UNIDAD DIDACTICA N° 03

ING. QUÍM. JORGE R.VALDEIGLESIAS JARA

 CONTENIDOS
1. FUNDAMENTOS

2. CLASIFICACIÓN

3. EL PROCESO CROMATOGRÁFICO

4. PARÁMETROS FUNDAMENTALES

5. APLICACIONES DE LA CROMATOGRAFÍA
1. FUNDAMENTOS 1903: usó columnas de adsorción para separar
pigmentos vegetales

Fase
móvil
Pigmentos
vegetales

Fase
estacionaria
Mikhail Tswett (1872-1919)

CROMATOGRAFÍA
Chroma: color
Graphein: escribir
COMIENZOS

Desarrollada por
Mikhail Tswett, en
1906 con el fin de
separar los
colorantes que
componen a las
plantas.
DEFINICIÓN

 La cromatografía es una técnica que permite separar los

diferentes componentes de una mezcla compleja.

 La separación se logra por diferencias en la movilidad relativa de

los solutos, lo cual se logra por las distintas interacciones físicas y
químicas entre los componentes de la cromatografía.
COMPONENTES BÁSICOS DE UNA CROMATOGRAFÍA

 Fase estacionaria
 Fase móvil
 Soluto o muestra
2. CLASIFICACIÓN
2A. SEGÚN LA DISPOSICIÓN DE LA FASE ESTACIONARIA

Cromatografía plana:
 Cromatografía en capa fina
 Cromatografía en papel

Cromatografía en columna
 Cromatografía de líquidos
 Cromatografía de gases
 Cromatografía de fluidos supercríticos
CROMATOGRAFÍA PLANA
Papel Cromatografía en papel
Fase estacionaria
Adsorbente sobre soporte Cromatografía
en capa fina
Gel de sílice, poliamida….

METODOLOGÍA DE TRABAJO Lámina de vidrio, de

plástico o metálica

1 2 3 4 5
CROMATOGRAFÍA EN COLUMNA

Muestra
Fase (A+B)
móvil

B
Fase
estacionaria
A B

A B
2B. Según el tipo de fase móvil

 Cromatografía de líquidos (LC) En columna o en superficie plana

 Cromatografía de gases (GC)

En columna
 Cromatografía de fluidos supercríticos (SFC)
 CLASIFICACIÓN DE LOS MÉTODOS CROMATOGRÁFICOS EN COLUMNA

Método Técnica Fase estacionaria Tipo de equilibrio

LC Reparto Líquido adsorbido sobre un sólido Distribución entre líquidos

inmiscibles
Adsorción Sólido Adsorción

Intercambio iónico Resina de Intercambio Iónico Intercambio iónico

Exclusión por Líquido en intersticios de un sólido Distribución/Exclusión

tamaños polimérico

GC Gas-líquido Líquido adsorbido sobre un sólido Distribución entre gas y

líquido
Gas-sólido Sólido Adsorción

SFC Especies orgánicas enlazadas a Distribución entre fluido

superficie sólida supercrítico y superficie
enlazada
CLASIFICACIÓN DE MÉTODOS CROMATOGRÁFICOS EN COLUMNA

 Cromatografía de reparto: El soluto está en equilibrio entre el líquido de la fase

móvil y el de la fase estacionaria por diferencias de solubilidades.
 Cromatografía de adsorción: Fenómeno superficial en el cual las partículas del
soluto son adsorbidas por la fase estacionaria.
 Cromatografía de intercambio iónico: Los iones del soluto son retenidos por
los grupos funcionales que se encuentran en la fase estacionaria.
 Cromatografía de exclusión molecular: No hay equilibrio de separación . Se
separan por el tamaño partículas.
 Cromatografía de afinidad: reacción inmunológica donde el soluto es el
antígeno y los anticuerpos se encuentran adsorbidos en la fase estacionaria.
3. EL PROCESO CROMATOGRÁFICO
Muestra
(A+B)
Fase
móvil

B
Fase
estacionaria
A B

B
A
B
Detector ● ● ● ● ● ● ●
Señal analítica

t0 t1 t2 t3 t4 t5 t6
A
B

Tiempo, min t0 t1 t2 t3 t4 t5 t6
 ENSANCHAMIENTO DE BANDAS
Columna

Comienzo

Perfil de concentración

Tiempo
PARÁMETROS A CONSIDERAR EN
CROMATOGRAFÍA
CONCEPTOS PREVIOS .- CROMATOGRAMA

Tiempo de retención= tiempo que transcurre desde la

inyección de la muestra hasta que el soluto alcanza el
detector( a veces esta magnitud se mide en volumen de
elución)

Tiempo muerto= es el tiempo Ancho del pico en la base= es el

necesario para que una especie tiempo transcurrido desde que el
que no se retiene en la fase soluto alcanza el detector hasta que
estacionaria alcance el detector lo abandona
FACTOR DE REPARTO (Rf)
Factor que se obtiene experimentalmente y me permite establecer la distancia
recorrida por un soluto en relación a la fase móvil. Aplica en las cromatografías
PLANAS

Distancia recorrida por la muestra

Rf = ---------------------------------------------
Distancia recorrida por el solvente
EJEMPLO 01

Se realizo un cromatografía en capa delgada para determinar la presencia de rojo cobalto en

una muestra de pigmentos textiles. Para tal caso se corrió junto con las muestras un patrón
de colorantes que contenía la muestra problema . Una vez terminada la cromatografía se
midió la distancia recorrida por el solvente arrojando un valor de 8,6 cm; la muestra presento
una distancia recorrida de 5,6cm y 7,4cm mientras que el patrón presento medidas de 2.9
cm, 5,7cm y 6,8cm.¿cual es el valor de Rf de las muestras y el patrón de colorantes? ¿se
encuentra el colorante en cuestión en la muestra?
Patrones Rf= d muestra/d solvente 2.9/8.6=0.33
5.7/8.6=0.66
6.8/8.6=0.79

5,6/8,6=0.65
Muestras Rf= d muestra/d solvente
7,4/8,6=0.86
CONSTANTE DE DISTRIBUCIÓN ( Kc )

Valor teórico que relaciona la concentración de un soluto entre la fase móvil y la

fase estacionaria.

Concentración molar
del analito en la fase
Cs estacionaria
Kc = -----
Cm Concentración
molar del analito en
la fase móvil
FACTOR DE RETENCIÓN ( k )
Factor que se puede determinar experimentalmente y permite comparar la
velocidad de migración de los diferentes solutos.

k= Tr – Tm
Tm

IMPORTANTE: k <<<<< a 1 soluto muy poco retenido

k entre 1 y 5 valor ideal
k 20 o mayor cromatografías muy largas
 FACTOR DE SELECTIVIDAD (α)

Relaciona los tiempos de retención de dos solutos y por lo tanto me permite

saber la eficacia de la columna para separarlos.

α = (Trb) –Tm = Valor siempre > 1

(Tra)-Tm

IMPORTANTE= ESTE FACTOR NO TOMA EN CUENTA EL ANCHO DE PICO

RESOLUCION = R
EJEMPLO 02

Determinar la resolución de una columna que presenta

los siguientes valores de corrida:
TrA=16.40 WA=1.11
Tr B= 17.63 WB= 1.21

Rs= 2 x 17,63-16.40
1.11 + 1.21
Rs=1.10
4. PARÁMETROS FUNDAMENTALES

Respuesta del detector

CH4 Octano No
identificado Nonano

Tiempo
Inyección Fig.1

tr´ = tr - tm
EFICACIA DE UNA COLUMNA: H, L
H

L
N
H
«Martin y Synge»
L

 wb = 4σ 2
2
 tR 
H L
N  16  
L N  wb 
H n

N i
«n compuestos en el cromatograma»: N  i 1

n
 Resolución Resolución
= 0,5 = 0,75
Señal

Señal
Resolución
=1 Resolución
= 1,5
Señal

Señal
Tiempo Tiempo

F1
 5. Aplicaciones de la cromatografía ANÁLISIS CUALITATIVO

Disolución estándar
Señal analítica

CH4 Octano Nonano Decano La muestra no contiene

Tiempo metano ni octano.
Si los contiene será a
Muestra concentraciones inferiores
a los correspondientes
Señal analítica

límites de detección

CH4 Octano ¿Nonano? ¿Decano?

Tiempo

Identificación positiva: - Comparación de datos de retención

- Uso de detectores en línea
 5. Aplicaciones de la cromatografía ANÁLISIS CUANTITATIVO

Área
Altura, h

Señal analítica
Fig.1

tm tr Tiempo

A. MÉTODOS DE ANÁLISIS CROMATOGRÁFICO CUANTITATIVO

1. Calibración con patrones
0,4
Preparación de disoluciones patrón

Área de pico, s
0,3

0,2
Obtención de sus cromatogramas
0,1

0,0
0 5 10 15 20 25 30

Concentración, ng ml-1
 5. Aplicaciones de la cromatografía
0,35

Area de pico/Area del estándar interno

B. MÉTODO DEL ESTÁNDAR INTERNO 0,30

0,25
Se añade a disoluciones
patrón y a muestras 0,20

0,15

0,10
Analito 1
Señal analítica

0,05
Estándar
interno 0,00
Analito 2 0 10 20 30 40 50 60

Concentración, ng ml-1

Tiempo