las radiaciones ionizantes

 Aplicaciones: estudio del ciclo celular

 Si, por ejemplo, se quiere saber qué células de un tejido están

sintetizando DNA como un paso previo a la división celular, se

Durante ese período, en todo el DNA sintetizado por las células de

ese tejido se incorporará la timidina marcada radiactivamente.

 Al tomar muestras del tejido (p. ej., cortes histológicos), si la

lámina que contiene el corte se recubre de una emulsión

fotográfica, en ésta quedará una impresión producida por las

radiaciones emitidas por la timidina tritiada, que activan los

cristales de bromuro de plata de la emulsión. Al revelar

fotográficamente esta emulsión, aparecerán gránulos negros de

el período de administración de la timidina radioactiva

Marcaje radiactivo con timidina tritiada de un cultivo de

células . Las células que se encontraban replicando el DNA

durante la administración de la timidina radiactiva aparecen