CULTIVO DE MICROORGANISMOS

 INTRODUCCIÓN:

Un cultivo de microorganismos consiste en proporcionarles las condiciones físicas,

químicas y nutritivas adecuadas para que puedan multiplicarse de forma controlada.
En general, podemos distinguir cultivos líquidos y sólidos en función de las
características del medio y cultivos discontinuos y continuos en función de la
disponibilidad de nutrientes en el medio.

 OBJETIVOS:

Comparar los principales métodos de cultivo utilizados para los diferentes tipos de
microorganismos.

Conocer los principales métodos de cultivo utilizados para los diferentes tipos de
microorganismos.

 MARCO TEORICO:

Diferentes métodos de siembra

- Sembrar: Es el acto de colocar el material bacteriológico en el medio de cultivo

para promover su crecimiento y desarrollo, y subsiguiente multiplicación.

El resultado de una siembra se llama: Cultivo

· Las siembras pueden ser:

- Primarias: cuando el material es inoculado en los medios por primera vez

- Secundarias: cuando el material a inocular procede de una siembra primaria

Métodos Generales:

1) Siembra por dilución: Se toma el tubo de ensayo con medio líquido, como el
caldo simple. Se toma el material a diluir y se siembra en el tubo con el uso del asa
cargada con el material bacteriológico, se agita, con movimientos moderados.

Medio de cultivo: Liquido

Instrumento: Asa

Finalidad: poner la bacteria en suspensión

Diluciones sucesivas

Consiste en diluir una muestra hasta conseguir muy pocas células que, tras
inocularse en un medio de cultivo, generen colonias aisladas.

2) Siembra por estrías en superficie: Se siembra el material en la superficie del

agar inclinado en un tubo de ensayo, allí se extiende por toda la superficie con el
asa bacteriológica, previamente esterilizada y cargada con el material a sembrar,
haciendo estrías no muy amplias, pero tampoco muy estrechas. Se inicia por la
parte más profunda de la superficie inclinada y se termina la estría en la parte
más cerca de la boca del tubo.

Medio de cultivo: agar base inclinado

Instrumento: asa o aguja bacteriológica

3) Siembra por estría por agotamiento: Con éste procedimiento se puede

conseguir una buena separación de las colonias y aislarlas fácilmente. Para ello se
funde el medio de cultivo, se vuelca en caja de Petri y se deja solidificar. Con el
asa previamente esterilizada se toma material de un cultivo heterogéneo y se
descarga sobre la superficie del medio formando estrías. Esto puede realizarse de
varias formas:
a- Al comienzo se coloca el inoculo, luego se continúa con las estrías. Cuando se
quiere obtener colonias muy separadas se puede utilizar dos o tres placas de Petri,
para lo cual se repite la operación sin tomar con el asa nuevo material.

b- Se puede dividir la placa de Petri en cuatro cuadrantes; una vez depositado el

material en el primero, siguiendo el sentido de las agujas del reloj, se hace una
estría luego en el segundo, tercero y cuarto cuadrante sin cargar nuevamente el
asa; en el último cuadrante aparecerán las colonias aisladas

c- El inóculo se extiende sobre una pequeña zona de la placa, próxima al borde, se

esteriliza el asa y se traza otra estría a partir del depósito y así sucesivamente.

Medio de cultivo: solido en placa de Petri

Instrumento. Asa

Finalidad. Obtener colonias aisladas

4) Por picadura o punción: Con una aguja se toma el material que se quiere
sembrar y se lo introduce en el tubo, con medio semisólido. Introducir la aguja
hasta el fondo, formando un canal de punción, trayecto por el cual la retiraremos
luego. Este método se utiliza para estudiar la movilidad de las bacterias.

Medio de cultivo. Semisólido

Instrumento: aguja bacteriológica

Finalidad: Estudiar la movilidad de las bacterias

5) Siembra en TSI: (Por picadura y estrías en superficie): el TSI (Triple Sugar
Iron) es un medio que contiene glucosa, sacarosa y lactosa, hierro y un indicador
que es el rojo fenol.

En este medio sembraremos por picadura y estrías en superficie, como ya

conocemos, para estudiar los cambios que ocurrirán en superficie y profundidad. A
lo largo del canal se desarrollan los microorganismos, y según lo hagan en la parte
superior o inferior del tubo, estarán indicando su comportamiento frente a los
azucares, los cambios indican lo siguiente:

Crecimiento microbiano en medio líquido

Si la bacteria crece en un medio líquido, en la mayoría de los casos las células que
se

producen en cada división continúan su vida independientemente formándose una

suspensión de células libres.

En un cultivo discontinuo de bacterias en medio líquido, se pueden diferenciar

cuatro

fases en la evolución de los parámetros que miden el crecimiento microbiano:

1.- Fase lag o de adaptación: durante que los microorganismos adaptan su

metabolismo a las nuevas condiciones ambientales (abundancia de nutrientes y
condiciones de cultivo) para iniciar la fase de crecimiento exponencial.

2.- Fase exponencial o logarítmica: en ella la velocidad de crecimiento es máxima y

el tiempo de generación es mínimo. Durante esta fase las bacterias consumen a

velocidad máxima los nutrientes del medio. La evolución del número de células
durante esta fase se explica con los modelos matemáticos que describiremos a
continuación.
3.- Fase estacionaria: en ella no se incrementa el número de bacterias (ni la masa u

otros parámetros del cultivo). Las células en fase estacionaria desarrollan un

metabolismo diferente al de la fase exponencial y durante ella se produce una
acumulación y liberación de metabolitos secundarios que pueden tener importancia
industrial.

Los microorganismos entran en fase estacionaria porque se agota algún nutriente

esencial del medio o porque los productos de desecho que han liberado durante la
fase exponencial hacen que el medio sea inhóspito para el crecimiento microbiano.

La fase estacionaria tiene gran importancia porque probablemente represente con

mayor fidelidad el estado metabólico real de los microorganismos en los ambientes

naturales.

4.- Fase de muerte: se produce una reducción del número de bacterias viables del

cultivo.

Crecimiento microbiano en medio sólido

Las fases, parámetros y cinética de crecimiento discutidas para el caso de los

cultivos

líquidos se presentan también en cultivos sólidos. La cinética de crecimiento, en

este

caso, se puede estudiar siguiendo la evolución del número de células viables por
unidad de superficie o por unidad de masa.
Cuando una célula aislada e inmóvil comienza a crecer sobre un substrato sólido, el

resultado del crecimiento al cabo del tiempo es una colonia. Por consiguiente, se
denomina unidad formadora de colonia (UFC) a una célula bacteriana viva y aislada
que si se encuentra en condiciones de substrato y ambientales adecuadas da lugar
a la producción de una colonia en un breve lapso de tiempo. Si el número inicial de
bacterias por unidad de superficie es muy alto, la confluencia de las colonias da
lugar a lo que se llama un césped cuando se realizan los cultivos en placas de
laboratorio.

En el caso de microorganismos móviles (deslizantes) o en el de los hongos

filamentosos que tienen un crecimiento trófico no se producen colonias aisladas
sino formaciones más difusas o miceliares.

 MATERIALES:

medio de cultivo ya preparado(agares y caldos).

asa de siembra.

Mechero.

tubo de ensayo.

cuy con linfadenitis.

Alcohol.

Algodón.

Isopos.

sal de andrews.
 PROCEDIMIENTO:

Con una jeringa extraer la pus del cuy

colocar un poco de muestra en el isopo para poder hacer la siembra

Cuando se utilice exclusivamente el asa de platino o nicrón.

Coger el asa por el cabo, en forma similar, a cuando tomamos el lápiz para escribir.

Introduzca el asa de alambre de platino o nicrón directamente en la zona de color

azul de la llama del mechero, hasta que se ponga al rojo vivo. Seguidamente,
proceda a introducir lentamente el resto del alambre para lograr el mismo efecto.
Retire el instrumento de la llama y espere de 4 a 5 segundos con el objetivo de que
el asa se enfríe.

Con el asa estéril y fría tome el volumen o fragmento de la muestra que será
sembrado y trasládelo de inmediato para el medio del cultivo seleccionado.

Si la siembra se fuera a producir en un medio solidificado en forma de cuña en

tubo de ensayo, proceda del siguiente modo:

Con la mano opuesta a la que sujeta el asa, tome el tubo por l porción inferior.

Con el dedo meñique de la mano que sostiene el asa, retire del tubo el tapón de
algodón o la tapa de rosca y reténgala(no colocar el tapón o la tapa sobre la mesa
de trabajo)

Flamee de inmediato la boca del tubo de ensayo, pasándola una o dos veces por la
llama del mechero, con el objetivo de eliminar por incineración, los microorganismos
contaminantes que se encuentran en esa zona, por la parte externa del tubo. Esta
acción calórica, provoca además una convección del movimiento del oxígeno
presente en el interior del tubo hacia afuera, debido a la desigualdad de calor, lo
cual favorece que decrezca el riesgo de contaminación.

Introduzca el asa con el volumen o fracción de la muestra en el tubo, hasta el

fondo de la cuña. A partir de este momento, la siembra puede realizarse de
diferentes maneras, en dependencia del tipo de microorganismo que pretendemos
que se desarrolle en ese medio de cultivo:
Deslizando el asa, desde el fondo hacia arriba, por toda la superficie de la cuña,
trazando una línea longitudinal.

Deslizando el asa por la superficie de la cuña desde el fondo hacia arriba,

imprimiéndole un movimiento de zigzag.

Motiando toda la superficie de la cuña con hisopo.

Efectuando cualquiera de las tres variantes explicadas pero adicionalmente
roturando el medio con el asa, haciendo un pequeño corte longitudinal.

Al concluir la siembra se flamea la boca y se taponea nuevamente el tubo

procediendo a esterilizar el asa en las llama del mechero.

Si la siembra se fuera a realizar en la superficie de un medio solidificado en

placa de Petri, proceda de la siguiente manera:

Con la mano opuesta a la que sujeta el asa de platino, tome la placa de Petry, de
manera que la tapa quede hacia arriba. Con ayuda del dedo pulgar abra
parcialmente la placa.
Introduzca el asa con la muestra y proceda a deslizarla suavemente en forma de
zigzag, desde la pared, hasta cubrir aproximadamente un tercio de toda la
superficie.

Cierre la placa y gírela varios cm, en contra de las manecillas del reloj, procediendo
a abrirla nuevamente por igual procedimiento.

Introduzca nuevamente el asa y haga un segmento similar al anterior, de manera

que las bacterias sembradas en el primer segmento sean removidas para el
segundo.

Repita esta operación una o dos veces más.

Finalmente cierre la placa y colóquela sobre la mesa de trabajo boca abajo.

Esterilice el asa de platino a la llama del mechero, en la forma explicada antes de

dejarla en el puesto de trabajo.
Rotular y guardar para la incubación

 CONCLUSIONES:

Una vez que ya tenemos los medios de cultivo preparados, hay que inocularlos, y
para ello se necesita:

Medio de cultivo.

Condiciones óptimas de incubación como temperatura, pH, presión, condiciones

atmosféricas (concentración de O2).

Estos medios de cultivo son sólidos (cultivos en reposo), o líquidos (para cultivos en
agitación)

Al realizar una siembra de microorganismos, debemos tener en cuenta que técnica

se va a utilizar, debido a que estas varían respecto a las características del
microorganismo a tratar. También debe tenerse en cuenta la forma, espacio y el
objetivo al que se quiere llegar, pues dependiendo de esto la técnica de siembra es
diferente. Un microorganismo se puede sembrar en un medio líquido o en la
 superficie de un medio sólido de agar .Un cultivo de bacterias o de hongos es con el
fin de aislarlas en el medio para lograr un mejor estudio de ellos.

 CUESTIONARIO:

Linfadenitis
Es una infección de los ganglios linfáticos (también llamados
nódulos linfáticos). Es una complicación de ciertas infecciones bacterianas.

Causas
El sistema linfático (vasos linfáticos) es una red de ganglios, conductos,
vasos linfáticos y órganos que producen y movilizan un líquido llamado linfa
desde los tejidos hasta el torrente sanguíneo.
Los ganglios linfáticos o nódulos linfáticos son pequeñas estructuras que
filtran el líquido linfático. Contienen una gran cantidad de glóbulos blancos
para ayudar a combatir las infecciones.

La linfadenitis ocurre cuando los ganglios resultan agrandados por hinchazón

(inflamación), por lo regular en respuesta a bacterias, virus u hongos. Los
ganglios inflamados generalmente se encuentran cerca del sitio de una
infección, tumor o inflamación.

La linfadenitis puede ocurrir después de infecciones cutáneas u otras

infecciones causadas por bacterias, como estreptococos o estafilococos.
Algunas veces, es causada por infecciones poco comunes, tales como
tuberculosis o la enfermedad por arañazo de gato (bartonela).

Síntomas
Los síntomas pueden incluir:

 Piel enrojecida y sensible sobre el ganglio linfático

 Ganglios linfáticos inflamados, sensibles o duros

 Fiebre

Los ganglios linfáticos se pueden sentir elásticos si se ha formado

un absceso (bolsa de pus) o si están inflamados.

Pruebas y exámenes
 El proveedor de atención médica llevará a cabo un examen físico. Este
incluye palpar los ganglios linfáticos y buscar signos de lesión o infecciones
alrededor de los que estén inflamados.

Una biopsia y un cultivo del área o nódulo afectado pueden revelar la causa
de la inflamación. Los hemocultivos pueden revelar una diseminación de la
infección (a menudo bacterias) al torrente sanguíneo.

Tratamiento
La linfadenitis puede diseminarse en cuestión de horas. El tratamiento debe
comenzar de inmediato.

El tratamiento puede incluir:

 Antibióticos para tratar cualquier infección bacteriana

 Analgésicos (calmantes) para controlar el dolor

 Medicamentos antiinflamatorios para reducir la inflamación

 Compresas frías para reducir la inflamación y el dolor

Se puede necesitar cirugía para limpiar un absceso.

Expectativas (pronóstico)
El tratamiento oportuno con antibióticos por lo general lleva a una
recuperación completa. La desaparición de la inflamación puede tardar
semanas o incluso meses.

Posibles complicaciones
Una linfadenitis que no se trata puede llevar a:

 Formación de un absceso

 Celulitis (una infección de la piel)

 Fístulas (observadas en linfadenitis debida a tuberculosis)
 Sepsis (infección del torrente sanguíneo)
Prevención
La buena salud general y la higiene pueden ayudar a prevenir cualquier
infección.
 Bibliografía:
- https://medlineplus.gov/spanish/ency/article/001301.htm
- https://es.m.wikipedia.org/wiki/Linfadenitis
- https://www.academia.edu/9286004/INFORME_7_CULTIVO_DE_
MICROORGANISMOS.
- http://html.tecnicas-de-cultivo-microbiologia.html/.
- https://www.slideshare.net/aguero-luna/medios-de-cultivos.
- http://www.unavarra.es/genmic/microgral/Tema%2002.-
%20Cultivo%20de%20microorganismos.pdf.